TMA技术检测HCV_RNA和ELISA法检测抗_HCV的比较_秦伟斐

ＮＡＴ 检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ 阳性结果为１２份。结论 ＥＬＩＳＡ 和 ＮＡＴ 检测结果存在不一致，二者互补能够进一步降低输血感染 ＨＣＶ
的 风 险 ，保 障 血 液 安 全 。
关 键 词 ：转 录 介 导 扩 增 ； 酶 联 免 疫 吸 附 测 定 ； 肝 炎 病 毒 ，丙 型 ； 核 酸 检 测 ； 血 液 安 全
ＲＮＡ 阳性１２ 份，ＨＣＶ－ＲＮＡ 不 合 格 率 ０．０３％。 两 种 ＥＬＩＳＡ
试剂之间（χ２＝２７．６００，Ｐ＜０．０５），以 及 它 们 分 别 与 ＮＡＴ 之 间 （ＥＬＩＳＡ 试剂１ｖｓ ＮＡＴ，χ２＝７４．０１５，Ｐ＜０．０５；ＥＬＩＳＡ 试 剂 ２ ｖｓ ＮＡＴ，χ２ ＝１６３．１３０，Ｐ＜０．０５），阳 性 检 出 率 差 异 均 有 统 计 学 意义。
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国际检验医学杂志２０１３年６月第３４卷第１１期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊｕｎｅ ２０１３，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１１
·检验仪器与试剂评价·
ＴＭＡ 技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ 和 ＥＬＩＳＡ 法检测抗－ＨＣＶ 的比较＊
秦 伟 斐 ，李 小 红 ，田 耘 博 ，黄 霞 ，李 维 ，廖 红 文 △ （重庆市血液中心，重庆 ４０００１５）
Ｓ／ＣＯ
总数
联检阳性
鉴别阳性
０．８≤Ｓ／ＣＯ＜１
６１
０
０
１≤Ｓ／ＣＯ＜５
１１３
１
０
５≤Ｓ／ＣＯ＜１０
２２
１２
１２
合计
１９６
１３
１２
３ 讨 论 本 血 液 中 心 对 献 血 者 血 液 样 本 采 取 传 统 的 ＥＬＩＳＡ 法 检
测，结果 发 现，４７ ００４ 例 血 液 样 本 中 有 ２４５ 例 抗－ＨＣＶ 结 果 为 阳性，试剂１检 测 出 １０５ 例 阳 性 样 本，其 中 灰 区 ２９ 份，试 剂 ２ 检测出１９６份阳性 样 本，其 中 灰 区 ６１ 份，两 种 ＥＬＩＳＡ 试 剂 结 果为灰区的样 本 ＮＡＴ 检 测 均 为 阴 性。 从 本 实 验 数 据 中 没 有 观察到酶免检测灰区结果与核酸检测阳性间存在明显的相关 性。ＮＡＴ 检测阳性的１３例标本均处 于 ＥＬＩＳＡ 试 剂 １ 的 强 阳 性反应性组（Ｓ／ＣＯ≥１０），１３ 例 标 本 有 １２ 例 处 于 ＥＬＩＳＡ 试 剂 ２的强阳性反 应 性 组 （１０＞Ｓ／ＣＯ≥５），则 １２ 例 鉴 别 为 ＨＣＶ－ ＲＮＡ 阳性的样本均处 于 该 组，仅 有 １ 例 处 于 试 剂 ２ 的 弱 阳 性 反应组（５＞Ｓ／ＣＯ≥１），说 明 ＮＡＴ 检 测 阳 性 与 ＥＬＩＳＡ 检 测 结 果强阳性有明显的相关性。
测技术进行 ＮＡＴ 检测。标本于生 物 安 全 柜 内 开 盖，置 于 样 品
