常见猪病PCR检测操作步骤及试剂配制(精)
常见猪病PCR检测操作步骤及试剂配制
一、RNA病毒(蓝耳病、猪瘟、乙脑、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、轮状病毒等
包括病料的处理、RNA的提取、反转录、和PCR扩增、凝胶电泳四个步骤。
1、病料的处理
取组织病料约2克,加入4-5毫升灭菌的PBS或者生理盐水,置研磨器(灭菌中研磨或者用剪刀细心剪碎,置-20℃中反复冻融三次,即可用于检测。
2、RNA的提取
1取上述冻融三次的病料约200微升置1.5毫升的离心管中,加入500-600微升TRIzol剧烈振摇30秒后,静置5分钟后,再次剧烈振摇30秒后,静置5分钟。
2在加入200微升的氯仿,上下颠倒混匀30s,静置5分钟,4℃ 12000g 离心15 min。
离心完毕后,取上清约400-500微升(注意不要吸到中间层白色物质置新的灭菌好的离心管中,加入等体积的异丙醇,颠倒数次后(不可剧烈震动静置10分
钟,4℃12000g离心10 min.可见管底部有少量白色沉淀,倒掉异丙醇,加入1毫升75%的乙醇(DEPC水配制,振摇,将白色沉淀悬浮,4℃7500g离心5 min。弃去上清,干燥沉淀物(将离心管倒置于卫生纸或者其它吸水纸上,室温约5 min即可加入20μLDEPC 水溶解用于RT-PCR,或于-20℃保存备用。
两步法:
1、反转录
在10μL的反转录体系中加入:上述步骤中提取的RNA7μL、5×Buffer 2μL、
0.5μL或者下游引物0.5μL;65℃10分钟, 10 mM dNTP 0.25μL、Oligo (dT
18
迅速放置-20摄氏度冰箱中2分钟,加入M-MLV 100U/μL 0.25μL(反转录酶37℃水浴1h,即可做为PCR扩增的模板,立即用于PCR扩增或置于- 20 ℃保存备用。
2、PCR扩增
设立阳性和阴性对照,阳性对照一般为病毒液,阴性对照用灭菌的双蒸水做为PCR反应模板。
反应总体系为25μL
cDNA 2μL,(模板
25mmol/L Mg2+ 1.5μL,
2.5mmol/L dNTPs 2.0μL,
10× Mg2+ free PCR Buffer 2.5μL,
20mmol/ L上下游引物各1μL,
Taq DNA聚合酶(5U/μL0.2μL
无菌双蒸水补至25.0μL。
PCR反应条件为:94℃预变性3 min;94℃ 45s,56℃ 45s,72℃ 45s,共进行36个循环;最后72℃延伸10min。(根据不同的病毒设定时间和温度
一步法:采用的是TaKaRa 的PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2试剂盒在25uL反应总体系:
<1> PrimeScript 1 Step Enzyme Mix , 1uL
<2> 2 × 1 Step Buffer , 12.5uL
O ,6.5ul
<3> RNase Free dH
2
<4> 20mmol/ L上下游引物各1μL,
<5> 提取的RNA模板:3ul
反应条件:50℃反转录30min,94℃预变性2min,进行30个循环(94℃变性1min, 56℃退火1min,72℃延伸1min, 最后72℃延伸10min。扩增完的PCR产物放4℃保存。
3、凝胶电泳
1%琼脂糖凝胶的配制
0.25琼脂糖+25毫升TAE+1.25微升Goidview放入锥形瓶中,置烤箱中约1分钟沸腾后,摇匀,放置室外,约20-30分钟后倒入板中,约30-45分钟凝固后即可使用。点样:将凝胶放入电泳槽中,DL2000的DNA Marker3-5微升,其它样品5微升+0.5-1微升的londingbuffer混合后点样,开启电泳仪,电压80-150V。
4、PCR 产物回收纯化
取20μL PCR产物与4μL 6×Loading Buffer混匀,1%琼脂糖凝胶(GoldView
0.5ug/ml电泳。电泳结束后,在紫外灯下切出含有目的DNA条带的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面的电泳缓冲液,此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的多余凝胶以减小凝胶体积,从而提高DNA的回收产率。之后按照胶回收试剂盒产品说明书回收目的片段,并取1μL回收产物点样观察回收效果。
纯化步骤如下:
(1 称量胶块重量,计算胶块体积,按照1mg等于1μL计算胶块体积;
(2 向胶块中加入3倍胶块体积的融化液DR-I Buffer;
(3 均匀混合后65℃水浴10 min,其间摇晃3-5次使胶块完全溶化;
(4 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer 0.5倍体积量的DR-II Buffer,均匀混合;
(5 转移液体至Spin column中,12,000 rpm 离心1min,弃滤液(可将滤出液体回收再离心一次以提高DNA回收率;
(6 将500ul 的RinseA加入Spin column 中,12,000 rpm 离心30s,弃滤液;
(7 将700 ul 的Rinse B加入Spin column 中,静置2-3 min,12,000 rpm 离心30s,弃滤液;
(8 重复上一步操作;
(9 10,000 rpm,离心1min,弃滤液;
(10 将Spin column 安置于一灭菌的1.5ml Eppendorf管中,在滤膜中央处加入灭菌双蒸水或者试剂盒中的洗脱缓冲液20-30微升,室温静置1-2 min; (11 12,000 rpm 离心1min,收集滤出液体再离心洗脱一次,即得到纯化的PCR 产物。
