第九章 免疫学实验技术概述

(六) 结合比例

Ag与Ab的结合常需适当比例才出现可见反
应，在最适比例时反应最明显；

这种现象可以用“格子学说”来解释：Ab(1gG) 为二价，Ag通常为多价，只有Ag，Ab结合形 成大的复合物，肉眼才可见；
带现象
只有当Ag与Ab比例适当时，才能形成大的复 合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而
2．自制：一般天然Ag、动物血清、组织Ag等
(二) Ab制备提纯
(三)操作程序制定
(四)材料准备和滴定：工作浓度滴量 (五)试验条件选择： (六)特异性试验 1．Ag、Ab验证：反复、重复验证
2．交叉试验
3．抑制试验(阻断)
(七)敏感性试验 (八)重复性试验
(九)稳定性试验
五、血清学试验的应用 (一) 血清学诊断 (二) 生物活性物质超微定量 (三) Ag/Ab亚细胞、细胞水平定位
(五)结合力与离解力 Ag，Ab的结合为弱能量的非共价健结 合，其结合力决定于Ag表位与Ab的结合点
之间所形成的非共价健的数量，性质和距
离，包括4种力的作用：
Ag-Ab结合的离解力
指Ag-Ab结合具有可逆性，因为Ag-Ab之间靠
非共价结合，因此在一定条件下可使其解离。 解离后的Ag-Ab仍保留其原有活性。
凝集抑制：（血凝抑制）
（三）与补体有关的实验：活性、组分、补结、 免疫粘附血凝等。 （四）中和试验
（五）标记技术： 同位素标记 荧光标记：化学发光免疫技术 酶标记：组化法、测定法（ELISA） ELISA：间接法、免疫酶斑点技术（dotELISA）、 竞争法、 夹心法、 桥联法 （六）免疫电镜组化技术 胶体金铁蛋白标记技术
抗原与抗体的结合的特异性
（二）交叉性 交叉抗原：不同的Ag物质之间存在相
同的Ag表位时，称为交叉抗原。
交叉反应：又不同抗原制备的抗血清除
与各自的相应Ag发生反应外，尚能与对方
Ag发生反应。
通常两种Ag之间亲缘关系越近，交叉
反应程度越高。
A
B
抗原与抗体的结合的交叉性
(三)用已知测未知
所有血清学反应都毫无例外地是用已知Ag测
一滴血清/血、一根羽毛、少许组织悬
液、植物一片子叶等。
(二)种类多，可择优选用
(三) 方法简便快速 (四) 特异性、敏感性
(五) Ag/Ab定位、定量
四、血清学试验的制定原则 特定的或建立新的血清学方法时，应注意
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以下原则：
(一) Ag准备和提纯 1．购自试剂公司：如半Ag、激素、酶、
农药、抗生素、昂贵的天然Ag等。
抑制反应现象的出现.
前带现象：Ab过剩，Ag过少；稀释Ab 后带现象：Ag过剩，Ab过少；稀释Ag。
(七) 血清学反应的影响因素
1．电介质：生理盐水，缓冲盐水，少数动 物(禽)血清用8.5％NaCl；
2．温度；
3．pH：pH6.0～8.0
三、血清学技术的优越性 (一)检样量少，预处理简单：
(四) Ag组分分析，如病毒结构蛋白可用免疫转
印，免疫沉淀(琼扩、电泳、交叉免疫电泳等)
(五) 物种鉴定分型
(六) 有机物提取纯化
六、血清学试验的类型 （一）沉淀反应：
环状沉淀试验
琼脂扩散：
免疫电泳
对流电泳 火箭电泳
双向电泳
补体结合试验
（二）凝集反应： 直接凝集：平板、试管 间接凝集：间接血凝、炭凝、乳胶凝集 协同凝集：
竞争酶联免疫吸附检测法(CiELISA)原理
B
B0
免疫层析法检测CAP结果

0ng/ml，检测线为清晰红色条带； 1ng/ml，检测线与0标准品的相似; 3ng/ml，检测线浅于0ng/ml标准品; 10ng/ml，检测线明显浅于0 ; 肉眼判定检测限可达3ng/ml。
第二节
未知Ab或用已知Ab测未知Ag。
用已知测未知的依据：抗原抗体的反应是特
异的。
正确理解实验原理或进行试验设计的关键是
搞清楚什么是已知，什么是未知，谁是抗原身份，
谁是抗体身份，谁是身兼两职的。
(四)试验与抑制试验 许多血清学试验可以被相应的Ag／Ab所 抑制，即抑制反应现象的出现，抑制试验可 以验证反应的特异性；还可使一些不易被检 测的Ag(如简单半Ag)或Ab(如单价Ab)，得以 检出。
第九章
免疫学实验技术概述
第一节
体液免疫的检测
——血清学反应
血清学反应：体外发生的抗原抗体反应。 所有血清学反应类型的基本原理：抗原抗体 反应的特异性。
二、血清学反应的一般规律
(一)特异性
• Ab只能与相应Ag特异结合。 • Ag表面常具有多个(多种)不同表位，所以
免疫血清中也应含有相应多种特异性Ab。
细胞免疫技术
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