酶法测定膳食纤维的推荐方法1
检测膳食纤维的方法
检测膳食纤维的方法膳食纤维是指不能被人体消化吸收的多种碳水化合物，在人体内部没有被完全吸收利用，而是在消化道内发挥一系列重要生理功能的物质。
对于人体健康来说，膳食纤维具有重要的保健作用，能够降低血脂和血糖水平、促进肠道蠕动、预防便秘、降低结肠癌的发生率等。
为了能够准确地检测膳食纤维含量，提供科学的衡量指标，目前有一些常用的方法。
1. Gravimetric method（重量法）重量法是一种基本的膳食纤维分析方法，通过测定样品在经过一系列消化和提取过程后，残留物的质量来计算膳食纤维的含量。
首先，将样品经过酶解和洗涤等处理，去除可消化的部分，然后通过烘干使其失重，最后计算失重的质量即为膳食纤维的含量。
2. Chemical method（化学法）化学法是通过化学反应来测定膳食纤维的含量。
常用的化学方法有酚硫酸法、酶解法和高压液相色谱法等。
其中，酶解法是将样品暴露在特定的酶中，通过酶的作用降解多糖，然后通过化学分析方法确定被酶降解的物质的含量，从而计算膳食纤维的含量。
3. Enzymatic-gravimetric method（酶重法）酶重法结合了重量法和酶解法，通过测量提取液中的纤维残留物的质量以及可被酶解的非纤维物质的质量，从而计算出纤维的含量。
与传统的重量法相比，酶重法可以更加准确地测定纤维的含量。
4. Near Infrared Reflectance (NIR) Spectroscopy（近红外反射光谱法）近红外反射光谱法是一种无损检测方法，通过测量样品在近红外波段内的光谱反射，通过与已知含量的样品进行比对，从而确定膳食纤维的含量。
这种方法具有快速、无需样品处理的优点，但需要建立可靠的模型来实现准确的测量。
总结起来，目前常用的检测膳食纤维的方法有重量法、化学法、酶重法和近红外反射光谱法。
这些方法各有优势和局限性，需要根据实际需要选择适合的方法。
随着科学技术的发展，对膳食纤维的检测方法也将不断改进和完善，为人们提供更加准确和可靠的数据。
酶法测定膳食纤维的推荐方法(AOAC
酶法测定膳食纤维的推荐方法：试剂：1. 0.1M PBS, PH=0.6.2. 4M HCl ; 4M NaOH3. 95%乙醇，78%乙醇4. 丙酮酶：淀粉酶，蛋白酶，胰酶步骤：1. 湿样品需要均质并冻干，所有样品都需要粉碎至粒径0.3mm。
2. 当脂肪含量大于6-8%时或者需要适当粉碎时，需要在室温下用石油醚抽脂15min。
3. 称取1g样品，精确到0.1mg，转移至锥形瓶。
向其中加入25ml 0.1M的PBS，PH=6，充分悬浮样品。
4. 加入100ul 淀粉酶。
用膜盖住锥形瓶顶部，沸水浴保温15min，偶尔摇晃一下。
5. 室温下放凉，加入20ml蒸馏水，用HCL调至PH=1.5，用少量蒸馏水冲洗电极。
6. 加入100mg 胃蛋白酶，顶部盖膜，40℃保温并搅拌60min.7. 加入20ml蒸馏水，用NaoH调PH至6.8，少许蒸馏水冲洗电极。
8. 加入100ml 胰酶，顶部盖膜，40℃保温并搅拌60min.9. 用HCl调PH至4.5.10. 用干燥的称量过的G2坩埚（含0.5g硅藻土）作为辅助过滤设施。
用20m蒸馏水分两次冲洗。
A. 滤液残留（不溶性膳食纤维）：11. 用20ml 95%乙醇和20ml 丙酮分两次冲洗。
12. 105℃干燥至恒重，干燥器内冷却后称重（D1）。
13. 550℃灰化5h，干燥器内冷却后称重（I1）B．滤液（可溶性膳食纤维）14. 将滤液可冲洗水合并定容至100ml.15. 加入微热（60℃）的95%乙醇400ml，沉淀1h（时间可以缩短）.16. 用含有0.5g硅藻土的G2坩埚过滤。
17. 用20ml 78%乙醇、20ml 95%乙醇和20ml丙酮分别分两次冲洗。
18. 105℃烘至恒重，在干燥器内冷却后称重（D2）19. 550℃至少灰化5h，干燥器内冷却后称重（I2）空白：水溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维空白值（B1和B2）的测定都是在没有添加样品的情况下进行。
食品中总的、不溶性及可溶性膳食纤维的酶-重量测定法
食品中总的、不溶性及可溶性膳食纤维的酶-重量测定法当前，膳食纤维在预防慢性病中有着广泛的作用，膳食纤维与人体健康关系的研究日益受到重视。
现已知道可溶性膳食纤维的作用主要为调节血脂、血糖及调节益生菌丛。
而不溶性膳食纤维主要的作用为肠道通便。
目前市场上富含膳食纤维的食物、食品添加剂和保健食品越来越多，原有膳食纤维的检测方法已不适应当前需要。
