人参主要病原菌生防真菌的筛选及鉴定
五种栽培植物上细菌病害的病原菌鉴定及室内药剂筛选
内容摘要
综合以上结果，我们可以得出以下结论：Paenibacillus polymyxa是一种具 有生防潜力的人参病害生防细菌，其通过产生抗菌肽和诱导人参抗性相关酶系来 抑制病害的发生。这一发现为今后开发高效、环保型人参病害生物防治制剂提供 了理论依据。
内容摘要
然而，本研究仍存在一定的局限性。首先，在筛选生防细菌过程中，我们仅 了Paenibacillus polymyxa一种生防细菌，未来研究可以进一步发掘其他具有 生防潜力的人参病害生防细菌。其次，在实验过程中，我们仅针对 Paenibacillus polymyxa的抗菌物质和抗性诱导机制进行了初步研究，其具体 作用机制仍有待深入研究。
内容摘要
综上所述，本研究为人参病害的生物防治提供了一定的理论支持。在今后的 研究中，我们将进一步发掘其他具有生防潜力的人参病害生防细菌，并深入探讨 其作用机制，为实现人参产业的可持续发展提供更多有益的指导。
烟草秸秆中产纤维素酶细菌的筛 选、鉴定及酶活测定
烟草秸秆中产纤维素酶细菌的筛选、鉴定及酶活测定
1、待测药剂：选择了5种具有不 同作用机制的杀菌剂。
1、待测药剂：选择了5种具有不同作用机制的杀菌剂。
2、实验流程：首先制备了细菌悬浮液，然后将待测药剂与细菌悬浮液混合， 在培养皿中培养，并设置空白对照。每个处理重复三次。
1、待测药剂：选择了5种具有不同作用机制的杀菌剂。
3、数据分析：通过计数和比较不同处理组和对照组的存活细菌数量，计算各 药剂对细菌的抑制率。
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1、待测药剂：选择了5种具有不同作用机制的杀菌剂。
经过室内药剂筛选实验，发现5种杀菌剂对不同细菌病害的防治效果存在差异。 其中，某含铜杀菌剂对假单胞杆菌属细菌效果显著，而某氨基糖苷类抗生素对黄 单胞杆菌属细菌防治效果较好。此外，某季铵盐类杀菌剂对两种细菌均有较好的 防治效果。
人参果常见病害及防治和治疗办法
叶片向上卷曲，表面出现明亮的黄色或黄绿色相间的条纹。
线虫病
• 根结线虫病：根部形成大小不等的根结，根系发育不良， 地上部生长缓慢，植株矮小。
03 病害防治技术
农业防治
选用抗病品种
针对当地病害发生情况，选择抗病性较强的人参果品种。
合理轮作
避免连作，减少病原菌的积累和扩散。
加强田间管理
及时清除病残体，合理施肥浇水，增强植株抗病能力。
科学合理使用农药
农药选择
根据病害种类选择合适的农药，并注意使用剂量和浓度，避免滥用和过量使用。
施药时间
选择在病害发生初期或发病高峰前进行施药，以控制病害的蔓延。
提高栽培技术和管理水平
栽培技术
采用先进的栽培技术，如合理密植、修 剪枝条等，提高人参果的抗病能力。
VS
管理水平
加强水肥管理，合理搭配氮、磷、钾等营 养元素，增强树势，提高人参果的抵抗力 。
增强植物抗性
通过使用生物肥料等措施，可以促进植物的生长和抗病能力的提高， 从而减少病原菌的侵染和繁殖。
05 防治与治疗的注 意事项
定期检查与预防
定期检查
定期对人参果进行检查，及时发现并记录可能出现的病害症状，如叶片黄化、落 花落果等。
预防措施
采取科学合理的农业措施，如轮作、加强田间管理等，以预防病害的发生。
湿度控制
湿度是影响病原菌生长的重要因素之一。在干燥的环境中，病原菌容易 繁殖，因此可以通过增加湿度或控制湿度来抑制病原菌的生长。
化学治疗
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药剂防治
使用化学药剂是防治病害的常用方法之一。可以 选择针对特定病害的药剂，并在适当的时间使用 ，以达到防治效果。
消毒杀菌
人参栽培技术
定期检查，发现病虫害及时采取措施防治，以防病虫害扩散。
种植密度
合理安排种植密度，一般每平方米种植2-3棵，过密会导致光照不足、通风不良，过稀则无法充分利用土地资源。
注意事项
药用价值
发展前景展望
营养保健
深加工产品
生态保护
THANKS
感谢观看
做好越冬防护措施，防止动物践踏和风吹日晒，保证人参安全越冬。
越冬管理
03
化学防治
使用高效、低毒、低残留的化学药剂进行防治，注意轮换使用不同药剂，防止产生抗药性。
参林的病害防治
01
生理性病害
针对不同生理性病害，采取相应的预防和治理措施，如调整土壤酸碱度、补充微量元素等。
02
病原菌病害
针对病原菌引起的病害，采取综合防治措施，如选用抗病品种、加强田间管理等。
整地作畦
将种子用温水浸泡24小时后，在温室中催芽，待大部分种子萌发后即可播种。
种子处理
将种子均匀撒播在畦面上，覆盖一层薄土，并浇水保湿。
播种方法
பைடு நூலகம்
参苗的日常管理
定期进行除草松土，以保持土壤的通透性和防止杂草的滋生。
除草松土
水分管理
肥料管理
病虫害防治
根据气候条件和土壤湿度，适时浇水，保持土壤湿润。
根据土壤肥力和参苗生长需要，合理施肥，一般以有机肥为主，化肥为辅。
运输
在运输过程中要避免人参受到挤压、碰撞等机械损伤，同时需要确保运输时间尽可能短，以减少途中人参品质的变化。
参根的储存与运
06
其他注意事项与前景展望
土壤选择
选择有机质丰富、通气性好、排水良好的土壤，避免在黏重、排水不良、土层薄或肥力低下的土地上种植。
钩状木霉和哈茨木霉菌对人参土壤理化性质及真菌群落结构的影响
doi：10.11838/sfsc.1673-6257.22370钩状木霉和哈茨木霉菌对人参土壤理化性质及真菌群落结构的影响马莹莹1，2，金 桥1，2，关一鸣1，2，张 鹏3，潘晓曦1，2，张 悦1，2， 刘政波1，2，张舒娜1，2，闻正顺4，王秋霞1，2*［1．中国农业科学院特产研究所，吉林 长春 130112；2．吉林省中药材种植（养殖）重点实验室， 吉林 长春 130112；3．吉林敖东世航药业股份有限公司，吉林 敦化 133700； 4．浙江海洋大学食品与药学学院，浙江 舟山 316022］摘 要：为研究不同木霉菌对栽培人参土壤的改良作用，分析木霉菌对土壤养分和土壤真菌群落结构与功能特征的影响。
采用人参盆栽试验，添加外源木霉菌（钩状木霉DH3、MM3、MM4、Q7 4种菌株和哈茨木霉MM6菌种）后，分析土壤理化性质以及土壤微生物群落多样性变化。
