结晶紫中性红胆盐琼脂使用
BGLB实验步骤
BGLB实验步骤
①加样制作平板：选取2-3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿ImL。
同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
及时将15 -20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注．于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，
待琼脂凝固后，再加3～ 4mL VRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于（36±1)0C培养18~24h.
②平板菌落数的选择：选取菌落数在15 ~150CFU的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌qun菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0. 5mm或更大。
③证实试验：从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，(36±1)℃培养24-48h，观察产气情况。
凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌qun阳性。
④大肠菌qun平板计数的报告：经后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8. 3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（每毫升）样品中大肠菌群数。
例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA 平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌qun数为：100 X 6/10 X 10-4 CFU/g(mL)＝6. 0 X 10一3 CFU/g（mL)。
农产品食品检验员二级题库含参考答案
农产品食品检验员二级题库含参考答案一、单选题（共74题，每题1分，共74分）1.关于氧化还原滴定法的原理，下列叙述正确的是（）。
A、氧化还原反应不可以间接滴定一些能与氧化剂或还原剂发生定量反应的物质B、氧化还原反应也可以间接滴定一些能与氧化剂或还原剂发生定性反应的物质C、氧化还原反应的特点是反应过程复杂、副反应多，反应速度慢，反应条件不易控制D、氧化还原滴定法是以高锰酸钾反应为基础的滴定分析法正确答案：C2.下列选项中不属于生产者的产品质量义务的是（）。
A、特殊产品要按规定包装B、严格实行岗位质量规范C、不得以假充真、以次充好D、产品质量要检验合格正确答案：B3.关于酸碱指示剂变色范围，下列说法正确的是（）。
A、甲基橙是一种有机弱碱，它的变色pH值范围为8.0～0B、甲基橙是一种有机弱碱，它的变色pH值范围为8.0～9.8C、酚酞是一种有机弱酸，它的变色pH值范围为1.2～2.8D、酚酞是一种有机弱酸，它的变色pH值范围为8.0～0正确答案：D4.测定黄酒中非糖固形物时，测得的固形物减去（）即为非糖固形物。
A、可溶性物质B、有机物C、总糖D、挥发性物质正确答案：C5.社会主义职业道德的核心思想是（）。
A、执政为民B、集体主义C、立党为公D、为人民服务正确答案：D6.关于手提式高压蒸汽灭菌锅的构造，下列说法正确的是（）。
A、放水阀装在锅盖上B、排气阀、溢流阀装在锅盖上C、温度计装在底座上D、排气阀放在底座上正确答案：B7.按有效数字的运算规则，3.40+6.7281+2.00421的计算结果为（）。
A、13.231B、13C、13.23D、14正确答案：B8.标定盐酸溶液常用的指示剂是（）。
A、溴甲酚绿-甲基红混合指示剂B、甲基红C、溴甲酚绿D、甲基橙正确答案：A9.如果食品酸度测量的结果是pH=26，则该结果的有效数字是（）位。
A、2B、3C、1D、4正确答案：A10.沙门氏菌检验增菌过程为轻轻摇动前增菌过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养（）。
结晶紫中性红胆盐琼脂使用
编号：022221品种名称：结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)(Violet Red Bile Agar)用途：用于水或食品中大肠菌群平板菌落计数(GB 4789.3-2008和SN0169-92)。
原理：蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;乳糖是可发酵的糖类;氯化钠可维持均衡的渗透压;3号胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;中性红为pH指示剂。
图鉴：配方(每升)：蛋白胨7g酵母膏粉 3g乳糖10g氯化钠5g3号胆盐1.5g中性红0.03g结晶紫0.002g琼脂15g最终pH 7.4±0.2使用方法：1、称取本品41.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，备用(不得超过3h)。