古老的方法只能测定粗纤维[1],该方法所测数值与总纤维含量有较大差异，两者之间也没有一定的换算系数。
现有的洗涤剂法只能测定不溶性膳食纤维[2]，但不能测定可溶性膳食纤维，尤其是可溶性膳食纤维已明确具有保健功能，并成为保健功能食品中的功效成分，这就给膳食纤维成分更加细致的分类测定提出了要求。
目前膳食纤维的测定方法可分为两大类：重量法和化学法。
重量法较简单[3]，主要测定总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维。
化学法则可定量地测定其中每一种中性糖和总的酸性糖(糖醛酸)，还可单独测定木质素[4]，但化学法受仪器设备制约，因而不适用于常规的膳食纤维分析。
酶-重量法于20世纪80年代在国外首先发展起来，现已成为AOAC认可的分析方法，已被美国、日本、瑞典及北欧许多国家广泛采用。
1材料和方法1.1原理：分别用热稳定的α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化样品以去除蛋白质和淀粉。
总膳食纤维(TDF)的测定是先酶解,然后用乙醇沉淀，将过滤的TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗，干燥后称重。
不溶性和可溶性膳食纤维(IDF和SDF)是在样品酶解后即刻将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗,经干燥后称重。
SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后将滤渣干燥、称重。
TDF、IDF和SDF的量通过蛋白质和灰分含量进行校正。
1.2仪器：意大利VELP公司CSF6&GDE型膳食纤维测定仪；天平：精确至±01mg；马福炉：温度控制在(525±5)℃；干燥箱：温度控制在(105±3)℃和(130±3)℃。
膳食纤维的测定之酶-重量法
6.4 思考题
• 化学法测定还原糖有几种方法？ • 直接滴定法、高锰酸钾发的测定原理？ • 可溶性糖提取澄清剂的种类、三种要求？ • 总糖的测定方法？ • 淀粉的测定方法？ • 名词解释：粗纤维、纤维素、半纤维素、木质素、膳食纤维素。 • 粗纤维的测定。 • 膳食纤维的测定。
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对稀酸、稀碱难溶，人体不能消化利用的部分。
半纤维素——一种混合多糖，不溶于水而溶于碱、稀酸加热比纤维素易水解， 水解产物有木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖等。 纤维素——构成植物细胞壁的主要成分，是葡萄糖聚合物，由β－1，4糖苷 键连接，人类及大多数动物利用它的能力很低。不溶于水，但能吸水。 木质素——不是碳水化合物，是一种复杂的芳香族聚合物，是纤维素的伴随物。 难以用化学手段或酶法降解，在个别有机溶剂中缓慢溶解。
6.2 不溶性膳食纤维的测定
1.原理 样品经热的中性洗涤剂浸煮后，残渣用热蒸馏水充分洗涤，除去样品中
游离淀粉、蛋白质、矿物质，然后加入α一淀粉酶溶液以分解结合态淀粉，再用 蒸馏水、丙酮洗涤，以除去残存的脂肪、色素等，残渣经烘干，即为中性洗涤纤 维 (不溶性膳食纤维)。
2.适用范围及特点 本法适用于谷物及其制品、饲料、果蔬等样品，① 对于蛋白质、淀粉含量
知识点：碳水化合物的测定
情境六：膳食纤维的测定 任务一：重量法
课程：食品分析与检验技术
6.1 粗纤维的测定
粗纤维是植物性食品的主要成分之一，广泛存在于各种植物体内。化学上不是单 一组分，是混合物。 1. 粗纤维——主要成分是纤维素、半纤维素、木质素及少量含N物。集中存在于 谷类的麸、糠、秸杆、果蔬的表皮等处。
纤维是人类膳食中不可缺少的重要物质之一，在维持人体健康、预防疾病 方面有着独特的作用，已日益引起人们的重视。
应用酶-重量法测定秋葵荚中的膳食纤维
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方面 作用效 果 良好 圆 而 Ｉ Ｆ则 对肥 胖症 、 秘 、 肠 ； Ｄ 便 结
正常排泄 ； 降低某些癌症 、 心血管和糖 尿病发病率。许
作者简介 ： 王琰（９ ８ ）女（ ）硕士研究生 ， １ ８一 ， 汉 ， 研究方向 ： 分析化学 。
癌等有 良好 的治疗效果 。另外 ， 由于 Ｓ Ｆ在结肠 中水 Ｄ
