菌株筛选方法
菌种选育的常用途径
菌种选育的常用途径引言菌种选育是一种重要的微生物学研究领域，通过对不同菌种的筛选和改良，可以获得具有特定功能的菌株，应用于农业、医药、食品等领域。
本文将详细介绍菌种选育的常用途径，包括菌种筛选、遗传改良和代谢工程等方面。
菌种筛选菌种筛选是菌种选育的第一步，通过对大量的菌株进行筛选，找到具有特定功能的菌种。
常用的菌种筛选途径包括：1. 传统筛选法传统筛选法是指通过传统的培养基和培养条件，观察菌株在不同环境下的生长情况和代谢产物的产量，从中选出具有优良性状的菌株。
这种方法简单易行，但效率较低。
2. 高通量筛选法高通量筛选法是利用自动化设备和高通量平台，对大量的菌株进行快速筛选。
常用的高通量筛选方法包括微孔板筛选、流式细胞术和荧光素酶报告基因等。
这种方法高效快速，能够同时处理多个菌株。
3. 分子生物学筛选法分子生物学筛选法是通过对菌株的基因组进行分析，筛选出具有目标基因或特定代谢途径的菌株。
常用的分子生物学筛选方法包括PCR技术、基因芯片和下一代测序等。
这种方法能够准确地确定菌株的遗传特征，对于寻找具有特定功能的菌株具有重要意义。
遗传改良遗传改良是菌种选育的关键步骤，通过对菌株的基因进行改造或调控，使其具有更好的性状和功能。
常用的遗传改良途径包括：1. 诱变诱变是指通过物理或化学手段对菌株的基因进行改变，产生突变体。
常用的诱变方法包括辐射诱变和化学诱变。
诱变可以导致菌株的遗传多样性增加，从而增加筛选到具有特定功能的菌株的概率。
2. 基因工程基因工程是指通过外源基因的引入或菌株内部基因的改造，使菌株具有特定的性状和功能。
常用的基因工程方法包括基因克隆、基因敲除和基因表达调控等。
基因工程可以准确地改变菌株的遗传特征，实现对菌株的精确改良。
3. 重组DNA技术重组DNA技术是指通过DNA片段的重组和重排，实现对菌株基因组的改造。
常用的重组DNA技术包括PCR扩增、限制酶切和连接等。
重组DNA技术可以实现对菌株基因组的精确改造，为菌种选育提供了有力的工具。
菌种筛选方法
菌种筛选方法菌种筛选是微生物学研究中的一项重要工作，通过筛选出具有特定特性或功能的菌株，可以广泛应用于医药、食品、农业和环境等领域。
本文将介绍一些常见的菌种筛选方法。
一、传统筛选方法1. 纯培养与分离纯培养与分离是最基本的菌种筛选方法。
通过采集样品，将其中的微生物分离出来，并通过重复分离和鉴定，筛选出单一菌种用于后续研究。
这种方法简单易行，但需要进行大量的繁琐工作。
2. 形态学特征筛选菌落形态学特征是菌株之间的重要区别指标，通过观察菌落的大小、颜色、形状等特征，可以初步筛选出具有目标性状的菌株。
这种方法不需要复杂的设备和技术，适合初步筛选大量样品。
3. 生理生化特征筛选生理生化特征是菌株在代谢和生长方面的表现，通过测定菌株对各种生理生化指标的反应，例如抗生素敏感性、产酶能力等，可以进一步缩小筛选范围。
这种方法需要特定的培养基和试剂，对筛选条件有一定要求。
二、分子生物学方法1. PCR扩增PCR扩增是一种常用的分子生物学技术，可以利用特异性引物扩增目标基因。
通过在筛选过程中选择特定的基因片段作为指标，可以筛选出具有目标特性的菌株。
这种方法具有高灵敏度和高特异性，适用于筛选基因工程菌株等特定要求的菌株。
2. 基因芯片基因芯片是一种高通量技术，可以同时检测上千个基因。
通过在菌种筛选中选择合适的探针，可以迅速准确地筛选出具有目标基因表达的菌株。
这种方法操作简便，适用于大规模筛选。
3. 基因重组技术基因重组技术是一种将异源基因导入宿主细胞中的方法，通过构建适当的载体和选择合适的宿主细胞，可以快速筛选出具有目标基因功能的菌株。
这种方法需要相关的分子生物学技术支持，适用于特定的目标筛选。
三、高通量筛选方法1. 微孔板筛选微孔板是一种用于大规模平行筛选的工具，通过在每个微孔中添加不同培养条件和指标物质，可以同时筛选多个菌株。
