白腐真菌
白腐真菌及其对异生物质的降解机制
管菌属 等 ， 常见 的包 括 长绒 毛 栓 菌 、 云芝 、 黄孢 原 毛
１ 白腐 真 菌 的 生 物 学 特 点
１ １ 白腐真菌的生物学概念 、 ． 分类及其分布
木 材是 菌 物 群 落 占有 的一 类 重 要 基 质 。 菌 物 在木 材基 质 上 的 定 居 ， 突破 若 干 物 理 、 学 和生 要 化 物竞 争 方 面 的诸 多 障 碍 … 。菌 物 本 身 的机 制 必 须
各 地 区 白腐 真 菌种 类 的变 化 常 随 树木 种 类 与气 候
诸 多条件 而 改变 。
的胶 质 和脂液 防线 ， 后在 寄 主细 胞 间隙 和细 胞 内 然
１２ 白腐真菌 的酶 学特 点 －
白腐 真菌 对木 质素 和许 多 异 生 物质 的降 解 ， 依 靠 一些 酶 的产 生 和 分 泌 。这 些 酶 共 同构 成 了 木 质 素降解 系 统 的主 体一 木 质 素 降解 酶 系 统 Ｊ 白腐 。
（ ｃｏｌ ｆ ｈ ｍ ｃ ｎ ｎｅ ｎ Ｓ ｈｏ ｏ ｅ ｉａ Ｅ ｇ ｅｒ ｇ＆ Ｔ ｃｎ ｌ ｙＣ ｉａＵ ｉｅ ｉ ｎｎ Ｃ ｌ ｉ ｉ ｅｈ ｏ ｇ ｈｎ ｎｖｒ ｔ ｏ Ｍｉｉｇ＆ Ｔ ｃｎｌｇ ， ｕｈｕ２ １０ ， ｈｎ ） ｏ ｓｙｆ ｅｈ ｏ ｙ Ｘ ｚｏ ２ ０ ８ Ｃ ｉａ ｏ
１ ２ １ 产 Ｈ Ｏ 的 氧 化 酶 系 ． ． ：：
白腐真菌在环境保护中研究与应用
１ 白腐真菌在工业废水处理 中的研 究与应用
１１ 造纸废 水 处理 ．
吴涓等研究了不同白腐真菌对灰法造纸黑液废
水的处理效果 ，考察了黑液废水浓度和碳氮源添加
量对黑液脱色及 Ｃ Ｄ Ｏ 去除率 的影响。研究结果表
明，变色栓菌 （ｒｍ ｔ ｅ ｃｌ ）对黑液废水 的 Ｔａ ｅ ｓ ｒ ｏ ｒ ｅ ｖ８ ｏ Ｃ Ｄ 和色度的去除率分别达到 ６． ％和 ４ － ％， Ｏ ４５ ２ ７１ ３ 在添加 ０ ％纤维二 糖和 ０ ２ ． ２ ． ％天冬 酰胺 的情况下 ０ 应用 自 行分离 、 筛选的 白腐真菌（ Ｈ ２ — ） Ａ ８ ２ 处理黑
Ｔ Ｔ大分子在经 Ｐ Ｎ ｃ菌作用后 ，生成 了易被重铬酸 钾氧化的其他有机物质 。 王庆生等采用实验正交法 ， 利用 Ｐ ｃ菌降解硝基苯类化工废水 。 结果表明， 在常 温ｆ ２ ５℃１ Ｈ值为 ７ 进水 Ｃ Ｄ。 ２００ｍ ／、 、 ｐ 、 Ｏ 为 ０ ｇ 硝 Ｌ 基苯类化合物进水浓度为 １０ｍ ／ 、 留时间为 ６ ０ ｇ 停 Ｌ ０ 于煤炭脱硫 。通过正交实验确定 了该 Ｐ ｃ菌脱硫的 最佳实验条件 ，在此基础上探讨 了其脱硫 的降解规 律。 研究表明，Ｃ菌煤炭脱硫是完全可行的， Ｐ 而且脱 硫速度较快 ， ｄ内可脱除煤中 ５ ． ％的无机硫和 ２ ５０ ３
再进行处理时的脱色率高达 ９％， ０ 而原废水直接处 理时脱 色率仅 为 ６％。荚荣 等 １ 将裂褶 菌 Ｆ ７ ５ １ ５ １ １ （ ｈ ｏｈ１ ｉ ｓ． １） Ｓ ｉ ｐ ｖｕ ｐ Ｆ７￣定在聚酯纤维 Ｅ ｃｚ １ｎ 构建 白腐 真菌生物接触氧化装置用来处理染料废水 。研究发
２ 白腐真 菌在 堆肥 处理 和垃 圾渗滤 液 处理 中的研 究与应 用
白腐真菌处理秸秆的研究
白腐真菌处理秸秆的研究闵晓梅 孟庆翔中国农业大学动物科技学院摘要 某些白腐真菌能选择性的降解秸秆木质素,提高秸秆瘤胃干物质降解率和改善秸秆营养价值,因此,白腐真菌日益受到国内外学者的重视。
本文主要阐述白腐真菌降解秸秆木质素的机理、处理前后秸秆化学成分和瘤胃干物质消失率的变化、影响处理效果的因素以及生产实践中需要解决的问题。
关键词 白腐真菌 木质素 降解 消失率 农作物秸秆由于营养品质低下,适口性差等原因,在饲料方面的利用率很低,一般不超过15%～20%,从而造成大量氮素和有效能的损失。