添加不同外源木霉菌处理后人参土壤理化性质发生变化，土壤pH值无显著变化，土壤全氮、有机质、铵态氮、硝态氮、有效磷、速效钾含量显著增加（P<0.05），而碳氮比（C/N）在添加木霉菌处理中降低，其中钩状木霉MM3和哈茨木霉MM6两株菌的理化性质表现最好。
ITS测序分析获得703个OTUs，涵盖了8门、26纲、46目、86科、141属。
木霉菌处理后土壤真菌微生物α多样性指数（ACE、Chao1）增加，尤其是钩状木霉MM3；钩状木霉MM3中的主要特征种群是肉座菌科（Hypocreaceae）和木霉菌属（Trichoderma），哈茨木霉MM6的主要特征种群是毛壳菌科（Chaetomiaceae）。
冗余分析（RDA）发现，土壤 C/ N 和硝态氮是影响土壤环境中微生物多样性的主要因素；相关分析表明，刺球菌属（Chaetosphaeria）与土壤全氮含量呈显著正相关，与C/N呈显著负相关。
本结果为栽培人参土壤微生物改良和生物防治提供理论依据。
关键词：人参；木霉菌属；土壤理化性质；冗余分析；真菌群落多样性；Spearman分析人参（Panax ginseng C.A.Meyer）为五加科人参属多年生草本植物，其干燥根是我国名贵的中草 药［1］。
植物根际促生菌F13的筛选、鉴定及对豆角促生、抗病的效果
第 63 卷第 2 期2024 年 3 月Vol.63 No.2Mar.2024中山大学学报（自然科学版）（中英文）ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI植物根际促生菌F13的筛选、鉴定及对豆角促生、抗病的效果*梁卫驱1，2，胡珊1，黄皓1，郑伟才1，喻孟君1，陈彦1，陈淑慰1，徐匆1，罗华建1，刘孝龙2，31. 东莞市农业科学研究中心，广东东莞 5230002. 中山大学生命科学学院，广东广州 5102753. 中国科学技术大学化学与材料科学学院，安徽合肥 230026摘要：为获得具有药肥双效的多功能植物根际促生菌，从葡萄根际土壤中分离出同时具有溶磷解钾功能的菌株F13。
该菌通过形态学观察、生理生化检测和16S rDNA比对，鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
经平板对峙法测定菌株F13对8种植物病原菌的抑制率为63.26%~81.53%。
田间应用中发现，菌株F13发酵液灌根处理对豆角（Vigna unguiculata subsp. sesquipedalis（L.） Verdc.）生长具有显著的促进作用，其中实验组在株高、叶片数、茎粗方面分别高于对照组26.7%、24.4%、11.9%，产量高于对照组39.68%；在植株吸收磷、钾元素方面分别高于对照组11.5%、46.8%；在豆角果实中维生素C、可溶性蛋白含量方面分别高于对照组22.15%、55.55%。
此外，菌株F13对豆角白粉病的相对防效达 71.92%。
因此，菌株F13是一株具有巨大应用潜力的药肥双效植物根际促生菌。
关键词：植物根际促生菌；促生作用；拮抗作用中图分类号：S154.3 文献标志码：A 文章编号：2097 - 0137（2024）02 - 0150 - 10Screening and identification of plant growth-promoting rhizobacteriaF13 and its effect on growth promotion and disease resistance of cowpeaLIANG Weiqu1，2， HU Shan1， HUANG Hao1， ZHENG Weicai1， YU Mengjun1，CHEN Yan1， CHEN Shuwei1， XU Cong1， LUO Huajian1， LIU Xiaolong2，31. Dongguan Agricultural Science Research Center， Dongguan 523000， China2. School of Life Sciences， Sun Yat-sen University， Guangzhou 510275， China3. College of Chemistry and Materials Science， University of Science and Technology of China，Hefei 230026， ChinaAbstract：In order to obtain a plant growth-promoting rhizobacteria with dual effects of medicine and fertilizer，a bacteria strain，named as F13， which has the function of dissolving phosphorus and potassium，was isolated from the grape rhizosphere soil. The bacterium was identified as Pseudomonas aeruginosaby morphological observation，physiology and biochemistry and 16S rDNA identification. The plateDOI：10.13471/ki.acta.snus.2023E035*收稿日期：2023 − 06 − 21 录用日期：2023 − 08 − 09 网络首发日期：2023 − 10 − 23基金项目：广东省科技计划项目（2017A020208002）；东莞市科技转化与推广服务项目（2019B0302）作者简介：梁卫驱（1980年生），男；研究方向：农业生物技术；E-mail：***************通信作者：胡珊（1981年生），女；研究方向：农业生物技术；E-mail：***************刘孝龙（1985年生），男；研究方向：生物技术；E-mail：****************.cn（胡珊、刘孝龙为共同通信作者）第 2 期梁卫驱，等：植物根际促生菌F13的筛选、鉴定及对豆角促生、抗病的效果confrontation method determined that the fermentation broth of strain F13 