自身抗体检测要求与具体应用
自身抗体检测项目及临床意义
一、抗核抗体抗核抗体（antinuclearantibodies，ANA）泛指抗各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。
ANA的性质主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。
ANA可以与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。
ANA主要存在于血清中，也可存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。
ANA在SIE患者的滴度较高，但也出现在其他许多自身免疫病中，在许多研究报告中，都将检出ANA作为自身免疫甚至自身免疫病存在的依据。
这种现象的机制尚未明了，有待于进一步研究。
（一）ANA的类型及意义由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同的ANA。
1．抗核蛋白抗体核蛋白抗原（DNP）由DNA和组蛋白组成。
由于DNP抗原存在不溶性和可溶性两个部分，可分别产生相应的抗体。
不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白所吸收，它是形成狼疮细胞的因子；可溶性抗原存在于各种关节炎病人的滑膜液中，其相应抗体也出现于RA病人的滑膜液中。
2．抗DNA抗体可以分为两大类：①抗天然DNA（nDNA）抗体，或称抗双链DNA（dsDNA）抗体；②抗变性DNA抗体，或称抗单链DNA（ssDNA）抗体。
抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性，70％～90％的活动期SLE病人该抗体阳性，效价较高，并与病情有关。
抗ssDNA抗体可见于多种疾病中，特异性较差。
3．抗ENA抗体可提取性核抗原（ENA）多从动物的胸腺中提取。
先将胸腺匀浆并破碎细胞，分离出细胞核；再经盐水或磷酸盐缓冲液处理后，很容易从胞核中提取出来。
ENA 不含DNA，对核糖核酸酶敏感。
近年来的研究表明，ENA可分为十几种，现仅介绍几种主要的ENA及其相应抗体。
（1）抗PNP抗体：PNA即核糖核蛋白，对核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加热561h 变性。
抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。
高效价的抗PNP抗体对混合性结缔组织病有诊断意义，而低效价的抗PNP抗体可在SIE患者中发现。
自身抗体的检测操作方法
自身抗体的检测操作方法自身抗体的检测是一种用于确定人体是否产生特定抗体的实验方法。
它在临床诊断、免疫学研究以及药物疗效评估等领域起着重要作用。
下面我将详细介绍自身抗体检测的操作方法。
首先，自身抗体检测需要从患者的血液中提取血清。
一般情况下，采用静脉采血的方式获取血样。
为了提取血清，可以将采集到的静脉血样置于无菌离心管中，接着通过离心操作，将红细胞和血液中的其他细胞沉淀下来，留下含有抗体的上清液。
接下来，提取到的血清样本需要存储在低温条件下，储存在零下20摄氏度或更低的冰箱中。
这是因为高温会导致抗体的变性和降解，从而影响后续检测的准确性。
在进行自身抗体检测之前，需要选择适当的实验方法。
常见的自身抗体检测方法包括免疫荧光法（IFA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫印迹法（Western blotting）等。
这些方法各有特点，在不同的情况下选择合适的方法进行检测。
以ELISA为例，操作方法如下：首先，将含有抗体的血清样本加入到固相底物的微孔板中，使血清中的抗体与固相底物结合。
然后，用稀释液对样本进行稀释，以减少非特异性背景信号的干扰。
接着，加入特异性的酶标记抗体，使其与固相底物结合形成免疫复合物。
经过洗涤，去除非特异性结合的物质。
随后，加入含有受体物质的底物，使底物与酶标记抗体发生反应，产生比色或荧光信号。
最后，根据比色或荧光信号的强度，通过光度计或荧光计测定样本中特定抗体的浓度。
将测量结果与标准曲线进行比较，可以得出样本中抗体的相对含量。
除了ELISA，还有其他的自身抗体检测方法。
例如，免疫荧光法是一种通过观察荧光信号来确定特定抗体的存在与否的方法。
在这种方法中，将血清样本与特定抗原结合，然后加入荧光标记的抗体，通过观察标本下荧光信号的出现来确定抗体是否存在。
在进行自身抗体检测时，还需要注意一些技术细节。
比如，选择合适的控制组设置，以确保实验的准确性和可靠性。
同时，实验前需要对试剂进行质量控制，如检查试剂是否过期、是否发生了结冰等，以避免对实验结果的影响。