注:PCR纯化产物可直接用于测序,如用PCR回收产物直接测序时,回收第10步中不可用洗脱缓冲液,只可用双蒸水。
5、DNA病毒(PCV2、伪狂犬病毒、细小病毒等
包括病料处理、DNA的提取和PCR扩增、凝胶电泳四个步骤。
1、病料处理同上
2、DNA的提取
1取处理好的病料约1毫升置1.5毫升的离心管中,12000 rpm/min离心五分
钟,取上清液(500-700μl.缴入等体积的氯仿剧烈振摇静止5分钟,12000 rpm 离心10分钟,
2去上清至新的离心管中,加入终浓度为分别为10% 的SDS(约50微升和
50μg/ml蛋白酶K(约10微升,55℃作用1.5h-2h(提前准备好水浴锅。
3加入200uL Tris饱和酚,振荡混匀,4℃,12000 rpm/min离心15min;
4取上清液,于一个新的离心管中,加入Tris饱和酚和氯仿各200uL,充分混
匀, 12000 rpm/min离心15min;
5取上清于一新的离心管中,加入200uL氯仿,充分混匀,12000 rpm/min离
心15min;
6去上清于新的离心管中,加入2倍体积无水乙醇,-20℃放置20min, 12000
rpm/min离心15min,弃上清。(无水乙醇提前冰浴
7加入70%的乙醇(提前放入冰箱冲洗沉淀表面和管壁,弃乙醇,晾干。(若
无沉淀可以离心7500 rpm/min离心5min;
8最后加入20μl 无菌ddH2O溶解,-20℃保存备用。
3、PCR扩增
设立阳性和阴性对照,阳性对照一般为病毒液,阴性对照用灭菌的双蒸水做为PCR反应模板。
反应总体系为25μL
cDNA 2μL,(模板
25mmol/L Mg2+ 1.5μL,
2.5mmol/L dNTPs 2.0μL,
10× Mg2+ free PCR Buffer 2.5μL,
20mmol/ L上下游引物各1μL,
Taq DNA聚合酶(5U/μL0.2μL
无菌双蒸水补至25.0μL。
PCR反应条件为:94℃预变性3 min;94℃ 45s,56℃ 45s,72℃ 45s,共进行36个循环;最后72℃延伸10min。(根据不同的病毒设定时间和温度
3、凝胶电泳同上
4、PCR产物的纯化回收以及测序同上。
试剂配制
1、DEPC水的配制
向灭菌的玻璃瓶中加入超纯水,然后加入DEPC至终浓度为0.01%(V/V过夜搅拌(放置摇床中,高压灭菌即可。
2、病料处理用PBS的配制
NaCl: 8.00g
KCl: 0.20g
Na
2HPO
4
1.42 g
KH
2PO
4
:0.27g
向烧杯中加入800毫升去离子水,充分搅拌,用浓盐酸调节PH至7.4,加入去离子水定容至1升,高压灭菌后即可使用。
1、TAE电泳液
150×TAE贮存液:Tris242g,冰乙酸28.5 ml和Na
2EDTA.2H
2
O 37.2混合,向
烧杯中加入800毫升去离子水,充分搅拌,加入57.1毫升醋酸,充分搅拌,加入去离子水定容至1升,室温保存。
(21×TAE工作液:50×TAE贮存液20 ml,加纯水定容至1000 ml。
4、10%SDS:10gSDS置于100-200ml烧杯中,加入80ml的去离子水,68℃溶解,调PH7.2,早定容100ml.
5、dNTP Mixture、ExTaqDNA聚合酶、TRIZOL等试剂均购自Invitrogen公司; M-MLV 购自Promega公司。DL2000的DNA Marker , 一步法的PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2试剂盒
购自TaKaRa公司。Tris饱和酚,购自Solarbio。
检测用的引物:
1.蓝耳:
上游:JN1 5 CGGTTTTGATGGGCGACA 3
下游:JN2 5 TGCAGGCGTGCGAGGTAA 3
退火温度:53-56℃
检测缺失毒株用
2.猪瘟
<1>检测疫苗毒用
上游:HCV1 5AAACGGAGGGACTAGCCGT 3
下游:HCV2 5GATTCAACTCCATGTGCCATG3
退火温度:56℃
<2>检测野毒
上游:CSFV1 5-ACCTAATCTTACACTATGCAATC-3
下游:CSFV2 5-CTGGACTAGTCCCATCAAAT-3
退火温度:51-54 ℃
3.传染性胃肠炎
上游:TGEV1 5-GATGGCGACCAGATAGAAGT-3
下游:TGEV2 5-GCAATAGGGTTGCTTGTACC-3
退火温度:51 ℃
4.流行性腹泻
上游:PEDV1 5- GAAATAACCAGGGTCGTGGA-3
下游:PEDV2 5-GCTCACGAACAGCCACATTA-3
退火温度:51 ℃
5.乙脑
上游:JE -1 5 AACAGCATGCAAATCGAAGAC3
下游:JE- 2 5 CCAGAAACATCACCAGAAGG3
退火温度:55 ℃
6.伪狂犬
上游:PRV-gB-F 5’CGTCGAAGTACACGTACCCG3’
下游:PRV-gB-R 5’CTCGAGCGAGCTGCAGAACAAG3' 退火温度:55 ℃
7.细小
上游:PPV-F 5’CCCAGAGGCAACAGCAATTAGG 3’下游:PPV-R
5’CGAGATCTTGTGAAGATGTGG3’
退火温度55℃
8.圆环
上游:PCV2-F 5’CAACAGCATGCCCAGCAAGAAGAAT3’下游:PCV2-R 5’TAGATTACACAGTCTCAGTAG3’
退火温度55℃
试验检测项目及试验检测频率规定明细表
