实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
实验四大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定
一、概述
植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf．)或药用大黄(Rheum offcinale Baill．)的干燥根及根茎。
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。自古以来，
大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。
功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽
醌类衍生物，如：大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有
效成分是结合型的蒽苷类。蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3％～5％，该类成分少部分
以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在。此外，大黄还含有鞣质等多元酚类
化合物，含量在10％一30％之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。
主要化学成分的结构及物理性质大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的
苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。
大黄酸(rhein)，C15H806，黄色针晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204。可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。
大黄素(emodin)，C15H1005，橙黄色针晶(乙醇)，m.p256—257℃。UVλmax436，289，266，253，222。可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。
芦荟大黄素(aloe emodin)，橙色针晶(甲苯)，m.p223～224℃。UVλmax429，287，254，225，202。可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。
大黄素甲醚(physcion)，砖红色单斜针状结晶(苯)，m.p205—207℃。溶于苯、三氯甲
烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。
大黄酚(chrysophano1)，C15H1004，橙黄色针晶(乙醇或苯)，m.p195—196℃。UVλmax429，287，256，225，202。可溶于丙酮、三氯甲烷、苯、乙醚和冰醋酸和碱水，微溶于石油醚，不溶于水。
大黄酸葡萄糖苷(rhein 8-monoglucoside)，黄色针晶。m.p266—267℃。
大黄素葡萄糖苷(emodin monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。m.p190—191℃。
芦荟大黄素葡萄糖苷(aloeemodin monoglucoside)，黄色针晶。m.p235℃。
大黄酚葡萄糖苷(chrysophanol monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。m.p239℃。
二、实验部分
(一)实验目的要求
1．掌握蒽醌苷元的提取方法—双相酸水解法。
2．掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法。
3．掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法。
(二)实验的基本原理
1．提取原理
双相酸水解法，为一相为与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双相酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游
离蒽醌类化合物。根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即
在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸
乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2．分离原理
pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。具有羧基
或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸钠溶液，只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。以分离酸度不同的
蒽醌苷元。也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离
(1)大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸(—COOH)>大黄素(β酚—OH)>芦荟大黄素(醇—OH)>大黄素甲醚(—OCH3)≈大黄酚(—CH3)。
(2)大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。
大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
(三)实验方法
1．总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程
操作注意事项
①所得乙酸乙酯液中若带有酸水液，应用分液漏斗分出弃去；此处用蒸馏水洗除乙酸乙酯液中的酸。
②萃取时容易发生乳化，而且随着碱液碱度的增高，乳化现象会越严重，所以要轻轻振摇。
③每次加碱液进行pH梯度萃取时，注意要测一下乙酸乙酯液的pH。
④萃取时一定要注意乳化层的分出，不要混入。
2．总蒽醌苷元的提取
大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20％硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2个h (加磁子搅拌)，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分
出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（每次20ml），将乙酸乙酯液放置在锥形瓶中，
密封。
3.游离蒽醌的分离与精制
(1)大黄酸的分离和精制
将乙酸乙酯提取液置500m1分液漏斗中，用5％NaHCO3溶液萃取三次（80ml, 60ml,
40ml），合并碱液，在搅拌下滴加浓盐酸，调节ph＝2，放置，待沉淀析出完全后，过滤，
并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，得深褐色粉末，主为大黄酸。沉淀干燥后，样品加冰醋酸10ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，
得黄色针晶为大黄酸。
(2)大黄素的分离和精制