自身抗体检测的室内质量控制
自身抗体检测的室内质量控制室内质量控制是指医学实验室内为达到质量要求所进行的操作技术和活动，即检验人员按照一定的频度连续测定稳定样品中的特定组分，并采用一系列方法进行分析，按照统计学规律推断和评价本批次测量结果的可靠程度，以此判断检验报告是否可发出，及时发现并排除质量环节中的不满意因素。
下面将从四个方面介绍关于自身抗体检测开展室内质控的应用要点。
一、质控品的选择1、质控品的基本要求：无基质效应、稳定性好、均匀性好、定值与非定值、质控品水平（阴性、弱阳性、强阳性）。
国家标准GB/T20468-2006《临床实验室定量测定室内质量控制指南》和行业标准WS/T641-2018《临床检验定量测定室内质量控制》，均对质控品特性作出如此要求：质控品应与患者待测样本具有相似或相同的基质。
质控品应均一和稳定，如条件允许，可储存一年或以上的用量。
瓶间变异性应小于分析系统的变异。
2、质控品的来源：检测系统配套质控品、第三方质控品、自制质控品。
3、选用第三方质控品时，需要评估浓度水平的适用性，根据质控品说明书，若有提到的“适用仪器”与实验室使用的仪器一致，则可以直接使用质控品标明的浓度水平。
若无，则应使用本实验室的检测方法进行验证，评价其水平是否满足相应浓度要求。
4、如果没有商品化质控品，实验室可以自制质控品。
二、自制质控品1、质控品原则：①选择人血清基质，添加剂尽可能少，无溶血、无黄疸、无乳糜血、无传染性；②均匀性好，变异小；③稳定性好，至少半年用量的相同批号，复溶后稳定；④浓度水平要满足实验要求。
2、质控品（QCM）自制方法流程，可以参照CNAS-GL005:2018(IDT ISO G80:2014)：QCM的技术要求→原料采集→制备→分装和包装→均匀性评估→定值/赋值→稳定性评估→形成文件/信息→储存。
3、质控品水平：①阴性质控品：目标项目人阴性血清混合物。
②阳性质控品：目标项目人阳性血清混合物，间接免疫荧光法ANA滴度1:1000或以上，印迹法抗核抗体谱中强度阳性（若组合式检测，至少2个阳性项目）。
抗体的检测与临床应用
抗体的检测与临床应用抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质分子，它在人体的免疫系统中具有重要的作用。
抗体的检测与临床应用是现代医学领域中至关重要的一环，可以帮助医生诊断疾病、评估疾病的病情和治疗效果。
本文将就抗体的检测方法和在临床应用中的重要性进行探讨。
一、抗体的检测方法1. 免疫层析法免疫层析法是一种简单、快速、灵敏且具有较高特异性的抗体检测方法。
它通过在试验纸条上固定抗体试剂和抗原试剂，利用抗体和抗原之间的特异性结合来检测目标抗体的存在，常用于急性感染病毒抗体的检测。
2. 免疫测定法免疫测定法是一种广泛应用于临床实验室的抗体检测技术，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）等。
这些方法能够准确、敏感地检测出目标抗体，被广泛用于实验室诊断、疾病筛查和药物监测等领域。
3. 免疫荧光法免疫荧光法是一种高度特异性和敏感性的抗体检测技术。
通过对样本中的抗体进行荧光染色，观察其在荧光显微镜下是否结合到特定抗原上，可以达到检测抗体的目的，被广泛用于自身免疫性疾病和传染病的诊断。
二、抗体的临床应用1. 疾病诊断抗体的检测在疾病诊断中起着不可替代的作用。
临床医生可以通过检测患者体内的特定抗体水平，判断其是否感染某种病原体或患有某种特定疾病，如HIV抗体检测、乙肝抗体检测等，有助于及早发现疾病并采取相应的治疗措施。
2. 疫苗接种疫苗接种是利用抗原引起机体产生抗体，从而形成免疫保护的一种预防性医学措施。
在接种疫苗前，医生通常会先对患者进行抗体检测，以确定其免疫状态，从而确定是否需要接种疫苗以及疫苗的接种剂量。
3. 疗效评估在治疗过程中，医生可以通过定期检测患者体内特定抗体的水平，来评估治疗的疗效和疾病的病情变化。
比如在肿瘤治疗中，通过监测患者血清中肿瘤标志物抗体的水平，来判断肿瘤的生长状态和预后。
4. 输血安全在输血过程中，抗体的检测也扮演着重要的角色。
通过对供血者和受血者的抗体进行检测，可以减少输血后的不良反应，保障输血的安全性。
自身免疫性肝病(AILD)相关自身抗体的检测及临床应用
四、AILD相关自身抗体的检测
1、间接免疫荧光法（IIF）
③抗LKM-1抗体：肝组织可见肝细胞胞质细颗粒型至均质型 的强荧光染色；肾组织仅在近端肾小管上皮细胞胞质荧光染 色；胃组织缺乏特征性的荧光染色。
④抗LC-1抗体：肝组织可见肝细胞胞质颗粒型荧光染色，啮 齿类动物肝组织中央静脉周围的荧光染色明显减弱，但若同 时存在抗LKM-1抗体阳性，此荧光特征通常难以呈现。肾、 胃组织缺乏特征性的荧光染色。
三、AILD相关自身抗体检测的临床应用