had an antagonistic effect on8 kinds of plant pathogens，and the antibacterial rate was between 63.26% and 81.53%. In the fieldapplication， it was found that the root irrigation of the strain F13 had a significant effect on the growth of cowpea. The experimental group was 26.7%， 24.4%， and 11.9%， respectively， higher than that of the control group in terms of plant height，number of leaves，and stem diameter，and the yield increased by 39.68%. Compared with the control group， the experimental group increased phosphorus and potassium by 11.5% and 46.8%， and increased vitamin C and soluble protein content by 22.15% and 55.55%，respectively. In addition，strain F13 had a good control effect on cowpea powdery mildew，and the control efficacy in field reached 71.92%. Therefore，strain F13 is a rhizosphere growth-promoting bacterium with great potential for application of medicine and fertilizer.Key words：plant growth-promoting rhizobacteria； promoting effect； antagonistic action近年来，为了更好地促进作物生长和防治作物病害，大量农业化学品被投入使用，导致农药、酞酸酯、激素、抗生素、抗性基因及病原微生物等非生物和生物的污染物在农田中不断积累，造成了一系列资源环境问题（何艳等， 2018；李志明等， 2019）。
根茎类药用植物连作障碍研究进展
黑龙江农业科学2024(3):110-115H e i l o n g j i a n g A gr i c u l t u r a l S c i e n c e s h t t p ://h l j n y k x .h a a s e p.c n D O I :10.11942/j.i s s n 1002-2767.2024.03.0110王小国.根茎类药用植物连作障碍研究进展[J ].黑龙江农业科学,2024(3):110-115,128.根茎类药用植物连作障碍研究进展王小国1,2(1.三门峡职业技术学院食品园林学院,河南三门峡472000;2.河南科技大学应用工程学院,河南三门峡472000)摘要:在根茎类药用植物集约化种植中,长期连作引起的植株生长不良㊁产量下降和品质降低等连作障碍问题,已成为制约我国中药材产业发展的重要因素㊂为缓解根茎类药用植物的连作障碍,促进根茎类药用作物的产业发展,本文综述了根茎类药用植物连作障碍的成因,并概括总结了消除连作障碍的措施㊂根茎类药用植物连作障碍成因十分复杂,包括植物的化感作用㊁土壤理化性质恶化㊁土壤酶活性改变和土壤中致病菌增加等,这些因素单独作用或共同作用㊂目前常用的消减技术措施包括:筛选耐重茬抗病新品种㊁合理轮作间作㊁土壤强还原处理㊁土壤蒸汽消毒和施加生物炭等物理措施㊁使用氯化苦㊁威百亩㊁棉隆和噻唑膦等化学农药,以及利用微生物菌剂如芽孢杆菌㊁哈茨木霉和淡紫拟青霉等调节土壤微生物群落并抑制有害微生物等㊂其中,利用微生物菌剂消减连作障碍是近年来的研究热点之一,但由于连作障碍涉及根系㊁土壤和微生物等诸多因素,采取综合防控措施才能有效消减连作障碍㊂最后从选育抗病性强㊁耐连作的优质新品种㊁进一步探索适宜的轮作间作模式和提高病原菌拮抗微生物稳定性等方面,对我国根茎类药用植物连作障碍的研究方向进行了展望㊂关键词:药用植物;连作;重茬;消减措施收稿日期:2023-08-22基金项目:河南省重点研发与推广专项项目(232102110061);三门峡市软科学计划项目(2022003031)㊂作者简介:王小国(1977-),男,硕士,副教授,从事遗传育种及栽培技术研究㊂E -m a i l :w a n g x i a o g u o @s m x pt .e d u .c n ㊂ 随着中医药行业的发展,下游产业对中药材的需求量不断提升,中药材种植面积呈现持续增长㊂据统计,2020年我国中药材种植面积达555.964万h m2[1]㊂由于中药材生产周期较长且具有明显的地域性,在规模化和集约化种植过程中,道地产区的连作障碍问题也日益凸显㊂长期连作导致的植株长势弱㊁病害严重㊁产量下降和品质降低等问题制约了我国中药材产业的快速发展㊂根茎类药用植物指入药部分(根㊁块根㊁块茎和鳞茎等)生长于地下的植物㊂‘中国药典“(一部)记载的根茎类中药占其收载药材和饮片的27.44%,与其他药用植物相比较,连作障碍问题更为严重㊂早在明代卢之颐‘本草乘雅半偈“中就记载,地黄 种植甚易,入土即生㊂但种植之后,其土便苦,次年止可种牛膝㊂再二年,可种山药㊂足十年,土味转甜,始可复种地黄㊂否则味苦形瘦,不堪入药也㊂ [2]现代研究则表明,不仅地黄不能连作,丹参㊁太子参㊁西洋参㊁白术㊁三七㊁黄连㊁黄芪㊁黄芩㊁百合㊁贝母㊁山药㊁当归和半夏等根茎类药用植物也忌连作㊂丹参连作后,根系维管束腐烂,有时会形成结节状虫瘿,地上植株矮小,叶片发黄,严重者甚至死亡[3];西洋参连作后,易发生根腐病和锈腐病,根部出现腐烂,叶片褪绿,植株萎蔫死亡[4];半夏随着连作年限的增加,易发生土传病害,产量和品质均下降,必须间隔几年甚至十几年才可复种[5]㊂本文在分析根茎类药用植物连作障碍成因基础上,总结了近年来消减连作障碍的技术措施,以期为中药材种植者和相关研究人员提供参考㊂1 