经NaHCO3溶液提取过的乙酸乙酯液，继用5％Na2CO3溶液萃取三次，每次用量40ml，合并碱液，在搅拌下滴加浓盐酸，调节ph ＝2，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出
液呈中性，60℃干燥，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色
针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
(3)芦荟大黄素，大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离
经Na2CO3提取过的乙酸乙酯液，再用5％NaOH溶液提取三次，每次用量40ml，合并后的碱液同（1）法处理，所得产品为黄色粉末，为芦荟大黄素、大黄酚和大黄素－6－甲醚的混合物。
3.游离蒽醌类化合物的鉴定
(1)化学鉴定
①碱液试验分别取各蒽醌结晶少许置于小试管中，加lml乙醇溶解，加10％氢氧化钠溶液数滴，观察颜色变化。羟基蒽醌类应呈红色。
②醋酸镁试验分别取各蒽醌结晶少许置于小试管中，各加乙醇lml 使溶解，滴加0．5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化，羟基蒽醌应显橙色到蓝紫色。
(2)色谱鉴定
①薄层色谱鉴定
吸附剂：硅胶G—CMC—Na板。
样品：上述分别获得的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酚的三
氯甲烷溶液及各相应对照品的三氯甲烷溶液。
展开剂：石油醚—乙酸乙酯—醋酸(2：1：0.2)。
展开方式：上行展开。
显色：在可见光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后用浓氨水熏或喷5％醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
四、注意事项
①大黄中蒽醌类化合物的种类、含量与大黄的品种、采集季节、炮制方法及贮存时间均
有关系。由于蒽醌类衍生物主要以苷的形式存在，所以较新鲜的原药材蒽醌类成分含量高，
如果是贮存时间长的饮片，则蒽醌类成分含量低，实验选材要注意。
②用碱液萃取时要注意浓度和用量，酸化时，加酸要慢，多搅拌。
③分液漏斗的正确使用。
五、思考题
1．简述液—液萃取法的原理、溶剂选择原则和操作技术。
2．什么叫双相酸水解?掌握其原理和用途。
3．大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性和极性与结构有什么关系?
4．pH梯度萃取法的原理是什么?该法适用于哪些中药成分的分离?
5．蒽醌类化合物及其甙的薄层色谱用什么作吸附剂、展开剂和显色剂?
6. 蒽醌类与醋酸镁显色反应的必要条件是什么?其颜色反应与羟基所在的位置有
何关系?
参考文献
1．杨其菖主编．天然药物化学．北京：中国医药科技出版社，1998，84-87
2．李嘉蓉主编．天然药物化学实验．北京：中国医药科技出版社，2000，54
3．陈德昌主编．中药化学对照品工作手册．北京：中国医药科技出版社，2000，42-46，97 4．刘桂芳主编．中药化学实验及技术．沈阳：辽宁大学出版社，1995，205-213，265 5．阚毓铭等，中药化学实验操作技术，北京，中国医药科技出版社，1988，145页．6．康延国主编，中成药薄层色谱鉴别，北京，人民卫生出版社，1995，29页．
实验报告
植化方法学实验报告 单位：六班七组 成员：樊若西付云飞原雪娜邹晓楠毕天民 总结汇报：毕天民 报告执笔：付云飞 2011年7月8日
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 一、实验题目：大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 二、实验目的： 1、掌握大黄浸膏的提取方法 2、了解柱层析、薄层层析的操作技术 3、学习用硅胶柱色谱法和硅胶制备薄层色谱法分离大黄中的蒽醌 类成分的提取分离方法 4、学习蒽醌类化合物的鉴定方法 三、实验原理： 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药店所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheumpalmatclm L），大黄（R.officinale Baill）及唐古特大黄（R.tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷，总含量约2-5%。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：
大黄酸 R1=H R2=COOH 大黄素 R1=CH3 R2=OH 芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H 大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3 大黄酚 R1=CH3 R2=H 大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。 四、实验材料： 1、仪器：旋转蒸发仪、红外灯、天平、回流装置一套、圆底烧瓶、 烧杯、蒸发皿、层析槽、布氏漏斗、抽滤瓶、试管、滴管、橡 皮管、分液漏斗、普通滤纸、水浴锅、薄层板、喷雾器、点样 毛细管等。 2、试药：大黄 3、试剂：95%乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、冰醋 酸 4、吸附剂：薄层色谱硅胶（10~40目） 柱色谱硅胶（200~300目） 显色剂（装置）：1%氢氧化钾溶液，2%三氯化铁溶液，10%硫酸乙醇溶液，紫外灯
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定 一、实验目的 1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法 2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法 3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法 二、实验原理 1.提取原理 双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。 2.分离原理 pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。以分离酸度不同的蒽醌苷元。也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。 （1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3） （2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚 大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法 四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程 大黄药材（粗粉）50g 乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次） 直至乙酸乙酯层pH值呈中性 乙酸乙酯提取液 碱水层乙酸乙酯层 滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次） 沉淀物（黄色结晶或 黄色絮状沉淀）碱水层 沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次） 橙色絮状沉淀） 沉淀过滤，碱水层 丙酮精制 橙色结晶（大黄素）节pH=2 沉淀物 （橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层 沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱 黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃） （芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1） 大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取 大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙
