ApoE—／—小鼠动脉粥样硬化模型的建立
瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉α—SMA表达的影响
瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉α—SMA表达的影响目的探讨瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉粥样硬化及α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin，α-SMA）表达的影响。
研究瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）降脂外的可能机制。
方法将20只6 w龄雄性ApoE基因缺陷小鼠随机分为两组：阳性对照组10只，予高脂饲料和饮水；瑞舒伐他汀组10只，予高脂饲料、饮水和瑞舒伐他汀10 mg/Kg/d；另设同周龄野生雄性小鼠10只作为阴性对照组：予普通饲料、饮水喂养。
三组小鼠喂养13 w后，摘出眼球并测定血清中总胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的水平等生化指标。
然后处死小鼠并取出主动脉（从主动脉弓起始到腹主动脉分支处），常规HE染色及免疫组织化学染色，观察主动脉形态学变化和血管壁斑块组织变化，定量分析斑块面积与管腔面积之比（PA/LA）、血管内膜厚度（IMT），定性分析α-SMA表达强度的变化。
结果 6 w龄ApoE基因缺陷雄性小鼠喂养13 w后，与阳性对照组比较，瑞舒伐他汀组血清TCH、TG、LDL-C水平显著降低，两组差别有统计学意义；病理测定PA/LA及IMT，瑞舒伐他汀组较阳性对照组明显减小，差别有统计学意义；与阳性对照组比较，瑞舒伐他汀组血管壁组织α-SMA 表达减少有统计学意义。
结论瑞舒伐他汀可减少动脉粥样硬化病变中α-SMA表达，其抗动脉粥样硬化降脂外作用可能为阻止血管平滑肌细胞向动脉粥样硬化斑块中迁移有关。
标签：瑞舒伐他汀，ApoE基因缺陷小鼠，AS，α-平滑肌肌动蛋白动脉粥样硬化（AS）是众多心脑血管疾病共同的病理生理基础，也是心血管系统疾病中最常见的疾病，严重危害人类疾病。
目前他汀类药物已被公认为具有抗AS作用，越来越多的研究表明它在抗AS的形成和发展方面，除了降脂作用外还有很多调脂外的抗AS机制，如抑制血管平滑肌细胞（VSMC）的迁移和增殖。
血管内皮损伤法构建动脉粥样硬化模型
血管内皮损伤法构建动脉粥样硬化模型根据不同的外力，血管内皮损伤法可以分为机械损伤法和物理生化因子损伤法。
前者主要是用球囊导管、钢丝套圈或金属丝等来损伤血管内皮，而后者则是用化学药品、电刺激、空气干燥或放射线等来损伤血管内皮。
其中，以球囊损伤法最为常用。
【造模机制】血管内皮损伤是动脉粥样硬化发生的始动环节，通过外力损伤血管内皮细胞，使血管内皮通透性、黏附性、血液凝固改变，造成动脉内膜损伤或功能障碍，再辅助性饲喂高脂、高胆固醇饮食，可诱导动脉粥样硬化形成。
【造模方法】家兔：先用高胆固醇饮食饲喂家兔2周，然后用球囊经右股动脉损伤家兔腹主动脉，使动脉内皮剥脱从而诱导血管内皮增生，之后继续用高胆固醇饮食饲喂6周，可以成功诱导动脉粥样硬化发生。
此外，将家兔主动脉暴露在192Irγ辐射，并给予高胆固醇饮食，2周可发现被辐射动脉内膜有局灶性巨噬细胞内皮下黏附及内皮损伤，6周时可观察到血管内明显动脉粥样硬化斑块形成。
另外，用电流刺激家兔颈动脉，同时给予0.2％高胆固醇饮食28天，也可以诱导动脉斑块形成。
大鼠：将充满生理盐水的塑料球囊导管自颈外动脉进入胸主动脉，向外拉至颈外动脉再进入胸主动脉，反复3次，冉喂以高脂、高胆固醇饮食8周后，可以出现明显动脉粥样硬化病变。
小鼠：用介入治疗用的导丝，在颈动脉或股动脉反复拉3次，损伤血管内皮，和家兔、大鼠一样，可以配合高脂饮食加快动脉粥样硬化病变形成。
【模型特点】血管内皮损伤配合高脂、高胆固醇饮食可以缩短建模时间，动脉粥样硬化的发生部位也比较明确，形成的斑块中间有脂质核心，并有富含平滑肌细胞的纤维帽覆盖。
【模型评估和应用】与单纯的高脂饮食诱导法相比，此类模型模拟介入治疗对血管的损伤和再狭窄过程，应用于血管重构的研究。
但是，此法对于动物具有创伤性，造价也较高，其病理基础更类似于外伤血管改变，适用于外科术后内膜增生及纤维帽形成的研究。
动脉粥样硬化高脂饲料对小鼠糖脂水平的作用研究
· 论著 ·动脉粥样硬化高脂饲料对小鼠糖脂水平的作用研究王 品，齐 齐，郑斯莉，徐浩展，缪朝玉（海军军医大学药理学教研室，上海 200433）［摘要］ 目的 研究动脉粥样硬化高脂饲料对小鼠体重、血糖血脂水平及动脉粥样硬化斑块形成的作用，并且明确禁食时间对血脂检测结果的影响。