省道二桓线三道沟至下套段边防公路建设项目 试验检测项目及试验检测频率规定明细表 试验说明 一、试验检测频率应严格按照要求的最小频率及标准进行，当不足一次时，最少进行试验一次，具体说明如下： 1、每批货：钢筋、钢丝、钢绞线、预应力粗钢筋、冷拔低碳钢筋，应为同品种、同等级、同一截面、同一炉号、在同一时间交货，钢筋重量60吨为一批，冷拉钢筋20吨为一批。沥青为同一容器，重量在100吨以下。 2、每批号：同一厂家、同品质、同编号、同生产日期水泥为200吨，不足200吨按一批对待。石灰为200吨，粉煤灰为1000立方米。 3、每料源：粗细骨料为同一粒径等级、同一厂家，结构物为100立方米以下，路面为1000立方米以下。 4、每级土壤：为同一地点、同一类别，且数量在5000立方米或以下。 5、同批构件：系指一个或多个构件，用同一级别、同一材料、同一配合比混凝土预制的构件。 二、根据《公路工程施工监理规范》和有关管理办法的规定，将试验检测工作分为承包人试验和监理工程师试验两大类。 （一）承包人试验应包括验证试验、工艺试验、见证试验、自检试验、标准试验和委托试验。 1、自检试验：是承包人按要求频率和标准进行最小频率的试验。
2、验证试验：是对材料或商品构件进行预先鉴定，以决定是否可以用于工程。 3、工艺试验：是根据技术规范的规定，在施工之前对路基路面及其他需要通过预先试验方能施工的分项工程预先进行工艺试验，然后依其试验结果全面指导施工。主要包括：（1）掺灰土方路基施工（2）路面各结构层施工（3）桥涵工程特殊施工工艺以及其它工程。 4、见证试验：是指在承包单位按规定自检的基础上，在建设单位，监理单位的试验检测人员的见证下，由施工人员在现场取样，送至指定单位进行试验。见证试验范围：（1）用于承重结构的混凝土、砂浆试件试验。（2）用于结构工程的主要受力钢筋。（3）稳定粒料的无侧限抗压强度。（4）沥青技术指标，沥青混凝土马歇尔稳定度试验。（5）土基的最大干密度试验。（6）监理工程师和建设单位认为必要的其它试验项目，见证试验的频率时承包单位自检频率的10%。但对下列项目应按承包人频率100%进行见证取样送检试验：半刚性基层、底基层强度、水泥混凝土强度、结构混凝土强度以及重要施工部位。 5、标准试验：施工前应对工程控制永的标准数据进行试验确定，为标准试验，包括材料最大干密度确定（标准击实）、混合料的掺配比例的确定等等（配比）。标准试验是对各项工程的标准指标进行施工前的数据采集，它是控制和指导施工的科学依据，包括各项标准击实验、寂寥的标准级配试验、混合料的配合比试验、标准强度试验等。应按以下要求进行：1）试验监理工程师应派出试验监理人员参加承包人试验的全过程，并进行有效的现场监督检查。2）在各项工程开工前合同规定或合理的时间内，应由承包人先完成标准试验，试验报告及试验材料提交监理工程师审查批准。3）监理工程师应在承包人进行标准试验的同时或以后，平行进行复核（对比）试验，必要时以便确定或调整承包人标准试验的参数或指标。 6、委托试验：承包人不具备试验检测条件或未经主管部门批准同一进行试验检测项目，承包人可委托有资质的试验室进行，试验结果作为自检试验出现。
几种常见猪病的治疗及预防
几种常见猪病的治疗及预防 1仔猪圆环病毒病及继发感染 仔猪圆环病毒病是由猪圆环病毒（PCV）引起的一系列疾病的总称。该病发生时，不仅可以单独感染造成仔猪损失，而且多以混合感染其他病原形式引起感染猪场更为严重的 损失，如与副猪嗜血杆菌（HPS）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等。 随着气温逐步升高，在一些猪场中，PCV及其继发感染的病例增多，发病猪场主要集中在山东地区，这些猪场的母猪存栏规模在50～700头，发病猪分布于产房、保育和育肥前期三个阶段，从2014年2月底至3月初开始出现明显的临床症状。据统计，发病率在40%～60%、死亡率为70%～80%，给猪场造成了严重损失。 1.1临床及剖检症状 发病猪外观整体呈皮肤苍白、消瘦、被毛粗糙、脊骨突出、运动无力（图1）。部分产房仔猪排黄色稀粪；有的猪有神经症状，侧卧于地；有的猪场仔猪眼结膜有明显炎症（图2）。一般从发病到死亡可持续7～20天，也有一些猪可耐过，但后期生长基本停滞，成为僵猪。 将猪场中的部分发病猪宰杀后，剖检观察其内脏变化。主要表现为淋巴结特别是腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结肿
胀（图3），有的猪支气管淋巴结肿胀出血；肺间质增宽，肺小叶间有胶冻样液体（图4），弹性增大，有的猪肺脏与胸壁粘连；心包积液增多（图5），有的浑浊，严重者心脏被厚厚的纤维素性渗出物附着；有的脾脏全部出血、肿胀，表面有凸出的白色小颗粒和黑色梗死灶（图6），也有的仅呈轻微出血变化；肾脏呈区域性弥漫性出血。部分猪在剖检时，还发现有肠壁变薄、透明的现象（产房腹泻猪多见）；关节液增多，呈黄色，略带暗血（神经症状猪多见）等。 为更好地进行确诊，剖检过程中取有明显病变的肝、脾、肾、肺等组织，送实验室进行病原分子检测。共送检病料17份，主要进行猪瘟（CSF）、PC、PRRS、HPS和链球菌病（SS）等病原的检测。 1.2诊断结果 通过对发病猪临床与剖检症状的观察，以及对猪场技术人员有关发病情况的询问，怀疑导致这些猪场发病的主要病原为PCV，有的还存在同其他病原引发的混合感染，如PRRS和HPS。最终的实验室检测结果也证实了前期的初步诊断，即发病场中100%有PCV感染，57.3%有HPS和PV 的混合感染，61.5%有PRRSV和PV的混合感染，5.7%有CSFV和PV的混合感染，也有一些场存在三种病原的混合感染，没有发现链球菌或四种病原混合感染的猪场。
猪病现场解剖识别要点汇总讲课讲稿
猪病现场解剖识别要 点汇总
