HPLC法测定芦荟体内芦荟苷、芦荟大黄素含量的研究

太长，提取环境温度过高（提取30 mi n 时，超声波清 洗器内温度为40 C 左右，提取时间达1 h 时，仪器内 温度上升到60 C 左右），而芦荟苷稳定性差，造成部 分芦荟苷结构遭到破坏，被氧化成芦荟大黄素。
表1 不同提取条件提取芦荟苷、芦荟 大黄素效果比较
Table 1 Results of extraction met hods of aloi n and aloe -e modi n i n aloe
平均回收率#% Average recovery
98. 37
99. 02
2 .3 方法的精密度
相对偏差为1. 31 % ；芦荟大黄素含量平均值为20. 0
根据测定值计算此芦荟中芦荟苷含量平均值为
3 385. 6 mg#kg ，相对标准偏差为1. 26 % ；芦荟大黄 素含 量 平 均 值 为 365. 5 mg#kg ，相 对 标 准 偏 差 为 1. 34 % 。可见此测定方法重现性比较好（见表3 ）。
量［4 ］。用紫外可见分光光度计分别测定浓度均为
20 mg／L 的芦荟苷与芦荟大黄素在200 !700 n m 的 吸收光谱。
1 .3 .2 流动相的选择 选择甲醇- 水（体积比分别 为30770 、40760 、50750 、60740 、70730 、80720 ）溶液 作为流动相进行试验［5 ］，流速：1. 0 mL／mi n 。 1 .3 .3 工作曲线的建立 分别精确配制 0 !250 "g／mL 芦荟苷、芦荟大黄素系列标准溶液，按上述 色谱条件分别进样20 "L ，以峰面积为纵坐标，浓度 为横坐标绘制标准曲线，得芦荟苷、芦荟大黄素的回
相同的情况下，二标样在此波长检测时均具有最大 峰高［8 ］。同时在此检测波长下进样分析，分离情况
良好，样品中非待测成分不干扰测定。
图1 芦荟苷紫外光谱图 Fig .1 UV spectra of aloi n
第2 期
马晶军等：HPLC 法测定芦荟体内芦荟苷、芦荟大黄素含量的研究
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图2 芦荟大黄素紫外光谱图
1 材料与方法
1 .1 供试材料 1 .1 .1 供试芦荟 品种为库拉锁芦荟，河北华美芦 荟生产开发有限责任公司提供。 1 .1 .2 主要化学试剂 芦荟苷标准品（中国药品生 物制品检定所），芦荟大黄素标准品（中国药品生物 制品检定所），甲醇（HPLC 级）。 1 .1 .3 主要仪器 高效液相色谱仪（HPLC ）（美国 Waters 公司，Waters -600 E 系列），二极管阵列检测
法精密度试验以及回收率测定，最终确立了应用 HPLC 测定芦荟体内芦荟苷、芦荟大黄素含量的色谱条件。
关 键 词：HPLC；芦荟苷；芦荟大黄素
中图分类号：0 657 .7
文献标识码：A
On det er mi nati on of al oi n and al oe -e modi n i n Aloe barbadensis mill by HPLC
MA ji n9-j un 1 ，FAN G zhen91 ，WU oi u- hua1 ，SUN huan- mi n92 ，WEN ya-j un 2
（1 . Agricult ural Uni versit y of Hebei ，Baodi ng 071001 ，Chi na ； 2 .Beiji ng Agro - Tech Extensi on stati on ，Beiji ng 100029 ，Chi na ）
归方程。
1 .3 .4 回收率试验 精确称取处理好的芦荟细粉 3 份，每份0. 5 g ，分别置于25 mL 容量瓶中。1 号 瓶中加入芦荟苷标准溶液（0. 2 mg／L ）5 mL ，芦荟大 黄素 标 准 溶 液（0. 2 mg／L ）1 mL ，再 加 入 甲 醇 19 mL ；2 号瓶加入芦荟苷标准溶液10 mL ，芦荟大黄 素标准溶液2 mL ，甲醇13 mL ；3 号瓶加入芦荟苷 标准溶液15 mL ，芦荟大黄素标准溶液3 mL ，甲醇7 mL 。各瓶均于超声波清洗器中提取30 mi n 。提取 液以3 000 r#mi n 离心，上清液经0. 45 "m 微孔滤膜 过滤后用 HPLC 测定。每个加标样品测定3 次，取 平均值计算加标回收率。
Fig .2 UV spectra of aloe -e modi n
2 .2 .2 流动相的确定 结果表明，甲醇所占比例对 芦荟苷、芦荟大黄素的出峰时间影响很大。随着甲
醇含量的加大，出峰时间不断加快，与文献［9 ］报道 相同。经过反复试验，发现选择甲醇- 水（70I 30 ）溶 液作为流动相效果较好。在此流动相条件下，芦荟
第28 卷第2 期
河北农业大学学报
Vol .2F AGRI CULTURAL UNI VERsI TY 0 F HEBEI
Mar . 2 0 0 5