方法 对10周龄雄性ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠分别给予高脂饲料及普通饲料，4个月后观察动脉粥样硬化斑块情况；对10周龄雄性C57BL/6J小鼠分别给予普通饲料4周、普通饲料2周+高脂饲料2周、高脂饲料4周，考察动物的体重、肝脏、血糖、血脂水平，并分析正常饮食条件下取材前禁食12、6 h及不禁食条件下对血脂检测结果的影响。
结果 给予高脂饲料的ApoE-/-小鼠动脉斑块面积显著增加（P<0.01）；给予高脂饲料的C57BL/6J小鼠的体重增加（P<0.01），肝脏脂肪样变；血糖、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平显著升高（P<0.01），而三酰甘油(TG)水平明显下降（P<0.01）。
相比于禁食12 h，禁食6 h及不禁食条件下检测到的三酰甘油水平明显升高（P<0.01）。
结论 动脉粥样硬化高脂饲料可加速ApoE-/-小鼠形成动脉粥样硬化斑块，显著升高血糖、TC及LDL-c水平，但明显降低TG值。
禁食时间可影响血清TG的检测结果。
［关键词］ 高脂饲料；动脉粥样硬化；血糖；三酰甘油；胆固醇［中图分类号］ R965 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1006-0111（2021）02-0121-05［DOI］ 10.12206/j.issn.1006-0111.202012002Effect of atherosclerotic high-fat diet on the level of glucose and lipid in mice WANG Pin，QI Qi，ZHENG Sili，XU Haozhan，MIAO Chaoyu（Department of Pharmacology, Naval Medical University, Shanghai 200433, China）［Abstract］ Objective To study the effects of atherosclerotic high-fat diet on body weight, blood glucose, blood lipid levels and atherosclerotic plaque formation in mice, and to determine the effect of fasting time on the results of blood lipid testing. Methods 10-week-old male ApoE knockout (ApoE-/-) mice were given high-fat diet and normal diet. The atherosclerotic plaques were observed four months later. 10 week old C57BL/6J male mice were given regular diet for 4 weeks, regular diet for 2 weeks + high-fat diet for two or four weeks. Body weight、liver、glucose, and the serum lipid levels were examined. The influence of fasting for 12 h, 6 h or no fasting on blood lipid detection results before sacrificing were studied. Results The atherosclerotic plaque area of ApoE-/- mice given high-fat diet increased significantly (P<0.01). C57BL/6J mice given high-fat diet gained weight (P<0.01). The glucose, TC, LDL-c and HDL-c were also increased in C57BL/6J mice with liver fat accumulation while the level of TG was significantly decreased(P<0.01). Compared with the fasting 12 h group, serum triglyceride (TG) was significantly increased (P<0.01）in fasting 6 h and no fasting groups. Conclusion The atherosclerotic high-fat diet can accelerate the formation of atherosclerotic plaques in ApoE-/-mice, significantly increase blood sugar, TC and LDL-c levels, but significantly reduce TG values.. The fasting time can affect serum triglyceride (TG) level.［Key words］ high fat diet；atherosclerosis；glucose；triglyceride；cholesterol动脉粥样硬化以慢性血管炎症及大中动脉内皮下脂质斑块形成为主要特征，内皮细胞、平滑肌细胞、免疫细胞等均参与动脉粥样硬化的过程，随着斑块的积累，累及多种器官导致其病变[1]。