这种方法高效快速，可以用于大规模筛选和反复筛选。
2. 流式细胞术流式细胞术是一种利用特定染料对菌株进行筛选的方法，通过检测菌株表面或内部的荧光信号，可以筛选出具有特定特性的菌株。
选育菌种的方法
选育菌种的方法一、引言菌种的选育是微生物学研究中的重要环节，它对于促进农业、食品工业、医药领域的发展具有重要意义。
本文将介绍一些常用的选育菌种的方法，包括传统的筛选方法和基于分子生物学的筛选方法。
二、传统的筛选方法1. 随机筛选法随机筛选法是最常用的菌种选育方法之一。
其步骤包括：从自然环境中收集样品，如土壤、水体等，将样品制成适宜的培养基，然后进行培养。
在培养过程中，通过观察菌落的形态、颜色、生长速度等特征，筛选出具有特殊性状或功能的菌株。
2. 生理选育法生理选育法是根据菌株的生理特性进行选育的方法。
通过调节培养条件，如温度、pH值、氧气浓度等，筛选出适应特殊环境的菌株。
例如，有些菌株能够在高温或低温环境中生长，有些菌株能够在酸性或碱性环境中生长，这些菌株可以被应用于相关领域。
3. 抗性筛选法抗性筛选法是利用抗生素或其他抑制性物质来筛选菌株的方法。
通过将菌株培养在含有抗生素或抑制性物质的培养基上，只有具有抗性的菌株才能够生长并形成菌落。
这种方法可以筛选出具有抗生素抗性、耐酸碱或耐高温的菌株。
三、基于分子生物学的筛选方法1. PCR筛选法PCR筛选法是利用聚合酶链反应(PCR)技术来筛选菌株的方法。
通过设计特异性引物，扩增目标基因片段，然后通过电泳分析扩增产物，筛选出具有特定基因的菌株。
2. 基因克隆筛选法基因克隆筛选法是将目标基因插入表达载体中，然后转化到宿主菌中，通过观察宿主菌的表型变化来筛选菌株。
例如，将具有抗性基因的载体转化到宿主菌中，只有转化成功的菌株才能够生长在含有抗生素的培养基上。
3. 荧光筛选法荧光筛选法是利用荧光蛋白标记目标基因，通过观察菌株产生的荧光信号来筛选菌株。
例如，将荧光蛋白基因与目标基因融合，将融合基因转化到宿主菌中，通过观察菌株产生的荧光信号来筛选具有目标基因的菌株。
四、总结菌种的选育是微生物学研究中不可或缺的一环。
传统的筛选方法包括随机筛选法、生理选育法和抗性筛选法，它们通过观察菌株的形态、生长特性和抗性等来筛选菌株。
菌种筛选方法范文
菌种筛选方法范文菌种筛选是微生物学中的一项重要技术，用于从大量的菌株中筛选出具有特殊性状或功能的菌株。
菌种筛选方法可以根据筛选目的和筛选对象的特点进行选择，以下列举了常用的菌种筛选方法：1.外观筛选法：根据菌落的形态、颜色或大小等外观特征进行筛选。
这种方法适合于筛选出形态特殊的菌株，如颜色较深或较浅的菌株。
2.抗生素抗性筛选法：将菌株培养在含有不同抗生素的培养基上，观察菌株的生长情况，筛选出对其中一种或几种抗生素具有抗性的菌株。
这种方法适合于筛选出耐受抗生素的菌株，如耐药菌株。
3.发酵产物筛选法：筛选产生特定发酵产物的菌株。
如筛选产生抗生素、酶类或有机酸等特殊代谢产物的菌株。
这种方法适合于筛选具有特定功能的菌株。
4.pH、温度耐受筛选法：在不同pH值或温度条件下，培养菌株并观察其生长情况，筛选出对酸碱度或温度变化具有耐受性的菌株。
这种方法适合于筛选出耐受极端环境的菌株。
5.发酵特性筛选法：通过观察菌株在发酵过程中的产物、产率或变化等特性，筛选具有优良发酵特性的菌株。
这种方法适合于筛选工业发酵过程中需要的菌株。
6.代谢产物筛选法：通过检测菌株代谢产物的生物活性或化学特性，筛选具有特定代谢能力的菌株。
如筛选具有抗菌活性的菌株。
这种方法适合于筛选具有特殊生物活性的菌株。
7.遗传筛选法：通过引入特定基因标记，并利用特定基因的表达产物对菌株进行筛选。
如筛选具有目标基因表达的菌株。
这种方法适合于筛选具有特定基因功能的菌株。
总之，菌种筛选方法是根据筛选目的和筛选对象的特点，选取适合的筛选方法进行。