连作障碍发生原因1.1 化感作用研究表明,植物的根茎或残体通过挥发㊁淋溶㊁分泌和腐解作用向土壤释放的化感物质是引起连作障碍的重要因子[6]㊂药用植物的活性成分通常是植物的次生代谢产物,因此药用植物更易产生化感物质㊂这些物质不易分解,对下茬中药材产生毒害作用,从而抑制其发芽和生长发育㊂这些化感物质包括香草酸㊁香豆酸和阿魏酸等大分子物质(表1)㊂如何志贵[7]对连作3年半夏根际土壤和非连作土壤中的酚酸物质进行提取,通过L C -M S 鉴定出17种酚酸类物质,其中没食子酸㊁原儿茶酸㊁香草酸㊁丁香酸㊁香兰素㊁丁香醛㊁阿魏酸㊁绿原酸等8种物质可能对半夏生长发育产生较强的化感作用,除阿魏酸外,其他7种酚酸对半夏发芽率和萌发指数均有抑制作用㊂随着研究者不断深入地研究,还会有新的化感物质逐渐被发现㊂113期 王小国:根茎类药用植物连作障碍研究进展表1 根茎类药用植物根际化感物质药用植物根际土壤化感物质半夏没食子酸㊁原儿茶酸㊁香草酸㊁丁香酸㊁香兰素㊁丁香醛㊁阿魏酸㊁绿原酸[7]丹参包括2-乙基己醇㊁苯甲酸㊁油酸甲酯等24种物质[8]地黄香豆酸㊁对羟基苯甲酸㊁香草酸㊁丁香酸㊁阿魏酸[9]人参水杨酸㊁没食子酸㊁苯甲酸㊁3-苯基丙酸和肉桂酸[10]黄连香草酸㊁阿魏酸与4-香豆酸[11]山药香草酸㊁对羟基苯甲酸及阿魏酸[12]西洋参总苷㊁生物碱㊁酮及黄酮㊁有机酸㊁萜㊁醇和香豆素等[13]黄芪4-羟基香豆素㊁对羟基苯甲酸㊁对甲氧基苯甲酸及肉桂酸[14]太子参9种酚酸(包括没食子酸㊁香豆酸㊁3,4-二羟基苯甲酸㊁对羟基苯甲酸㊁香草酸㊁丁香酸㊁香兰素㊁阿魏酸㊁苯甲酸)和8种有机酸类物质(草酸㊁甲酸㊁苹果酸㊁乳酸㊁乙酸㊁柠檬酸㊁酒石酸和琥珀酸)[15]玉竹对-羟基苯甲酸㊁香草酸㊁丁香酸㊁香豆酸㊁阿魏酸[16]1.2 土壤理化性质恶化诸多研究发现,长期连作后土壤理化性质恶化,表现为土壤板结,团粒结构破坏,孔隙度下降,通气透水性下降,如三七连作3年土壤和未种植三七土壤相比较,土壤出现板结[17]㊂同时,由于根茎类药用植物栽培年限较长,植物对养分的选择性吸收以及长期重施化肥而忽视有机肥,造成土壤中一些营养元素缺乏,而另一些营养元素富集,土壤养分失衡㊂如山药连作后,土壤中氮㊁锰和锌元素大幅降低[18];党参连作后,土壤中硝态氮㊁速效磷和速效钾含量较轮作均降低[19];浙贝母连作后,土壤中有效氮㊁有效磷㊁有效钾含量显著降低[20];半夏连作后,根际土壤中有机质㊁全氮和全磷含量降低,而速效钾含量升高[21];三七连作后,土壤有机质㊁氮和磷含量较对照显著下降,而土壤铁㊁硼和铝含量增加[17]㊂此外,长期连作还可以导致土壤酸化㊂研究表明:人参连作6年后,参地p H 由新林土的5.5~5.8降为5.1~5.3[22],白术㊁三七和党参根际土壤p H 也随种植年限的增加而降低㊂1.3 土壤中酶活性改变土壤中的生物化学过程需要酶的催化作用才能完成,土壤酶活性能够反映微生物数量和群落结构,同时也能反映土壤肥力㊂前人研究发现,根茎类药用植物连作后土壤中脲酶和蔗糖酶活性通常降低,表明连作后土壤对氮㊁碳等元素的利用率降低,而纤维素酶和多酚氧化酶活性通常增强(表2)㊂但研究者对不同药用植物土壤过氧化氢酶活性的研究结果却并不一致,例如半夏㊁牛膝㊁地黄㊁三七㊁栝楼和西洋参连作后,土壤过氧化氢酶活性降低,说明连作后中药材抗逆性减弱,可能会诱发病害的发生,而山药连作却提高了土壤过氧化氢酶的活性,这可能与药用植物种类不同有关,同时由于土壤环境的复杂性,酶活性会受到多种因素的影响㊂表2 根茎类药用植物连作土壤酶活性变化药用植物土壤酶活性变化半夏连作较轮作土壤的过氧化氢酶㊁脲酶㊁磷酸酶活性降低6.21%㊁18.80%和21.49%,多酚氧化酶活性升高62.96%[21,23]牛膝连作20年以上土壤中脲酶㊁蔗糖酶和过氧化氢酶活性降低,脲酶活性从1.57m g ㊃g -1降低至1.23m g ㊃g -1,多酚氧化酶活性增强[24]地黄连作土壤脲酶活性比正茬降低63.06%,过氧化氢酶活性降低51.92%[25]三七连作3年,土壤过氧化氢酶活性由2.23m g ㊃g -1降至1.02m g ㊃g -1,多酚氧化酶活性升高[17,26]栝楼连作2年土壤中蔗糖酶㊁脲酶㊁磷酸酶活性均降低,过氧化氢酶活性较对照下降26.97%[27]山药连作后土壤中脲酶㊁碱性磷酸酶㊁蔗糖酶活性降低,过氧化氢酶活性增强[28]黄连脲酶活性降低,正茬416.56μg ㊃d -1㊃g -1,连作3年148.47μg ㊃d -1㊃g -1,连作5年127.31μg ㊃d -1㊃g -1[29]黄芪连作6年后脲酶和蔗糖酶活性降低,纤维素酶活性0.281U ㊃g -1,比正茬提高59.4%[30]西洋参连作较对照土壤脲酶㊁磷酸酶㊁蔗糖酶和过氧化氢酶活性降低,正茬土壤脲酶活性25.89m g ㊃g -1,连作土壤脲酶活性20.69m g ㊃g-1[31]玉竹正茬脲酶活性392.069μg ㊃d -1㊃g -1,连作298.174μg ㊃d -1㊃g -1;正茬蔗糖酶活性34.800μg ㊃d -1㊃g-1,连作20.801μg ㊃d -1㊃g-1[16]1.4 土壤微生物失调,致病菌增加土壤微生物失调是连作障碍发生的主要原因㊂随着药用植物连作年限的增加,土壤中微生物群落结构和数量发生变化,细菌数量减少,病原111黑 龙 江 农 业 科 学3期真菌数量增加㊂研究表明,随着丹参连作年限增加,土壤中芽孢杆菌属(B a c i l l u s )等有益细菌逐渐减少,而真菌镰刀菌属(F u s a r i u m )㊁毛壳菌属(C h a e t o m i u m )和青霉菌属(P e n i c i l l i u m )等病原菌数量及相对丰度增加[32],镰刀菌属可引起丹参根腐病的发生㊂有学者对重茬地黄植株中分离的病原菌进行鉴定后,确定尖孢镰刀菌(F .o x y s po r u m )是地黄连作障碍主要病原菌[33];同时,尖孢镰刀菌㊁腐皮镰刀菌(F .s o l a n i )和轮枝镰刀菌(F .v e r t i c i l l i o i d e s)也是黄芪和人参[34]根腐病的致病菌,镰刀菌的厚垣孢子在土壤中存活很长时间后仍能表现出致病性㊂此外,根茎类药用植物连作后,易导致线虫病的发生,如山药短体线虫病和根腐线虫病[35]㊁丹参根结线虫病[36]和西洋参线虫病等,降低了根茎类中药材的商品价值㊂2 