微生物技术应用背景知识一：显微技术
第二章微生物的纯培养和显微技术
（Streptococcus lactis）
无乳链球菌（Streptococcus
agalactiae)
溶血链球菌 （ Streptococcus
hemolyticus)
沿两个相垂直的平面进行，分裂后 每四个细胞特征性地连在一起，呈 田字形. 如四联微球菌
（Micrococcus tetragenus）
（3）螺旋菌
螺旋状的细菌称为螺旋菌。 根据其弯曲情况分为： 弧菌（vibrio)：螺旋不满一圈，菌体呈弧形或逗号形 例：霍乱弧菌、逗号弧菌 螺旋菌(spirillum)：螺旋满2—6环，螺旋状 例：干酪螺菌 螺旋体(spirochaeta)：旋转周数在6环以上，菌体柔 软。 例：梅毒密螺旋体
Vibrio cholerae
杆菌端部特征
Rod-Shaped Bacterium, hemorrhagic E. coli, strain 0157:H7
Bacillus megabacterium
Legionella pneumophila (causes Legionnaires Disease)
(causes anthrax), Bacillus anthracis
③培养基应少含或不含糖分（尤以细菌）
④试管密封以隔绝空气 优：方法简单，成活率高
缺：保存时间短，传代次数多，易变异。
②石蜡油封藏法
原理：低温、缺氧 方法：将无菌石蜡油注入生长良好的斜面种试管 内（油量高出斜面1cm）包扎后竖直放入冰箱 保藏。 说明：①液体石蜡于170℃干热灭菌1h。 ②斜面培养基能干燥则保藏效果好。 ③保藏时间1—2年。 ④适于保藏霉菌、酵母、放线菌及芽孢杆 菌。 ⑤能细菌中种类最多的，工农业生产中所用的细菌大多是 杆菌，如淀粉酶、蛋白酶生产菌--枯草杆菌，谷氨酸生产菌-北京棒杆菌，细菌肥料--根瘤菌，杀虫剂--苏云金杆菌，致 病菌--伤寒沙门氏菌，痢疾志贺氏菌等。 细菌应用：工业上生产各种氨基酸、核苷酸、酶制剂、乙醇、 丙酮、丁醇、有机酸、抗生素等；农业上用作杀虫菌剂、细 菌肥料的生产和在沼气发酵、饲料青贮等方面的应用；医药 上如各种菌苗、类毒素、代血浆和许多医用酶类的生产等； 以及细菌在环保和国防上的应用等，都是利用有益细菌活动 的例子。 细菌危害：人、动物、植物的传染病、食物和工农业产品腐 烂变质。 2、古生菌 与细菌有着类似的个体形态，但多生活在极端环境中如高温、 高盐、
第二章微生物的纯培养和显微技术
▲ 子实体
大
侧
型
耳
真
菌
（2）霉菌的形态
分枝或不分枝。管状。
在固体培养基上 营养菌丝：部分菌丝伸入培养基
内吸收养料。
气生菌丝：菌丝伸入空中生长 繁殖菌丝：由气生菌丝发育到一
定阶段分化而成。
（3）与人类的关系
人类实践活动中最早认识和利用的一类微生物。
■制曲、酿酱等发酵食品 ■发酵工业：生产酒精、柠檬酸、酶制剂 ■农业：饲料发酵、生产赤霉素、杀虫农药、除草剂 ■堆肥腐熟 ■引起农副产品、衣物、食品、器材发霉 ■引起动植物体病害：黄曲霉
单细胞
三种基本形态
球状菌 杆状菌 螺旋状菌
弧菌 螺菌
（1） 球状菌
球状或扁圆状
单球菌（尿微球菌） 双球菌（肺炎双球菌） 链球菌（乳酸链球菌） 四联球菌（四联细球菌） 八叠球菌（尿素八叠球菌）
葡萄球菌（金黄葡萄球菌）
▲单球菌
分裂后的细胞分散而单 独存在的球菌. 如尿素微球菌 (Micrococcus ureae
小单胞菌属
形态：只有基质菌丝，上生孢子梗，顶生一 个孢子。
特性：产庆大霉素 繁殖：孢子生殖
弗兰克氏菌属
赤
杨
形态特性：共生菌。与 非豆科木本植物根形成 根瘤。固氮。不易人工
形 成 根 瘤
根 与 弗 兰 克
培养。
氏 菌
繁殖：孢囊孢子生殖。
放线菌属于细菌，在防病治病、工农业生产中 有特殊重要性。
粮食、食物、用具、器材。耐较酸环境。
二 真核微生物的个体形态
1 霉菌（mold） 2 酵母菌（Yeast） 3 大型真菌 4 藻类（Algae） 5 原生动物（Prokaryote）
1 霉菌（mold）
微生物制片显微观察及检测技术
革兰氏染色图解
革兰氏染色试剂
步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上
步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上
步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层
步骤4：风干
步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定
步骤6：结晶紫染色1分钟
步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片
步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗
低倍镜操作方法
1.两眼从侧面注视 低倍物镜对准通光孔，使用粗调焦螺旋将镜筒 自上而下的调节，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破 玻片。当物镜镜头与载物台的玻片相距2～3mm时停止； 2.左眼注视 （注意右眼应该同时睁着），并转动粗调焦螺旋，使 镜筒徐徐上升，直到看清物象为止； 3. 再用微调焦螺旋调至清晰。 注意：粗调调焦螺旋只用于上调载物台，如观察显微镜时 ，用粗调节器调节，有压碎载玻片、损坏物镜的危险。因此， 用细调焦螺旋调节视野使其更清晰
微生物检测技术介绍
检测技术的重要性
一、微生物检验技术介绍
微生物检测