不同的菌株筛选方法可以相互结合使用，以提高筛选效果。
通过合理的筛选方法，可以高效地从大量菌株中筛选出具有特殊性状或功能的菌株，并在工业发酵、医药、食品等领域中得到应用。
微生物菌株的筛选及其在环境治理中的应用
微生物菌株的筛选及其在环境治理中的应用微生物是一类非常特殊的生命体。
它们常常起着十分重要的作用，可以影响人类的健康、动植物的生长、土壤的肥沃等方面。
然而，在环境治理中，微生物却可以发挥更加巨大的作用。
微生物的菌株筛选是环境治理的重要手段之一，多年来受到了广泛关注。
本文将从微生物菌株的筛选方法、筛选后的应用以及现代微生物治理方法等方面进行探讨。
一、微生物菌株的筛选方法微生物菌株的筛选是指通过研究和阅读文献资料，从原始的微生物种群中筛选出有用的生物菌株，然后对其进行试验研究，确认其功能和应用价值。
1. 传统微生物菌株筛选法传统菌株筛选法是最为常用的一种方法。
它包括了以下几个步骤：（1）微生物样品的来源微生物样品可以来自土壤、河流、海洋、肠道、病毒等多种渠道。
（2）微生物的富集和筛选在这个阶段，常常采用的是培养和分离的方法。
通过在营养富集基质上培养微生物，然后再分离其单体，筛选出目标物种。
（3）菌株的特性和功能研究在筛选出目标物种的基础上，对其特性和功能进行深入的研究，例如：酶的稳定性、生长条件等。
（4）评价对菌株的应用价值进行评价，包括其对环境的影响、经济价值、安全性等。
2. 现代微生物筛选法传统微生物筛选法虽然简单易行，但是存在着一些缺点，比如筛选效率低，评价标准不够明确等问题。
在这种情况下，现代微生物筛选法应运而生。
它将分子生物学、基因工程、生物统计和高通量筛选等科技手段相结合，从而提高了微生物筛选的效率和准确性。
二、微生物菌株的应用微生物菌株的应用可以分为生产应用和环境应用两种类型。
1. 生产应用（1）工业微生物微生物工业可以生产很多实用的物品，例如乳酸、酵母、酒精、细菌和酶等。
（2）医药微生物微生物有很强的生殖力和代谢活力，因此它可以作为重要的医药材料。
2. 环境应用（1）环境修复由于化工行业和工程建筑的发展，环境污染问题日趋严重，微生物的生化特性被广泛利用于环境修复中，比如：清洁污水、修复地下水污染等。
微生物菌株的筛选及其在环境修复中的应用
微生物菌株的筛选及其在环境修复中的应用随着人类社会的不断发展和城市化进程的加快，环境污染问题日益严重，给人类和地球造成了巨大的威胁。
为了解决这一问题，科学家们开始研究和应用微生物菌株在环境修复中的作用。
本文将介绍微生物菌株筛选的方法以及其在环境修复中的应用价值。
一、微生物菌株筛选的方法微生物菌株的筛选是指选择具有一定特殊功能菌株的过程，这些菌株可以在特定环境中对某些有害物质进行降解和转化，或者具有修复受损环境的能力。
以下是一些常用的微生物菌株筛选方法：1.1 原位分离法原位分离法是通过直接从环境中采集样品并进行分离培养，筛选出具有特定功能的微生物菌株。
该方法的优势在于可以直接在目标环境中寻找适应的菌株，可以更好地适应受损环境的修复需求。
1.2 代谢产物筛选法代谢产物筛选法是通过检测微生物培养基中的代谢产物，从中筛选出具有降解有害物质能力的菌株。
如利用基因工程技术，将携带特定代谢途径的基因导入菌株中，使其产生特定的代谢产物，并通过测定代谢产物的生成情况来筛选菌株。
1.3 特异性评价法特异性评价法是通过检测微生物菌株的特定酶活性或基因表达水平，评价其对有害物质的降解能力。
例如，利用PCR技术检测特定降解基因的表达情况，或者通过测定细胞外酶的活性来评价菌株的降解效果。
二、微生物菌株在环境修复中的应用微生物菌株在环境修复中具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：2.1 土壤修复土壤污染是一种常见的环境问题，影响着农田的可持续利用和生态系统的正常运行。