大黄中蒽醌类的提取与分离
大黄中蒽醌类的提取与分离 一、实验目的 学习目的:掌握大黄中蒽醌类化学成分的提取分离技术。 知识要求:1、掌握大黄中蒽醌类化合物的提取、分离原理。2、熟悉大黄中蒽醌类化合物的结构及主要理化性质。3、了解大黄中蒽醌类化合物的提取分离新进展。 能力要求:1、熟练进行大黄中蒽醌类化合物的提取、分离及鉴定操作。2、学会大黄中大蒽醌类化合物的色谱鉴定技术。 二、实验原理 大黄(Rheum palmatum L.)：蓼科多年生草本植物，掌叶。大黄的干燥根可入药，性寒味苦，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种作用。大黄中化学成分复杂，主要以蒽醌衍生物为主。包括游离蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷、鞣质等。游离蒽醌主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸。 R1=H R2=COOH 大黄素R1=CH3 R2=OH 芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H 大黄素甲醚R1=CH3 R2=OCH3 大黄酚R1=CH3 R2=H 提取分离原理：大黄中的蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于乙醚而被提取出来。再利用各种蒽醌类化合物酸性不同，采用pH梯度萃取法分离得到各种蒽醌类化合物。 三、实验材料器材： 器材：500ml圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管、30cm层析缸、标本瓶、索氏提取器一套、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、广泛PH 试纸 药品：大黄20g、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、0.25%氢氧化钠溶液、5%氢氧化钠溶液、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、甲醇、乙醚、含水氯仿（水饱和）、石油醚（沸程60-90℃）、冰醋酸、乙酸乙酯、醋酸镁、柱层析用硅胶（100～200目）、硅胶G、CMC 四：实验步骤 （一）粉碎:将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到大黄粗粉，经80目筛子得到大黄细粉。（二）酸解:取大黄粉20 g，加20%H2SO4 200ml，在70℃水浴上加热3~4小时。 （三）水洗、抽滤、干燥:抽滤，滤饼水洗至中性后，于70℃左右干燥，研成粉末。 （四）索式提取:圆底烧瓶内的抽提剂受热挥发，蒸气经导气管向上，在冷凝管中冷却为液体，滴入装有样品滤纸筒的管中，使样品浸在纯净的抽提剂中。 待提取物质逐渐从样品中溶解到抽提剂中。当样品管中的抽提剂液面逐渐上升到与回流
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 一、实验目的 （1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 （2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术 （3）学习蒽醌类化合物鉴定方法 二、实验器材 材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。 仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。 三、实验原理 大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。 大黄酸 R1=H R2=COOH 大黄素 R1=CH3 R2=OH 芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H
大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3 大黄酚 R1=CH3 R2=H 四、实验内容 大黄素的提取、分离流程图 大黄粗粉10g 20%H2SO4 150 ml 加热1h, 抽滤、干燥 滤饼 150ml乙醚回流提取1 h 乙醚层 水层（紫红色）乙醚层 HCl 5%Na 大黄酸沉淀（粗品） 水层（红色）乙醚层 HCl % NaOH 大黄素沉淀（粗品）水层（红色） 芦荟大黄素、大黄素甲醚沉淀（混合物） 具体操作步骤 1. 游离蒽醌的提取
实验四 大黄中游离蒽醌的分离及鉴定
实验四大黄中游离蒽醌的分离及鉴定 【实验目的】 1、能够熟练运用pH梯度萃取法对大黄中游离蒽醌进行分离。 2、正确判断显色反应的结果。 【实验原理】 游离蒽醌的分离是利用各羟基蒽醌类化合物酸性不同，采用pH梯度萃取法进行。【实验材料】 设备: 圆底烧瓶、表面皿、烧杯、三角瓶、试管、pH试纸、滤纸 药品: 盐酸、乙醇、氢氧化钾、0.5%醋酸镁、乙醚、5%Na 2CO 3 、5%NaHCO 3 、 0.5%NaOH、5%KOH 【实验步骤】 1、大黄酸的分离：将含有游离蒽醌的乙醚溶液转移至250ml的分液漏斗中，加 5%NaHCO 3水溶液20ml，振摇。防止分层，放出下层NaHCO 3 ，置于另一三角瓶中，上层 乙醚溶液留存于分液漏斗中，再加5%NaHCO 3 溶液15ml萃取一次，每次振摇提取后， 放置分层时间应稍久，以免乙醚溶液混在下层水液中，影响分离效果。提取过层中， 如乙醚挥发，可酌量补加。合并NaHCO 3 提取液，注意其呈色，在搅拌下小心滴加盐酸条pH2-3，观察酸化过程中的呈色变化，析出物抽滤收集，干燥后称重。 2、大黄素的分离：留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na 2CO 3 水溶液每次15-20ml 如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止，约需6-7次，合并Na 2CO 3 提取 液，小心滴加盐酸酸化至pH2-3，放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 3、芦荟大黄素的分离：留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液每次15ml萃取3-4次。乙醚溶液再以蒸馏水萃取2-3次，以洗去碱液。合并NaOH和水提取液，加盐酸调pH2-3，放置。抽滤吸出沉淀，收集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 4、大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离：留存的乙醚液，置圆底烧瓶中，回收乙醚，放置。抽滤收集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。