传统筛选系统 免疫凝集/免疫沉淀实验 Mini VIDAS筛选系统 实时荧光定量PCR 革兰氏染色镜鉴 按照标准进行 传统的生化反应鉴定 API试剂条 菌鉴定国际金标准
微生物鉴定
半自动细菌鉴定仪 （ATB Expression）
(二)细菌的革兰氏染色步骤
涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗 →干燥→观察
1 ．取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单 染色的相同。 2．用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3．加碘液媒染1min后水洗。 4 ．斜置载玻片，滴加 95 ％乙醇脱色，至流出的乙醇不 现紫色 为止，大约需时20~30s，随即水洗。 5．用蕃红染液复染1min，水洗。 6．用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用 低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细 胞的颜色。
微生物制片显微观察及检测技术
微生物制片显微观察及检测技术微生物是一类不能看见的生物体，它们很小、很微弱。
为了观察和检测微生物，科学家们开发出了多种显微观察和检测技术。
本文将介绍一些常用的微生物制片技术及显微观察和检测技术。
微生物制片技术主要是将微生物样本制备成薄片以便进行显微观察。
常用的制片技术包括固定、包埋和切片。
固定是将微生物样本中的细胞或细菌固定在载玻片上，常用的方法有热固定、酒精固定和甲醛固定等。
包埋是将固定的微生物样本包裹在固体介质中，通常用于切片前的处理，常用的方法有冰冻包埋和石蜡包埋。
切片是将包埋的微生物样本切成薄片，常用的方法有冷冻切片和石蜡切片。
显微观察技术是利用显微镜观察微生物样本的细节和特征。
常用的显微观察技术包括光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜是利用光线通过样本并经过透镜放大观察，主要适用于观察细菌、真菌、原生动物等较大的微生物。
电子显微镜是利用电子束通过样本并经过电磁透镜放大观察，主要适用于观察细菌、病毒等较小的微生物。
电子显微镜分为扫描电子显微镜和透射电子显微镜两种，扫描电子显微镜适用于表面观察，透射电子显微镜适用于内部观察。
检测技术是用于检测微生物样本中的特定组分或特定物质。
常用的检测技术有免疫荧光检测法、酶联免疫吸附检测法和聚合酶链反应检测法等。
免疫荧光检测法是利用荧光染料标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显微镜观察荧光信号来检测微生物样本。
酶联免疫吸附检测法是利用酶标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显色反应来检测微生物样本。
聚合酶链反应检测法是利用特定的引物和酶来扩增微生物样本中的特定基因片段，通过电泳分析来检测扩增产物。
除了上述的微生物制片技术、显微观察和检测技术，还有一些其他的辅助技术可以提高微生物观察和检测的效果。
例如，染色技术可以通过染色一些特定物质来突出显示微生物样本中的细节和结构。
常用的染色技术有普鲁士蓝染色、格拉姆染色和伊汀染色等。
荧光标记技术可以通过标记荧光染料来突出显示微生物样本中的特定组分。
微生物检验技术知识点
微⽣物检验技术知识点1微⽣物：是⼀群形体细⼩、结构简单、⼈⾁眼看不见，必须借助于光学显微镜、电⼦显微镜放⼤⼏百倍、⼏千倍甚⾄⼏万倍才能看到的⽣物。
2 微⽣物的种类：原核细胞型：细菌、放线菌、螺旋体、⽴克次⽒体、⽀原体、⾐原体；真核细胞型：酵母菌、霉菌、微藻类等；⾮细胞型：病毒、亚病毒（类病毒、拟病毒、朊病毒）。
3 病源微⽣物：感染⼈、动植物，导致疾病发⽣的有害微⽣物，称之为病原微⽣物。
4、微⽣物对产品的污染：对产品造成污染的微⽣物来源：⼟壤、空⽓、⽔、⼈和动植物、⽣产原料、⽣产器械及包装材料等5 微⽣物检验的意义：1）是衡量动植物性产品卫⽣质量的重要指标之⼀，也是判定被检产品能否⾷⽤的科学依据之⼀。
2）通过微⽣物检验，可以判断产品加⼯环境及产品卫⽣环境，能够对产品被微⽣物污染的程度作出正确的评价，为各项卫⽣管理⼯作提供科学依据，提供传染病和⼈类、动物和⾷物中毒的防治措施。
3）微⽣物检验是以贯彻“预防为主”的卫⽣⽅针，可以有效地防⽌或者减少⾷物中毒、⼈畜共患病的发⽣，保障⼈民的⾝体健康；同时，它对提⾼产品质量，避免经济损失，保证出⼝等⽅⾯具有政治上和经济上的重要意义。
6微⽣物检验的范围与对象：微⽣物检验<>范围1.⽣产环境的检验：车间⽤⽔、空⽓、地⾯、墙壁等。
2.各种产品的原、辅料检验：包括⾷⽤动物、⾕物、添加剂等⼀切原辅材料。
3.各类产品加⼯、储藏、销售诸环节的检验：包括⾷品从业⼈员的卫⽣状况检验、加⼯⼯具、运输车辆、包装材料的检验等。
4.产品的检验：重要的是对出⼚产品、可疑产品及⾷物中有毒⾷品的检验.微⽣物检验<>对象7类(1)⾷品(2)化妆品(3)药品(4)⼀次性⽤品及其他⽣活⽤品(5)应施检疫的出⼝动物产品(6)环境(7)有关国际条约或其他法律、法规规定的强制性卫⽣检验的进出⼝商品我国卫⽣部颁布的⾷品微⽣物指标有菌落总数、⼤肠菌群和致病菌三项⼤肠菌群是指⽰⽔质受粪便污染的指⽰菌，细菌总数指⽰⽔体受污染物污染的情况。
微生物学实验知识点总结与实践应用
微生物学实验知识点总结与实践应用微生物学实验知识点总结与实践应用微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。