微生物菌株可以通过吸附、转化或降解有害物质，改善土壤的物理性质和化学性质，促进土壤的恢复和修复。
2.2 水体治理随着城市化进程的不断加快，水体污染问题日益严重。
微生物菌株可以降解水体中的有机物和重金属等有害物质，提高水体的水质，减少水生生物受到的危害，从而实现水体的治理和修复。
2.3 污水处理工业和家庭排出的废水中含有大量的有机物和污染物，对水环境造成了严重的污染。
高效菌筛选方法及策略
高效菌筛选方法及策略菌筛选是指在大量细菌中筛选出具有特定性状或有潜力的菌株。
高效菌筛选方法和策略的研发对于开展微生物研究和利用具有重要意义。
以下是一些常用的高效菌筛选方法及策略。
1.快速筛选方法：快速筛选方法主要通过缩短菌筛选的时间，提高筛选效率。
其中一种常用方法是利用荧光标记在特定条件下或对特定物质的响应。
如利用绿色荧光蛋白（GFP）标记菌株，通过荧光筛选可以快速获取目标菌株。
2.抗性筛选方法：抗性筛选方法通过添加特定抗性基因或对抗特定抗生素，来获得对这些抗生素具有耐受性的菌株。
这样一来，对抗生素的敏感菌株可以被消除，而具有抗性的菌株则可以快速筛选出来。
3.变异筛选方法：变异筛选方法通过利用菌落的形态、色素等可变性特征，筛选出变异菌株。
可以通过菌落形态观察、涂片染色、荧光筛选等方法，快速获得形态或性状变异的菌株。
4.高通量筛选方法：高通量筛选方法利用自动化设备，如微孔板阵列、高通量测序仪等，对大量菌株进行快速筛选。
这种方法主要应用于菌株库的筛选或特定代谢产物高效筛选等方面。
5.代谢产物筛选方法：这种方法通过检测菌株代谢产物的产量或特性，筛选出具有特定代谢产物的菌株。
可以通过色谱-质谱联用技术、高效液相色谱、质谱成像等手段，对菌株代谢物进行分析和筛选。
6.分子筛选方法：分子筛选方法利用特定的分子探针或探测基因，在菌株中筛选具有特定基因或特定基因表达的菌株。
可以通过PCR、南方印迹等技术，对菌株的基因组或转录组进行筛选。
综合利用上述方法和策略，可以实现高效菌株的筛选。
同时，还可以采用多因素组合的策略，如结合菌株形态、生长能力、产物产量和基因组信息等进行筛选。
高效菌筛选方法和策略的研发有助于加快菌株研究和开发，提高微生物资源的利用效率。
食用菌类栽培中的菌种筛选方法
食用菌类栽培中的菌种筛选方法在食用菌类的栽培过程中，选择合适的菌种对于提高产量和质量至关重要。
本文将介绍食用菌类栽培中的菌种筛选方法，帮助农民和菌农在栽培实践中做出明智的选择。
一、初步筛选初步筛选是在菌种的基本特性和生态要求的基础上进行的。
它的目的是根据不同菌种的生长条件和适应性，筛选出适合特定环境的菌种。
以下是几种常用的初步筛选方法：1.形态特征观察：不同菌种的形态特征存在差异，如子实体形状、颜色、纹理等。
通过观察这些特征，可以初步区分不同的菌种。
2.生理生化指标检测：通过检测菌种的生理生化指标，如生长速度、产孢量、适应温度等，来评估其适应性和品质特征。
3.病原性检测：某些食用菌类可能存在病原菌种，对于筛选出的菌种进行病原性检测，确保栽培过程中不会受到病害的侵害。
二、实验室筛选在初步筛选的基础上，可以将具备潜力的菌株进行实验室筛选。
实验室筛选主要是通过在控制环境中观察并测定菌株的生长速度、产孢量、品质特征等指标来进行评估。
以下是几种常用的实验室筛选方法：1.菌株培养：将初步筛选出的菌株进行适当的培养，观察其生长情况、菌丝密度等，并记录相应指标。
2.菌株诱导：通过不同的诱导方法，如添加特定营养物质、调节温度湿度等，评估菌株的产孢能力和产香特性。
3.品质评估：将菌株进行品质评估，如食用价值、口感、营养成分等，以确保选出的菌种符合市场需求。
三、田间试验筛选在实验室筛选的基础上，可以将具备潜力的菌种进行田间试验，以进一步评估其适应性和产量表现。