2、以无菌手续取样品25g或25mL，加入含225mL无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的三角瓶内，充分振摇或用均质器均质1min成1：10稀释液，然后以1：10继续稀释，选择三个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个平皿，倾注加热溶解并冷至45℃左右的培养基，琼脂凝固后再加3-4mL培养基覆盖平板表层。
3、36±1℃培养18—24h。
4、观察结果。
质量控制：质控菌株接种后于36±1℃培养18—24h结果如下：菌名菌号生长状况培养特征大肠埃希氏菌ATCC25922 良好深红色菌落，周围有红色沉淀产气肠杆菌CMCC(B)45103 良好红色菌落，周围可有淡红色沉淀金黄色葡萄球菌ATCC6538 受抑制-----贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
贮存期三年。
规格：250g来源：环凯微生物。
结晶紫染色液配制及使用说明
结晶紫染色液( 1 %)编码品名规格单位北京华越洋生物结晶紫染色液 (1%) 10ml 瓶GT79031-10ml北京华越洋生物结晶紫染色液 (1%) 100ml 瓶GT79032-100ml北京华越洋生物结晶紫染色液 (1%) 500ml 瓶GT79033-500ml产品说明：结晶紫染色液 (Crystal Violet Staining Solution) 是一种组织或细胞染色经常用的能够把细胞核染成深紫色的染色液。
结晶紫是一种碱性染料，能够和细胞核中的 DNA 联合，进而产生细胞核染色。
产地：国产提示：本品仅用于科研实验，不可以用作医疗及临床诊疗。
储藏条件：阴凉处保留重点词：结晶紫染色液 , 结晶紫染色液 (1%)结晶紫染色液(1%)有关染色产品 :货物名称规格货物名称规格中性红染色液 %）500ml 结晶紫水溶液 %) 100ml 中性红染色液 %）500ml 核固红染色液 %) 100ml 中性红染色液 % 惯例染色 ) 100ml 天狼星红染色试剂盒2*50mLTTC染色液（ %）500ml %伊文斯蓝 / 埃文斯蓝溶液100mL Masson三色染色试剂盒7×50ml 茜素红 S 染色液 (1%, 100mL 普鲁士蓝染色试剂盒2*50ml %核固红染色液100ml 尼氏染色液 ( 焦油紫法 ) 2*100ml 改进 Lillie-Mayer 苏木素100ml染色液吕氏碱性美蓝染色液（%）100ml 改进 Lillie-Mayer 苏木素500ml染色液亮绿 SF 染色液100ml Ehrlich 苏木素染色液100ml 溴甲酚绿 - 甲基红指示剂溶液100ml Ehrlich 苏木素染色液500ml 饱和油红 O染色液100ml 苏木素伊红混淆染色液( 一100ml步法 )Van Gieson 染色液50ml 苏木素伊红混淆染色液( 一500ml步法 )Van Gieson 染色试剂盒3×50ml 改进 Harris 苏木素染色液100ml Schiff 试剂50ml 改进 Harris 苏木素染色液500ml 茜素红 S 染色液（ %）100ml Mayer 苏木素染色液100ml 煌焦油蓝染色液100ml Mayer 苏木素染色液500ml 2% TTC染色液100ml 苏木素伊红 (HE) 染色液2×100ml 革兰氏染色液试剂盒4×10ml 苏木素伊红 (HE) 染色液2×500ml 醋酸洋红染色液100ml Core 苏木素染色液100ml姬姆萨原液100ml Core 苏木素染色液500ml 姬姆萨工作液100ml Carazzi 苏木素染色液100ml 瑞氏 - 姬姆萨复合染液100ml Carazzi 苏木素染色液500ml 瑞氏染液50ml Delafield 苏木素染色液100ml 结晶紫染色液 %) 10ml Delafield 苏木素染色液500ml 结晶紫染色液 (1%) 10ml Gill 苏木素染色液 (Gill 100ml 结晶紫染色液 %) 10ml Gill 苏木素染色液 (Gill 500ml 荚膜染色液（试剂盒）50ml×2 Gill 苏木素染色液 (Gill 100ml 芽孢染色液（试剂盒）50ml×2 Gill 苏木素染色液 (Gill 500ml 鞭毛染色液（试剂盒）100ml Gill 苏木素染色液 (Gill 100ml 石炭酸复红染液 ( 苯酚品红染液 ) 100ml Gill 苏木素染色液 (Gill 500ml 改进型石炭酸复红染液( 苯酚品红100ml Heidenhain 铁苏木素染色3×染液 ) 液100ml 抗酸染色液（试剂盒）50ml×3 天青石蓝苏木素染色液2× 50ml 吕氏碱性美蓝染色液（%）100ml 改进 MacConaill 铅苏木素140ml染色液卢戈碘液（革兰氏染色）10ml 苏木素无水乙醇溶液 (5%) 100ml 番红染色液（沙黄）10ml 苏木素无水乙醇溶液 (10%) 100ml 卢戈碘液（标准碘液）100ml 伊红染色液 ( 入口水溶 ) 100ml Mayer' 苏木素染液 ( 免疫组化 ) 10ml 伊红染色液 ( 入口水溶 ) 500ml HE染色液 ( 试剂盒 ) 3×10ml 