动脉粥样硬化造模方法
动脉粥样硬化造模方法1.引言1.1 概述概述动脉粥样硬化是一种常见的血管疾病，其主要特征是动脉壁内聚积了大量脂质沉积物，导致动脉管腔狭窄甚至闭塞，严重威胁人类健康。
为了深入研究动脉粥样硬化的发病机制，科学家们发展了许多造模方法，用于模拟和研究该疾病的发生与发展过程。
动脉粥样硬化的造模方法包括动物模型和体外模型两种。
动物模型是通过将动物暴露在特定环境或进行特定操作来诱发动脉粥样硬化，从而使动物模型具有与人类疾病相似的特点。
常用的动物模型包括小鼠、兔和猪等。
这些动物模型在解剖结构、生理功能和代谢方式等方面与人类相对接近，能够为研究提供重要参考。
另一方面，体外模型是通过将动脉粥样硬化的发生与发展过程在实验室中进行模拟，以研究其相关机制。
体外模型包括细胞培养模型和体外血管模型。
其中，细胞培养模型利用培养的细胞，如内皮细胞和平滑肌细胞等，进行各种实验和研究。
体外血管模型则是通过构建人工动脉血管或使用已移植的动脉片段，在实验室中模拟动脉粥样硬化的病理改变，以评估新药物或治疗方法的疗效。
综上所述，动脉粥样硬化的造模方法为研究这一疾病的发病机制和寻找治疗方法提供了重要手段。
通过动物模型和体外模型的研究，科学家们可以更好地理解动脉粥样硬化的发展过程，进一步推动该疾病的防治工作。
随着技术的不断进步，相信在不久的将来，动脉粥样硬化的造模方法将会得到进一步的发展和应用。
1.2 文章结构文章结构是指文章的组织框架和布局方式，它对于文章的整体逻辑和内容的呈现非常重要。
本文将分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分将提供一些背景信息和引出主题。
在概述中，将简要介绍动脉粥样硬化的基本概念和病因，引起读者对这一疾病的兴趣。
接着，在文章结构的第二小节中，将详细描述本文的结构和内容安排，以帮助读者更好地理解文章的整体布局。
最后，明确本文的目的，即什么是动脉粥样硬化造模方法，为什么研究这个方法的重要性。
正文部分将对动脉粥样硬化造模方法进行详细讨论。
瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉SR—AⅠ表达的影响
瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠主动脉SR—AⅠ表达的影响目的探讨瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化以及主动脉AⅠ型清道夫受体（SR-AⅠ）表达的影响。
研究瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）降脂外的可能机制。
方法20只6 w龄雄性ApoE基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组、瑞舒伐他汀组，高脂饮食喂养13 w；10只野生雄性小鼠作为正常对照组，正常饮食喂养13 w。
13 w后处死小鼠后取主动脉，用10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色及SR-AⅠ免疫组织化学染色；另一部分标本-80℃保存，提起总蛋白和mRNA，并做Western Blot 和RT-PCR检测。
观察主动脉血管壁形态学变化，定性和定量分析主动脉组织清道夫受体1（SR-AⅠ）表达强度变化。
结果和正常对照组相比，高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重，主动脉SR-AⅠ蛋白和mRNA的表达均明显增加；和高脂模型组比较，瑞舒伐他汀组主动脉粥样硬化病变程度减轻，SR-AⅠ蛋白和mRNA的表达均减少。
结论瑞舒伐他汀可减轻主动脉粥样硬化病变程度并可减少主动脉SR-AⅠ的表达；瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化的降脂外作用可能与抑制主动脉SR-AⅠ的表达有关。
标签：瑞舒伐他汀；ApoE基因缺陷小鼠；动脉粥样硬化；AⅠ型清道夫受体目前他汀类药物已被公认为具有抗动脉粥样硬化作用，越来越多的研究表明它在抗动脉粥样硬化的形成和发展方面，除了降脂作用外还有很多调脂外的抗动脉粥样硬化机制，而SR-AI在动脉粥样硬化的形成中起着重要的作用，本实验通过研究瑞舒伐他汀对主动脉SR-AI表达的影响，探讨其调脂外的抗动脉粥样硬化机制。