《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。
微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。
涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。
我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。
（1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。
在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。
（2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。
自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。
（3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。
灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。
微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。
灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。
是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之达到无菌保障水平。
经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。
经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。
（4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。
经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。
根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。
微生物检验基础知识
微生物检验基础知识
微生物检验是一种使用显微技术对微生物进行观察和测量的方法。
以下是微生物检验的基础知识：
1. 微生物的概念：微生物是微小的生物，通常需要使用显微镜才能看到。
它们包括细菌、病毒、真菌、藻类等。
2. 微生物检验的分类：微生物检验可以分为细菌检验、病毒检验、寄生虫检验和真菌检验等。
3. 微生物检验的方法：微生物检验的方法包括直接观察、分离培养、血清学试验、生化反应等。
4. 微生物检验的步骤：微生物检验的步骤包括采集样品、制备培养基、接种、培养、观察和鉴定等。
5. 微生物检验的应用：微生物检验在医学、环境监测、食品卫生等领域有广泛应用。
例如，在医学领域中，微生物检验可以帮助医生诊断疾病，监测感染情况，并选择合适的药物治疗。
在环境监测中，微生物检验可以用来检测水源、土壤等环境的污染情况。
6. 微生物的特点：微生物具有体积小、数量大、繁殖快等特点。
同时，它们也具有广泛的分布和多样的种类，可以在各种环境中生存和繁殖。
通过以上基础知识的学习，可以对微生物检验有一个基本的了解和认识。
如有更深入的学习需求，建议阅读微生物检验相关书籍或咨询专业人士。
第二章微生物的纯培养和显微技术
33
蛋白酶产生菌的分离
34
具有氨苄青霉素抗性 的大肠杆菌
35
五、选择培养分离
5·2 富集培养：不同微生物间的有不同特点，根据这些特点 制定特定的环境条件，使需要的微生物生长旺盛，数量增 加，从而更容易分离到该微生物。
（3）无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止 其被其它微生物污染的技术称为无菌技术。
3
一、无菌技术
1·1微生物培养的常用器具及灭菌 • 常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿等
注：所有器皿使用前都要灭菌！ • 培养基：培养微生物营养物质。
注：配制好后要及时灭菌。 • 常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌、
干热灭菌
待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制
31
五、选择培养分离
1. 利用选择平板进行直接分离
牛奶平板：分离蛋白酶产生菌； 颜色反应：分离特定的菌株； 利用特定细菌的滑动特点进行
分离纯化；
待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物
32
5·1用选择培养基进行直接分离 选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，
群体。
28
五、选择培养分离 选择培养分离：根据微生物的营养、生理、 生长条件等特点，通过选择培养进行微生物 的分离与纯化技术。
29
五、选择培养分离
微生物群落中数量占少数的微生物的分离纯化：
抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离的微生物生长更快；
使待分离的微生物在群落中的数量上升， 方便用稀释法对其进行纯化。
第二章微生物的纯培养和显微技术精品PPT课件
四联球菌
▲八叠球菌 按三个互相垂直的平
面进行分裂后，每八个 球菌在一起成立方体形.