伊红染色液 ( 水溶 ) 100ml Cole 氏苏木素染色液 ( 惯例染色 ) 100ml 伊红染色液 ( 水溶 ) 500mlWeigert 苏木素染色液2×50ml 伊红染色液 ( 水溶 ,5%) 100ml AB-PAS染色试剂盒50ml*6 伊红染色液 ( 醇溶 ) 100ml 糖原 PAS染色液（过碘酸 - 雪夫染50ml×2 伊红染色液 ( 醇溶 ) 500ml 色液）糖原 PAS染色液试剂盒（过碘酸 - 50ml×4 Scott 蓝化液500ml 雪夫染色液）伊红染色液100ml 氨水溶液 %) 500ml 标准阿利新蓝染色液3×50ml 氨水溶液 %) 500ml 阿利新蓝染色液100ml 氨水溶液 %) 500ml 阿利新蓝染色液 (pH=（试剂盒）3×50ml 氨水溶液 (1%) 500ml 碱性品红乙醇溶液 (5%) 100ml 天青石蓝 B 染色液50ml 碱性品红水溶液 (1%) 100ml 天青石蓝 B 染色液100ml。
23552339_乳粉中大肠菌群测定能力验证的结果与分析
T logy科技分析与检测大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，包括大肠杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。
食品中检出大肠菌群，表明食品受到人和温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染。
大肠菌群在结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）培养基上呈现出直径为0.5 mm或者更大的紫红色菌落特征，并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
该典型菌落在煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中37 ℃ 条件下培养能够产气[1]。
因此，实验室一般采用VRBA平板初筛，并通过BGLB肉汤验证方式检测食品中是否存大肠菌群。
能力验证是指利用实验室之间的比对，按照预先制定的准则来评价实验室的检测能力的活动。
通过参加能力验证活动，不仅可以对实验室进行质量控制、完善实验室的管理制度，而且可以评判实验室相关项目检测人员的检验技术水平是否维持在正常的水平，从而确保日常检验报告检测数据的准确性和可信性[2]。
2019年，本实验室参加了由国家食品药品监督管理总局组织，中国食品药品检定研究院提供样品的乳粉中大肠菌群的计数检验能力验证活动，通过分析和总结此次能力验证的实验结果，为日常的微生物检验工作提供技术支持。
1 材料与方法1.1 培养基及试剂结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：批号1072991，厂家：广东环凯；煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：批号1066081，厂家：广东环凯；氯化钠：批号20180504-2，厂家：广州广试。
大肠杆菌：菌株编号 ATCC25922，来源：广东环凯；弗氏柠檬酸杆菌：菌株编号ATCC43864，来源：广东环凯；所有培养基和试剂均在有效期内，并通过验收验证。
1.2 仪器散设备全自动蒸汽灭菌器（型号：GI54DS厂家：厦门致微）；电热恒温培养箱（型号：HKP-9172A，厂家：广东环凯）；生物安全柜（型号：BSC-1600IIA2，厂家：苏净安泰）；电热恒温干燥箱（型号：DHG-9123A，厂家：广东环凯）；电热恒温水浴锅（型号：DKZ-3B厂家：上海一恒）。
结晶紫中性红胆盐琼脂MSDS
运输前应先检查包装容器是否完整、密封，运输过程中要确保容器不泄漏、不倒塌、不坠落、不损坏。运输途中应防曝晒、雨淋，防高温。
第十五部分：法规信息
法规信息
化学危险物品安全管理条例(1987年2月17日国务院发布)，化学危险物品安全管理条例实施细则(化劳发[1992] 677号)，工作场所安全使用化学品规定([1996]劳部发423号)等法规，针对化学危险品的安全使用、生产、储存、运输、装卸等方面均作了相应规定。
稳定性：
稳定
禁配物：
无资料
避免接触的条件：
聚合危害：
分解产物：
第十一部分：毒理学资料
急性毒性：
LD50：无资料
LC50：无资料
亚急性和慢性毒性：
刺激性：
致敏性：
致突变性：
致畸性：
致癌性：
第十二部分：生态学资料
生态毒理毒性：
生物降解性：
非生物降解性：
生物富集或生物积累性：
其它有害作用：
无资料
第十三部分：废弃处置
无资料
燃烧热(kJ/mol)：
无资料
临界温度(℃)：
无资料
临界压力(MPa)：
无资料
辛醇/水分配系数的对数值：
无资料
闪点(℃)：
无资料
引燃温度(℃)：
无资料
爆炸上限%(V/V)：
无资料
爆炸下限%(V/V)：
无资料
溶解性：
不溶于冷水，易溶于沸水，缓溶于热水。
主要用途：
用于化学试剂等。
其它理化性质：
第十部分：稳定性和反应活性
结晶紫中性红胆盐琼脂
第一部分：化学品名称
化学品中文名称：
结晶紫中性红胆盐琼脂
大肠菌群计数
原标准
01
初发酵
02
EMB分离培养
03
染色，复发酵
04
报 告
05
现标准
06
LST初发酵
07
