药敏试验方法简介 ppt课件
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目录 Contents
• 药敏试验概述 • 药敏试验的步骤 • 药敏试验的临床应用 • 药敏试验的注意事项 • 药敏试验的发展趋势
01
药敏试验概述
药敏试验的定义
药敏试验
是一种检测细菌对抗生素敏感性的试 验，用于指导临床医生选择合适的抗 生素进行治疗。
定义补充
药敏试验通过测量细菌在接触不同浓 度的抗生素时生长情况的变化，来判 断细菌对抗生素的敏感程度，从而帮 助医生选择最有效的抗生素。
接种方法
将制备好的菌液均匀涂布在培养基上， 或使用定量接种环接种。
培养
培养条件
根据不同病原体设定适宜的培养 温度和时间。
培养观察
定期观察培养基上是否有细菌生长， 以及生长情况是否符合预期。
防止污染
确保培养过程的无菌操作，避免杂 菌污染。
结果解读
结果判定
根据培养结果，判断细菌是否对 某种药物敏感或耐药。
耐药性的监测
总结词
药敏试验有助于监测病原微生物的耐 药性变化，为抗生素的更新换代和临 床用药提供依据。
详细描述
随着病原微生物耐药性的不断增加， 药敏试验能够监测耐药性的发展趋势， 及时发现新的耐药菌株，为临床用药 提供更新换代的选择。
治疗效果的评估
总结词
通过药敏试验可以评估治疗效果，及时调整治疗方案，提高治愈率。
THANKS
结果记录
及时、准确地记录实验结果， 为后续数据处理和分析提供依
据。
实验后的数据处理与分析
数据处理
对实验数据进行整理、分类和 统计，确保数据准确无误。
结果分析
根据实验目的和要求，对实验 结果进行分析，得出结论。
结果报告
目录 Contents
• 药敏试验概述 • 药敏试验的步骤 • 药敏试验的临床应用 • 药敏试验的注意事项 • 药敏试验的发展趋势
01
药敏试验概述
药敏试验的定义
药敏试验
是一种检测细菌对抗生素敏感性的试 验，用于指导临床医生选择合适的抗 生素进行治疗。
定义补充
药敏试验通过测量细菌在接触不同浓 度的抗生素时生长情况的变化，来判 断细菌对抗生素的敏感程度，从而帮 助医生选择最有效的抗生素。
接种方法
将制备好的菌液均匀涂布在培养基上， 或使用定量接种环接种。
培养
培养条件
根据不同病原体设定适宜的培养 温度和时间。
培养观察
定期观察培养基上是否有细菌生长， 以及生长情况是否符合预期。
防止污染
确保培养过程的无菌操作，避免杂 菌污染。
结果解读
结果判定
根据培养结果，判断细菌是否对 某种药物敏感或耐药。
耐药性的监测
总结词
药敏试验有助于监测病原微生物的耐 药性变化，为抗生素的更新换代和临 床用药提供依据。
详细描述
随着病原微生物耐药性的不断增加， 药敏试验能够监测耐药性的发展趋势， 及时发现新的耐药菌株，为临床用药 提供更新换代的选择。
治疗效果的评估
总结词
通过药敏试验可以评估治疗效果，及时调整治疗方案，提高治愈率。
THANKS
结果记录
及时、准确地记录实验结果， 为后续数据处理和分析提供依
据。
实验后的数据处理与分析
数据处理
对实验数据进行整理、分类和 统计，确保数据准确无误。
结果分析
根据实验目的和要求，对实验 结果进行分析，得出结论。
结果报告
药敏试验_PPT幻灯片
因此，在使用抗菌药物的过程中，必须加强细菌对 抗菌药物敏感性的实验室监测，为临床上合理使用 抗菌药物提供试验依据。而细菌对抗菌药物的敏感 试验，就是对抗菌药物进行实验室监测的主要手段 之一。
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
药敏试验简介ppt课件
– 使用CLSI 方法记录 – 采用其他方法时使用CLSI做参照方
法进行比对
ppt课件
33
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
M7 表格
附录
•抗生素的测试与报告
MIC法
•S I R 折点 •质控
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点
– 见后面的幻灯：
ppt课件
19
常量稀释法
•药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
• 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
• 德国DIN标准 …pp…t课件..