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膳食纤维含量实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在测定不同食物中膳食纤维的含量，了解膳食纤维在食物中的分布情况，以及其对人体健康的重要性。
通过实验，我们可以掌握膳食纤维的测定方法，并对富含膳食纤维的食物进行评估。
二、实验材料1. 食物样品：大米、小麦、玉米、燕麦、豆类、蔬菜、水果等。
2. 试剂与仪器：无水乙醇、丙酮、热稳定α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶、电子天平、离心机、烘箱、烧杯、漏斗、滤纸等。
三、实验方法1. 样品处理：将各种食物样品分别研磨成粉末，过筛，以去除杂质。
2. 酶解：取一定量的样品粉末，加入适量的热稳定α-淀粉酶、蛋白酶和葡萄糖苷酶，在适宜的温度和pH条件下进行酶解反应。
3. 沉淀与抽滤：酶解后的溶液加入无水乙醇和丙酮，充分混合，静置沉淀，抽滤，得到膳食纤维残渣。
4. 洗涤与干燥：将残渣用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥称量，得到总膳食纤维（TDF）含量。
5. 可溶性膳食纤维（SDF）测定：将酶解后的溶液直接抽滤，用热水洗涤残渣，干燥称量，得到不溶性膳食纤维（IDF）含量；滤液用无水乙醇沉淀，抽滤，干燥称量，得到SDF含量。
四、实验结果1. 大米：TDF含量为2.2%，SDF含量为0.6%。
2. 小麦：TDF含量为2.5%，SDF含量为0.8%。
3. 玉米：TDF含量为2.8%，SDF含量为0.9%。
4. 燕麦：TDF含量为5.3%，SDF含量为1.2%。
5. 豆类：TDF含量为6.5%，SDF含量为1.8%。
6. 蔬菜：TDF含量为3.2%，SDF含量为0.9%。
7. 水果：TDF含量为2.7%，SDF含量为0.8%。
五、实验讨论1. 从实验结果可以看出，不同食物中膳食纤维的含量差异较大。
豆类、蔬菜和燕麦的膳食纤维含量较高，适合作为高纤维食物的来源。
2. 燕麦的膳食纤维含量最高，其TDF含量是大米的2倍多，小麦的2倍。
这说明燕麦是一种非常优秀的膳食纤维来源。
3. 豆类、蔬菜和水果中的膳食纤维含量较高，可以促进肠道蠕动，增加粪便体积，有助于缓解便秘症状。
应用酶重量法测定全麦粉的总膳食纤维
（ １ ． 中粮 营养 健 康 研 究 院 有 限 公 司 ， 北 京 １ ０ ０ ０ ２ ０ ；２ ． 国 家 粮 食 局 标 准 质 量 中心 ， 北 京 １ ０ ０ ０ ３ ７ ）
摘 要 ： 膳 食 纤 维具 有 重要 的 营 养 作 用和 保 健 功 能 ， 酶 重 量 方 法是 测 定食 品 中膳食 纤 维 比较 方便 和 经 济 的一 种 方
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｄ ｉ ｅ ｔ ａ ｒ ｙ ｆ ｉ ｂ ｅ ｒ ｏ ｆ ｗｈｏ ｌ ｅ ｗｈ ｅ ａ ｔ ｆ ｌ ｏ ｕ ｒ ｂ ｙ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｇ ｒ ａ ｖ ｉ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ
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ＡＢＳ Ｔ ＲＡＣＴ： Ｄｉ ｅ ｔ ａ ｒ ｙ ｆ ｉ ｂ ｅ ｒ ｈ ａ ｓ ａ ｎ ｉ ｍｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｅ ｉ ｎ ｎ ｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｃ ａ ｒ ｅ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｔｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｇ ｒ ａ ｖ ｉ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ｉ ｓ ａ
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膳食纤维含量的分析方法及其作用
膳食纤维含量的分析方法及其作用膳食纤维是指不被小肠消化吸收的食物成分，包括纤维素、半纤维素、木质素和胶质等。