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1 .4 方法精密度试验 精确称取处理好的芦荟细粉0. 5 g 置于25 mL
容量瓶中，加入甲醇25 mL ，于超声波清洗器中提取 30 mi n 。提取液以3 000 r#mi n 离心，上清液经0. 45 "m 滤膜过滤后上 HPLC 测定。按上述方法重复处 理，测定同一芦荟样品6 次。 1 .5 仪器精密度试验
将预 处 理 好 的 芦 荟 粉 末 于 75 C 烘 箱 中 干 燥 6 h ，精确称取0. 5 g 置于25 mL 容量瓶中，分别以 甲醇、50 % 甲醇为提取溶剂［2 ］，改变超声波提取时 间，得出最佳提取方案［3 ］。
1 .3 HPLC 的条件优化 1 .3 .1 检测波长的选择 选择较高灵敏度的检测 波长可提高分析的精密度，同时也可降低最小检测
2 .2 . 3 工作曲线的确定 芦荟苷的回归方 程 为 != 217 358 + 745 517 "，相关系数#= 0. 999 9 ；芦 荟大黄素的回归方程为 != 369 472 + 1 267 264 "， 相关系数#= 0. 999 8 。二者在0 !400 "g#mL 范围 内均与峰面积呈良好的线性关系。
苷的出峰时间为1. 6 mi n 左右，芦荟大黄素的出峰 时间为4. 3 mi n 左右，从图3 可以看出，此条件下基 本能够实现样品峰与杂质峰的基线分离，基本满足
图3 芦荟苷、芦荟大黄素 HPLC 图谱 Fig .3 HPLC chromatogra ms of aloi n and aloe-e modi n
提取溶剂
Extracti ng sol vent
甲醇 50 % 甲醇
甲醇 50 % 甲醇
甲醇 50 % 甲醇
甲醇 50 % 甲醇
提取时间#mi n Extracti ng ti me
15 15 30 30 45 45 60 60
芦荟苷含量# （mg·kg -1 ） Content of aloi n
对芦荟苷与芦荟大黄素含量皆为20 mg／L 的 标准溶液重复测定6 次。
2 结果与分析
2 .1 提取试验的结果 从表1 中可以看出，甲醇的提取效果比50 % 甲
醇要好，超声波提取30 mi n 即可提取完全。当提取 时间达1 h 时，提取芦荟苷含量明显下降，芦荟大黄 素含量明显提高，原因可能是由于超声波提取时间
2 .2 HPLC 测定条件的确定 2 .2 .1 检测波长的确定 从图1 、图2 可知芦荟苷 在297 n m、356 n m 处有吸收峰，芦荟大黄素在225 n m、253 n m、286 n m、428 n m 处有吸收峰，与 文 献 ［6 ，7 ］基本一致。为了保证测定有较高灵敏度，并兼 顾二者均在吸收峰附近检测，选用293 n m 为检测 波长。上机测定分析证明，在进样量与样品浓度均
芦荟大黄素
含量#（mg·kg -1 ） Content of
aloe -e modi n
2 487. 6 2 018. 5 3 385. 6 2 863. 7 3 369. 4 2 906. 4 2 847. 9 2 442. 0
272. 3 233. 4 365. 5 313. 2 363. 5 311. 7 416. 4 348. 7
established . Key words ：HPLC ；aloi n ；aloe -e modi n
对芦荟的质量进行评估较为复杂，通过测定芦 荟体内活性成分的含量来评判其质量具有科学性。 研究表明，芦荟的活性成分主要是以芦荟苷为主的 多种羟基蒽醌类衍生物，通过测定芦荟苷含量来评 估芦荟质量［1 ］具有科学依据，这种方法已得到公认。 应用 HPLC 单独测定芦荟苷已有人研究，并得出较 好结论，但 同 时 检 测 芦 荟 苷、芦 荟 大 黄 素 的 研 究 不 多，测定的 一 些 具 体 细 节 不 够 明 确，检 测 结 果 不 理 想。本试验对应用 HPLC 法同时测定芦荟体内芦 荟苷、芦荟大黄素的含量的方法进行了探讨。
! 收稿日期：2004 -09 -15 基金项目：河北农业大学基金项目（2004 -18 ） 作者简介：马晶军（1971 - ），男，江苏苏州人，硕士，讲师，主要从事化学教学工作.
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河北农业大学学报
第28 卷
器（PDA），色谱柱：大连依利特 C18（4. 0 mm > 200 mm），紫 外 可 见 分 光 光 度 计（岛 津 UV - 2501PC 型），J L -120 型超声波清洗器（上海杰理科技有限 公司），Milli pore si mplicit y185 型纯水仪。 1 .2 提取试验
2 .2 . 4 回收率的测定确定 回收率测定结 果 见 表2 。
分析要求。
表2 回收率测定结果（!= 3 ） Table 2 Results of recovery（!= 3 ）