30
CLSI药敏解释标准
• CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南
ppt课件
31
CLSI 药敏文件
• M100-S22 常见菌 (2012)** • M11-A7 厌氧菌 (2007) • M39-A3 积累抗菌谱(2009) • M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放
• 培养时间：18小时
ppt课件
9
测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
法进行比对
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33
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
M7 表格
附录
•抗生素的测试与报告
MIC法
•S I R 折点 •质控
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点
– 见后面的幻灯：
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19
常量稀释法
•药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
• 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
• 德国DIN标准 …pp…t课件..
30
CLSI药敏解释标准
• CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南
ppt课件
31
CLSI 药敏文件
• M100-S22 常见菌 (2012)** • M11-A7 厌氧菌 (2007) • M39-A3 积累抗菌谱(2009) • M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放
• 培养时间：18小时
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测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
病原性球菌 药敏试验PPT.ppt
位置，再灭菌后可取另一药片放置。 4、37℃，过夜培养，观察结果。
药敏实验结果
+ ） 大肠杆菌 （ G- ）
纸片法抑 菌环直径
抗药 中度敏感 高度敏感
青霉素 (10ug/
片) ≦20
21-28
≧29
链霉素 氯霉素 庆大霉素 (10ug/片) (30ug/片) (10ug/片)
药敏试验（纸片扩散法）
材料：
普通琼脂平板(2块平板/组） 大肠杆菌、金葡菌 青霉素、链霉素、氯霉素、庆大霉素药片
方法：
氯青 庆链
G- 大肠杆菌
氯青 庆链
37℃×18~24h
葡菌球菌 G+
药敏实验（纸片扩散法）
步骤： 1、在培养基平皿上做标记。 2、接种；用棉签分别沾取菌液（G+，G-）均匀分
别涂布于2个平皿上。 3、贴药片；镊子灭菌取药片放置于平皿上的标记
≦11 12-14 ≧ 15
﹤ 10 10-17 ﹥ 17
≦ 12 13-14 ≧ 15
实验报告
绘制标本片镜下图 记录药敏试验结果
病原性球菌 药敏试验
实验内容
病原性球菌标本片观察 链球菌、 脑膜炎双球菌、
药敏试验（纸片扩散法）
目的要求
掌握病原性球菌的基本形态。 掌握药敏实验操作技术与判断。
链球菌
药敏实验
不同的细菌种类或菌株，对同一药物的敏感性 不同，测定细菌对药物的敏感程度，简称药敏实验。
纸片扩散法 试管稀释法
药敏实验结果
+ ） 大肠杆菌 （ G- ）
纸片法抑 菌环直径
抗药 中度敏感 高度敏感
青霉素 (10ug/
片) ≦20
21-28
≧29
链霉素 氯霉素 庆大霉素 (10ug/片) (30ug/片) (10ug/片)
药敏试验（纸片扩散法）
材料：
普通琼脂平板(2块平板/组） 大肠杆菌、金葡菌 青霉素、链霉素、氯霉素、庆大霉素药片
方法：
氯青 庆链
G- 大肠杆菌
氯青 庆链
37℃×18~24h
葡菌球菌 G+
药敏实验（纸片扩散法）
步骤： 1、在培养基平皿上做标记。 2、接种；用棉签分别沾取菌液（G+，G-）均匀分
别涂布于2个平皿上。 3、贴药片；镊子灭菌取药片放置于平皿上的标记
≦11 12-14 ≧ 15
﹤ 10 10-17 ﹥ 17
≦ 12 13-14 ≧ 15
实验报告
绘制标本片镜下图 记录药敏试验结果
病原性球菌 药敏试验
实验内容
病原性球菌标本片观察 链球菌、 脑膜炎双球菌、
药敏试验（纸片扩散法）
目的要求
掌握病原性球菌的基本形态。 掌握药敏实验操作技术与判断。
链球菌
药敏实验
不同的细菌种类或菌株，对同一药物的敏感性 不同，测定细菌对药物的敏感程度，简称药敏实验。
纸片扩散法 试管稀释法
药敏试验(扩散法)操作方法PPT课件
（2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是 必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合 MIC可以方便地制定用药方案。
敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓 度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。
中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度 或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的 感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。
二、常用的药敏测定方法
1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。
纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基 上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上 广泛使用此法。定性
2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）
通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断 其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏 试验的方法。 定量