如藤黄八叠球菌
（Sarcina ureae)
八叠球菌
▲葡萄球菌 分裂面不规则，多个球菌
聚在一起，像一串串葡萄。 如金黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus)
第二节 显微镜和显微技术
显微镜自 身特点
放大倍数 分辨率 反差
显微 观察效果
操作者 技能
显微镜使用 标本制作 观察技术
一 显微镜的种类及原理 二 显微观察样品的制备
一 显微镜的种类及原理
普通光学显微镜 暗视野显微镜（视野暗，样品亮。细菌运动） 相差显微镜（不染色观察细微结构） 荧光显微镜（黑暗时荧光素吸收紫外线放出可见光） 电子显微镜
第二章 微生物的纯培养和显微技术
第一节 微生物的分离和纯培养 第二节 显微镜和显微技术 第三节 原核微生物 第四节 真核微生物
第一节 微生物的分离和纯培养
微生物的培养物（culture) 微生物的纯培养物(pure cultrue) 微生物的纯培养技术
无菌技术
防止实验操作过程中其被其他微生物污
显微镜的数值孔径与镜口角及工作距离间的关系 η.sinθ——数值孔径NA。
低倍镜 高倍镜
油镜
以空气做介质同以香柏油做介质的比较 η.sinθ——数值孔径NA。
(a)×500
(b)×175
(c)×210
(a) (b)暗视野显微镜观察 (c) (d) (e)相差显微镜观察
(d)×600
(e)×100
普通光学显微镜
机械装置——镜座、支架、载物台、调焦螺旋 光学系统——物镜、目镜、聚光器
微生物实验技术
第一章 普通光学显微镜的使用
一、普通光学显微镜
现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系 统来放大成像，由机械装置和光学系统两大部分 组成 。 在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键， 它直接影响着显微镜的分辨率。
油镜：放大倍数最大，可达100x ，使用时 需要在载玻片和镜头之间滴加镜油。 1）增加照明亮度 2）增加显微镜的分辨率
二、霉菌形态观察
美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。 由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使 美蓝由蓝色氧化型转变成无色的还原型，染色后 活细胞呈无色。死细胞或代谢能力微弱的衰老细 胞胞内还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。
2、水一碘液浸片法
将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍后，滴加一滴于 载玻片中央，无菌操作取少许菌体置于染液中混 匀，盖上盖玻片后镜检。
革兰氏阳性菌：
细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少， 经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通 透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现 蓝紫色。
第四章 真菌
单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十 倍，一般通过美蓝染液水浸片法或水一碘液浸片 法来观察酵母菌形态 。
革兰氏染色
1.制片 取活跃生长期菌种按常规方法涂片(不宜过厚)、 干燥和固定。 2.初染 滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min 后倾去染液，水洗至流出水无色。
3.媒染 先用碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1 min，倾 去碘液，水洗至流出水无色。 4.脱色 将玻片上残留水用吸水纸吸去，在白色背景下用 滴管加95%乙醇脱色(一般20-30 s)，当流出液无 色时立即用水洗去乙醇。
一般情况下，应遵守从低倍镜到高倍镜再 到油镜的观察程序，因为低倍数物镜视野 相对大，易发现目标及确定检查的位置。