大黄实验讲义
大黄中羟基蒽醌类化合物的提取、分离及鉴定 一．实验目的 1.掌握蒽醌类成分的提取分离方法 2.熟悉薄层色谱法对蒽醌类化合物的定性、定量分析 3.熟悉铺板方法及蒽醌类成分的鉴定方法 二．实验原理 大黄中羟基蒽醌类化合物多数以苷的形式存在，采用酸水解法把蒽醌苷水解成苷元，利用游离羟基蒽醌易溶于氯仿、乙酸乙酯等中低极性有机溶剂的性质，可用乙酸乙酯提取。大黄素等羟基蒽醌所含官能团的种类和数目不同，其极性也不同，可通过硅胶TLC对其进行定性定量分析，利用硅胶柱色谱法对其进行分离纯化。 三．材料、试剂、仪器 1.材料：大黄 2.试剂：20%硫酸，乙酸乙酯，0.4%羧甲基纤维素钠溶液，石油醚（60-90沸程），硅胶（薄 层层析用200-300目，柱层析用100-160目） 3.仪器：回流装置，旋转蒸发仪，抽滤瓶，布氏漏斗，滤纸，层析板，玻璃板，层析柱， 铁架台，层析缸，烘箱，电子称，烧杯（100ml、250ml、500ml），量筒（杯），玻璃棒，吸耳球，脱脂棉。 四．步骤 1.酸水解（3hr）：称取大黄10g，置圆底烧瓶中，加入100ml20%硫酸，回流加热，保持微 沸1hr，抽滤，滤渣水洗2～3遍，置于烘箱中，70℃干燥备用。 2.游离羟基蒽醌的提取及铺板（3hr） （1）提取：将滤渣转入500ml圆底烧瓶中，加入乙酸乙酯100ml，回流提取1hr，抽滤，制备乙酸乙酯提取液。 （2）铺板：称取薄层色谱用硅胶30g于研钵中，加入100ml 0.4%羧甲基纤维素钠溶液，按同方向缓慢匀速搅拌，将其制成糊状，铺板，晾干，于105℃活化30min，备用。 （如有气泡，可滴加1-2d乙醇做消泡剂） 3.TLC色谱（3hr） （1）分别取硅胶板2块（自制和成品），点样，展层，绘制图谱（图1），计算Rf值。展
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 （一）概述 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种： O OH R 2 OH R 1 12-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH 大黄素(Emodin) 橙色针晶 256~257℃ -H -CH 2OH 芦 荟 大 黄 素 (Aloe-emodin) 橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H -CH 3 大黄酚(Chyrsophanol) 金色片状结 晶 196℃ 大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。 （二）实验目的和要求 1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。 2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。 3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。 4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。 （三）实验方法
大黄素的提取、分离与鉴定
大黄中大黄素的提取、分离与鉴定 一实验目的 1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术 3）掌握蒽醌类化合物鉴定方法 4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法 二实验原理 大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物 ,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。 大黄酸 R 1=H R 2 =COOH 大黄素 R 1=CH 3 R 2 =OH 芦荟大黄素 R 1=CH 2 OH R 2 =H 大黄素甲醚 R 1=CH 3 R 2 =OCH 3 大黄酚 R 1=CH 3 R 2 =H 本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其R f 值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。 大黄酸：黄色针状结晶， mp.321—322 ℃（升华），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。 大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257 ℃（乙醇或冰醋酸），能升华。其溶解度如下：四氯化碳0.01 %、氯仿0.07 %、二硫化碳0.009 %、乙醚0.14 %、苯0.041 %。易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。
大黄中游离蒽醌的提取分离与检识
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识 （一）目的要求 学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求： 1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。 2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。 3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。 4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。 5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。 （二）主要化学成分的结构及性质 大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。 1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。 2．大黄素(emodin)分子式C15H10O5，分子量270.23。橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。 3．芦荟大黄素(aloe-emodin)分子式C16H10O5，分子量270.23。橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。 4．大黄酚(chrysophanol)分子式C15H10O4，分子量254.23。橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶
大黄的成分提取
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 关键词：大黄蒽醌类成分提取2012-08-27 09:01 来源：丁香园点击次数：344 概述 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L），大黄（R. officinale Baill）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种： 大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。 实验目的和要求 1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。 2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。 3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。 4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