1资料与方法1.1动物健康野生型雄性小鼠10只、ApoE基因缺陷雄性小鼠20只，体重18.5～21.2 g/只，购自南京医科大学实验动物中心。
1.2药物瑞舒伐他汀，商品名可定，由阿斯利康制药有限公司提供。
1.3饲料基础饲料及高脂饲料均由南京医科大学实验动物饲料厂提供。
动脉粥样硬化模型小鼠心脏中 Movat染色技术的应用
动脉粥样硬化模型小鼠心脏中 Movat染色技术的应用郭静;孙维梁;于长安;潘琳【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2015(27)14【摘要】目的：：ApoE基因敲除小鼠为目前研究动脉粥样硬化的常用模型之一，其在高脂饲养下可加速形成主动脉粥样硬化斑块。
动脉粥样硬化的病灶成分有平滑肌细胞、泡沫细胞、胆固醇结晶、胶原纤维、弹力纤维和蛋白聚糖。
Movat染色技术可以在一张切片上直观显示出这几种成分的病理变化，规范和细化的实验操作步骤可以保证染色结果的一致性，为动脉粥样硬化的深入研究提供清晰可靠的实验依据，从而更客观的评估实验结果。
方法：ApoE基因敲除小鼠，雄性70只随机分为8组：ApoE空白组，阳性对照药组，治疗药物A高、中、低剂量组，治疗药物B高、中、低剂量组，以及6只C57小鼠对照组。
高脂饲养26周后，采血后处死。
取心脏，石蜡包埋后进行定位切片。
分批进行染色，染色过程中摸索和细化了染液配置、染色温度、染色时间等条件，规范实验操作。
成片后进行组织病理学观察，并对胶原纤维、弹力纤维、蛋白聚糖、泡沫细胞等进行定性和定量分析。
结果：通过试验建立了细化、规范化的Movat染色操作流程。
光镜下观察染色结果可见各结构成分着色分明：胶原纤维和弹力纤维分别为黄色和黑色，蛋白聚糖呈绿色，泡沫细胞呈淡紫色，心肌平滑肌呈红色。
主动脉粥样硬化斑块病灶部位结构清晰，病理表现为血管平滑肌增生，胶原纤维、平滑肌细胞和蛋白聚糖形成纤维帽，纤维帽下泡沫细胞形成并向下延伸，脂质大量沉积，弹力纤维断裂。
与空白组和阳性对照组相比，治疗药物A和B均对病症的严重程度和病程进展有一定的治疗效果。
结论：在本实验中对Movat染色的染液配置、染色时间、染色温度等进行细化和调整，为实验操作流程的规范化提供依据。
在保证了实验统一性的基础上，可客观评估药物对动脉粥样硬化的治疗效果，同时因粥样斑块各结构成分颜色分明，利于镜下成像鉴别，可对各成分进行定量统计分析，为实验结果提供了可靠的实验数据。
黄芩苷治疗小鼠动脉粥样硬化模型的作用与机制
对照组
灌胃 4 周
生理 盐水
模型组
生理 盐水
阿托伐他汀组 黄芩苷低剂量组 黄芩苷中剂量组
高脂饲料喂养 12 周，用相应试剂灌胃 4周
黄芩苷 高剂量 组
阿托伐他汀 5 mg/(kg·d)
50 mg/(kg·d) 黄芩苷
75 mg/(kg·d) 黄芩苷
100 mg/(kg·d) 黄芩苷
孙治中，男，1995 年生， 河南省周口市人，汉族， 主要从事心血管疾病临床 与研究。
市 510000；2广州中医药大学第一附属医院，广东省广州市 510000)
DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1187
ORCID: 0000-0002-4976-9596(孙治中)
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基于核因子 κB 通路调控炎症反应探讨黄芩苷抗动脉粥样硬化的机制 雄性 ApoE-/-小鼠 n=10
摘要 背景：现代实验室及临床研究表明，黄芩苷可通过抗氧化应激、抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移等多途径发 挥抗动脉粥样硬化效应，但其作用机制尚不明确。 目的：观察黄芩苷对动脉粥样硬化小鼠血脂、一氧化氮及核因子 κB 与其下游炎症因子水平的影响。 方法：将 60 只雄性 ApoE-/-小鼠随机分为 5 组，每组 10 只：对照组给予普通饲料喂养，其余 5 组给予高脂 饲料喂养 12 周，建立动脉粥样硬化模型；随后对照组、模型组灌胃给予生理盐水，阿托伐他汀组灌胃给予 阿托伐他汀 5 mg/(kg•d)，黄芩苷低、中、高剂量组分别灌胃给予 50，75，100 mg/(kg•d)黄芩苷。连续给 药 4 周后，采用全自动生化仪测定血脂水平，油红 O 染色观察主动脉斑块变化，ELISA 法检测血清炎症因 子水平，Western blot 检测主动脉中核因子 κB p65、血管细胞黏附分子 1 蛋白表达，硝酸酶还原法测量主 动脉一氧化氮水平，实时荧光定量 RT-PCR 检测主动脉组织核因子 κB p65、血管细胞黏附分子 1、肿瘤坏 死因子 αmRNA 的表达。 