2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴 加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计 算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸 药片吸水量为0.01ml。
药液的制备（用于商品药的试验）：
按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。 如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1ห้องสมุดไป่ตู้兑水1L，配制 药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏 片所用的药液浓度。
2、成药（复方成分） 多种联合 的抗菌药物制剂应以其成分中某种 含量最高的抗菌药物为标准稀释成 有效浓度。但多数厂家由于产品配 方机密，多按产品用量进行配制。 药敏片可由厂家提供，也可自制。
敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓 度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。
中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度 或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的 感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。
二、常用的药敏测定方法
1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。
纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基 上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上 广泛使用此法。定性
2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量）
通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断 其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏 试验的方法。 定量
2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴 加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计 算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸 药片吸水量为0.01ml。
药液的制备（用于商品药的试验）：
按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。 如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1ห้องสมุดไป่ตู้兑水1L，配制 药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏 片所用的药液浓度。
2、成药（复方成分） 多种联合 的抗菌药物制剂应以其成分中某种 含量最高的抗菌药物为标准稀释成 有效浓度。但多数厂家由于产品配 方机密，多按产品用量进行配制。 药敏片可由厂家提供，也可自制。
药敏试验报告的解读PPT课件
48
（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
26
与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
28
细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
9
10
11
12
铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
14
15
16
17
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（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
26
与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
28
细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
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铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
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抗菌药物敏感性试验(药敏试验)PPT课件
治疗对基本药物过敏的患者
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
药敏试验PPT资料PPT课件
在感染初期或症状明显时 采集样本，以提高检出率。
采集部位
选择病原体含量较高的部 位进行采集，如痰液宜选 自肺部。
样本处理
样本保存
样本量
采集后的样本应尽快送至实验室进行 检测，如不能及时送检，应妥善保存。
保证足够的样本量，以满足后续实验 需求。
样本处理方法
对采集的样本进行适当的处理，如离 心、过滤等，以去除杂质和无关细胞。
结果判断
根据病原体的生长情况，判断其对不同药物的敏 感程度。
报告发布
将实验结果及时报告给临床医生，为治疗提供参 考依据。
04
药敏试验的应用
抗生素选择
抗生素选择
药敏试验能够确定病原体对各种 抗生素的敏感程度，帮助医生选 择最有效的抗生素进行治疗，提 高治愈率并减少耐药性的产生。
耐药性检测
通过药敏试验可以检测病原体对 抗生素的耐药性，了解耐药机制 和传播情况，为制定防控策略提 供科学依据。
在琼脂平板上接种细菌，然后滴 加抗生素溶液，观察抑菌圈的大 小，判断细菌对药物的敏感性。
稀释法
将不同浓度的抗生素与细菌混合培 养，观察细菌的生长情况，确定药 物的最小抑菌浓度（MIC）。
纸片扩散法