大量的研究表明,在动物可食入情况下,4kg秸秆的有效能值相当于1kg玉米的有效能值。
目前我国每年生产秸秆517亿t左右,若将秸秆利用率从20%提高到50%左右,仅此一项即可节约饲用粮51714×(50—20)%=4275万t,从而能有效地缓解日益严峻的人畜争粮的矛盾。
在秸秆饲喂反刍动物时,需对秸秆进行预处理,以提高其营养价值、适口性等。
预处理包括物理、化学、生物等方法。
基于我国国情,虽物理、化学处理方法对秸秆品质均有较大改善,但是由于实际生产中成本、操作和环境污染等方面原因,推广使用范围较小。
一系列的实验室研究和饲养试验表明,微生物处理秸秆具有广阔的前景。
近年来,国内研究使用较多的是以乳酸菌—纤维分解菌—丙酸菌为主的微生物活菌制剂。
虽然经处理秸秆的瘤胃干物质消失率没有显著提高,甚至反有下降,但由于秸秆的适口性明显改善,牛羊秸秆的采食量大幅增加,日增重效果明显优于未经处理的秸秆,加上其操作简单易行、成本低,受到牛羊养殖户的极大欢迎。
自70年代以来,国外许多学者和研究人员致力于白腐真菌的研究。
Z adrazil等(1982)研究了200多种白腐真菌后发现,有几十种白腐真菌能显著的改善秸秆的适口性,提高木质素的降解率,大幅度(40%～60%)提高秸秆的瘤胃干物质消失率,从而使秸秆成为反刍动物的一种含较高营养价值的廉价能量饲料。
【白腐菌】白腐菌液体深层培养条件的研究
磷酸-葡萄糖经E MP 途径代谢为L -缬氨酸合成所需的前体丙酮酸。
在还原力足够的情况下,6-磷酸-葡萄糖流入E MP 途径的流量越大越有利于L -缬氨酸的合成。
由图4a 和4b 可以看出,6-磷酸-葡萄糖进入H MP 途径和E MP 途径的流量分配由出发菌株的H MP:E MP =83:17=4.88:1变为突变株AA T V341的75.7:24.3=3.12:1,E MP 途径的流量由17.0增加到24.3,使更多的6-磷酸-葡萄糖流入了E MP 途径,代谢为丙酮酸,有利于L -缬氨酸的合成。
图4 G 6P 节点处的流量分配Fig.4Flux distribution around the G 6P n ode in AS1.495and AA TV341图5 PY R 节点处的流量分配Fig.5 Flux distribution around the PY R n ode in AS 1.495and AA TV341图6 L -缬氨酸育种相关的途径及调节Fig.6 Path ways and regulation related to breeding for L -valine biosynthesis2131212 PY R 节点丙酮酸除了流入T C A 循环和流向L -缬氨酸的合成,还参与丙氨酸、异亮氨酸、乳酸和乙酸等杂酸的合成,因此,丙酮酸节点的流量分配较为复杂。
为了便于比较,把E MP 途径中由1,3-2P -G A 到PY R 途径上的流量转化为100,比较这个节点处的流量分配情况(见图5)。
出发菌株AS1.495是Leu -突变株,不能正常合成亮氨酸,由丙酮酸经α-酮基异戊酸流向L -缬氨酸合成途径的流量为15.8。
突变株AA T V341由于叠加了L -AAH ss 、2-T A r 、Vd -三个遗传标记,丙酮酸节点处的流量分配发生了重大变化,丙酮酸流入T C A 循环的流量由32.6降为9.80,流入杂酸的流量由51.6降为13.5,而流入L -缬氨酸合成途径的流量由15.8增为76.7,大大增加了。
白腐真菌固定化技术及其研究进展
广东化源自工 ６ ５第 ３ 卷 总第 ２ ２ ８ ２ 期
Ⅵ、ｗ．ｄ ｈ ｍ ． ｍ ， ｇｃｅ ｃ ｖ ｏ