实验方法 1．大黄总蒽醌苷元的提取 注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。 2．总蒽醌苷元分离方案的设计 1)大黄总蒽醌苷元的纸色谱 2) 蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验 3)最佳萃取剂及其用量的确定 4)蒽醌类成分各种萃取剂用量的确定 5)新分离方法的设计 3．蒽醌类成分的分离与精制 ①大黄酸的分离与精制 将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液275ml振摇萃取，静置至彻底分层，放出氯仿液后，到出碱水液至置250ml 烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。 ②大黄素的分离与精制 将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经干燥后，用10ml冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄素纯品。 ③芦荟大黄素的分离和精制 余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液540ml或用0.5%KOH540ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml 乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。 ④大黄酚和大黄素甲醚的分离--磷酸氢钙柱色谱
2023年大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定实验报告
大黄中蒽醌类成分旳提取、分离和鉴定 一、试验目旳 （1）熟悉蒽醌类成分旳提取分离措施 （2）掌握pH梯度提取法旳原理和操作技术 （3）学习蒽醌类化合物鉴定措施 二、试验器材 材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、一般滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。 仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。 三、试验原理 大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功能。其重要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚旳酸性最弱。根据以上化合物旳酸度差异，可用碱性强弱不一样旳溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R 1=H R 2=COOH 大黄素 R 1=CH 3 R 2=OH 芦荟大黄素 R 1=CH 2OH R 2=H 大黄素甲醚 R 1=CH 3 R 2=OCH 3 大黄酚 R 1=CH 3 R 2=H 四、 试验内容 大黄素旳提取、分离流程图 大黄粗粉10g 20%H 2SO 4 150 ml 加热1h, 抽滤、干燥 滤饼 150ml 乙醚回流提取1 h 乙醚层 5%NaHCO 3萃取
实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 LT
晶(乙醇或苯)，m.p195—196℃。UVλ 429， max 287，256，225，202。可溶于丙酮、三氯甲烷、苯、乙醚和冰醋酸和碱水，微溶于石油醚，不溶于水。 大黄酸葡萄糖苷(rhein 8-monoglucoside)，黄色针晶。m.p266—267℃。 大黄素葡萄糖苷(emodin monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。m.p190—191℃。 芦荟大黄素葡萄糖苷(aloeemodin monoglucoside)，黄色针晶。m.p235℃。 大黄酚葡萄糖苷(chrysophanol monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。m.p239℃。 二、实验部分 (一)实验目的要求 1．掌握蒽醌苷元的提取方法—双相酸水解法。 2．掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法。 3．掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法。 (二)实验的基本原理 1．提取原理
双相酸水解法，为一相为与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式 存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双相酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。 2．分离原理 pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5％碳酸钠溶液，只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。以分离酸度不同的蒽醌苷元。也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离 (1)大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸(—COOH)>大黄素(β酚—OH)>芦荟大黄素(醇 —OH)>大黄素甲醚(—OCH 3)≈大黄酚(—CH 3 )。 (2)大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 一、实验目的 （1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 （2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法 二、实验器材 材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石 油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板 （2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、 铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。 仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。 三、实验原理 大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度
萃取分离。 O O OH OH R1R2 大黄酸R1=H R2=COOH 大黄素R1=CH3 R2=OH 芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H 大黄素甲醚R1=CH3 R2=OCH3 大黄酚R1=CH3 R2=H 四、实验内容 大黄素的提取、分离流程图 大黄粗粉10g 20%H2SO4 150 ml 加热1h, 抽滤、
大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定.