将含有一定量抗生素的纸片贴在琼 脂平板上，观察纸片周围抑菌圈的 大小，判断细菌对药物的敏感性。
02
药敏试验的种类
详细描述
E试验法是一种新型的药敏试验方法，通过在药敏试纸上施加连续变化的压力，使药物浓度与细菌生 长曲线呈线性关系，从而快速准确地判断细菌对药物的敏感程度。该方法操作简便，结果准确可靠。
03
药敏试验的步骤
样本采集
采集方法
根据感染部位和病原体类 型，选择合适的采集方法， 如咽拭子、痰液、尿液等。
采集部位
选择病原体含量较高的部 位进行采集，如痰液宜选 自肺部。
样本处理
样本保存
样本量
采集后的样本应尽快送至实验室进行 检测，如不能及时送检，应妥善保存。
保证足够的样本量，以满足后续实验 需求。
样本处理方法
对采集的样本进行适当的处理，如离 心、过滤等，以去除杂质和无关细胞。
结果判断
根据病原体的生长情况，判断其对不同药物的敏 感程度。
报告发布
将实验结果及时报告给临床医生，为治疗提供参 考依据。
04
药敏试验的应用
抗生素选择
抗生素选择
药敏试验能够确定病原体对各种 抗生素的敏感程度，帮助医生选 择最有效的抗生素进行治疗，提 高治愈率并减少耐药性的产生。
耐药性检测
通过药敏试验可以检测病原体对 抗生素的耐药性，了解耐药机制 和传播情况，为制定防控策略提 供科学依据。
在琼脂平板上接种细菌，然后滴 加抗生素溶液，观察抑菌圈的大 小，判断细菌对药物的敏感性。
稀释法
将不同浓度的抗生素与细菌混合培 养，观察细菌的生长情况，确定药 物的最小抑菌浓度（MIC）。
纸片扩散法
将含有一定量抗生素的纸片贴在琼 脂平板上，观察纸片周围抑菌圈的 大小，判断细菌对药物的敏感性。
02
药敏试验的种类
详细描述
E试验法是一种新型的药敏试验方法，通过在药敏试纸上施加连续变化的压力，使药物浓度与细菌生 长曲线呈线性关系，从而快速准确地判断细菌对药物的敏感程度。该方法操作简便，结果准确可靠。
03
药敏试验的步骤
样本采集
采集方法
根据感染部位和病原体类 型，选择合适的采集方法， 如咽拭子、痰液、尿液等。
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4. 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化 的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面；
5. 35℃孵育16～24小时，量 取抑菌圈直径；
6. 根据抑菌环的直径，按照 CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
CLSI对K-B法的标准化规定 纸片药物含量、细菌接种浓度、培养基、
平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、 质控方法等；常规测试、报告的抗生素。
钙镁离子含量、锌离子含量 （用27853氨基糖苷类和亚胺
– 苛养菌放普通环境生长 不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 培养时间
菌悬液
– 粘液性铜绿需48小时
浓度高抑菌环缩小（假耐药）• 测量方法
浓度低则扩大（假敏感）
稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有受试菌的培养 基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀 释），培养16～24h后，通过观察细菌生长 现象来测得药物对受试菌的最低抑菌浓度 （MIC）。
不同的药判定标准不同；不同的菌判定标 准也不同。
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扩散法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值7.2-7.4
• 气体环境
营养程度（肠球菌能生长）
– 普通细菌放CO2时由于
厚度
碳酸的影响，药物活性
抗生素拮抗剂含量（用29212 监控）
受到影响，形成假敏感 或假耐药
1.手工试验
• 纸片扩散法（K-B法） • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法 • E-test法
2.自动仪器药敏系统
纸片扩散法（K-B法）
原理：抑菌圈的大小反映受试菌对测定药 物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈 负相关。
MIC与抑菌圈直径的线性关系
药敏试验方法简介
耐药菌问题日益严重
“目前药物失去作用的速度与科学家发 现新药物的速度差不多。”
摘自WHO报告
抗微生物治疗面临的获得新的耐药机制 •以往对付耐药性的策略收效不显
一、 抗菌药物敏感试验（AST）
预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，指导合
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稀释法（MIC法）
MIC法：分为常量法和微量法
Ø 常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
Ø 微量法：微量肉汤稀释法
p 简化双浓度折点法 ATB药敏
p 简化常规浓度分布MIC法 BD、德 灵药敏
p 动力学计算MIC法 VITEK2药敏
VITEK32、
肉汤稀释法
不生长 = 抗生素抑制细菌生长 生长 = 抗生素无法抑制细菌生长
葡萄球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
肠杆菌科抗菌药物敏感试验推荐分组
假单胞菌属的抗菌药物药物敏感推荐分组
不动杆菌属的抗菌药物药敏试验推荐分组
肠球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
肺炎链球菌抗菌药物药敏试验推荐分组
药敏试验的折点亦遵照每年最新公布的 CLSI标准进行，分为敏感（S）、耐药（R） 和中介（I）。
对于稀释法的批量试验，有时需要报告 MIC50、MIC90。
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稀释法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值 7.2-7.4
• 气体环境
营养程度
– 所有需氧细菌均放普通
抗生素拮抗剂含量
大气环境。如果放CO2
钙镁离子含量（钙10-25； ，由于碳酸的影响，药
镁10-12.5μg/ml）
Increasing Antibiotic Conc.