白腐 真 菌 固定化 技 术 及 其研 究进 展
范 荣 桂 ，刘 博 ，王 权 程 ，董 双双 ，李 叶 叶 ，王 君
（ 宁工 程技 术 大学 环境 科 学与 工程 学 院，辽 宁 阜 新 １ ３ ０ ） 辽 ２０ ０
［ 要】 摘 文章阐述了白腐真菌的生物学特性和降解机理及在难降解污染物处理中的优势， 提出了自腐真菌生物技术在实际应用 中所需解决的 问 ，讨论了微生物固定化技术及其影响因索，对臼腐真菌固定化技术的优势进行 了分毛 ，综合评述了自 题 ｝ ｝ ＝ 腐真菌固定化技术中载体材料特性、
固定 化 时间及 固 定方法 研 究的新 进 展 。
Ｋｅ ｗ ｏ ｄ ： ｈ ｔ—ｏ ｎ ｉ ｂ ｏ ｅ ｒ ｄ ｔ ｎ； ｉ ｏ ｉ ｚ ｄｔ ｃ ｎ ｌｇ ｙ ｒ ｓ ｗ ｉ ｒ ｔｕ ｇ； ｉｄ ｇａ ａｉ ｅ ｆ ｏ ｍｍ ｂ ｌ ｅ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ： ｗ ａ ｔ ｗａｅ ｅ ｔ ｅ ｔ ｉ ｓｅ ｔｒｔ ａｍ ｎ ｒ
染料 、 工等 行业 的难 降解 有机 废水 具有 毒性 大 ， 分复 杂 ， 兵 成 化学 耗氧 量 高 ，对环 境 危害 较大 的特 点…： 白腐真 菌依 靠其 胞 外 酶 的催 化氧 化作 用＿ ，不断 有 学者将 其 应用 于 这类 废水 ，挖 掘 其 ２ Ｊ 在 处 理难 降解 污 染物 方 面的 巨大 潜 能１。微 生物 固定化 技术 在 废 ３ ｌ 水处 理 中有 稳定 性强 、 菌体 可循 环利 用 等独 特优 点 ｌ， 因此 ，固 定化 白腐 真菌培 养 及 降解技 术在 破解 难 降解有 机 污染 物 降解领 域 中的难 题成 为研 究 的热 点 。 Ｊ
白腐真菌降解木质素的营养调控
白腐真菌降解木质素主要是通过其分泌的胞外过氧化物酶系统来完成的"’(()，*++%&。
涉及木质素多聚物降解的主要有%种酶，即木质素过氧化物酶",-.(-(/0123-4560：,78&、依赖锰的过氧化物酶"95(.5(060:40/0(40(;/0123-4560< 9(8&和漆酶",5==560&>,78和9(8都含亚铁血红素的糖蛋白，并且发现有多种同工酶。
它们的存在和酶活性对不同的菌种是不同的"?-1@5(4A5110BC*+!D&，因为具有不同特性的酶的不同表达是生物降解底物以获得营养的最有效途径。
*木质素降解酶体系的营养调控胞外酶在木质素的生物降解过程中起着关键作用，但是大多数真菌在自然条件下酶的合成量较低或几乎没有，并且许多酶的作用不能充分地发挥出来。
此外对大多数白腐真菌来说，与木质素降解有关的酶都是次生代谢中产生的，改变营养条件"如增加培养基中的葡萄糖&可抑制次生代谢而产生大量的初生代谢的酶类，如纤维素酶和半纤维素酶"李越中等，*++E&，从而降解掉更多的纤维素和半纤维素。
因此为提高酶的产量，增加酶的活性和选择性，国内外对木质素降解的各种酶及其同工酶的调控方面进行了大量的研究，包括从氮源和碳源的含量和形式、碳氮比例、锰的浓度、氧的浓度、木质素模型物的诱导及微量元素的作用等方面进行调控。
*F*木质素过氧化物酶",78&的营养调控李越中等"*++E&研究了不同的营养条件对8・=G1H626/21-IJ的,78合成的影响，结果表明对于碳源，K:葡萄糖有利于,78的合成，但淀粉不完全水解产生的环状糊精产酶比K:葡萄糖还高；多种单糖同时存在时的产酶量比单用葡萄糖高。
有机氮酵母浸汁培养基中,78酶活性最高，以酒石酸铵为氮源菌丝体的产酶效率最好。
吸附法固定化白腐真菌的研究
件 下 降解模 拟废水 ， 定苯 酚及 ｃ 测 ０Ｄ去 除率 。
（ ） 培养后 吸附 ： ２先 接种基 础 培养基 固体 培养 的菌