结果与结论：①与对照组比较，模型组总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平升高(P < 0.05)，高密度脂 蛋白水平降低(P < 0.05)，主动脉内膜厚度与斑块截面积增加(P < 0.05)，炎症因子肿瘤坏死因子 α、白细胞 介素 1 水平升高(P < 0.05)，NO 水平降低(P <0.05)，核因子 κB p65、血管细胞黏附分子 1 蛋白表达升高 (P < 0.05)，核因子 κB p65、血管细胞黏附分子 1、肿瘤坏死因子 α mRNA 表达升高(P < 0.05)；②与模型 组比较，阿托伐他汀组及黄芩苷低、中、高剂量组血脂水平明显改善(P < 0.05)，炎症因子水平降低(P < 0.05)， NO 水平升高(P < 0.05)，主动脉内膜厚度与斑块截面积减少，核因子 κB p65、血管细胞黏附分子 1 蛋白表 达降低(P < 0.05)，核因子 κB p65、血管细胞黏附分子 1、肿瘤坏死因子 α mRNA 表达降低(P < 0.05)，其 中黄芩苷的改善作用存在剂量依赖性；③与阿托伐他汀组比较，黄芩苷高剂量组总胆固醇、白细胞介素 1、 血管细胞黏附分子 1 蛋白及基因表达降低(P < 0.05)，NO 水平升高(P < 0.05)；④结果表明，黄芩苷可能通 过改善血脂与抑制核因子 κB 炎症通路等途径对抗动脉粥样硬化形成。 关键词： 黄芩苷；动脉粥样硬化；核因子 κB；炎症因子；血管细胞黏附分子 1；肿瘤坏死因子 α
金属硫蛋白对ApoE基因缺陷小鼠血脂、动脉粥样硬化及主动脉SR—AI表达的影响
Ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｍｅ ｔ ａ ｌ ｌ ｏ ｔ ｈ ｉ ｏ ｎ ｅ ｉ ｎ ｏ ｎ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｌ ｉ ｐ ｉ ｄ ｓ ， ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ Ｓ Ｒ— Ａ ｌ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ
肌酸磷酸激酶指标与高脂模型组相 比 Ｐ均 ＞ ０ ． ０ ５ 。与正常对照组相 比， 高脂模 型组 主动 脉粥样硬化病变 程度 明显 加重 ， 主动脉壁 Ｓ Ｒ — Ａ Ｉ 蛋 白和 ｍＲ Ｎ Ａ表达均 明显增加 （ Ｐ均 ＜ ０ ． ０ ５ ） ； 与 高脂模 型组相 比， 金属硫 蛋 白组 主动脉粥
样硬化程度减轻 ， Ｓ Ｒ — Ａ Ｉ 蛋 白和 ｍ Ｒ Ｎ Ａ的表达均 降低 （ Ｐ均 ＜０ ． ０ ５ ） 。结论 金属硫 蛋 白对 Ａ ｐ ｏ Ｅ基 因缺 陷小 鼠血
脂无 明显影 响 ， 但可降低其主动脉壁 Ｓ Ｒ — Ａ Ｉ 蛋 白和 ｍ Ｒ Ｎ Ａ， 降低粥样硬化病变程度 。 关键 词 ： 金属硫蛋 白； Ａ ｐ ｏ Ｅ基 因缺陷小 鼠； 动脉粥样硬化 ； Ａ Ｉ型清 道夫受体
山东 医药 ２ ０ １ ３年第 ５ ３卷 第 １ ４期
金 属 硫 蛋 白对 Ａ ｐ ｏ Ｅ基 因缺 陷小 鼠血 脂 、 动 脉 粥 样 硬 化 及 主动 脉 Ｓ Ｒ ． Ａ Ｉ 表 达 的影 响
朱 中生 。 王海燕 ， 王登 峰 ， 鲁亚 丽 （ １徐 州 市第一人 民医院 ， 江苏徐 州 ２ ２ １ ０ ０ ２； ２南京 医科 大 学附属 南京 第一 医院 ）
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ２ — ２ ６ ６ Ｘ ． ２ ０ １ ３ ． １ ４ ． ０ １ １
巨噬细胞极化与动脉粥样硬化斑块稳定性的研究进展
巨噬细胞极化与动脉粥样硬化斑块稳定性的研究进展①刘理谢燕飞余军（江西中医药大学医学转化中心，南昌 330004）中图分类号R392.12 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2023）10-2115-07［摘要］动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，其中粥样斑块的形成与演变直接影响疾病进程。
斑块中纤维帽变薄、脂核区增大、胶原降解酶增多等都会影响斑块稳定性，导致斑块破裂，并进一步形成血栓，最终引发一系列心血管疾病。
巨噬细胞泡沫化后构成粥样斑块中的重要成分。
近年研究发现巨噬细胞不同表型占比影响斑块稳定性。
本文就巨噬细胞表型、巨噬细胞极化对斑块稳定性的影响及相关机制进行综述。