BGLB验证
08
报 告
09
检样
稀释
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
产气
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
计数红色带气泡菌落
报告结果
36℃±1℃
24±2h
大肠菌群PetrifilmTM 测试片检验程序
操作要点
按第一法的样品制备方法进行。 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，pH值过低或过高时分别用1M NaOH或1M HCl予以调节。 合理稀释度的选择，每稀释度接种2张测试片。 接种时避免气泡产生。 培养基未凝固时勿挪动。 将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片。
MPN
阳性管数
1g(mL)检样中最大可能数（MPN）表
使用MPN检索表的注意点
这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准通用的。 表里的数字是有小数点的。 报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告单位是100g/ml。 原标准MPN表有64个组合，而现标准选择
选择菌落数在30~150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
证实试验
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进行证实试验。 BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大肠菌群阳性菌落。
环凯微生物紫红胆盐葡萄糖琼脂平板说明书
广东环凯微生物科技有限公司网址：地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：860288778876产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：紫红胆盐葡萄糖琼脂平板英文名称：Violet Red Bile Glucose Agar Plate 【产品编号与包装规格】产品编号产品类型包装规格CP22223B1即用型平板90mm×10个/包【产品用途】用于耐胆盐革兰氏阴性菌的选择性分离培养。
【检验原理】明胶胰酶水解物和酵母浸出粉提供碳氮源和微量元素；葡萄糖是可发酵的糖类；氯化钠可维持均衡的渗透压；脱氧胆酸钠和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪肠球菌；中性红为pH 指示剂。
1、从储藏室（2-25℃）取出平皿，并恢复至室温。
2、将包装整体送入取样地点，在此过程中逐步去掉外面一层包装，最后一层包装在操作间打开。
3、按规定标准的方法接种培养皿。
4、接种结束后，盖上皿盖，将平皿从洁净室取出，置于培养箱中按规定的温度和时间培养。
5、培养结束后，从培养箱中取出观察、计数。
【质量控制】1、感官、理化指标红色、清晰无沉淀、表面平整、无裂痕、无肉眼可见杂质和气泡，pH 值为7.4士0.2。
2、生物学指标【储存条件与保质期】2~25℃，避光保存；有效期见包装。
【注意事项】1、储存温度应尽量保持恒定，请尽量选择接近使用环境的温度存放，不建议长期存放于2-8℃的冰箱中，避免温差过大而形成过多冷凝水，或避免因冷冻而破坏凝胶特性。
2、产品使用前，应平衡至室温。
3、质检报告可以登录环凯网站，打开“下载中心”页面，输入产品批号下载。
【废物处理】检测之后带菌物品置于121℃下高压灭菌30分钟后处理。
【执行标准】Q/HKSJ03普通微生物培养基【说明版本】2021年01月21日广东环凯微生物科技有限公司网址：地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：************-8619************8602************88778876。
紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基使用说明
紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基
紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基用途：
用于控制菌检查培养基适用性试验或检验。
紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基注意事项：
1.检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用；
2.请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰；
3.在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，
然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可；