以下是几种常用的田间试验筛选方法：1.不同栽培基质试验：在不同的栽培基质条件下，观察菌种的生长情况和产量表现，并比较其差异，筛选出适应性较强的菌种。
2.不同环境条件试验：在不同的温度、湿度等环境条件下，观察菌种的生长速度和产量表现，并评估其适应性。
3.病害抗性试验：将选出的菌种进行病害抗性试验，观察其在病害侵害下的表现，确保选出的菌种能够在实际栽培中抵御病害。
四、市场验证筛选在经过实验室和田间试验筛选后，仍需进行市场验证以确定最终的菌种选择。
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第二章餐厨垃圾堆肥产酶菌株筛选2 材料与方法2.1 材料2.1.1 实验材料1）筛选材料：HM菌剂（河南恒隆态生物工程股份有限公司）；EM菌剂（江西天意集团）；金宝贝菌剂（北京华夏康源科技有限公司）；群林发酵剂（广西北海群林生物工程有限公司）。
2）发酵材料：餐厨垃圾（购自贵州大学南校区学生食堂）；稻草（购自铜仁市，晒干后粉碎至5mm左右）。
2.1.2 主要药品及试剂2.1.3 实验仪器电子分析天平（EL-2005）西特传感技术有限公司高速台式离心机（TGL-161）Thermo公司冷冻离心机（2-16k）德国eppendorf公司标准型净化工作台上海锦星科学仪器有限公司低温冰箱〔BCD-108E）风华电器厂超低温冰箱(Forma-6C ULT) Thermo公司调温调湿箱（WS/08-01）重庆试验设备厂干燥箱（101-2）上海实验仪器总厂自动三重水蒸馏器（SZ-97）上海亚荣生化仪器厂高压灭菌锅（GMSX-280）英国阿斯太欧（Astell）公司循环水浴锅（RET7）Thermo公司电热恒温培养箱（DH3600) 天津泰斯特仪器有限公司恒温摇床（SKY-2102C) 上海苏坤实业有限公司高速组织捣碎机（DS-1) 上海标本模型厂磁力双向搅拌器（90-1）上海亚荣生化仪器厂pH计ACS交直流两用电子计价秤昆明金瑞克电子衡器有限公司双金属温度计（WSS-411）天津市新华热工仪表有限公司河北铁狮磨浆机械有限公司秸秆揉丝饲料粉碎多用机（9R-30)紫外分光光度计2.1.6 培养基1）初筛培养基（1）细菌培养基（%）：牛肉膏0.3；蛋白胨1.0；氯化钠0.5；琼脂粉2.0；pH7.2 （2）霉菌培养基（%）：磷酸二氢钾0.1；七水硫酸镁0.05；蛋白胨0.5；葡萄糖1.0；琼脂粉2.0；孟加拉红0.03；pH自然；链霉素30μg/m L（3）乳酸菌培养基（%）：蛋白胨1；牛肉膏1；酵母膏0.5；柠檬酸二铵0.2；葡萄糖2.0；吐温80 0.1；乙酸钠0.5；三水磷酸氢二钾0.2；七水硫酸镁0.058；七水硫酸锰0.025；琼脂粉2.0；pH6.2（4）放线菌培养基（%）：可溶性淀粉2；氯化钠0.05；硝酸钾0.1；磷酸氢二钾0.05；七水硫酸镁0.05；七水硫酸亚铁0.001；重铬酸钾0.015；琼脂粉2.0；pH7.4；青霉素3μg/ml2）复筛培养基（1）产淀粉酶筛选培养基（%）：可溶性淀粉0.2；蛋白胨1.0；酵母膏0.5；磷酸氢二钾0.3；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；琼脂粉2.0；pH7.0【陈秋红,孙梅,施大林,等.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】（2）产脂肪酶筛选培养基（%）：硫酸铵0.1；磷酸氢二钾0.1；氯化钾0.05；七水硫酸镁0.01；橄榄油1.0；聚乙烯醇0.1；琼脂粉2.0；pH8.5【刘敏,曹志军,焦艳芬,等. UHT 乳中产耐高温脂肪酶嗜冷菌的研究[J]. 内蒙古农业大学学报.2008,29(1):230-233】（3）产纤维素酶筛选培养基（%）：七水硫酸镁0.01；羧甲基纤维素钠1.5；氯化钙0.01；磷酸二氢钾0.05；硫酸铵0.2；磷酸氢二钾0.2；pH自然【刘胜贵,严明,邹娟,等.