已有 学者利 用一些 天然 有机 载体 固定化 白腐 真 菌降解 苯 酚废 水 以及 其 它 废 水 ［ ７ ， 对 于 载 体 选 择方 面 的 ４ ］但 ￣ 研究 较少 。作者本 着 以废 治 废 的原 则 ， 择 了几 种 农 选
１ ３ 分 析 方 法 ．
直接吸附方式固定的白腐真菌对苯酚及cod的降解较好于先培养后吸附的固定化方式这是因为木屑中木质素促进真菌的生长且真菌在吸附的情况下形成直径大的菌团提高了降解能力
维普资讯
圆
２８０５０ 亿ｅｍｉｔｙ ＆ Ｂｉｅｎｇｉ￣ｅｒｎ ０，Ｉ ． Ｃ ｓ与生物ｒ ｉｇ ０Ｖ．Ｎ１ ｒ ｏ Ｚ程 ２ ｈ
果 较好［ ， 中 以吸附法 和包埋 法 研究 较 多 ， 用 也 １ 其 ］ 应 较 广 。吸附 固定化 是利 用载 体与微 生物 之间 的静 电作 用， 使得微 生物 吸附在 载体 表面而得 到 固定 ， 载体 的选 择尤 为关键 。 目前 研 究 主要 有 无 机类 、 糖 与 蛋 白质 多 类、 天然高 分子凝 胶类 和有机合 成 高分子凝 胶类 载体 。
业废 品作 为 固定化 载 体 ， 吸 附法 固定化 白腐 真菌 及 对 其去 除苯 酚和 Ｃ ０Ｄ 的效 果进行 了初 步研究 。
种于装 有 １ ０ ０ ０ｍＬ培养基 的烧 杯 中 ， 调节 液体 培养 基
ｐ 值 为 ５ ０ 在 ３ ℃恒 温水 浴 中 曝气 培 养 ２ｄ Ｈ ．， Ｏ 。称 取 １ ０ｇ木 屑 ， 人 ２ 的 Ｈ ０ 放 溶液 中浸 泡 ３ ｎ 用蒸 ０ｍｉ ， 馏 水洗 至 中性 ， 入 已培养 ２ｄ的液 体 培养基 中 ， 加 继续 培养一 段时 间后滤 去 培养液 即得木 屑吸 附 固定 化 的 白 腐 真菌 。用 生理盐 水洗 净后在 ３ ℃ 、 Ｈ一６ ０的条件 ０ ｐ ． 下 降解 模拟废 水 ， 定苯 酚及 Ｃ Ｄ去 除率 。 测 Ｏ １ ２ ２ 吸 附载体实 验 ．． 选择 １ ２ １中较好 的 固定化 方 式 ， 别 称 取 等量 ．． 分
白腐真菌在环境保护中应用的研究进展
白腐真菌在环境保护中应用的研究进展邵梅香;朱炳根;李敏;李辉信【摘要】White rot fungi are the general name of the filamentous fungi and can cause the wood white rot in the living nature.Their hyphae can stretch into trees or timber wood cell cavity to absorb nutrients,and then release enzymes.Degrading pollutants by white rot fungi is an effec-tive method with advantages of universality,low nutrition and high adaptability compared with bacteria.This paper mainly introduces the mode of enzyme degradation and extensive application in environmental protection such as in the pollution of the atmosphere,sewage and soil.In addition,the white rot fungi also has a wide range of applications in food testing and other biological technology.The ending in this paper points out that research direction on the white rot fungi in the future.%白腐真菌是生物界中一类引起木质白色腐烂的丝状真菌的总称。