在PBC患者一级亲属中，母女、姐妹间AMA的共同阳性率为 10%~20%，远高于普通人群。因此，在PBC患者的亲属中检 测AMA等自身抗体，有利于疾病的早期发现。AMA阳性但 不能明确诊断PBC者，需定期行胆汁淤积相关生化指标的随 访。
总之，检测自身抗体可用于AILD的预测，对肝脏生化指标正 常且AILD相关自身抗体（如ASMA、AMA等）阳性者，应 定期随访，以及进行相关学会指南推荐的其他评估肝脏功能 的新标志物检测，如可预测肝功能正常或轻度异常者的肝硬 化、肝纤维化程度的血清壳多糖酶3样蛋白1（CHI3L1）等， 以早期评价肝胆功能，或采取其他临床干预措施。
1、间接免疫荧光法（IIF）
（2）标本、荧光标记二抗：IIF检测血清标本的ANA、 ASMA、抗LKM-1抗体、AMA通常采用1∶40起始的倍比稀 释系统。由于使用不同的检测试剂，可根据试剂说明书，采 用倍比稀释系统或 稀释系统。所用二抗应使用荧光素标记的 抗人IgG抗体。
四、AILD相关自身抗体的检测
四、AILD相关自身抗体的检测
2、其他免疫学方法
由于IIF检测AILD相关自身抗体的实验操作、结果判断等存 在难以标准化，阳性滴度判断依赖于不同的实验基质。因此， IIF检测AILD相关自身抗体需要经过专业培训的实验室人员 和高质量的实验基质。
自身抗体检测的常用方法及流程
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以下是自身抗体检测的常用方法及流程：一、常用方法1. 间接免疫荧光法（IIF）：是自身抗体检测的经典方法，通过检测患者血清中与细胞或组织抗原结合的抗体来确定自身抗体的存在。
自身免疫病与自身抗体检测及应用
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（三）发病机制
隐蔽抗原释放 ✓自身抗原出现 自身抗原成分改变
共同抗原的诱导
淋巴细胞旁路活化 ✓免疫调节异常 多克隆刺激剂旁路活化
辅助刺激因子表达异常
✓遗传因素 多表现在HLA-B、DR抗原 上
2021/1/12
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常见自身免疫病
SLE:累及多器官多系统 炎症性结缔组织病，多 发于青年女性，临床症 状复杂，可出现发热， 皮疹，蝶形红斑，盘状 红斑，光敏现象，口腔 溃疡，关节痛，肾损伤， 心血管病变，胃肠症状， 贫血等。抗ds-DNA,抗 Sm抗体是特征标志。
IgM：伴严重关节功能障碍，预后不良
IgG：与患者滑膜炎、血管炎和关节症状密切相 关
IgA：RA临床活动指标，与骨质破坏和关节炎症
20状21/1/严12 重程度有关。
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抗核抗体（ANA）
ANA是以自身真核细胞成分为靶抗原的一组自 身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体。 ANA在不同的疾病中呈现出不同的组合，不同 疾病有自己的抗核抗体谱。 按理化特性和抗原部位分类： 1.抗DNA抗体 2.抗组蛋白抗体 3.抗非组蛋白抗体 4.抗核仁抗体
2. 一般原则 有的项目敏感性高，特异性低，有筛选意义，有 的敏感性低，特异性强，可以先做ANA筛查， 再做其他检测。
3. 质量控制 每次试验同时设置阴、阳对照，以监测结果的准 确性。
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谢谢观赏
2021/1/12
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检测方法
1.ANA检测常用间接免疫荧光法，ELISA等方法， 常用间接免疫荧光法作总ANA的筛选试验。用 Hep2细胞和猴肝细胞做基质， Hep2细胞特点： 人源性、细胞核大、分裂期细胞多、可大批培养。
2.常见ANA荧光图形及意义
自身免疫性疾病的相关检验指标分析与应用
自身免疫性疾病的相关检验指标分析与应用自身免疫性疾病（Autoimmune diseases）是指机体免疫系统错误地攻击自身组织、器官或功能，导致慢性炎症和损伤的一类疾病。
由于自身免疫性疾病的多样性和复杂性，目前临床常用的自身免疫性疾病相关检验指标主要包括免疫学指标、自身抗体检测和炎症指标等，这些指标可以作为自身免疫性疾病的辅助诊断工具，为疾病的早期筛查和预后评估提供重要依据。
一、免疫学指标1. 血小板计数（Platelet Count）血小板计数是指血液中血小板的数量，血小板是一种参与止血和血管修复的细胞。
在某些自身免疫性疾病中，血小板计数常常显著下降，如系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus，简称SLE）和自身免疫性血小板减少性紫癜（Autoimmune Thrombocytopenic Purpura，简称ITP）。