膳食纤维素在人体内具有很多重要的作用，如促进肠道蠕动，增加粪便量，防止便秘，减缓肠道内有毒物质的吸收，并降低血液中的胆固醇和三酸甘油酯等。
因此，膳食纤维素对人体健康的重要性不可忽视。
但是，如何准确地测定膳食纤维含量，一直是食品科学领域关注的问题。
本文将介绍膳食纤维含量的分析方法及其作用。
一、膳食纤维含量的分析方法目前，常用的膳食纤维含量分析方法主要包括酶解重量法、酶解色谱法和酒精碱解法三种。
1. 酶解重量法酶解重量法是将食物样品加入酶解液中，通过酶解去除可溶性纤维，再将残渣干燥至恒重，通过与原样比较得出膳食纤维含量。
该方法的优点是操作简单，不需要特殊药剂或设备，能够同时测量可溶性纤维和不可溶性纤维。
但是，该方法受到酶解液组分、温度、酶解时间等因素的影响，可以引入误差。
2. 酶解色谱法酶解色谱法是将食物样品加入酶解液中，在一定温度下酶解后，通过离子交换色谱柱或凝胶色谱柱等柱层析技术分离出可溶性纤维和不可溶性纤维。
该方法能够定量测量各种纤维素组分的含量，具有高精度、高灵敏度的优点。
但是，该方法需要特殊的色谱设备和技术，并且分析时间较长。
3. 酒精碱解法酒精碱解法是将食物样品用浓度为1.25%的乙醇氢氧化钾溶液转移至试管中，在恒温电热板上加热反应，利用酒精钠溶液中法定浓度的稳定化学试剂，测定生成的酸的量，从而计算出膳食纤维含量。
该方法的优点是简单易行，结果准确。
但是，由于纤维素和半纤维素对碱或酸有不同的抗性，因此可能会低估或高估膳食纤维含量。
二、膳食纤维含量的作用1. 促进肠道健康膳食纤维具有良好的水溶性、胶原质和糊粉质等特性，能够吸附水分并形成粘胶状物质，增加肠内粪便的体积和湿度，促进肠道蠕动，减少便秘和肠癌的发生率。
2. 降低胆固醇水平膳食纤维可以与胆固醇和胆汁酸结合，使其不能被吸收，从而降低血液中的胆固醇水平，减少心血管疾病的发生。
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酶-重量法（百度文库方法） 1.原理：样品分别用α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化以去除蛋白质和可消化的淀粉。
总膳食纤维（TDF）是先酶解，然后用乙醇沉淀，再将沉淀物过滤，将TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗，干燥称重。
不溶性和可溶性膳食纤维（IDF和SDF）是酶解后将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗，经干燥后称重。
SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后再过滤，干燥，称重。
TDF、IDF和SDF量通过蛋白质、灰分含量进行校正。
2.适用范围AOAC991.43 本方法适用于各类植物性食物和保健食品。
3.仪器 3.1烧杯：400或600ml高脚型。
3.2 过滤用坩埚：玻料滤板，美国试验和材料学会（ASTM）40-60μm，Pyrex 60ml（Corning No.36060 buchner，或同等的）。
如下处理：（1）在灰化炉525℃灰化过夜。
炉温降至130℃以下取出坩埚。
（2）用真空装置移出硅藻土和灰质。
（3）室温下用2%清洗溶液浸泡1小时。
（4）用水和去离子水冲洗坩埚；然后用15ml丙酮冲洗然后风干。
（5）在干燥的坩埚中加0.5g硅藻土，在130℃烘干恒重。
（6）在干燥器中冷却1小时，记录坩埚加硅藻土重量，精确至0.1mg。
3.3 真空装置：（1）真空泵或抽气机作为控制装置。
（2）1L的厚壁抽滤瓶。
（3）与抽滤瓶相配套的橡皮圈。
3.4振荡水浴箱：（1）自动控温使温度能保持在98±2℃。
（2）恒温控制在60℃。
3.5 天平：分析级，精确至±0.1mg。
3.6马福炉：温度控制在525±5℃。
3.7干燥箱：温度控制在105和130±3℃。
3.8干燥器：用二氧化硅或同等的干燥剂。
干燥剂两周一次在130℃烘干过夜。
3.9 PH计：注意温控，用pH4.0、7.0和10.0缓冲液标化。
3.10 移液管及套头：容量100μl和5ml。
3.11 分配器或量筒：（1）15±0.5ml，供分配78%的乙醇，95%的乙醇以及丙酮。
（2）40±0.5ml，供分配缓冲液。
3.12. 磁力搅拌器和搅拌棒。
4. 试剂全过程使用去离子水，试剂不加说明均为分析纯试剂 4.1 乙醇溶液：（1）85%：加895ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。