纤维素降解真菌的筛选及其产酶条件[J]. 中国农学通报,2011,27(7):102-106】3）产酶发酵液（1）产淀粉酶发酵液（%）[1]：可溶性淀粉0.5；蛋白胨0.5；酵母膏0.5；氯化钠0.1；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；pH7.0（48h培养）【陈秋红,孙梅,施大林,等.益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究.科学试验与研究[J].2009,4:7-10,21】（2）产脂肪酶发酵液（%）：蛋白胨2.0；葡萄糖0.58；橄榄油乳化液4；硫酸铵0.1；七水硫酸镁0.05；磷酸氢二钾0.1；pH自然（72h培养）【胡朝阳,韦晗宁,李春苑,等.产脂肪酶菌株的筛选及酶学特性研究[J]. 广西农业生物科学,2006,25(3):261-268】（3）产纤维素酶发酵液：A液：葡萄糖0.4g；七水硫酸镁0.25g；CMC-Na 0.5g；水89mL; B液：磷酸氢二钠6.0g；氯化钠0.5g；磷酸二氢钾3.0g；氯化铵1.0g；水100mL; C液：氯化钙0.11g；水100mL灭菌后10mLB液+1mLC液+89mLA液即为发酵液【雷正玉,何力,王朝元,等.草鱼体内产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的研究[J]. 微生物学杂志,2007,27(4):54-57】4）基础培养基（%）：蛋白胨1.0；酵母膏0.5；氯化钠1.0；琼脂粉2.0；pH7.02.1.7 溶液配制0.5%淀粉溶液配制：0.5g可溶性淀粉加入10mL水混合成糊状，加入95mL沸水，微沸几分钟。
静置、冷却，取上清即得。
0.1mol/L H2SO4溶液配制：取10.9mL浓硫酸定容至100mL，即为1mol/LH2SO4溶液。
取10mL，1mol/LH2SO4溶液定容至100mL，即为0.1mol/L的H2SO4溶液。
碘液的配制：称取2.0g碘化钾溶于10mL蒸馏水中，加入1.0g碘，迅速搅拌使其溶解后加水定容至300mL。
即0.1mol/L的卢卡氏碘液；取0.4mL 0.1mol/L碘液定容至100mL即得0.4mmol/L碘液。
4%聚乙烯醇溶液配制：称取40g聚乙烯醇(PV A）加蒸馏水约800mL，在沸水浴中不断搅拌使其完全溶解，冷却后定溶至1000mL，再经纱布过滤后备用。
橄榄油乳化液的配制：取4%聚乙烯醇溶液150mL，加50mL橄榄油，高速组织搅动机搅动6min(分2次搅动，每次3min，中间休息5min中)，即制成乳白色的橄榄油乳化液。
磷酸盐缓冲液配制：0.025mol/L，pH值7.5。
甲液：称取17.01gKH2PO4，加水定容至500mL；乙液：称取44.77gNa2HPO4·12H2O，加水定容至500mL；吸取13mL甲液与100mL 乙液混匀即成0.25mol/L磷酸缓冲液，使用时用水稀释10倍，即成0.025mol/L 磷酸盐缓冲液。
0.05mol/L Na OH溶液配制：取4.58g固体Na OH溶于1L水中，用邻苯二甲酸氢钾标定，使用时稀释10倍。
酚酞溶液配制：取1g酚酞溶于100mL 95%的乙醇中即得10g/L的酚酞溶液；取0.5g酚酞溶于100mL 95%的乙醇中即得5g/L的酚酞溶液【GB/T 603-2002化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备】Na2CO3-NaHCO3缓冲液配制：0.1mol/L，pH10。
0.1mol/LNa2CO3溶液：称取28.62g Na2CO3·10H2O溶解、定容至1L，即为0.1mol/LNa2CO3溶液；0.1mol/LNaHCO3溶液：称取8.40gNaHCO3溶解、定容至1L，即为0.1mol/LNaHCO3溶液。