［关键词］巨噬细胞；极化；斑块稳定性Research progress on macrophage polarization and atherosclerotic plaque stabilityLIU Li，XIE Yanfei，YU Jun. Center Office of Translational Medicine，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004， China［Abstract］Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease in which formation and evolution of atherosclerotic plaques directly affect progression of disease. There are many factors that affect stability of plaques such as thinning of fibrous cap， enlargement of lipid nucleus and increase of collagenase， which can lead to plaque rupture and formation of thrombus and ultimately lead to a series of cardiovascular diseases. Macrophage foam constitutes an important component in atheromatous plaques. In recent years， studies have found that proportions of macrophages with different phenotypes affect stability of plaque. This article reviews relationship between macrophage phenotypes， polarization and plaque stability and related mechanisms.［Key words］Macrophages；Polarization；Plaque stability动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，其主要病变表现为部分动脉脂质沉积，并伴有平滑肌细胞和纤维基质增生，逐渐发展为动脉粥样硬化斑块，斑块破裂往往伴随纤维帽变薄、脂质池增大、炎症活动增加、蛋白水解酶含量增加等现象［1］。
超高频超声成像评估动脉粥样硬化小鼠升主动脉弹性属性
【关键词】 超声检查 ；动脉粥样硬化 ；主动脉 ；弹性
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａｏｒｔａ ｅｌａｓｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｂｙ ｕｌｔｒａ‐ｈｉｇｈ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｌ ｉｕ Ｙ ａ ，Ｗ ａｎｇ Ｊｕｎｌｉ ，Ｚｈａｎｇ Ｊｕｎ ，Ｌ ｉｕ Ｙ ａｎｉ ，Ｄｅｎｇ Ｙ ｏｕｂｉｎ ．Ｄｅｐ ａｒｔｍｅｎｔ ｏ ｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ， Ｔｏｎｇ ｊ ｉ Ｈ ｏｓ ｐ ｉｔａｌ ，Ｔｏｎｇ ｊ ｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ， Ｈ ｕａｚ ｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｉｓｔｙ ｏ ｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，Ｗ ｕｈａｎ ４３００３０ ，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ ：Ｌ ｉｕ Ｙ ａｎｉ ，Ｅｍａｉｌ ：ｙ ａｎｉ ．ｌｉｕ＠ １６３ ．ｃｏｍ
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ApoE—／—小鼠动脉粥样硬化模型的建立摘要：ApoE-/-基因敲除小鼠（ApoE-/-）经含有21%脂肪和0.15%胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂胆固醇水平检测，以及整体主动脉油红0染色与主动脉根部病理切片油红0染色等动脉粥样硬化病理分析。
结果显示经过高脂诱导的ApoE-/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE-/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高（P＜0.05）；低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；高脂诱导ApoE-/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65%，显著高于ApoE-/-小鼠的正常饮食组（21%）（P＜0.05），同时主动脉根部的血管壁明显增厚，管腔变窄。