（2）78%：加821ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。
4.2 丙酮： 4.3 供分析用酶：在0-5℃下储存。
（1）热稳定α-淀粉酶溶液：Cat. No. A3306，Sigma Chemical Co.，St. Louis，MO63178，或Termamyl 300L，Cat. No. 361-6282，Novo-Nordisk，Bagsvaerd，Denmark，或等效的酶。
（2）蛋白酶：Cat. No. P3910，Sigma Chemical Co.，或等效的。
当天用MES/TRIS缓冲液中现配50mg/ml酶溶液。
（3）淀粉葡糖苷酶溶液：Cat. No. AMG A9913，Sigma Chemical Co.，或等效的。
4.4 硅藻土：酸洗（Celite 545 AW，No.C8656，Sigma Chemical Co.，或等效的）。
4.5 洗涤液：两者挑一。
（1）铬酸：120g重铬酸钠Na2Cr2O7·2H2O，1000ml蒸馏水和1600ml浓硫酸。
（2）实验室用液体清洁剂，预备急需清洗的（Micro，International Products Corp.，Trenton，NJ08016，或等效的）。
用水配制2%溶液。
4.6 MES-TRIS缓冲液：0.05mol/L，温度在24℃时pH值为8.2。
（1）MES：2-（N-吗啉代）磺酸基乙烷（No.M-8250，Sigma Chemical Co.或等效的）。
（2）TRIS：三羟（羟甲基）氨基甲烷（No.T-1503，Sigma Chemical Co.或等效的）。
在1.7L的蒸馏水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS，用6mol/L NaOH调pH到8.2，用水定容至2L。
（注意：24℃时的pH为8.2，但是，如果缓冲液温度在20℃，pH就为8.3，如果温度在28℃，pH为8.1。
为了使温度在20-28℃之间，需根据温度调整pH值。
） 4.7 盐酸溶液：0.561mol//L，加93.5ml6mol/L盐酸到700ml水中，用水定容至1L。
5. 操作方法 5.1. 样品制备：（1）固体样品：如果样品粒度＞0.5mm，研磨后过0.3-0.5mm（40-60目）筛。
（2）高脂肪样品：如果脂肪含量＞10%，用石油醚去脂。
每克样品用25ml，每次提取完静置一会儿再小心将烧杯倾斜，慢慢将石油醚倒出，共洗三次。
（3）高碳水化合物样品：如果样品干重含糖＞50%，用85%乙醇去除糖份，每克样品每次10ml，共洗三次轻轻倒出，然后在40℃烘箱中不时翻搅干燥过夜，并研磨过0.5mm筛。
5.2. 样品消化（1）准确称取双份1.000±0.005g样品（M1和M2），置于高脚烧杯中。
（2）在每个烧杯中加入40ml MES-TRIS缓冲液，在磁力搅拌器上搅拌直到样品完全分散。
（防止团块形成，使受试物与酶能充分接触）。
（3）用热稳定的淀粉酶进行酶解处理：加100μl热稳定的淀粉酶溶液，低速搅拌。
用铝箔片将烧杯盖住，在95-100℃水浴中反应30分钟。
（起始的水浴温度应达到95℃）。
（4）冷却：所有烧杯从水浴中移出，凉至60℃。
打开铝箔盖，用刮勺将烧杯边缘的网状物以及烧杯底部的胶状物刮离，以使样品能够完全的酶解。
用10ml蒸馏水冲洗烧杯壁和刮勺。
（5）用蛋白酶进行酶解处理：在每个烧杯中各加入100μl蛋白酶溶液。
用铝箔盖住，在60℃持续摇动反应30分钟（开始时的水浴温度应达60℃），使之充分反应。
（6）pH值测定：30分钟后，打开铝箔盖，搅拌中加入5ml0.561mol/L HCL至烧杯中。
60℃时用1mol/L NaOH溶液或1mol/L HCL溶液调最终pH为4.0-4.7。
（注意：当溶液为60℃时检测和调整pH，因为在较低温度时pH会偏高。
）（7）用淀粉葡糖苷酶溶液酶解处理：搅拌同时加100μl淀粉葡糖苷酶溶液。
用铝箔盖住，在60℃持续振摇反应30分钟，温度应恒定在60℃。
5.3 测定 5.3.1.总的膳食纤维测定（1）用乙醇沉淀膳食纤维：在每份样品中，加入预热至60℃的95%乙醇225ml，乙醇与样品的体积比为4∶1。
室温下沉淀1小时。
（2）过滤装置：用15ml78%乙醇将硅藻土湿润和重新分布在已称重的坩埚中。
用适度的抽力把坩埚中的硅藻土吸到玻板上。
（3）酶解过滤，用78%乙醇和刮勺转移所有内容物微粒到坩埚中。
（注意：如果一些样品形成胶质，用刮勺破坏表面，以加速过滤。
）。