架，按照全自动血液病毒核酸检 测 仪（Ｐｒｏｃｌｅｉｘ ＵＬＴＲＩＯ? Ｓｙｓ－
ｔｅｍ）的操作程序上样，进行单 人 份 ＮＡＴ 检 测。 先 用 ＵＬＴＲＩＯ
试剂在 ＴＩＧＲＩＳ上做 ＨＩＶ ＲＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ、ＨＢＶ ＤＮＡ 三 联
为有反应性，其中１．０＞Ｓ／ＣＯ≥０．８之间 设 置 为 灰 区。 双 试 剂
Ｓ／ＣＯ 均大于或等于０．８，直接判为阳性；单试 剂 有 反 应 性 标 本
采用原 试 剂 对 标 本 管 进 行 双 孔 复 试，任 一 孔 有 反 应 性 判 为
阳性。
１．４．２ ＮＡＴ 检测与结果判断 采用 转 录 介 导 扩 增 （ＴＭＡ）检
表１ ＥＬＩＳＡ 检测试剂１阳性样本 Ｓ／ＣＯ 值与 ＮＡＴ 检 测 结 果 的 相 关 性 （ｎ）
ＣＯ＜１
２９
０
０
１≤Ｓ／ＣＯ＜１０
６２
０
０
１０≤Ｓ／ＣＯ
１４
１３
１２
合计
１０５
１３
１２
表２ ＥＬＩＳＡ 检测试剂２阳性样本 Ｓ／ＣＯ 值与 ＮＡＴ 检 测 结 果 的 相 关 性 （ｎ）
而 ＥＬＩＳＡ 检测抗－ＨＣＶ 的 总 不 合 格 率 和 核 酸 检 测 ＨＣＶ－ ＲＮＡ 阳性结果的 符 合 率 却 较 低，提 示 抗－ＨＣＶ 仅 能 部 分 反 映
测，同时采用转录介导扩增（ＴＭＡ）技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ，统计两种 方 法 的 阳 性 结 果 并 进 行 比 较。结 果 ４７ ００４ 份 无 偿 献 血 者 标
本中，ＥＬＩＳＡ 检测到的抗－ＨＣＶ 阳性样本总数 共 ２４５ 份，其 中，试 剂 １ 检 测 结 果 阳 性 数 １０５ 份，试 剂 ２ 检 测 结 果 阳 性 数 １９６ 份；
检测分析，对于 ＵＬＴＲＩＯ 有活性的标本，判为 ＮＡＴ 联检阳性；
再分别进行 Ｐｒｏｃｌｅｉｘ ＨＩＶ、ＨＣＶ 和 ＨＢＶ 鉴 别 试 验 （ｄＨＩＶ－１、
ｄＨＣＶ 和 ｄＨＢＶ）。
１．４．３ 确认实验检测与结果判断 将需要进行确证实验 的 样
本，按 ＨＣＶ 确认试剂 ＨＣＶ ＢＬＯＴ ３．０ 的 操 作 说 明 书 和 全 自
３２份样本进行 ＨＣＶ 确证实验。
１．４ 方 法
１．４．１ 血清学 ＥＬＩＳＡ 检测与判定规则 加样 器 自 动 加 样 后，
用全自动酶免分析仪对抗－ＨＣＶ 进 行 双 试 剂 ２ 次 ＥＬＩＳＡ 法 检
测，结果判定 依 据 《中 国 输 血 技 术 操 作 规 程 》（血 站 部 分，１９９７
版）规定的标准和试 剂 说 明 书。 本 实 验 室 将 Ｓ／ＣＯ≥０．８ 即 判
２．１ ４７ ００４份 无 偿 献 血 者 血 液 标 本 中 ＥＬＩＳＡ 抗－ＨＣＶ 阳 性
结 果共２４５份，不合格率为０．５２％；在这些阳性结果中，ＥＬＩＳＡ
试剂１检测结果阳性１０５份，不合 格 率 为 ０．２２％；ＥＬＩＳＡ 试 剂
２检测结果阳性１９６份，不 合 格 率 为 ０．４２％；ＮＡＴ 检 测 ＨＣＶ－