因此，检测血小板计数可以为这些疾病的诊断提供参考。
2. 淋巴细胞计数（Lymphocyte Count）淋巴细胞计数是指血液中淋巴细胞的数量，淋巴细胞是机体免疫的重要细胞成分。
在某些自身免疫性疾病中，淋巴细胞计数常常异常增加或减少，如甲状腺自身免疫疾病（Thyroid Autoimmune Disease，简称TAD）和类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，简称RA）。
因此，检测淋巴细胞计数可以作为这些疾病的辅助诊断指标。
3. 白细胞计数（White Blood Cell Count）白细胞计数是指血液中总白细胞的数量，白细胞是机体免疫的主要成分之一。
在自身免疫性疾病中，白细胞计数常常出现异常变化，如SLE和风湿性多肌痛症（Rheumatoid Myalgia，简称RM）。
因此，检测白细胞计数可以为这些疾病的诊断提供参考。
二、自身抗体检测1. 抗核抗体（Antinuclear Antibody，简称ANA）ANA是一类抗体，主要针对细胞核蛋白和染色体蛋白。
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荧光模式：
Hep-2片：细 胞核几乎均 质的荧光， 核仁荧光加 强而且也为 均质型，胞 浆无荧光。
肝组织片；细 胞核颗粒或 均质型荧光， 常见到细胞 核荧光。
自身抗原：为DNA拓扑异构酶1，分子量 为100KD。在DNA双链的复制和转录中 起作用。
临床意义：25~70%的系统性硬化症 （PSS）弥漫型患者阳性，局限型硬皮 病患者阴性。
相关疾病 硬皮病 CREST综合征
SLE 混合性结缔组织 病（MCTD）
检测：测定抗ds-DNA以血鞭毛虫属的绿 萤短膜虫为靶抗原基质，可联合使用 HEp-2细胞及灵长类肝组织检测。
自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架 上。
荧光模式：
绿蝇短膜虫： 动基体均 质的或边 缘亮度增 强的荧光。
Hep-2细胞： 细胞核的 均质型荧 光。
临床意义：高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔 组织病（MCTD）的特征，发生率为95~100%。 也可出现于SLE，但总是与抗Sm抗体同时出 现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性，发生 率为20~40%。
荧光模式
Hep-2片：细 胞核呈细 颗粒荧光， 核仁不发 光。
肝组织片： 细颗粒荧 光。
自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由 一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白 质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋 白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD 的磷酸化蛋白。
ANA可见于多种自身免疫性疾病， 特别是结缔组织疾病，常作为结缔 组织疾病的诊断，病情判断和疗效 观察的指标
已证实ANA对很多自身免疫性疾病有 诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不 同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核 糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性 疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症 性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间， 其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低， 为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类 型风湿病意义重大。
常见疾病
⑴ SLE活动性：占95%-100%，
非活动性：占80%-100%。 （2）药物诱导的SLE：占100%。 （3）混合性结缔组织疾病：占100%。 （4）其它风湿性疾病：占20%-50% （5）进行性系统硬化症：占85%-95%。 （ 6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。 （7）干燥综合征：占70%-80%。 （8）慢性活动性肝炎：占30%-40%。 （9）溃疡性结肠炎：占26%。