4.弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人
员指示方法处理。
保存：避光保存，放于阴凉干燥处。
紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基其他相关对照培养基：
硫乙醇酸盐流体对照培养基
改良马丁对照培养基
营养琼脂对照培养基
营养肉汤对照培养基
玫瑰红钠琼脂对照培养基
胆盐乳糖对照培养基
甘露醇氯化钠琼脂对照培养基
沙氏葡萄糖肉汤对照培养基
麦康凯琼脂对照培养基
沙门、志贺菌属琼脂对照培养基
4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG)对照培养基
沙氏葡萄糖琼脂对照培养基
念珠菌显色对照培养基
绿脓菌素测定用对照培养基基础
梭菌增菌对照培养基
哥伦比亚琼脂对照培养基
溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础
四硫磺酸钠亮绿对照培养基基础
乳糖发酵对照培养基
酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（YPD）对照培养基
胰酪大豆胨琼脂对照培养基
胰酪大豆胨肉汤对照培养基
R2A琼脂对照培养基
三糖铁琼脂对照培养基
麦康凯液体对照培养基
紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基肠道菌增菌液体对照培养基
木糖赖氨酸脱氧胆酸盐对照培养基。
大肠菌群检验原始记录(平板计数法)
XX公司
食品微生物检验记录
检品编号：检品名称：
【大肠菌群】按GB 4789.3-2010第二法平板计数法进行检验
环境条件：温度：湿度：
仪器设备：超净工作台编号：；培养箱（36℃±1℃）编号：
电子天平编号：
培养基与试剂：（配制日期：年月日）
①结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）；②无菌生理盐水；③煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤
样品操作
取 5 份独立包装的样品，分别取（）、、、、做为测试样品，按如下述操作，测得结果；
每份测试样品加入225 mL无菌生理盐水，均质，制成1:10样品均液（调节pH值为6.5~7.5），吸取 1 mL（1:10）样品均液至9 mL灭菌生理盐水中做10倍递增稀释。
选、和稀释液检测，培养基为结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA），℃，培养h（从月日: 到月日: ）,
挑选10个不同类型典型和可疑菌落，接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管，℃培养h（从月日: 到月日: ）。
标准规定：（标准号：）
n=5 c= m= CFU/g（mL）M= CFU/g（mL）结论：□符合规定□不符合规定
检验者：复核者：检验日期：。
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编号：022221
品种名称：结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)(Violet Red Bile Agar)
用途：
用于水或食品中大肠菌群平板菌落计数(GB 4789.3-2008和SN0169-92)。
原理：
蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;乳糖是可发酵的糖类;氯化钠可维持均衡的渗透压;3号胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;中性红为pH指示剂。
图鉴：
配方(每升)：
蛋白胨7g
酵母膏粉 3g
乳糖10g
氯化钠5g
3号胆盐1.5g
中性红0.03g
结晶紫0.002g
琼脂15g
最终pH 7.4±0.2
使用方法：
1、称取本品41.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，备用(不得超过3h)。
2、以无菌手续取样品25g或25mL，加入含225mL无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的三角瓶内，充分振摇或用均质器均质1min成1：10稀释液，然后以1：10继续稀释，选择三个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个平皿，倾注加热溶解并冷至45℃左右的培养基，琼脂凝固后再加3-4mL培养基覆盖平板表层。
3、36±1℃培养18—24h。
4、观察结果。
质量控制：
质控菌株接种后于36±1℃培养18—24h结果如下：
菌名菌号生长状况培养特征
大肠埃希氏菌ATCC25922 良好深红色菌落，周围有红色沉淀
产气肠杆菌CMCC(B)45103 良好红色菌落，周围可有淡红色沉淀
金黄色葡萄球菌ATCC6538 受抑制-----
贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
贮存期三年。
规格：250g
来源：环凯微生物。