＊ 基金项目：重庆市卫生局研究课题重点项目（２０１０－１－６１）。 △ 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ＨＷＬｉａｏ＠１６３．ｃｏｍ。
国际检验医学杂志２０１３年６月第３４卷第１１期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊｕｎｅ ２０１３，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１１
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２．２ ＥＬＩＳＡ 检测试剂 １ 与 试 剂 ２ 同 时 为 阳 性 的 样 本 数 有 ５６ 份，ＮＡＴ 检测阳性的１２份样本均包括在这５６份样 本 中，阳 性 率 为２１．４％（１２／５６）。随机从５６份中挑选了３２份 ＨＣＶ－ＲＮＡ 为阴 性 的 样 本 进 行 确 认 试 验 ，１５ 份 抗－ＨＣＶ 确 认 结 果 为 阳 性， 阳 性 率 ４６．９％ （１５／３２）。 ２．３ ＥＬＩＳＡ 检 测 与 ＮＡＴ 检 测 的 结 果 一 致 率 在 所 检 测 的 ４７ ００４份 样 本 中，ＥＬＩＳＡ 和 ＮＡＴ 均 为 阴 性 的 样 本 为 ４６ ７５９ 份，均为 阳 性 的 为 １２ 份，ＥＬＩＳＡ 检 测 抗－ＨＣＶ 与 ＮＡＴ 检 测 ＨＣＶ－ＲＮＡ 的一致率为９９．５０％，不一致率为０．５％。 ２．４ ＥＬＩＳＡ 检测阳性样本 Ｓ／ＣＯ 值 与 ＮＡＴ 检 测 结 果 的 相 关 性 （１）ＥＬＩＳＡ 检测试剂１阳 性 样 本 Ｓ／ＣＯ 值 与 ＮＡＴ 检 测 结 果的相关性：所有 １３ 份 ＮＡＴ 联 检 阳 性 和 １２ 份 鉴 别 为 ＨＣＶ－ ＲＮＡ 的样本 Ｓ／ＣＯ≥１０，说明 试 剂 １ 抗－ＨＣＶ 检 测 的 Ｓ／ＣＯ 值 越高，ＮＡＴ 联检和鉴别阳性可能性越大（试 剂 １ 的 ＣＯ 值 约 为 ０．１７０）。见表１。（２）ＥＬＩＳＡ 检 测 试 剂 ２ 阳 性 样 本 Ｓ／ＣＯ 值 与 ＮＡＴ 检测结果的 相 关 性：１３ 例 ＮＡＴ 联 检 阳 性 有 １２ 例 （有 １ 例 ＮＡＴ 联 检 阳 性 样 本 １≤Ｓ／ＣＯ＜５）和 １２ 例 鉴 别 为 ＨＣＶ－ ＲＮＡ 的样本５≤Ｓ／ＣＯ＜１０，说明试剂２抗－ＨＣＶ 检测的 Ｓ／ＣＯ 值越高，ＮＡＴ 联检和鉴别阳性可能性越大 （试 剂 ２ 的 ＣＯ 值 约 为 ０．３３０）。 见 表 ２。
动 蛋白印迹仪 ＰｒｏｆｉＢｌｏｔ ４８的操作程序进行实验操作。结果判
断依据按试剂说明进行。
１．５ 统计学处理 汇 总 ＥＬＩＳＡ 阳 性 结 果 及 ＮＡＴ 阳 性 结 果，
对两种技术的检 测 结 果 进 行 比 较 ，采 用
ＳＰＳＳ１１．０ 进 行
２
χ
检
验，检验水准 α＝０．０５。
２ 结 果
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２０１３．１１．０３７
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７３－４１３０（２０１３）１１－１４２６－０３