临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见 于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见 于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发 生率几乎为100%。
核仁荧光增强，核浆均质型---Scl-70抗体。 核仁均质型---PM-Scl及其他抗原抗体。 核仁细颗粒型---原纤维蛋白抗体。 核仁粗颗粒型---RNA多聚酶-成分抗原总称。
广义定义：针对细胞内所有抗原成分的 自身抗体的总称。对ANA的理解不再局 限于核成份，而是指核质和核蛋白的总 称。
间接免疫荧光法（IIF):现多以Hep-2细胞（人喉 癌上皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极 大地提高了ANA检测的阳性率和滴度。
是系统性红斑狼疮（SLE）的标准筛选试验。
我们实验室采用欧蒙荧光检测系统，将1:100作为 血清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:100阳性， 只能视为一个临界可疑值，临床意义不大。
ANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强 调高滴度。
整个细胞，包括细胞核、细 胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期 蛋白等。
抗体水平与疾病活动度相关，随着疾 病活动的控制，抗ds-DNA抗体滴度可以 下降或消失。
ANA谱3检测及临床应用
荧光模式：
Hep-2片：细胞 核粗颗粒， 核仁阴性。
肝组织切片： 同上。
荧光法不能区 分抗RNP和 抗体Sm。
自身抗原：抗原RNP和Sm属于一组小核糖核 蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多种蛋 白质组成，RNA中尿苷（U-RNA）含量较高。
药物诱导 慢性肝脏疾病 慢性肺部疾病 慢性感染 血液系统异常 恶性肿瘤
技术方面 临床方面
经皮质激素或免疫抑制剂治疗。 终末期肾病。 隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组
织。 由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
➢ 细胞核： 核均质型（DNA、组蛋白和核小体等） 核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白） 核膜型（板层素、gp120等） 核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等） 核浆点型（着丝点、核多点及核少点型） ➢ 细胞浆： 胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等） 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等 ➢ 分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等
还可见于： 非结缔组织疾病中也可 出现阳性；正常人（特别是老年人）也 可出现阳性，但滴度低，并且常表现为 IgM型；高滴度ANA则高度提示自身免 疫性疾病。
风湿性疾病
SLE
多发性肌炎
干燥综合征
硬皮病
血管炎
RA
正常的健康人
女性＞男性，出现率 随年龄而增加
风湿性疾病患者亲属
？孕妇
间接免疫荧光法（IIF）
基质组合为：HEP-2细胞 + 灵长类肝 （猴）
抗核抗体染色类型 核仁型（nucleolar）
均质性 （ homogeneous ）
ANA试验的结果中一般会报告其分型，这些 分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。
分型 核仁型 着丝点型 周边型 斑点型/ 弥散型
抗双链DNA抗体（ds-DNA）是系统性红 斑狼疮的特异性抗体，其阳性率因检测方法而 异，在40-90%。但抗ds-DNA阴性并不能排除 患有SLE的可能性。抗ds-DNA抗体具有预测 价值，85%的出现抗ds-DNA抗体的健康人在 五年内发展为SLE。已证实抗ds-DNA抗体参 与SLE的病理过程，在疾病形成过程中，抗 ds-DNA和其抗体形成的免疫复合物沉积在皮 下毛细血管、肾和其他器官内，激活补体系统， 从而导致组织损伤。