MIC = 8
.25
0.5
1
2
4
8
16
32
MIC (最小抑菌浓度) = 抗生素可抑制细菌生长 的最小浓度。
常量稀释法
药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
理用药，避免产生或加重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌
握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防 耐药菌感染的发生和流行。
（1）抗菌药物的选择 在我国主要遵循临床实验室标准化委员会
（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药物选择原则 Ø A组：对特定菌群常规测试并报告的药物 Ø B组：可常规测试、选择性报告的药物 Ø C组：替代性或补充性药物 Ø U组：仅用于泌尿道感染的抗菌药物
104 cfu/ml
mg/ml 4 2 1 0.5 0.25 0.12 0
微量肉汤稀释法
接种后应充分混匀，但不能有气泡产生
静置培养
培养温度；35℃
气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大 气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微 需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2 培养时间：18小时
药敏结果报告可用MIC（μg/ml）或对照 CLSI标准用S、R和I报告。
物活性受到影响，形成
菌悬液（5×104CFU/ml）
假敏感或假耐药
接种效应
• 培养时间
浓度高MIC抬高
– 真菌需48小时
浓度低MIC压低
– 奴卡菌需5天
E-test法
将稀释法和扩散法的原理结合起来，直接 测定药物对受试菌的MIC 。
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Etest 试条
敏感：分离菌株能被测试药物使用推荐剂 量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓 度所抑制
耐药：分离菌株不能被测试药物常规剂量 可达到的药物浓度所抑制；分离菌株可能 存在某些特定的耐药机制；治疗研究显示 药物对分离菌株的临床疗效不可靠
耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效
二、抗菌药物的种类及作用机制
三、药敏试验方法学
Log2. MIC
R
I
S
耐药
中介 敏感
d1 d2 抑菌圈直径（mm)
1. 准备抗菌药物纸片和水解酪蛋白（M-H）培养基；
2. 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐 水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准；
3. 用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余 菌液，然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次 旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周；
5. 35℃孵育16～24小时，量 取抑菌圈直径；
6. 根据抑菌环的直径，按照 CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
CLSI对K-B法的标准化规定 纸片药物含量、细菌接种浓度、培养基、
平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、 质控方法等；常规测试、报告的抗生素。
钙镁离子含量、锌离子含量 （用27853氨基糖苷类和亚胺
– 苛养菌放普通环境生长 不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 培养时间
菌悬液
– 粘液性铜绿需48小时
浓度高抑菌环缩小（假耐药）• 测量方法
浓度低则扩大（假敏感）
稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有受试菌的培养 基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀 释），培养16～24h后，通过观察细菌生长 现象来测得药物对受试菌的最低抑菌浓度 （MIC）。
不同的药判定标准不同；不同的菌判定标 准也不同。
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扩散法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值7.2-7.4
• 气体环境
营养程度（肠球菌能生长）
– 普通细菌放CO2时由于
厚度
碳酸的影响，药物活性
抗生素拮抗剂含量（用29212 监控）
受到影响，形成假敏感 或假耐药
1.手工试验
• 纸片扩散法（K-B法） • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法 • E-test法
2.自动仪器药敏系统
纸片扩散法（K-B法）