酶联免疫 吸 附 法 （ＥＬＩＳＡ）检 测 抗－ＨＣＶ 一 直 是 采 供 血 系 统筛查献血者 血 液 中 丙 型 肝 炎 病 毒 （ＨＣＶ）的 主 要 手 段，在 我 国 广 泛 应 用 该 技 术 进 行 献 血 者 血 液 筛 查 的 数 十 年 间 ，输 血 风 险 得以大大降低，国外研究数据 表 明，ＨＩＶ、ＨＣＶ 的 ＥＬＩＳＡ 法 漏 检 率 均 为 几 十 万 分 之 一 。 ［１－３］ 但 ＥＬＩＳＡ 检 测 抗－ＨＣＶ 只 是 反 映机体对 ＨＣＶ 感染的 免 疫 状 态，只 能 间 接 提 供 ＨＣＶ 感 染 的 依据，再加上抗原、抗体蛋白的变性、较长的“窗口期”等多种 因 素的存在，单纯 抗 原 或 抗 体 血 清 学 检 测 已 经 不 是 最 可 靠 的 方 法。而核酸检 测 技 术 （ＮＡＴ）是 直 接 检 测 病 毒 核 酸，即 ＨＣＶ－ ＲＮＡ，是反映 ＨＣＶ 复制最直接、最可靠 的 指 标。ＮＡＴ 已 被 许 多国家和地区应用于血液筛 查，目 前 用 于 采 供 血 系 统 ＮＡＴ 检 测的主要包括两大技术，即聚合酶链反应（ＰＣＲ）和转 录 介 导 扩 增（ＴＭＡ）技术，我国目前已将 ＮＡＴ 血液筛查纳入新的输血技 术操作规程［４］。本中心对４７ ００４份献血者血液样 本 应 用 Ｐｒｏ－ ｃｌｅｉｘ ＵＬＴＲＩＯ? Ａｓｓａｙ 试 剂，在 Ｐｒｏｃｌｅｉｘ ＴＩＧＲＩＳ? Ｓｙｓｔｅｍ 上 采用 ＴＭＡ 技 术 检 测 ＨＣＶ－ＲＮＡ，同 时 进 行 ＥＩＩＳＡ 检 测，以 评 估核 酸 检 测 技 术 和 ＥＬＩＳＡ 技 术 在 降 低 输 血 ＨＣＶ 感 染 风 险、 保障血液安全中的作用。 １ 资 料 与 方 法 １．１ 标 本 来 源 本 中 心 ２０１１ 年 部 分 无 偿 献 血 标 本 ４７ ００４ 份，每位献血者 留 取 ５ ｍＬ 和 ８ ｍＬ ＥＤＴＡ－Ｋ２ 抗 凝 血 各 １ 管 （无分离胶的用于 ＥＬＩＳＡ 检 测，有 分 离 胶 的 用 于 ＮＡＴ 检 测）， 各样品管的离心和保存均按相应的检测试剂说明书要求进行 操作。 １．２ 仪 器 与 试 剂 ＲＳＰ１５０ 和 ＲＳＰ２００ 型 全 自 动 样 品 处 理 机 （瑞 士 帝 肯）；ＦＡＭＥ２４／２０ 和 ＦＡＭＥ２４／３０ 型 全 自 动 酶 联 免 疫 分析系统（瑞士哈米尔顿）；ＰＲＯＣＬＥＩＸ ＴＩＧＲＩＳ 核酸检 测 系 统 （美国诺华）。全自动蛋白印迹仪 ＰｒｏｆｉＢｌｏｔ ４８（瑞士帝肯）。酶 联免疫试剂：抗－ＨＣＶ（上 海 科 华、美 国 强 生）。 核 酸 检 测 试 剂： 诺华乙型肝炎病毒、丙 型 肝 炎 病 毒、人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 （１ 型 ） 核酸检 测 试 剂 盒 （ＴＭＡ－化 学 发 光 法 ），ＨＣＶ 鉴 别 探 针 试 剂。 ＨＣＶ 确 证 试 剂：ＭＰ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＨＣＶ ＢＬＯＴ ３．０（法 国 ＭＰＤ）。 １．３ 检 测 流 程 上 述 样 本 分 别 进 行 ＥＬＩＳＡ 检 测 与 ＮＡＴ 检 测。对 ＥＬＩＳＡ 双试剂阳性且 ＮＡＴ 检测阴性的样本，随机挑选