猪病现场解剖识别要点汇总 现代猪场经营管理强调： 1、重视规划设计； 2、选准饲养模式； 3、规范消毒； 4、适度免疫； 5、淡化治疗； 6、科学管理。 既然投资养猪了，尽量让自己成为养猪和管理的高手，而不是应对猪病的专家，应对猪病这些事就让给专家做吧！ 但就目前中国养猪的现状，规划设计落后的猪场怎么办？养殖经验缺乏怎么办？还得每个场至少有一个懂得点兽医知识的人，单纯依靠高校或者企业的实验室做病毒分离或者抗体监测是不够的，必要的时候应当在指定隔离区域做一些病理解剖，从而确定疾病的大致方向。 现场病理解剖概要: 一>、外观 1、消瘦：
①缓慢性消瘦---圆环病毒病 ②快速消瘦，一般有肌肉的感觉---伪狂犬 ③肥肥壮壮的猪突然死掉---细菌感染 ④神经症状、败血进行性消瘦-------李氏杆菌病 2、具有皮肤红斑的热型疫病的鉴别 ①咽部明显肿大呈急性经过-----猪肺疫 ②咽部明显肿大呈慢性经过-----猪炭疽 ③没有咽部肿大各种年龄发病，红斑指压不褪色-----猪瘟 ④没有咽部肿大6月龄易发病，红斑指压不褪色，红斑不凸出皮肤界限不清楚----猪弓形体病 ⑤没有咽部肿大6月龄易发病，红斑指压褪色，红斑凸出皮肤，有菱型、方形等界线明显----猪丹毒 ⑥没有咽部肿胀多发生于仔猪肢体末梢、跛行、神经症状-----猪链球菌 ⑦没有咽部肿胀多发生于仔猪肢体、末梢及皮肤湿疹、腹泻-----猪副伤寒 3、具有明显呼吸症状的疫病的鉴别 ①体温正常呼吸困难，鼻无病变-----猪喘气病 ②体温正常呼吸困难，鼻有病变-----猪萎缩性鼻炎 ③体温升高呈流行性经过不良-----猪瘟 ④体温升高呈流行性经过良性------猪流行性感冒
常见猪病治疗方案
常见猪病治疗措施 一、蓝耳病（猪繁殖和呼吸综合症）： 诊断：1、高热，耳蓝； 2、母猪流产.早产.死产； 3、头颈部出血，淤血； 4、消化道、胃出血、坏死；肺出血、坏死、瘀血。 治疗：A、严重者正源聚抗+百特先锋注射； B、大群小柴胡散+替米考星预混剂+多维拌料。 二、猪瘟： 诊断：1、高热，对抗治疗； 2、眼流脓性分泌物； 3、拉干硬粪便，附血丝粘液； 4、死后回盲口附近有“纽扣”状溃疡 治疗：A、全群用猪瘟脾淋苗或细胞苗20-30头份紧急免疫接种； B、严重者正源聚抗+干扰素+百特先锋注射； C、大群抗病毒颗粒+盐酸林可霉素可溶性粉饮水。 三、猪圆环病毒 诊断：1、猪圆环病毒是由猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)引起猪的一种传染病。 2、主要特征为体质下降、消瘦、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、呼吸困难等。 3、仔猪先天性震颤,断奶仔猪多系统衰竭综合症,猪皮炎与肾病综合征,母猪繁殖障 碍。 治疗：A、个别严重者混感专家+正源聚抗注射 B、大群盐酸林可霉素可溶性粉+抗病毒颗粒饮水 C、小柴胡散+杆呼消拌料 四、口蹄疫 诊断：1、发热； 2、跛行 3、鼻镜、唇、蹄冠部、乳房发生水泡； 4、突死的有“虎斑心”症状。 防治：A、个别严重者正源聚抗+百特先锋注射 B、大群盐酸林可霉素可溶性粉+抗流感颗粒饮水 C、小柴胡散+杆呼消拌料。 五、传染性胃肠炎与流行性腹泻
诊断：体温正常：先呕吐后腹泻，呈喷射状，群发； 治疗：A、严重者痢克沙+干扰素针剂注射； B、苍术香连散拌料+氟苯尼考粉或正大肠杆宁饮水。 六、猪附红细胞体病： 诊断：红皮、高热、黄疸、茶尿、不食； 治疗：A、可使用附弓消、贝尼尔(血虫净)+正源聚抗分开注射 B、大群小柴胡散+30%正大制菌磺或杆呼消拌料 七、弓形虫 诊断：1、病初体温升高到40-42℃,呈稽留热型。 2、多见便秘,有时下痢。 3、呼吸困难,时有咳嗽和呕吐症状；流少量鼻液。 4、体表淋巴结,尤其是腹股沟淋巴结明显肿大。 5、身体下部及耳部出现淤血斑,或有较大面积的发绀。 治疗: A、严重者可使用附弓消+正源聚抗注射。 B、治疗时可用正大制菌磺按治疗量使用，用药一周停一周再用一周。 C、对猫采取措施进行控制,尤其注意对猫粪的处理。 八、猪副猪嗜血杆菌 诊断：1、发烧（40-40.8°） 2、关节肿，疼痛跛行，渐进性消瘦。 3、关节膜、腹膜、心包膜、胸膜炎症变化。 治疗：A、个别严重者强效克咳肌肉注射 B、大群用氟苯尼考粉+杆呼消拌料 九、伪狂犬 诊断：母猪流产、死胎、弱仔，公猪睾丸炎，仔猪神经症状、15-40日龄可大批死亡。治疗：A、全群做好伪狂犬苗，母猪定期防疫。 B、严重者混感专家+附弓消分开注射 C、盐酸林可霉素可溶性粉+抗病毒颗粒饮水。 十、猪流感 诊断：大群大部分迅速发病、体温升至40-42°、咳嗽、眼和鼻流分泌物，死亡率很低。治疗：A、个别严重者正源聚抗+百特先锋注射 B、大群盐酸林可霉素可溶性粉+抗流感颗粒饮水 C、荆防败毒散+杆呼消拌料 十一、猪链球菌 诊断：1、病猪精神不振，减食或不食，体温常升高至41℃以上，粪便干硬。
常见猪病检测方法
猪病诊断技术规范 一、致病性大肠杆菌的检测 1 引用标准 参考NY/T 555-2002（动物产品大肠杆菌、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法）。 2 范围 适用于猪大肠杆菌病的诊断。 3 检测方法 3.1 材料 3.1.1 营养肉汤 3.1.2 营养琼脂 3.1.3 EMB 3.1.4 TSI 3.1.5 IMViC生化鉴定管 3.1.6 小白鼠 3.2 分离培养 a)将采集的肝、脾、心血或肠内容物等分别接种伊红美兰琼脂平板（同时接种营养肉汤增菌备用），置37 ℃培养18~24 h。 b)观察培养特性，挑取黑色有金属光泽的菌落，用该菌落涂片，革兰氏染色，镜检。 c)如可见到两端钝圆并多以单个存在的革兰氏阴性粗短杆菌，应取5~10个典型菌落再接种于TSI琼脂。 d)同时挑取典型菌落接种营养琼脂，37 ℃培养16~18 h的菌液用于生化特性鉴定。 3.3 生化鉴定 挑取上述菌落纯培养物接种以下生化培养基和乳糖发酵管，(36±1) ℃培养24 h 后观察结果。 