氨基酸态氮的测定

酸式滴定管：25 ml 胖肚吸量管：10 ml
试剂
酚酞乙醇指示液：1% 酚酞乙醇指示液：1% 缓冲液：PH=6.18 缓冲液：PH=6.18
中性甲醛：20% 中性甲醛：20% 氢氧化钠标准溶液：0.0500mol/l 氢氧化钠标准溶液：0.0500mol/l
操作步骤
(1)吸取氨基酸20 ml ↓H2O 100 ml 刻度线 得到A
(V2 V1 ) * c * 0.014 m *100
电位滴定法
原理 根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固 定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸 度计的玻璃电极及甘汞电极同时插入被测 液中构成电池，用氢氧化钠标准溶液滴定， 依据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终 点。
仪器
酸度计（附磁力搅拦器）；
磁力搅拌器
+NaOH
R―CH―COOH ︳ NH―CH2OH
[
R―CH―COOH ︳ N(CH2OH)
2
]
R ―CH―COOH ︳ NH―CHO
方法特点及应用
GB/T5009.5-2003食品中蛋白质的测定 此法简单易行、快速方便，与亚硝酸氮气容量法分析 结果相近。在发酵工业中常用此法测定发酵液中氨基酸含 量的变化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情况， 并以此作为控制发酵生产的指标之一。普氨酸与甲醛作用 时产生不稳定的化合物，使结果偏高;溶液中若有 存在也 可与甲醛反应，往往使结果高。
(2)吸取A 20 ml
↓H2O 60 ml 100 ml 开动磁力搅拌器
↓(0.05mmol/L)NaOH
滴定至PH=8.2 得到B并记录NaOH的消耗量 B 混匀 ↓(0.05mmol/L)NaOH 滴定至PH=9.2
(3) ↓10.0 ml 甲醛溶液 并记录NaOH的消耗量 (4)取80 ml H2O ↓10.0 ml 甲醛溶液
操作步骤
(1) 含氨基酸溶液20~30mg 250ml 滴定终点（红→ 琥珀色） ↓百里红酚酞3d (2) 含氨基酸溶液20~30mg ↓ 0.01mol/l NaOH标液 250ml 中性甲醛20ml 滴定终点（淡蓝色） 摇匀 ↓中性红指示剂 ↓ 0.01mol/l NaOH 2~3d
(3)分别记录两次消耗碱液的用量
试剂
40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂， ①40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂， 用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。 用氢氧化钠将40%甲醛中和至淡蓝色。 0.1%百里酚酞乙醇溶液 ②0.1%百里酚酞乙醇溶液 0.1%中性红50%乙醇溶液 ③0.1%中性红50%乙醇溶液 0.1%mol/L氢氧化钠标准溶液 ④0.1%mol/L氢氧化钠标准溶液
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双指示甲醛滴定法
原理
氨基酸具有酸性的-COOH基和碱性的-NH2基。它们相互租用而使氨基酸成为中性 的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就 可以用强碱标准溶液来滴定-COOH基，并用间接的方法测定氨基酸的总量。反 应式（有三种不同的推论）如下： H O ︳ ‖ R―C―C ︳ ︳ H3N ―O H O ︳ ‖ R―C―C―OH +HCHO ︳ NH2 H ︳ R―C―COOH ︳ N=CH2 R―CH―COONa ︳ N=CH2
Βιβλιοθήκη Baidu氨基酸态氮的测定
1概述 2氨基酸态氮的测定
概述
蛋白质可以被酶、酸或碱水解，其水解的最终产物为氨基酸。氨 基酸是构成蛋白质的最基本物质，虽然从各种天然源中分离得到的氨 基酸已达175种以上，但是构成蛋白质的氨基酸主要是其中的20种， 而在构成的氨基酸中，亮氨酸、 异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨算、蛋氨 酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，必须 依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生 理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病或通过补充而增强了新陈代 谢作用。 随着食品科学的发展和营养知识的普及，食物蛋白质中必需氨基 酸含量的高低及氨基酸的构成，愈来愈得到人们的重视。为提高蛋白 质的生理效价而进行食品氨基酸互补和强化的理论，对食品加工工艺 的改革，对保健食品的开发及合理配膳等工作都具有积极的指导作用。 因此，食品及其原料中氨基酸的分离、鉴定和定量也就具有极其重要 的意义。
结果计算
氨基酸态氮 %
式中: c----氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L V1----中性红指示剂滴定时消耗NaOH标准溶液体积，mL V2----百里酚酞知己滴定是消耗NaOH标准溶液体积，mL m-----测定用试样溶液相当于试样的质量，g 0.014----氮的毫摩尔质量，g/mmol =
表格
加甲醛前耗 NaOH量/mL 加甲醛后耗 NaOH量/mL NaOH标准液 浓度/mol.L-1
样 品 滴 定
1 2 3 平均 1 2 3 平均
空 白 滴 定
谢 谢 观 赏
组员：林蕾蕾（11） 陈云仙（19） 赵娇娇（22）
200ml
↓(0.05mmol/L)NaOH
滴定至PH8.2
↓(0.05mmol/L)NaOH 滴定至PH=9.2，做空白试验
结果计算
氨基酸态氮 %
=
(V2 V1 ) * c * 0.014 m * 20 / 100 *100
式中： V1----试样稀释液加入甲醛后滴定至终点（PH9.2）消耗NaOH标准 溶液的体积，ml V2----空白试验加入甲醛后滴定至终点（PH9.2）消耗NaOH标准 溶液的体积，ml c----氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L m-----测定吸取的试样溶液相当于试样的质量 0.014----氮的毫摩尔质量，g/mmol