实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导，成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠，可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。
关键词：ApoE-/- 小鼠；动脉粥样硬化；胆固醇；血脂；主动脉中图分类号：R394 文献标识码：A 文章编号：1007-7847（2015）02-0141-04The Establishment of Atherosclerosis Model in ApoE-/- MiceOU Hai-long，ZHANG Li-lin，HE Xiao-lan，LI Hong-mei，LEI Ting-wen （Department of Biochemistry and Molecular Biology，Guiyang Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China）Abstract ：The ApoE gene knockout mice （ApoE-/-）were fed with a high-fat （HF）diet containing 21% fat and 0.15% cholesterol for 12 weeks to establish atherosclerosis model. After diet induction，the ApoE-/- mice were sacrificed and plasma total cholesterol （TC），triglyceride （TG），low -density lipoprotein -cholesterol （LDI-C）and high-density lipoprotein-cholesterol （HDL-C）levels were measured. The whole aortas and sequential sections of the aortic root were stained with oil red 0. Results showed that the plasma levels of TC and TG from HF diet induced ApoE-/- mice were both dramatically higher than normal diet（ND）-fed ApoE-/- mice as well as wild-type mice fed with normal diet or HF diet （P <0.05）. The contents of LDL-cholesterol in plasma were elevated by three-fold compared with wild-type （ND and HFD）. Atherosclerotic lesion sizes were significantly increased in whole aorta （65%）as compared with normal diet ApoE-/-mice （21%）. Similar result was obtained from cross -sections of the aortic root analysis. The results demonstrated that HF diet treatment greatly enhanced atherosclerosis development in ApoE-/-mice. The establishment of atherosclerosis model mice provides a valuable tool for drug screen，gene therapy and even in vivo mechanism analysis in atherosclerosis disease.Key words ：ApoE-/-mice；atherosclerosis；cholesterol；lipoprotein；aorta（Life Science Research，2015，19（2）：141 ?144）体内的脂类物质代谢异常时，多余的脂质沉积在血管壁上，并逐渐形成斑块，使血管内皮增厚、变硬，是引起动脉粥样硬化（atherosclerosis AS）的重要原因之一。
载脂蛋白E（apo；ipoprotein E，apoE）主要存在于乳糜微粒（chylomicrom，CM）、极低密度脂蛋白（verylowdesitylipoprotein，LDL）等多种血浆脂蛋白中，可介导脂蛋白残粒的摄取，维持血浆胆固醇的平衡、促进泡沫细胞中胆固醇的外流以及具有抗氧化和消炎等作用，该基因缺陷将使体内脂代谢发生紊乱。
ApoE基因敲除的纯合小鼠（ApoE-/-）可正常存活和繁殖，当给予适当的高脂饮食时，可导致各种高脂蛋白血症[1.2]，是动脉硬化研究的常用工具。