3.3.1 靛基质试验： a)滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 mL于靛基质试验培养基中混合，观察结果。- 1 - b)出现红色环的为反应阳性；出现黄色环的为反应阴性。 3.3.2 甲基红（MR）试验 a)滴加甲基红指示剂0.2 mL于MR-VP培养基中混合，观察结果。 b)出现红色为阳性反应；出现黄色为阴性反应。 3.3.3VP试验 a)滴加VP试剂甲液0.2 mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1 mL 混匀，静置，观察结果。 b)在15 min内出现红色的为阳性反应；无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1 h 后再观察一次，出现红色也为阳性反应。
2017年3月补充最新公路工程试验检测项目参数检验频率一览表
附录3 试验检测项目/参数检验频率一览表 说明 1.本附录“工程类别”主要分为路基工程、桥梁工程、隧道工程、路面工程（底基层、基层、沥青面层、水泥混凝土面层）、交通安全设施5类。工地试验室可根据《公路工程质量检验评定标准》(JTG F80/1-2004)（第一册土建工程）工程类别划分对应参照执行。 2.“试验检测项目/参数”列为公路工程工地试验室主要检验或外委的原材料、过程质量控制（不包括已完工程实体质量检验）的常用试验检测参数。 3.“施工检验频率”列主要依据产品质量标准、工程施工技术规范等编写，但部分试验检测参数的施工检验频率无明确规定，本附录将此类参数对应的信息栏用斜体或“/”标注（用斜体字标注的，为检验频率参考值；用“/”标注的，满足项目具体规定即可）；监理抽检频率依据《公路工程施工监理规范》（JTG G10-2006）开展。 4.“依据标准”列由于表格容量限制，只列出了标准（规范）代号，完整的标准（规范）代号、名称详见附录5（《标准（规范、规程）引用一览表》）。 5.本附录可作为工地试验室开展试验检测工作时的技术参考，工地试验室在确定具体检验频率时，还应满足项目招标等合同组成文件有关规定。 6.工地试验室在应用本附录过程中，若有关参数的施工检验频率已有明确规定，应予以执行；当标准规范发生更新时，其相应内容应按最新版本予以调整；当本附录内容与标准（规范）要求有出入时，应以标准（规范）规定为准。
工程类别：路基工程（一）第1页，共1页类别试验检测项目/参数施工检验频率依据标准检验程序备注 原材料检验 土 1.颗粒分析； 2.界限含水率； 3. 最大干密度；4.最佳含水率； 5.CBR 1次/料场/部位（按照路床、 路堤区分） JTG F10-2006 施工单位按规定 频率自检，监理 单位按规定频率 抽检 / 岩石 1.单轴抗压强度1次/料场，有怀疑时随时检测 原地 面土 1.颗粒分析； 2.界限含水率； 3. 最大干密度；4.最佳含水率；5. 天然含水率 至少2处/km，土质变化时， 视具体情况增加 土工 合成 材料 1.抗压强度； 2.延伸率；3梯形 撕裂强度；4.顶破强度；5.厚度； 6.单位面积质量； 7.垂直渗透系 数；8.土工格栅土工网网孔尺寸 1次/批，每10000m2为1批JTG/T D32-2012 施工、监理单位 分别取样并外委 / 过程质量控制 地基承载力必要时JTG D63-2007 施工、监理单位 可共同检验 / 填土天然含水率每天使用前 JTG F10-2006 施工单位按规定 频率自检，监理 单位按规定频率 抽检 / 土方路基压实度 施工过程中每一压实层每 1000m2至少检验2点，不足 1000m2时检验2点必要时根据 需要增加检验点数 结构物台背填土压实度每压实层每50m2不少于1点JTG/T F50-2011 平整度每200m测2处×10尺 JTG F10-2006 土方路基弯沉 每一双车道评定路段（不超过 1km）测定80～100个点 施工、监理单位 可共同检验 / 料源确定1.在选取土场时，应在上述试验检测参数的基础上增加天然稠度、有机质含量及烧失量的检验； 2.每个土场所有试验检测参数检验1次，同时注意膨胀土、失陷性黄土等特殊土的判别和使用； 3.施工单位通过试验选定土场/石场后，监理单位进行验证试验，并根据试验结果确定土场/石场
常见猪病诊断对照表(归纳整理)
猪皮肤病的鉴别诊断表 病毒 病性水真猪丹猪坏死杆渗出表皮脓疱性溃疡性角化 过度 疥癣角化名泡性菌毒痘菌病炎皮炎内芽肿不全 症疾病 矮小牛痘 创伤+ 皮肤擦猪疏螺猪疥 环 病孢子猪丹病葡萄球螨感锌缺 坏死杆伤、S，旋体+ 境、因病毒菌、毒杆毒、菌、莲染+超乏、钙 菌+继hy-icus+ 环死杆脂肪学毛鲜菌猪痘球菌敏反过量 发细菌其它因子菌酸菌病毒应 各种 各种 发14周为小猪、年龄 年 龄，出生各种年 病各种各种出生至急性，4 哺乳仔但也见尤是 哺乳至4 龄尤是种猪年年龄年龄3周龄—12周猪各种年断乳 猪不月龄架子猪 龄为局发性龄的猪猪架 常见 子猪 小点 致大 圆形红 斑， 病 隆起丘斑， 变，脓疱，肉芽隆起的 长方水泡浅表溃皮肤渗黑斑， 病褐色红斑瘀肿，耳红斑，皮屑水泡形肿丘疹疡，褐出，油脂红斑， 变结点，脓部有结薄痂角过黑块， 坏脓疮色硬痂皮，红斑过度 痂，肿痂化 死， 败角化 形成 血症 痂 性边 缘 广泛 耳、 蹄分分布分布面部、小猪广泛颈、 耳、 眼、任何部眼、四肢、 部冠、布，广，广，颊部、分布，大肩、
背、尾 位的感 颈、四 面部、 位 鼻、 常见 肩、 腹部 眼、齿 猪呈局限 背、 部大腿 染伤口 肢、躯 颈部 舌 于耳 背、腹 多见 龈 性 臀 干 后 发 病 高达 高达 不定 高达 10% 率/ 低/ 100%/ 不一定 100% 100%/ /不 100%/ 低/低 低/低 低/低 — 死 无 低 /无 低 不定 定 低 100% 亡 率