消减连作障碍的措施近年来,连作障碍在我国中药材各大产区均有发生,目前生产上常用的消减措施包括:农业措施㊁物理方法㊁化学方法和生物方法等㊂2.1 农业措施2.1.1 筛选抗病新品种和嫁接育苗 选育抗病新品种,是消减连作障碍的重要途径之一㊂目前我国根茎类药用植物选育出的耐重茬抗病新品种有:三七抗病新品种 苗乡抗七1号 [37]㊁高抗根腐病黄精新品种 皖黄精3号 [38]㊁半夏中抗腐烂病新品种 赫麻芋2号 [39]㊁丹参高抗根腐病新品种 丹杂2号 [40]㊁高抗根腐病黄芪新品种 9118 和新品系 94-02 [41-42]㊁抗重茬山药新品种 丰抗3219[43]㊁抗当归麻口病新品种 岷归4号 [44]㊁抗根腐病和根结线虫病柴胡新品种 济柴1号 [45]等㊂此外,嫁接育苗也是减轻连作障碍的有效措施,通过砧木嫁接换根,可以提高种苗抗性,目前已在西瓜㊁甜瓜和黄瓜等园艺作物中推广应用,而根茎类中药材多以地下根茎入药,难以通过嫁接方式消减连作障碍㊂2.1.2 合理轮作间作 轮作间作是实际生产中改善土壤理化性质㊁消减连作障碍经济有效的措施㊂ 种地不倒茬,十年九抓瞎 换茬不换土,一亩顶两亩 轮作倒茬不用问,强如年年铺底粪 等农业谚语表明,通过轮作间作可均衡利用土壤养分㊂已有根茎类药用植物轮作间作模式(表3)研究结果表明,亲缘关系较远物种的轮作间作可以提高土壤p H ,降低酚酸类物质含量,提高土壤酶活性,改良土壤微生物群落结构,减轻病虫害,提高中药材产量㊂对半夏与小麦轮作的研究表明,轮作后半夏根际土壤酚酸类物质含量降低,病原真菌被抑制而有益真菌丰度提高[7]㊂山药与小麦轮作较山药连作,可明显提高土壤脲酶㊁蔗糖酶和碱性磷酸酶活性[28]㊂黄芪与莜麦/燕麦轮作能够提高土壤中脲酶和酸性磷酸酶活性,根腐病重度发病率为24.90%,显著低于连作黄芪重度发病率[30,46]㊂黄芩与小麦轮作能有效提高土壤中蔗糖酶活性[47]㊂丹参与烤烟轮作较连作能显著提高土壤蔗糖酶活性,能明显增加土壤中细菌和放线菌数量,真菌数量减少[48]㊂浙贝母与水稻轮作,可有效控制灰霉病和菌核病的发病率[49]㊂党参与小麦/玉米轮作倒茬,党参根腐病发病率降低为12.40%和16.60%以下[50]㊂白术与玉米轮作后,白术鲜重较连作增加3.7倍,产量明显提高[51]㊂表根茎类药用植物轮作间作模式2.2 物理方法物理方法包括强还原土壤处理(R e d u c t i v e S o i lD i s i n f e s t a t i o n ,R S D )㊁蒸汽消毒和施加生物炭等㊂强还原土壤处理指在土壤中施用大量粉碎易分解的有机物料后㊁淹水覆膜强还原土壤,短期内杀灭土传病原菌的方法[60]㊂强还原土壤处理不仅可改善土壤理化性质,修复因酸化和次生盐渍化而退化的土壤,还可以重建微生物区系,消减因理化性质退化和土传病原菌导致的连作障碍㊂强还原土壤处理在地黄中的研究表明,土壤强还原处理能够显著提高重茬地黄的存活率和产量[33,61];三七连作土壤强还原处理后,能显著降2113期 王小国:根茎类药用植物连作障碍研究进展低尖孢镰刀菌在真菌中的比例,降低三七发病率[62];在黄芪连作土壤中添加秸秆和牛粪有机物料后,强还原处理效果较好,可杀灭土壤中病原真菌[63];此外,强还原处理还能有效杀灭土壤中的根结线虫,杀线率较高㊂土壤蒸汽消毒是利用70ħ蒸汽保持30m i n杀死土壤病原生物的方法㊂研究表明,土壤蒸汽消毒后,三七的出苗率㊁存苗率㊁根鲜质量和干质量均高于对照,根腐病的发病率降低[64]㊂土壤中施加生物炭对太子参[65]㊁三七[66]和兰州百合的连作障碍也有一定缓解作用,但存在成本高等问题,因此大面积推广应用受到限制㊂值得一提的是,有研究发现土壤中蚯蚓及蚯蚓粪也能够一定程度上缓解连作障碍[67-68]㊂2.3 化学方法消减连作障碍常用的化学农药包括氯化苦㊁威百亩㊁棉隆和噻唑膦等㊂氯化苦别名三氯硝基甲烷,是一种易挥发油状液体,可有效防治连作土传病害和根结线虫,目前在我国仅作土壤熏蒸,且必须在专业技术人员指导下使用㊂研究表明:连作地黄每667m 2地块用30k g 氯化苦熏蒸后,长势较好[69];药食两用生姜连作后根结线虫发病严重,氯化苦熏蒸后,腐生性线虫数量和寄生性线虫数量大幅度降低[70]㊂威百亩是一种液态土壤熏蒸剂,常用剂型为32.7%~42.0%水剂㊂根据报道,安平县白山药连作种植后,土传病害严重,威百亩防治镰刀菌引起的白山药褐腐病效果较好,但熏蒸时应注意地温和熏蒸时间,当地温高且熏蒸时间过长时,易产生药害[71]㊂98%棉隆微粒剂是固态熏蒸剂,研究表明,375k g㊃h m -2的施用量对当归麻口病防效达50.00%~69.30%,同时控制了地下害虫和田间杂草的发生[72];此外,棉隆对三七和山药的连作障碍也有较好消减作用,有效降低病害发生率㊂噻唑膦属于有机磷类杀线虫剂,一般选择10%噻唑膦颗粒剂进行土壤撒施,如防风连作后发生根腐病,可按30k g ㊃h m -2的用量施用噻唑膦,如果施用量大则易伤根,且会造成土壤和地下水环境污染㊂2.4 生物方法土壤微生物失衡是导致连作障碍发生的原因之一㊂利用微生物菌剂可调节土壤微生物群落并抑制有害微生物㊂目前已报道的病原菌拮抗微生物有芽孢杆菌㊁哈茨木霉(T r i c h o d e r m ah a r z i a n u m )㊁淡紫拟青霉(P a e c i l o m y c e s l i l a c i n u s )和厚孢轮枝菌(V e r t i c i l l i u mc h l a m y d o s p o r i u m )等㊂2.4.1 芽孢杆菌 芽孢杆菌作为镰刀菌的拮抗菌已被广泛应用㊂黄伟民[73]在野生地黄生防菌的筛选和验证试验中,筛选出有效拮抗菌蜡样芽孢杆菌(B .c e r e u s),平板对峙试验证实所筛选的菌株对地黄病原菌尖孢镰刀菌有明显的拮抗效应;杨瑾[74]通过研究发现,贝莱斯芽孢杆菌(B .v e l e z e n s i s)对丹参根腐病病原菌腐皮镰孢菌和尖孢镰孢菌有抑制作用;杜家方[33]在地黄连作障碍发生机制及消减措施研究中发现,特基拉芽孢杆菌(B .t e qu i l e n s i s )对尖孢镰刀菌生长具有拮抗作用;此外,研究还发现,枯草芽孢杆菌(B .s u b t i l i s)和贝莱斯芽孢杆菌对北苍术㊁桔梗和人参连作病原菌均有抑制作用㊂2.4.2 哈茨木霉 