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白腐真菌生物法处理染料废水的研究 宋云飞，周健，肖柏喜，刘宵，李烨 (湖南城市学院 化学与环境工程学院，湖南 益阳 413000）
摘 要：实验采用白腐菌降解染料亚甲基蓝，研究了在不同振荡条件下,不同亚甲基蓝的
浓度、染料废水的不同培养时间、不同转速、碳源的不同浓度等条件对染料亚甲基蓝的脱色效果的影响。实验结果表明，白腐菌在无氮条件下，染料亚甲基蓝浓度为4mg/L，振荡速度为120rpm，碳源浓度为2.0%时，其降解能力达到最大，脱色率为78.5%。
关键词：白腐真菌；亚甲基蓝；染料；脱色
Decolorization of the methylene blue dye by White-rot fungi in liquid culture
SONG Yun-Fei,ZHOU Jian,XIAO Bo-xi,LIU Xiao,LI Ye (College of Chemistry & Environmental Engineering,Hunan City University,Yiyang,Hunan 413000,China)
Abstract：Experiment using white-rot fungi degrade the dye of methylene blue, studied in different oscillation condition such as different concentrations of methylene blue, different training time of dye wastewater, the different speed, different concentrations of carbon source, which is influence the methylene blue's decoloring effect. Experimental results show that the white-rot fungus under the conditions of without nitrogen, the concentration of methylene blue dye is 4mg/L, oscillation speed for 120rpm, carbon source for 2.0%, it’s degradation ability achieve maximum, the decolored rate is 78.5%. Keywords: White-rot fungus ; Methylene blue ; dye ; decoloring 染料主要用于天然蛋白质纤维、聚酰胺纤维、纤维素等织物的着色。作为母体染料，主要含有羟基、羧基、氨基、磺酸基芳香胺类化合物。这些人工合成的染料大多具有“三致”作用，从而成为重要的环境污染物。在自然条件下这些染料造成的污染很难被消除，用常规的物理、化学以及生物的方法也很难达到除去的目的，因此染料的脱色和降解成为了一个世界性的难点和热点。 亚甲基蓝[9]，是染料的典型代表，整个分子对称分布，中部分为两个苯环与一个 N,S杂环共轭的大π体系，两边的苯环各接一个二甲胺基，正电荷平均分布于整个共轭体系中，性质稳定。