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定 实验编号：1 日期： 学时数：6学时 地点： 任课教师： 实验目的：掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法 实验原理：大黄中有多种游离蒽醌及其苷类，总含量约2-5%。主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。 从大黄中提取分离游离蒽醌时，先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。实验对象：大黄 主要仪器、试剂：电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G、0.5%CMC-Na 实验操作步骤：酸水解：取大黄10g ,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。 铺薄层硅胶G板:薄层硅胶G ：0.5%CMC-Na（1：3） 实验注意事项：①加热温度不要太高。②溶液保持微沸，防止药渣炭化。③不断搅拌。 后记：
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定 实验编号：2 日期： 学时数：6学时 地点： 任课教师： 实验目的：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。 2. 掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。 实验原理：大黄中有多种游离蒽醌及其苷类，总含量约2-5%。主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。 从大黄中提取分离游离蒽醌时，先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。实验对象：大黄滤饼 主要仪器、试剂：电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油 醚、乙酸乙酯 实验操作步骤:总羟基蒽醌苷元的提取：取干燥滤饼，放入100ml圆底烧瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3-4小时，得乙醚提取液。 乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄 素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶G-CMC-Na展开剂为石油醚（60-90 C）- 乙酸乙酯（7:3），直立展开。 实验注意事项：①加热回流时电热套电压小于50v。
制药工程专业实验 大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离和鉴定及口服大黄素后的血浆成分测定
本科生实验报告 实验课程 学院名称 专业名称制药工程 学生姓名 学生学号 指导教师 实验组成员 实验成绩 二〇年月二〇年月
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离和鉴定及口服大黄素后的血浆成分测定 一、实验目的和任务 1、掌握酸水解苷到苷元实验方法和原理 2、掌握萃取分离法及了解其在天然产物提取中的广泛应用 3、掌握 pH 梯度萃取法的原理和操作技术 4、掌握硅胶柱色谱法分离精制大黄素、大黄酚和大黄素甲醚，熟练掌握柱色谱分离 5、学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法 6、用 HPLC 分析大黄中游离蒽醌类成分，熟悉 HPLC 分析原理及操作方法和用途 7、学习重结晶方法纯化大黄酸 二、实验仪器与材料 材料与试剂：大黄粗粉，硫酸，氯仿,NaHCO 3粉末，Na 2 CO 3 粉末，石油醚，乙酸乙 酯，NaOH粉末，硅胶 实验仪器：500ml圆底烧瓶，水浴锅，铁架台，烧杯，薄层板，玻璃棒，胶头滴管，锥形瓶，EP管，超声波清洗液，高速离心机，镊子，高效液相色谱，冷凝管 三、实验原理分析（包含酸水解原理、PH梯度萃取原理、柱层析分离精制大黄素原理） 酸水解原理：大黄中的蒽醌苷在酸性条件下加热水解成游离羟基蒽醌（苷元）和糖。 PH梯度萃取原理：大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。每个分子有不同的pKa，导致某一pH下各分子的电离情况不同，当某分子呈电中性的时候它最容易从溶液中析出。所以通过反复调pH，可以在不同pH下得到各个不同的组分