诸多研究表明,生防真菌哈茨木霉菌可缓解连作障碍[75],显著消减根际土壤中酚酸物质,对人参铁锈病的抑制率达79.53%,对地黄的病原菌也有抑制作用㊂平板对峙中对西洋参腐皮镰刀菌抑菌率高达100%[76],对从根腐病发病的白术中分离的尖孢镰刀菌抑菌率达50%以上[77],可降低白术发病率,促进白术生长,缓解连作障碍[78]㊂平贝母连作后菌核病发病严重,生物防治菌剂中的哈茨木霉菌对平贝母菌核病防效达79.27%[79],防治效果较好㊂此外,哈茨木霉菌可提高半夏连作土壤磷酸酶活性,降低连作时细菌性疫病的发病率,提高生物产量[5]㊂可见,哈茨木霉菌在防治中药材土传病害时,具有广谱的特点,可以抑制多种土传病原菌的生长㊂2.4.3 淡紫拟青霉和厚孢轮枝菌 药用植物连作后,不仅镰刀菌数量增加,还会增加土壤中线虫数量,如山药㊁丹参和西洋参等[80]㊂淡紫拟青霉和厚孢轮枝菌属寄生真菌,淡紫拟青霉适宜生长的温度为15~30ħ,菌丝生长适宜p H 6~9,黑暗中生长最佳,二者对根结线虫和孢囊线虫有较强寄生能力,可用于多种植物线虫病的防治㊂据报道,淡紫拟青霉颗粒剂41.25k g㊃h m -2的施用量,对导致当归麻口病发生的茎线虫的防效为63.43%,厚孢轮枝菌颗粒剂33.75k g㊃h m -2穴施,亦可有效防治当归麻口病[81]㊂除上述微生物菌剂之外,复合微生物肥料和生物有机肥在中药材无公害种植中也得到了较为广泛地应用,可改善连作土壤,提高中药材产量和品质㊂3 展望集约化种植方式不可避免地引起连作障碍问题㊂尽管国内外学者已对连作障碍原因及消减措施进行了大量研究,但大多研究都是从单一因素进行分析,存在一定局限性,且连作障碍发生原因311黑 龙 江 农 业 科 学3期较为复杂,涉及到根茎类药用植物的根系㊁土壤㊁微生物和环境等诸多因素,因此仍需进一步开展相关研究工作㊂(1)运用基因组学㊁转录组学㊁蛋白组学和代谢组学等分子生物学手段,从生态系统的角度深入解析连作障碍发生机制是未来的研究方向;(2)全面收集野生中药材种质资源,选育抗病性强㊁耐连作的优质新品种,是消减连作障碍的重要途径之一;(3)现有的芽孢杆菌㊁哈茨木霉㊁淡紫拟青霉和厚孢轮枝菌菌剂㊁复合微生物肥料和生物有机肥虽已在实际生产中发挥较好作用,但是目前这些菌剂和肥料存在的田间应用稳定性及成本问题,仍然制约着菌剂和微生物肥料的发展和推广,还需进一步改良和研究,使其大田应用效果更稳定;(4)随着技术的进步,寻找新的病原菌拮抗微生物也将是今后研究的内容;(5)在发病严重的地块,单一的消减措施可能得不到理想的效果,需采取积极有效的综合防控措施,进一步筛选适宜的轮作间作植物种类,积极探索药粮种植模式㊁林药种植模式和药药种植模式,建立科学㊁合理的轮作制度,同时注重有机肥和微生物肥料的使用,将有效缓解连作障碍,实现经济效益和生态效益的最大化㊂参考文献:[1] 王慧,张小波,汪娟,等.2020年全国中药材种植面积统计分析[J ].中国食品药品监管,2022(1):4-9.[2] 卢之颐.本草乘雅半偈[M ].刘更生等校注.北京:中国中医药出版社,2016.[3] 车欣宇.丹参根际拮抗真菌R F 15的筛选鉴定及其促生效应研究[D ].泰安:山东农业大学,2022.[4] 赵方杰.陕西留坝西洋参连作障碍成因及消减措施初步研究[D ].杨凌:西北农林科技大学,2020.[5] 何贝贝.半夏连作效应缓解技术研究[D ].武汉:华中农业大学,2022.[6] 董晓民,高晓兰,刘伟,等.桃连作障碍中自毒作用的研究进展[J ].黑龙江农业科学,2021(2):123-127.[7] 何志贵.半夏连作障碍发生机制与轮作修复研究[D ].杨凌:西北农林科技大学,2019.[8] 王鹏飞.丹参自毒物质的鉴定及其在腐解液和根际土中的含量分析[D ].泰安:山东农业大学,2021.[9] 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人参的薄层色谱鉴定简述
人参的薄层色谱鉴定简述人参的薄层色谱鉴定是一种常用的鉴别人参及其制品的方法。
以下是详细步骤：1.供试品溶液的制备：取供试样品，加入适当的溶剂，进行超声处理，取上清液作为供试品溶液。
在这个阶段，可以根据不同的溶剂选择来获得更准确的溶解效果。
2.对照药材溶液的制备：分别取西洋参、人参对照药材，同样加入溶剂进行超声处理，然后取上清液作为西洋参对照药材溶液和人参对照药材溶液。
这些溶液可以作为对照标准，用于薄层色谱鉴别的比对。
3.对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rf对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rd对照品和拟人参皂苷F11对照品，加入溶剂混合，得到对照品溶液。
这些对照品溶液可以作为人参皂苷的标准，用于薄层色谱鉴别的比对。
4.薄层色谱分析：在薄层色谱中，将供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液进行点样，然后进行展开、分离、定位和鉴定。
在展开过程中，不同成分会按照各自的理化性质进行迁移，形成不同的色带。
通过与对照药材溶液和对照品溶液的色带进行比对，可以对供试品中的人参皂苷进行定性鉴别。
5.结果判定：根据薄层色谱中的色带形状、颜色深浅、相对位置等特征，可以对供试品中的人参皂苷进行判定。
一般来说，如果供试品溶液与对照药材溶液或对照品溶液在相同位置上显示出相同颜色的色带，可以认为该成分存在于供试品中。
以上就是人参的薄层色谱鉴定的基本步骤。
这种方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点，因此在中药材的鉴别中应用广泛。
需要注意的是，在进行薄层色谱鉴定时，需要严格控制实验条件和操作流程，以保证结果的准确性和可靠性。
人参的性状鉴别
人参的性状鉴别【摘要】基于目前药材市场上出现的多种人参伪品，严重危害到广大人民群众的生命财产安全，故笔者收集查阅相关文献资料，对各种人参的性状做了以下陈述，仅供参考。
【关键词】人参；性状；鉴别0 概述近年来，随着人民生活水平的提高以及各种媒体宣传力度的增大，广大人民群众对于健康产业的认知已经到了一定的水平，对于自身健康的关注度较前些年更是有了明显的提高。