本研究以C57BL/6纯系的ApoE-/-小鼠为材料，通过高脂饲料喂养，成功诱导其形成动脉粥样硬化病变小鼠模型，该模型可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的试验材料。
1材料与方法1.1试剂和仪器体视显微镜（江南永新，南京），倒置显微镜（TS100F，Nikon公司，日本），冰冻切片机（CM1850，Leica公司，德国）；小鼠基础饲料由贵阳医学院动物中心提供；尹红、苏木素购自北京赛弛生物公司；油红0购自北京鼎国生物公司；低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）检测试剂盒购自南京建成生物公司；其余试剂均为国产分析纯。
1.2试验动物C57BL/6纯系背景的载脂蛋白E基因敲除小鼠（ApoE-/-）购自南京大学模式动物研究所，引种协议[2012]470号。
动物饲养环境条件为室温20-25℃，相对湿度40%～70%。
对6周龄左右的雄性（ApoE-/-小鼠（n=8）进行高脂肪饲料喂养（21%脂肪和0.15%胆固醇），喂食12周之后，对体重为25?30g的小鼠进行解剖并抽取静脉血用于下一步实验。
1.3血脂水平的检测方法血清总胆固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三月脂（Triglyceride，TG）水平的测定分别采用胆固醇氧化酶法（C0D-PAP）及磷酸甘油氧化酶法（GP0-PAP），最后通过分光光度计在500nm测得吸收值。
低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定方法均按照南京建成试剂盒说明书进行操作。
1.4主动脉整体染色方法小鼠采血后，在麻醉下用PBS进行灌注，分离获得整体主动脉，清除其余脂肪和结缔组织后，用PBS清洗干净，于4%多聚甲醛中固定12h以上，再纵向剖开。
主动脉经70%乙醇中浸泡2min后进行油红0染色30min （用异丙醇配成0.5%的母液，再以3：2的比例稀释成工作液）；70%乙醇漂洗至组织发白，经蒸馏水清洗数次后拍照，并用Image-Pro Plus 6.0.（IPP6.0）软件（Media Cybernetics）对斑块面积进行定量分析。
1.5主动脉根部斑块组织化学分析方法取出心脏固定48h后，从心耳下方切取主动脉根部，再进行蔗糖脱水，0CT （Optimal cutting temperature compound）包埋。
快速冷冻之后从主动脉瓣开始以100μm为间距切取连续5张厚度为8μm的切片。
切片进行油红0染色。
染色方法同1.4。
1.6统计方法实验结果的数据均表达为均数±标准差。
各组数据之间显著性检验用多个样本均数比较及两两比较的t检验分析。
2结果2.1 血脂检测ApoE-/-小鼠在高脂饲料饮食诱导12周后，取静脉血进行TC、TG、LDL-C和HDL-C水平检测。
结果显示经高脂诱导小鼠的TC和TG含量比未经诱导的野生型和ApoE-/--小鼠，以及经高脂诱导的野生型小鼠均显著升高（P＜0.05）（表1），其中比未经诱导ApoE-/-小鼠的TC含量提高了50%。
高脂组ApoE-/-小鼠的LDL-C水平比其他三组对照小鼠也存在不同程度的提高，特别是与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；HDL在体内具有抗动脉粥样硬化作用，其水平与正常饮食的ApoE-/-小鼠相比有显著升高，但与野生型（正常饮食组和高脂组）相比变化相对较小（表1）。
2.2动脉粥样硬化的病理分析对实验小鼠进行解剖，获取主动脉，通过油红0染色的方法确定脂质在整体主动脉壁上的积累程度，结果发现经高脂饲料饮食诱导后ApoE-/-小鼠的主动脉弓、腹主动脉、胸主动脉以及髂总动脉分支处均可见明显的粥样硬化斑块，斑块内的脂质被油红0染成红色，其阳性比例高达65%，比未经诱导处理的同窝出生的小鼠（21%）显著升高（P＜0.05）（图1）。
同时，获取主动脉根部，经冷冻切片后进行油红0染色。
我们发现结果与整体主动脉染色的相似，在经高脂饲料饮食诱导后小鼠中，其主动脉根部的血管壁明显增厚，红色脂质沉积在管壁面上，使管腔狭窄，而未经处理的ApoE-/--小鼠的斑块面积占动脉总面积的比例相对较小（图2）。
3讨论小鼠对胆固醇表现出比人类更强的耐受力，发生动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的进程和病变好发部位与人类也均有一定的差异，所以曾一度被认为不适合作为动脉粥样硬化研究的模式动物[3.4]。
后来人们发现C57BL/6背景的小鼠品系对胆间醇相对较为敏感，特别是Piedrahita等在1992年成功制备出的C57BL/6背景的ApoE基因敲除小鼠，当其给予高脂饮食，较易诱发AS而且病变进程与人类的相似，可发展至平滑肌细胞浸润等中晚期粥样病变[5.6]。