原理：抑菌圈的大小反映受试菌对测定药 物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈 负相关。
MIC与抑菌圈直径的线性关系
药敏试验方法简介
耐药菌问题日益严重
“目前药物失去作用的速度与科学家发 现新药物的速度差不多。”
摘自WHO报告
抗微生物治疗面临的获得新的耐药机制 •以往对付耐药性的策略收效不显
一、 抗菌药物敏感试验（AST）
预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，指导合
2020/4/27
稀释法（MIC法）
MIC法：分为常量法和微量法
Ø 常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
Ø 微量法：微量肉汤稀释法
p 简化双浓度折点法 ATB药敏
p 简化常规浓度分布MIC法 BD、德 灵药敏
p 动力学计算MIC法 VITEK2药敏
VITEK32、
肉汤稀释法
不生长 = 抗生素抑制细菌生长 生长 = 抗生素无法抑制细菌生长
葡萄球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
肠杆菌科抗菌药物敏感试验推荐分组
假单胞菌属的抗菌药物药物敏感推荐分组
不动杆菌属的抗菌药物药敏试验推荐分组
肠球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
肺炎链球菌抗菌药物药敏试验推荐分组
药敏试验的折点亦遵照每年最新公布的 CLSI标准进行，分为敏感（S）、耐药（R） 和中介（I）。
对于稀释法的批量试验，有时需要报告 MIC50、MIC90。
2020/4/27
稀释法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值 7.2-7.4
• 气体环境
营养程度
– 所有需氧细菌均放普通
抗生素拮抗剂含量
大气环境。如果放CO2
钙镁离子含量（钙10-25； ，由于碳酸的影响，药
镁10-12.5μg/ml）
Increasing Antibiotic Conc.
MIC = 8
.25
0.5
1
2
4
8
16
32
MIC (最小抑菌浓度) = 抗生素可抑制细菌生长 的最小浓度。
常量稀释法
药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
理用药，避免产生或加重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌
握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防 耐药菌感染的发生和流行。
（1）抗菌药物的选择 在我国主要遵循临床实验室标准化委员会
（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药物选择原则 Ø A组：对特定菌群常规测试并报告的药物 Ø B组：可常规测试、选择性报告的药物 Ø C组：替代性或补充性药物 Ø U组：仅用于泌尿道感染的抗菌药物
104 cfu/ml
mg/ml 4 2 1 0.5 0.25 0.12 0
微量肉汤稀释法
接种后应充分混匀，但不能有气泡产生
静置培养
培养温度；35℃
气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大 气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微 需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2 培养时间：18小时
药敏结果报告可用MIC（μg/ml）或对照 CLSI标准用S、R和I报告。
物活性受到影响，形成
菌悬液（5×104CFU/ml）
假敏感或假耐药
接种效应
• 培养时间
浓度高MIC抬高
– 真菌需48小时
浓度低MIC压低
– 奴卡菌需5天
E-test法
将稀释法和扩散法的原理结合起来，直接 测定药物对受试菌的MIC 。
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Etest 试条
敏感：分离菌株能被测试药物使用推荐剂 量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓 度所抑制
耐药：分离菌株不能被测试药物常规剂量 可达到的药物浓度所抑制；分离菌株可能 存在某些特定的耐药机制；治疗研究显示 药物对分离菌株的临床疗效不可靠
耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效
二、抗菌药物的种类及作用机制
三、药敏试验方法学
Log2. MIC
R
I
S
耐药
中介 敏感
d1 d2 抑菌圈直径（mm)
1. 准备抗菌药物纸片和水解酪蛋白（M-H）培养基；
2. 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐 水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准；
3. 用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余 菌液，然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次 旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周；