故而各种各样的保健品纷纷亮市，有的几近吹嘘，夸大功效，从而使部分百姓受到各种不同程度的伤害，甚至会危及生命。
比如人参，是用来补益身体的，适用于各种虚弱症状。
于是就有些黑心商人掺假，如用最常见的萝卜作伪品，或用药效不同的商陆冒充，这都大大危害到了广大人民群众的财产及生命安全，故笔者查阅相关文献，对正品人参做以鉴别，仅供参考。
1 人参简介1.1 物种概况人参（Panax ginseng C. A. Mey.），五加科植物人参的干燥根，濒危物种，多年生草本植物，喜阴凉、湿润的气候，多生长于昼夜温差小的海拔500～1100米山地缓坡或斜坡地的针阔混交林或杂木林中。
由于根部肥大，形若纺锤，常有分叉，全貌颇似人的头、手、足和四肢，故而称为人参。
人参别名：黄参、血参、人衔、鬼盖、神草、土精、地精、海腴、皱面还丹。
人参是珍贵的中药材，是“东北三宝”之一，在我国药用历史悠久。
图1 人参原植物1.2 植物形态人参多年生草本；主根肉质，圆柱形或纺锤形，须根细长；根状茎（芦头）短，上有茎痕（芦碗）和芽苞；茎单生，直立，先端渐尖，边缘有细尖锯齿，上面沿中脉疏被刚毛。
伞形花序顶生，花小；花被钟形，具5齿；花瓣5，淡黄绿色；雄蕊5，花丝短，花药球形；子房下位，2室，花柱1，柱头2裂。
浆果状核果扁球形或肾形，成熟时鲜红色；种子2个，扁圆形，黄白色。
1.3 生境分布人参多生长在北纬40～45度之间，1月平均温度-23～5℃，7月平均温度20～26℃，耐寒性强，可耐-40℃低温，生长适宜温度为15～25℃，年积温2000～3000℃，无霜期125～150天，积雪20～44厘米，年降水量500～1000毫米。
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人参主要病原菌生防真菌的筛选及鉴定肖春萍;杨利民;韩梅;程林;马锋敏;郭双双【摘要】[目的]筛选对人参主要病原菌具高效、广谱抑菌作用的生防真菌,丰富人参生防菌菌种资源.[方法]采用稀释平板法,从吉林省2处采样地的人参健株根际土壤中分离真菌;采用平板对峙培养法,通过初筛和复筛,筛选对人参链格孢菌(Alternaria panax)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、毁灭柱孢菌(C ylindrocar pon destructans)、恶疫霉菌(Ph ytophthora cactorum)、人参核盘菌(Sclerotinia schinseng)和灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)具有高效广谱抑菌活性的生防真菌;利用传统形态学和rDNA-ITS分子分析技术对分离到的生防真菌进行鉴定.[结果]从人参健株根际土壤中共分离得到400株真菌,其中有15株生防真菌对人参7种主要病原菌具有广谱抑菌作用,特别是对立枯丝核菌有强烈的抑制作用(抑菌率均大于50％),且FSR-106的抑菌作用最强(抑菌率87.41％,下同);FSR 121对人参链格孢菌的抑菌作用最强(60.00％);FSR-74对腐皮镰孢菌的抑菌率高达67.48％;FSR-46对毁灭柱孢菌和灰葡萄孢菌的抑菌率最大(66.67％和68.97％);FSR-97对恶疫霉菌及人参核盘菌的抑制作用最强(73.33％和66.67％).通过形态学和rDNA-ITS序列分析鉴定发现,15株生防真菌中有8株木霉属(Trichoderma)、3株青霉属(Penicillium)、1株曲霉属(Aspergillus)、1株附球菌属(Epicoccum)、1株毛壳菌属(Chaetomium)和1株轮层炭壳属(Daldinia),其中FSR-38为黑附球菌(Epicoccum nig rum),FSR-10、FSR-43和FSR-106为深绿木霉(T.atroviride),FSR 46为长枝木霉(T.longibrachiatum),FSR-55为钩状木霉(T.hamatum),FSR-72为桔绿木霉(T.citrinoviride),FSR-74为球毛壳菌(Chaetomium globosum),FSR-97为多孢木霉(Trichoderma pol ys-porum),FSR-91为蔡氏轮层炭壳菌(Daldinia childiae),FSR-25、FSR-67和FSR121为青霉属(Penicillium sp.).[结论]从人参健株根际土壤中可快速有效地筛选获得大量广谱性生防真菌;本研究所得的15株生防真菌对7种人参主要病害防治具有较高的潜在应用价值.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(044)007【总页数】13页(P181-192,201)【关键词】人参病原菌;木霉属;rDNA-ITS序列分析;生防真菌【作者】肖春萍;杨利民;韩梅;程林;马锋敏;郭双双【作者单位】吉林农业大学中药材学院,省部共建生态恢复与生态系统管理国家重点实验室培育基地,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,省部共建生态恢复与生态系统管理国家重点实验室培育基地,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,省部共建生态恢复与生态系统管理国家重点实验室培育基地,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,省部共建生态恢复与生态系统管理国家重点实验室培育基地,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,省部共建生态恢复与生态系统管理国家重点实验室培育基地,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,省部共建生态恢复与生态系统管理国家重点实验室培育基地,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S432.4+4人参(Panax ginseng C.A.Mey)为五加科多年生草本植物，是传统名贵中药材，具有重要的经济价值。
吉林省东北部是我国人参的主产区，人参种植业已成为当地的支柱产业之一[1]。
长期种植和品种选育难度大导致人参种质退化、土传病害严重，根部病害发生率为20%～70%[2]。