亚甲基蓝系统命名为氯化3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪-5-鎓，分子式为C16H18ClN3S。现阶段对亚甲基蓝的降解方法主要是物理化学法，此外，还有超声化学法[13]、黑碳吸附法、活性二氧化锰吸附法等对亚甲基蓝的脱色降解。 白腐菌是一种能降解木质素的丝状真菌，属于担子菌纲[2]。白腐菌处理染料废水技术是近几年来新兴的有效处理方法，它能通过白腐菌所分泌的特殊的降解酶系或其他机制将各种合成染料彻底降解为CO2和H2O，对脱色具有良好的效果。本实验通过研究白腐菌对亚甲基蓝的降解，研究了在不同振荡条件下，分别在不同亚甲基蓝的浓度、染料废水的不同培养时间、不同转速、碳源的不同浓度等条件下对染料亚甲基蓝的脱色效果的影响。随着工业的不断发展，各种染料废水的产生将更多，这就急需高效的方法来解决这个问题，而生物方法显示出经济、高效、适于大规模废水处理的特点，利用白腐菌进行亚甲基蓝脱色研究就是用的生物法，是初次的尝试与研究，所以该法有可能取得染料脱色新的突破。 1实验材料与方法
1.1 实验材料与仪器 菌株：白腐菌NJ（华南理工大学提供）。 其他材料：亚甲基蓝，土豆，琼脂，葡萄糖，硫酸镁，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾。 实验仪器：U-3010紫外可见分光光度计（日立公司），LDZX-75KBS立式压蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），SPX-100B-D型振荡培养箱（上海博讯实业有限公司），电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），SPX-150C型恒温恒湿箱（上海博讯实业有限公司）。 1.2 实验方法 1.2.1 亚甲基蓝最大吸收波长的测定 方法是配制低浓度的亚甲基蓝溶液，测量其在不同波长下的吸光度，绘制光谱吸收曲线。吸光度（ Amax）最大值处对应的波长，即为最大吸收波长（λmax）。本实验是直接查阅相关文献[14]，得知对1.0-6.0 mg/L的亚甲基蓝溶液，最大吸收波长是666nm。 1.2.2 固体培养基的制备 固体培养基成分/g：土豆 80；琼脂6.4；pH自然。其配制方法为：土豆削皮切片，称量80g，加水250mL，加热搅拌并保持恒沸30 min，过滤沸煮液，将琼脂加入到过滤好的土豆液中，加热搅拌溶解，pH 自然，然后按土豆与水的质量比为1：4加入剩下的水。取30支规格相同的试管，洗净晾干并制作配套的棉花塞。将每支试管装5-6ml煮好的未冷却的土豆液，塞好棉花塞，包扎好放入高压蒸汽灭菌锅内，设定温度为121℃，时间为20min，进行高压蒸汽灭菌。灭菌完后将每支试管摆成300的斜面，放到超净工作台上，留为接种用。 1.2.3 白腐菌的接种和培养 进入接种室前，用酒精消毒液洗手。开启超净工作台，点燃酒精灯，用镊子夹取浸有酒精的棉花擦拭双手和接种钩，并将接种钩在酒精灯上灭菌。然后左手同时拿住装有白腐菌和固体培养基的试管，用酒精灯外焰加热两支试管中上部，进行灭菌，打开棉花塞，用接种钩取少许白腐菌放入固体培养基试管中，然后塞上棉花塞。重复上述过程，接种更多的白腐菌。将所有接种的白腐菌放入恒温恒湿培养箱中培养，设定温度为28℃，湿度50%。 1.2.4 液体培养基的制备 称取如下培养基原料：葡萄糖 30g；MgSO4 0.6g；蛋白胨 4.5g；KH2PO4 0.9g；K2HPO4 0.6g。将各原料放入大烧杯，加自来水1500ml溶解。取30个250ml的锥形瓶洗净，并制作配套数量的棉花塞。然后用量筒依次量取50ml的液体培养基加入各锥形瓶中，塞上棉花塞，用报纸把瓶口包住，用橡皮筋扎好，放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，设定温度121℃，时间20min。