辐照灭菌确认方案计划
#####有限公司
研发部
#
#
#
辐
照
灭
菌
确
认
方
案
验证方案审批表
一、验证方案拟订表
二、验证方案审核
三、验证方案批准
批准人（签名）：批准日期：年月日
方案执行日期：年月日
四、验证执行小组成员
目录
1.主要内容和适用范围
2.辐照剂量测定
2.1原理
2.2选择SAL和获得产品样品
2.3测定初始污染菌
2.3.1初始污染菌的计算
2.3.2初始污染菌的测定
2.3.3校正系数的测定
2.3.4产品释出物的检验
2.4建立验证剂量
2.5完成验证剂量实验
2.6建立灭菌剂量
3.辐照灭菌加工确认
4.验证总结报告书
####辐照灭菌确认方案
1．主要内容和适用范围
本文对于###的灭菌确认过程做了详细描述，确认的内容包括辐照剂量的设定及辐照加工确认。本方案制定的目的在于证实产品辐照符合ISO11137-2006的要求，灭菌后的产品能达到10-6的无菌保证水平。
2．辐照灭菌剂量设定
2.1原理
验证的原理是基于ISO11137方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。再用验证剂量对产品进行辐照，并测定存活微生物的样品件数，以此来确定最低灭菌剂量（SAL=10-6）。
2.2选择SAL和获得产品样品
该产品的SAL选定为10-6，收集常规生产的标准包装产品，于灭菌前对三个批号进行随机抽样，每批至少抽取10个样品，其中取样比例（SIP）为1。
2.3测定初始污染菌
2.3.1初始污染菌的计算
测定至少30个样品单元的每件样品的初始污染菌并计算，
a)三批中的每一批的平均的单元产品初始污染菌（批平均），和
b)所有的单元产品平均初始污染菌（总平均初始污染菌）。
ISO11137-2006或GB/T18280-2007中，7.2.1.3.2测定至少30个样品单元的每件样品的初始微污染菌并计算：批平均值和总平均值。当初始污染菌较低（如小于10）；允许集中检测单独一批中10个单元产品来确定批平均初始污染菌。
将三批产品的每批平均初始污染菌与总平均初始污染菌比较，确定是否有一批平均值是总平均值的两倍或两倍以上。
确定初始污染菌测定中是否提供了校正因子，建立测定校正因子的方法。
2.3.2初始污染菌测定
测定依据：ISO11737-1：1995
试验方法：（平板计数法）
1)洗脱液：
PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠
7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过
滤，灭菌。
2)样品处理：
取样品10cm2，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，浸泡，振摇，作为1:10的供试液。
3)需气菌培养：
取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
4)霉菌培养：
取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的玫瑰红钠培养基，混匀，凝固，倒置培养。
5)计数：
除另有规定外，细菌培养48小时，逐日点计菌落数，一般以48小时的菌落数报告；霉菌、酵母菌培养72小时，逐日点计菌落数，一般以72小时的菌落数报告；必要时，可适当延长培养时间至5～7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。
批平均初始污染菌为（cfu/件）
总平均初始污染菌为（cfu/件）
2.3.3校正系数的测定
根据ISO11737-1中描述的初始污染菌的确定方法进行试验，测定校正因子，该因子取自对活菌计数的初始污染菌检测技术的验证。
测定依据：ISO11737-1:1995
试验方法：
1）标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372），传代培养，制成100cfu/ml备用。
2）洗脱液准备：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。
3）制备悬液稀释液，使0.1ml中含有100个芽孢。向随机抽取的10个产品上接种0.1mL该稀释悬液，并在层流下进行干燥。
4）用洗脱液对接种的产品进行洗脱，测定洗脱的芽孢数，并计算平均值。100除以平均芽孢数即为回收率的校正系数。