人参病害有 20～40种[3]，其中根腐病、锈腐病、黑斑病、灰霉病、立枯病、菌核病及疫病是人参的7种主要病害，对人参品质和产量产生了极大的影响。
因此，土传病害防控成为制约人参产业可持续发展的重大问题之一。
在人参病害防治上，化学农药防治因其高效、操作方便、适应性广、经济效益显著等特点而被长期广泛应用[4]，然而，化学农药防治不当不仅会导致农药残留和环境污染，还会降低人参药材的安全性和商品价值[5-6]。
国家《中药材生产质量管理规范》明确指出，提倡使用生防制剂防治植物病害，因此生防微生物防治已成为植物病虫害综合治理的重要手段[7-9]。
土壤真菌是土壤微生物的主要成员，土壤中的生防真菌可通过竞争、重寄生和代谢产物抗生作用等防治植物病害[10]，已报道的生防真菌包括木霉属[11]、青霉属[12]及毛壳菌属[13]真菌。
国内外研究者利用生防微生物防治人参病害，得到了多株对人参病原菌有拮抗作用的有益菌[14-16]，但有关生防真菌的分离鉴定研究较少[17-18]，且大多数生防真菌仅作用于1种或同时作用于2～3种人参病原菌，不能满足实际生物防治的需要。
鉴于此，本试验以吉林抚松地区人参健株根际土壤为研究对象，分离筛选对人参7种病害主要病原菌具有高效广谱抑菌效果的真菌菌株，并通过形态特征观察以及rDNA-ITS 序列分析对菌株进行鉴定，旨在丰富人参生防真菌菌种资源，为进一步开发广谱型人参生防菌剂和生物农药奠定理论基础。
1.1 材料1.1.1 研究区概况采样地Ⅰ位于吉林省抚松县榆树小西南叉(42°32′18.4″ N，127°08′34.7″ E，海拔537 m)，采样地Ⅱ位于抚松松江河4 km处(42°08′42.3″ N，127°32′29.2″ E，海拔718 m)，2样地均属于中温带湿润寒冷气候，冬季漫长、寒冷、积雪深厚；夏季短促，较热；年平均气温为4 ℃，极端最低气温-44.1 ℃，极端最高气温34.8 ℃；年平均降水量为800 mm，植被类型为针阔混交林，供试土壤均为暗棕色森林土。
1.1.2 取样2012年5月、7月及9月于吉林省抚松县采样地Ⅰ采集伐林翻耕后待栽人参土壤及直播1，2和3年生健康人参植株根际土；在采样地Ⅱ采集2年生倒栽1年的人参健株根际土、3年生倒栽1年的人参健株根际土、2003年及2007年撂荒参后土壤。
以“S”型取样法分别选取5个样点，去除表面枯枝落叶等杂物后采集土壤样品，按人参根际分布采样深度0～20 cm均匀采集，共采集土壤样品120份。
各样地中不同样点采集的鲜土充分混合均匀低温运回实验室后过2 mm筛，于4 ℃保存，用于生防真菌的分离筛选。
1.1.3 供试标靶人参病原菌菌株供试人参链格孢菌(Alternaria panax)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)、人参核盘菌(Sclerotinia schinseng)和灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)，均由吉林农业大学农学院植物病理实验室分离鉴定，4 ℃斜面低温保藏。
1.1.4 培养基PDA培养基和查氏培养基(CZA培养基),其中用PDA培养基进行土壤真菌的筛选及分离，用PDA培养基和CZA培养基进行生防真菌的形态学鉴定。
1.2 方法1.2.1 人参根际土壤中真菌的分离、计数采用传统的稀释平板法[14]进行人参根际土壤真菌的分离、计数。
称取10 g人参根际土壤置于90 mL装有玻璃珠的无菌生理盐水中，振荡2 min，取1 mL振荡液于9 mL灭菌生理盐水中，按梯度依次稀释至10-2，10-3，10-4 g/mL。
吸取100 μL振荡液涂布于PDA平板，25 ℃恒温培养7 d后，挑取菌落形态、大小及颜色等不一的单菌落于PDA培养基上计数，以涂布无菌水作为空白对照。
1.2.2 人参根际土壤中真菌的纯化采用单孢分离纯化法[19]进行人参根际土壤真菌的纯化。
将分离纯化获得的真菌菌块置于PDA培养基上，25 ℃继代培养3次后转接于PDA试管培养基中，4 ℃下保存备用。
1.2.3 人参生防真菌的初筛采用2点杯碟平板对峙法及生长速率法，对分离获得的400株真菌进行菌体抑菌活性初筛。
将1.1.3节7种人参常见病原菌作为靶标菌，分别挑取少量病原菌和真菌菌块于PDA平板上25 ℃活化4 d。
在活化后的病原菌及真菌菌落边缘打取菌饼(直径=5 mm)接入同一PDA平板两侧，2菌饼相距3 cm，以只接种人参病原菌菌饼的培养皿为空白对照，每个处理3次重复，25 ℃培养7 d后观察是否产生拮抗带。
1.2.4 人参生防真菌的复筛采用3点杯碟平板对峙法及生长速率法，依1.2.3节方法得到菌饼后，在PDA平板中央接入一个直径5 mm的病原菌菌饼，在距病原菌2.5 cm处的3个方位各接入同一待测生防真菌菌饼，另1个方位为空白，以仅接种人参病原菌的平板为空白对照，3次重复，25 ℃培养7 d后测量拮抗半径并计算抑菌率。
抑菌率= (对照病原菌菌落扩展半径-生防真菌对峙培养的病原菌菌落扩展半径)/对照病原菌菌落扩展半径×100%。
1.2.5 人参生防真菌的鉴定(1)传统形态学鉴定。
按照《真菌鉴定手册》[20]和《中国真菌志》将生防真菌鉴定到属。
具体操作为：将纯化得到的人参生防真菌菌株接种到PDA或CZA培养基中，25 ℃培养观察菌落的质地、颜色、在培养基上的生长速度以及产生的色素等形态特征。
同时挑取少量不同生长时期的人参生防真菌菌丝，置于洁净载玻片上，加盖玻片制得临时性玻片标本，采用基恩士超景深三维立体显微镜(VHX-600)观察产孢结构及孢子的大小和形态。
(2)rDNA-ITS序列鉴定。
利用真菌rDNA ITS(Internally transcribed spacer)区段既具保守性，又在科属种水平上有特异性序列的特性，对人参生防真菌的ITS区进行PCR扩增、测序及序列分析，将生防真菌鉴定到种。
具体操作为：采用TaKaRa Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0 试剂盒(宝生物工程(大连)有限公司，TaKaRa Code：DV811A)进行人参生防真菌基因组的提取。
利用真菌rDNA的ITS通用引物ITS 4和 ITS 5[21]，进行rDNA-ITS-PCR扩增。