病毒 过度 病 性水 真 猪丹 猪 坏死杆 渗出表 脓疱性 溃疡性 角化 疥癣 角化 名 泡性 菌 毒 痘 菌病 皮炎 皮炎 内芽肿 不全 症 疾病 证明 特征 临床 症 剧烈 真菌 性皮 临床症 实验 状、 细菌 骚痒、 诊 孢 肤病 齿伤、 状、细菌 检测日 临 床 室检 组织 细菌学 学、组 耳刮 断 子、 变、 细 细菌学 学、组织 粮 症 状 查 无瘙 菌分 学、 学 织学 物检 血清 查 痒 离 学 玫瑰 疥癣，角 喙食 猪痘， 鉴 糠， 败血 疥癣， 癖，脓 过度 疥 动物 脓疱 化不全， 疥癣， 别 渗出 症， 脓 渗出性 痘，渗 肿，压 角化， 癣 ， 诊 试验 性皮 疱性 性皮 皮炎 面部坏死 出性皮 迫性坏 渗出性 角化 渗出 等 炎 性脓疱性 皮炎 断 炎， 皮炎 皮炎 炎 死，血 性皮 不 全 疥癣 肿 炎 引起猪腹泻的疾病鉴别表 疾 发病年龄 腹泻特征 其他症状 病 呕吐，脱水，发病 传染性 各种猪 淡黄色水样，褐色， 率高，多发见于寒 胃肠炎 恶臭 冷季节，死亡率较 高 大肠杆 菌病（仔 猪脱水，无呕吐， 猪黄痢， 仔猪 黄白色水样，有气泡 尾坏死，典型 全窝 仔猪白 感染 痢） 剖检特点 诊 断 胃有不同内容物，肠 中有黄色褐色液体，荧光抗体法、病原肠血管充血，胃壁出分离、电镜检查血，小肠壁薄 肠充血或不充血，肠 壁轻度水肿，肠扩张 充盈液体、粘液和气 细菌学分离鉴定 仅小肠病变，如小肠
常见猪病的检测引物汇总
田小艳猪流行性腹泻病毒( Porcine epidemic diarrhea virus ,PEDV) 、猪传染性胃肠炎病毒( Porcine t rans2 missible gast roenteritis virus , TGEV) 和猪轮状病毒( Porcine rotavirus , PRV) 是3 种引起猪病毒性腹泻的重要病原 引物设计与合成根据GenBank 中PRV、TGEV 和PEDV 核酸序列分别设计引物: 上游P1 : 5′-AAAGATGCTAGGGACAAAATTG-3′;下游P2 : 5′-TTCAGATTGTGGAGCTATTCCA -3′。 P1/ P2 为PRV 检测引物,扩增VP6 基因片段的309bp 。 上游P3 : 5′-GATGGCGACCAGATAGAAGT -3′ 下游P4 : 5′-GCAATAGGGTTGCTTGTACC -3′。P3/P4 为TGEV 检测引物,扩增N 基因保守片段的612bp 。 上游P5 : 5′-GAAA TAACCA GGGTCGTGGA-3′; 下游P6 : 5′- GCTCACGAACA GCCACA TTA -3′。P5/ P6 为PEDV 检测引物,扩增N 基因保守片段的492 bp 。 张坤,本试验旨在建立能同时检测猪流行性腹泻病毒( PEDV) 、猪传染性胃肠炎病毒( T GEV) 和猪A群轮状病毒( GAR) 的多重RT PCR 检测方法 PEDV P1 5-TTCGGTTCTATTCCCGTTGATG-3 P2 5-CCCATGAAGCACTTTCTCACTATC-3 扩增长度663 TGEV P3 5 TT ACAAACTCGCT AT CGCAT GG3 P4 5 TCTT GTCACAT CACCTTT ACCTGC3 扩增长度528 GAR P5 5 CCCCGGT AT TGAATATACCACAGT3 P6 5 TTT CTGT TGGCCACCCTT TAGT3 扩增长度333 李敬双猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）基因序列及其相关的RT-PCR检测方法 TGEV P1：5′-TTGTCAACACACAAGGGCAAGC-3′ TGEV P2：5′-CAAGTCCAAAAGTGCGATCA CC-3′ PEDV P1：5′- TCGTTTTGGGTGGTTACCTAC-3′ PEDV P2：5′- AGTGGCAAATACATTGGCAGCG-3′ 扩增片段长度TGEV 为426 bp，PEDV 为584 bp。 由大连宝生物公司合成。
猪病现场解剖识别要点汇总
猪病现场解剖识别要点汇总 现代猪场经营管理强调： 1、重视规划设计； 2、选准饲养模式； 3、规范消毒； 4、适度免疫； 5、淡化治疗； 6、科学管理。 既然投资养猪了，尽量让自己成为养猪和管理的高手，而不是应对猪病的专家，应对猪病这些事就让给专家做吧！ 但就目前中国养猪的现状，规划设计落后的猪场怎么办？养殖经验缺乏怎么办？还得每个场至少有一个懂得点兽医知识的人，单纯依靠高校或者企业的实验室做病毒分离或者抗体监测是不够的，必要的时候应当在指定隔离区域做一些病理解剖，从而确定疾病的大致方向。 现场病理解剖概要: 一>、外观 1、消瘦：
①缓慢性消瘦---圆环病毒病 ②快速消瘦，一般有肌肉的感觉---伪狂犬 ③肥肥壮壮的猪突然死掉---细菌感染 ④神经症状、败血进行性消瘦-------李氏杆菌病 2、具有皮肤红斑的热型疫病的鉴别 ①咽部明显肿大呈急性经过-----猪肺疫 ②咽部明显肿大呈慢性经过-----猪炭疽 ③没有咽部肿大各种年龄发病，红斑指压不褪色-----猪瘟 ④没有咽部肿大6月龄易发病，红斑指压不褪色，红斑不凸出皮肤界限不清楚----猪弓形体病 ⑤没有咽部肿大6月龄易发病，红斑指压褪色，红斑凸出皮肤，有菱型、方形等界线明显----猪丹毒 ⑥没有咽部肿胀多发生于仔猪肢体末梢、跛行、神经症状-----猪链球菌 ⑦没有咽部肿胀多发生于仔猪肢体、末梢及皮肤湿疹、腹泻-----猪副伤寒 3、具有明显呼吸症状的疫病的鉴别 ①体温正常呼吸困难，鼻无病变-----猪喘气病 ②体温正常呼吸困难，鼻有病变-----猪萎缩性鼻炎 ③体温升高呈流行性经过不良-----猪瘟 ④体温升高呈流行性经过良性------猪流行性感冒