灭菌后取出放入超净工作台，待用。 1.2.5亚甲基蓝标准曲线的测定 配制0.05 g/L的亚甲基蓝溶液：称取亚甲基蓝固体0.0125g，放入烧杯加一定量的培养基溶解。转入洁净的250ml容量瓶，洗净烧杯，并将洗液转入容量瓶，定容，倒转摇匀待用。洗净6支50ml的容量瓶，并标号1-6，用移液管分别移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml 0.05 g/L的亚甲基蓝溶液于对应编号的容量瓶，加培养基营养液至刻度，6号瓶只加入50ml的培养基，倒转摇匀待用。 打开紫外可见分光光度计U-3010，设置最大吸收波长为666nm以及其他参数。清洗比色皿，装好空白溶液置零。将其中一个比色皿润洗后依次装1.0-5.0 mg/L的标准亚甲基蓝溶液进行测定，分别记录测定的吸光度，并绘制亚甲基蓝标准曲线。 1.2.6 液体浅层培养 取两根经过培养长出大量白腐菌的固体斜面试管，置于超净工作台。双手消毒进入工作台，点燃酒精灯，打开装有培养液的锥形瓶的棉花塞，用酒精灯外焰加热瓶口，进行灭菌消毒。同样对装有白腐菌的试管加热杀菌，然后用接种钩取4-5小块菌种放入锥形瓶中，塞好棉花塞。重复上述操作多次，获得更多的接种白腐菌的锥形瓶，然后将其放入振荡培养箱中，设置温度为28℃，振荡速度为120rpm左右，进行浅层培养。 1.2.7 染料脱色培养液的制备 配制无氮培养基1000ml原料：葡萄糖20.0g，MgSO4 0.4g，KH2PO4 0.6g，K2HPO4 0.4g。称取亚甲基蓝固体0.0125g，放入烧杯中加无氮培养基溶解，用玻璃棒将溶液转入250ml容量瓶中，烧杯用少许培养基润洗三次，洗液也转入容量瓶中，然后加培养基至刻度线，摇匀待用。 有氮培养基1000ml原料：葡萄糖 20g，MgSO4 0.4g，蛋白胨3.0g，KH2PO4 0.6g，K2HPO4 0.4g。用上述配制无氮培养基的方法配制有氮的0.05g/L的亚甲基蓝溶液。 配制无氮和有氮6.0、8.0、10.0 mg/L的50ml亚甲基蓝溶液：用移液管分别移取6.0、8.0、10.0ml的有氮和无氮0.05g/L亚甲基蓝溶液于6个50ml的容量瓶中，然后加相应的的培养液至刻度线，摇匀，贴好标签。取6个250ml的锥形瓶，在其中三个各加50ml的有氮培养液，另外三个各加50ml无氮的培养液。将对应的亚甲基蓝溶液加入锥形瓶中，配成3.0、4.0、5.0mg/L的共培养液，贴好标签。将所有锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌，温度121℃，时间20min。
1.2.8白腐菌对亚甲基蓝的降解 将处理好的白腐菌接种到6支装有100ml的已灭菌的亚甲基蓝共培养液的锥形瓶中，用棉花塞塞住瓶口，然后放入振荡培养箱（转速=140r/min,温度=30℃）进行培养，进行白腐菌的降解工作。 1.2.9 培养液吸光度的测定 连续几天每天取实验样品5ml稀释十倍后进行测定，分别用紫外可见分光光度计在666 nm波长下测量其吸光度，记录其数据。 1.2.10 脱色率的计算 脱色率η=（A0-A）/A0×100% 式中：η为脱色率；A0为降解前亚甲基蓝溶液的吸光度；A为处理后亚甲基蓝溶液的吸光度。
2.结果与讨论 2.1 亚甲基蓝的标准曲线 亚甲基蓝标准溶液吸光度原始数据如下:
表1 吸光度随浓度的变化 样品号 C (mg/L) 吸光度A 空白 0 0.001 1 1 0.119 2 2 0.217 3 3 0.299 4 4 0.408 5 5 0.532
亚甲基蓝标准曲线如下图所示：