使用时将Na2CO3溶液与NaHCO3溶液1:1混合即得0.1mol/L，pH10的Na2CO3-NaHCO3缓冲液。
1%CMC-Na溶液配制：称取1gCMC-Na溶解定容至100mL即得。
DNS试剂配制：称取酒石酸钾钠182.0 g，于500 mL 蒸馏水中，加热搅拌，依次加入3,5-二硝基水杨酸6.3 g，Na OH 21.0 g，苯酚5.0 g，搅拌至完全溶解，冷却后用蒸馏水定容至1 000 mL，棕色瓶中室温暗处放置一周后使用。
【张龙翔,张庭芳,李令媛. 生化实验方法和技术[M]. 北京:人民教育出版社,1982:9-11】2.2 方法2.2.1 样品组成菌株的分离纯化1. 各称取商品菌剂（HM菌剂、金宝贝菌剂、群林菌剂、EM菌剂）10g（或10mL）置于盛有90mL无菌生理盐水，含玻璃珠的三角瓶中，37℃，180r/min震荡60min，将菌剂打碎。
取上清作为10-1，依次稀释至10-2,10-3,10-4,10-5。
2. 吸取100μL稀释好的菌液涂布初筛培养基平板，三组平行实验。
3. 将涂布好的平板及其平行组分别置于28℃，45℃，55℃的恒温培养箱中培养（细菌、乳酸菌培养2d；霉菌培养3-5d；放线菌培养7d）。
4. 用接种环挑取分离出的单菌落在相应的分离培养基平板上划线纯化，并置于分离温度下培养至长出单菌落。
5. 挑取4.中的单菌落在相应的分离培养基斜面上划线，分离温度下培养，4℃保存。
2.2.2 产淀粉酶菌株的筛选2.2.2.1 初筛水解圈的测定1. 将保种菌株平板划线活化后，挑取单菌落在产酶筛选培养基平板上点种，分离温度下培养1-2d。
2. 培养结束后在平板上滴加1-2mL 0.1mol/L的碘液，（尽量避免滴加到菌落上）显色后测量菌落直径（d）与水解圈直径（D），并计算D/d的比值以此判断待测菌株对淀粉的分解能力。
3. 选出D/d比值较高的菌株，重新编号。
2.2.2.2 复筛酶活的测定[叶应妩，2006]【叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M ] 第3 版. 南京市:东南大学出版社, 2006】1.用牙签挑取初筛菌株保种斜面上的菌落，置于分离培养基液体试管中，180r/min，分离温度下培养活化。
2. 吸取1mL OD620值在0.6左右的菌液，置于含100mL产酶培养液的三角瓶中，180r/min, 50℃震荡培养2d。
3. 培养后的产酶发酵液4℃，7000r/min，离心取上清作为酶液。
4. 取5mL ，0.5%的可溶性淀粉溶液加入到试管中，40℃水浴预热10min 。
5. 加入5ml 酶液，反应5min 后用5mL0.1mol/L H 2SO 4终止反应。
5. 取5mL 反应液与5mL0.4mmol/L I2-KI 溶液显色，620nm 测OD 值。
（以0.5ml 水代替0.5mL 反应液为空白，以同批配置的淀粉酶空白发酵液离心上清为对照）。
6. 将OD 620值代入以下公式计算酶活力：D R R R L U ⨯⨯-=50m /00）酶活力（ R0：对照的碘液光吸收值；D ：酶稀释倍数；R ：反应液的光吸收值（调整D 使00R RR -在0.2-0.7之间，确定40℃，5min 内水解1mg 淀粉的酶量为一个活力单位）。
7. 依据水解圈比值D/d ，及体外酶活测定值，选出3株酶活较高且稳定性较好的菌株作为后期研究菌株。
2.2.3 产脂肪酶菌株的筛选2.2.3.1 初筛水解圈的测定1. 将保种菌株平板划线活化后，挑取单菌落在产酶筛选培养基平板上点种，分离温度下培养3d 。
2. 培养结束后直接测量菌落直径（d ）与水解圈直径（D ），并计算D/d 的比值，以此判断待测菌株对淀粉的分解能力。