猪 常 见 疾 病 鉴 别 诊 断 及 防 治 简 表
猪常见疾病鉴别诊断及防治简表（一） 一、常见消化系统传染病 病名病原流行情况临床症状病理变化 仔猪黄痢致病性 大肠杆 菌 发病日龄一般为1-7日龄，新生仔猪24小时 内最易感，潜伏期8-24小时，1-2天内同窝 仔猪几乎全部发病。 最初为突然拉稀，粪便稀薄如水，浆糊状，混有小气泡并带 腥臭味，随后拉稀愈加严重，数分钟拉一次，病猪口渴、脱 水、昏迷死亡 严重脱水，十二指肠粘膜充血、出血，肠内容物黄色或黄红色，空肠、 回肠明显积气，肠腔内充满水样内容物，尾端和后躯常沾有污粪。肠 系膜淋巴结充血、肿大，切面多汁，心、肝、肾变性，有小出血点。 仔猪白痢致病性 大肠杆 菌 多发生于10-30日龄仔猪，各窝与同窝发病先 后均不一致。发病与环境、温度、母乳、饲养 管理条件密切相关。 突然腹泻，排出乳白、灰白、淡黄或黄绿色稀粪，随后腹泻 次数增多，粪便腥臭而稀薄，病猪喂寒，脱水，吃奶次数减 少或不吃。有时见吐奶，除少数日龄小或发病严重的仔猪因 昏迷、虚脱死亡外，一般病情较轻的易自愈，但易形成僵猪。 消瘦、脱水、小肠扩张充气，内含黄白色酸臭稀粪，肠粘膜充血，肠 壁菲薄半透明状，胆囊肿大，肠系膜淋巴结轻度肿大。 仔猪副伤寒沙门氏 菌 1-4月猪易感，阴湿多雨季节、栏内潮湿不卫 生，饲养管理不当、运输等应激因素或猪抵抗 力下降时易发。健康猪常带菌。 急性型呈败血症，来势迅猛（多见于断奶后仔猪），体温 40.5-42℃。精神不振、呼吸困难，先便秘后腹泻，粪便呈 黄色水样、带血，有腹痛现象。耳、胸及腹下有紫斑。亚急 性和慢性型长期拉灰白或黄绿色恶臭样水样物，混有大量坏 死组织碎片或纤维状分泌物及血液，多数猪继发肺炎，病程 可达数周，终至死亡或成僵猪。 急性脾肿大，边缘纯钝，色暗蓝，绵软；肝有灰白色结节性坏死灶； 大肠粘膜充血、出血，胃淋巴结出血，肠系膜淋巴结肿大。亚急性和 慢性的尸体消瘦，大肠粘膜增厚，有浅平溃疡和坏死灶，盲肠、结肠 和回肠壁增厚，肠管膨大，粘膜上附着灰白色或暗褐色假膜，呈糠麸 状。 仔猪水肿病致病性 大肠杆 菌 主要发生于断奶后1-2周的仔猪，尤以一窝中 生长快，体格健壮的肥胖仔猪多发。阴雨天、 气候突变、饲料突然转变、营养单一而缺乏矿 物质和维生素等为诱因。 病猪突然发病，精神沉郁，食欲减退或不食，步态不稳，盲 目行走或圈走，共济失调，口吐白沫，叫声嘶哑，进而倒地 抽搐，四肢乱划作游泳状，逐渐发生后躯麻痹，卧地不起， 在昏迷中死亡。体温在初期升高至40-40.5，后很快降至常 温或偏低，眼睑或结膜水肿。病程数小时或1-2天。 可见全身多处水肿，特别是胃壁粘膜水肿是本病的特征（多见于胃大 弯和贲门部）。在胃肌和粘膜层之间，切面流出无色或混有血液而呈茶 色的渗出物，或呈胶冻状。大肠肠系膜水肿，结肠肠系膜胶冻状水肿。 全身淋巴结水肿。心包、胸腔和腹腔积液，并易凝固。 猪痢疾（血 痢）猪痢疾 密螺旋 体 经消化道传播，各种猪均易感，但以7-12周 龄猪易发，饲料、管理、环境、用具等因素可 促进传播流行。 病猪先排黄至灰褐色稀粪，或水泻带有粘液、血液。重者排 出带红色粘液、血块及脓性分泌物，或胶冻状，后黑色；病 猪弓背、卷腹、口渴、脱水、裒竭死亡。 局限于大肠、回肠处，大肠粘膜肿胀、严重出血，并复盖着有胶冻状 粘液和带血块的纤维素，大肠内容物软至稀薄并混有粘液、血液和组 织碎片。 猪传染性胃 肠炎冠状病 毒 本病多发于11-3月份寒冷季节，传播迅速， 各种年龄的猪均易感。数日内蔓延全群. 潜伏期短12-48小时，传播快，数日内蔓延全群，呕吐、水 样腹泻呈喷射状、粪便淡蓝、绿色和灰白色，腥臭，仔猪死 亡率高，一般猪3-7日康复。 胃内充满凝乳块，胃底粘膜充血，肠管扩张，呈透明状，肠壁变薄， 肠内含有未消化的小凝乳块和气体，肠绒毛缩短，后期出现肠炎症状。 流行性腹泻冠状病 毒 易发于冬春季，各种年龄的猪均易感，小猪发 病率高，1周龄乳猪死亡率高，经消化道感染。 类似传染性胃肠炎，主要症状为呕吐和水样腹泻，仔猪常因 脱水死亡，成年猪感染症状轻微。 病变仅限于小肠，肠管胀满、扩张，含有大量黄色液体，肠壁变薄， 肠系膜充血，肠系膜淋巴结水肿。 一、疾病治疗原则： 1、准确诊断是选择用药及治愈的关键，猪场应配备经验丰富的兽医和基本诊断条件。 2、个别发病、或当病猪不能采食和饮水时、或急性热性疾病应采取注射给药。 3、当大批发病时，应采用药物拌料饲喂或饮水治疗；也可采取药物拌料饲喂或饮水与注射相结合方式治疗；同时增用“多种维生素”加强畜禽免疫机能。 4、当猪场曾发生过疾病在未得到净化时，猪群带毒或环境有野毒存在时，除搞好防疫免疫接种外，还应在猪群生长发育的各阶段，采取必要的药物保健措施，防止个别免疫不好的猪只发病或引起群发。 5、有条件时尽量使用“微生态”制剂替代抗生素药物，提高机体免疫能力。 二、猪场的消毒原则： 1、猪场平时应采取经常性预防消毒和带猪消毒、清场时清洗消毒的原则，减少因排泄或外界各种途径的菌毒影响。 2、发病时应采取隔离和猪场紧急消毒措施，减少疾病传染。 3、老鼠、苍蝇、蚊子等是传染病的传播途径之一，应采取经常性灭鼠，选用适合的灭昆虫药物，减少疾病传播。 三、传染病的基本防治原则： 1、健全猪场防疫制度和体系，搞好整体防疫。 2、注意引种工作，防止上代猪场疾病因引种而进入。 3、切实抓好猪场防疫免疫工作，严格监测猪群免疫抗体水平，制定合理的免疫程序，防止传染病的发生。 4、病毒性传染病如发生，一般无特效治疗方法，但多数死亡于细菌的继发和混合感染，采用对症和防继发、混合感染的治疗措施可减少大部分的死亡。 5、猪场疫情临床症状千变万化，上述的几种混合感染的疫情虽在当前具有一定的代表性，却不能囊括所有。但无论何种演变，综合防制措施不离其宗，搞好科学的防疫、消毒工作，从各方面减少病原微生物数量上的积累与传播；再根据本场实际，搞好免疫接种工作，提高猪群抗体水平，增强猪体的免疫力等是实践证明了最为行之有效的防治措施。 瑞昌市畜牧水产局宣
常见猪病防治
常见猪病及其防治 猪病的种类繁多，包括传染病、寄生虫病、内科病、外科病及产科病等，而危害最严重的是传染病，其次是寄生虫病、中毒性疾病和营养缺乏病（含代谢障碍病），这些病如果预防不好，会给猪场造成无法估量的损失。因此必须实行饲养管理规范化、科学化、防疫措施制度化、经常化，才能更好地控制疾病的发生。要控制猪病的发生，则应注意以下几个问题： 1.科学饲养管理 （1）实行分群饲养； （2）创造良好的生长环境； （3）加强哺乳期母猪和仔猪的饲养管理。 2.自繁自养； 3.引进种猪时，要做好检疫； 4.制订合理的防疫制度； 5.严格执行消毒制度； 6.认真按免疫接种方案做好免疫工作； 7.有计划地进行药物预防。 一、猪瘟 病原：病原体为该病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒，存在于病猪的全身和体液中，其中淋巴结、脾和血液中含毒量最多。病毒对不利因素作用的抵抗力弱，在干燥环境和一些消毒药作用下易于死亡。发病猪舍及污染的环境在干燥和较高温度下,经1~3周即失去传染性。2%~3%火碱经30分钟可使病毒失去活性，5%漂白粉经营1小时可将病毒杀灭。 流行病学：各品种、年龄、性别的猪都易感，野猪也易感，病猪和带毒猪是传染源，通过粪、尿和各种分泌物排出病毒。感染途径主要是消化道和呼吸道。侵入门户是扁桃体，后进入血液循环。此病具高度传染性，发病无季节性。 临床症状：潜伏期一般为5~10天。 最急性型：突然发病，症状急剧，体温升高到42度，精神极度沉郁，卧地不起，病猪皮肤粘膜紫绀，出血。急性型：本型最多见，突然发病，病程1~2周，少食或不食，体温持续高热在40~42 度，病猪寒战，鸣叫，喜喝冷水，结膜潮红发炎，有些病猪有神经症状，震颤、痉挛抽搐，病程初期粪便呈干球状，后期便秘和腹泻交替出现。 急性和慢性型：病程较缓和，病程可达20~30天以上，妊娠母猪感染后可能不表现症状，但病毒通过胎盘传给胎儿，引起流产、死胎、畸形、胎儿木乃伊化，或产下的仔猪体质虚弱，出现震颤，最后死亡。 病理变化：全身淋巴结肿大，暗紫色，切面周边出血，呈大理石样，会厌软骨和喉头粘膜、膀胱粘膜、心外膜、肺膜、肠浆膜、腹膜及皮下等处有大小不一的出血点或血斑；肾呈土黄色，表面散有小红点，脾有梗死灶，慢性猪瘟大肠粘膜有出血和坏死，在回音瓣附近和盲肠、结肠粘膜上，可见大小不一的扣状溃疡，突出于粘膜表面。 防治：无特效药物，加强预防工作，严格执行疫苗接种程序。 二、猪细小病毒病 猪细小病毒病是由猪细小病毒引起的，其特征：猪细小病毒广泛存在于世界各地猪群，易感猪在怀孕早期感染猪细小病毒时可导致胎儿死亡、胚胎重吸收和胎儿木乃伊化，偶有流产，而母猪本身无明显症状。 流行病学：几乎所有猪群都感染此病，不同品种、性别、年龄的猪都易感，后备母猪比经产母猪易感染，传染源是带毒的公猪和母猪，流产和死胎、活胎及子宫分泌物中含有大量病毒，而带毒猪所产的活猪可能带毒排毒时间很长甚至终生。本病原对外界环境的抵抗力很强，可在被污染的猪舍生存数月之久，易造成长期连续传播。 临床症状：猪群爆发此病时，时常与木乃伊、窝仔数减少、母猪难产和重复配种等临床表现有关。 在怀孕早期30~50天感染，胚胎死亡或被吸收，使母猪不孕和不规则地反复发情。 怀孕中期50~60天感染，胎儿死亡之后，形成木乃伊，怀孕后期60~70天以上的胎儿有自免疫能力，能够抵抗病毒感染，则大多数胎儿能存活下来，但可长期带毒。 防治：严格执行卫生防疫制度，在污染的猪场应用疫苗接种或采取自然感染结合，推迟初配日龄的方法。疫苗接种：目前有两种疫苗，一种是疡毒苗，适用于未怀孕的初产母猪；另一种是灭活油乳苗，适用于各种猪。灭活油乳苗在配种前2个月左右注射。 三、猪乙型脑炎 病因：1948~1950年日本学者先后从猪流产胎儿和母猪脑组织中分离出日本脑炎病毒，并用病毒感染怀孕母猪引起死亡和流产。 临床病状：猪突然发病，发烧40~41度，呈稽留热，持续几天或十几天以上。精神不振，食欲减少或不食，粪便干燥呈球形，表面常附有灰白色粘液，有的呈关节炎状。 妊娠母猪主要症状是流产或早产，胎儿多是死胎，大小不等或为木乃伊胎。 公猪睾丸肿胀，多是一侧性。病猪精神食欲无大变化，一般转归良好。 预防：在疫区或疫场曾试用日本乙型脑炎病毒疫苗，于流行期前一个月免疫，4日龄以上至2岁的后备母猪都可注射，免疫后一个月产生坚强的免疫力，可防止妊娠后的流产或公猪患睾丸炎而造成的生精机能障碍。
市政道路工程试验检测项目及频率汇总表
建筑工程试验检测项目及频率汇总表 序号类别检验项目采用标准检测频率取样方法 1 土方 回填 土工击实 最大干密度 《土工试验方法标准》GB/T50123 每5000m3或土质发生变化时取具有代表性的扰动土最优含水率 压实程度压实系数《建筑地基基础设计规范》GB 50007 每1000㎡不少于3个点。灌砂法、环刀法、核子仪密度法 2 地基与 基础 换填地基 压实系数 或承载力 《建筑地基处理技术规范》JGJ 79 《建筑地基基础工程施工质量验收规范》GB 50202 检验数量，每单位工程不应少于3 点，1000m2以上工程，每100m2至 少应有1点，3000m2以上工程，每 300m2至少应有1点。每一独立基础 下至少应有1点，基槽每延20米 应有1点 压实系数：采用环刀法，取样点 应位于每层厚度的2/3深度处， 采用贯入仪或动力触探检测时， 每分层检验点的间距应小于4m。 承载力：按所选用的施工机械、 换填材料及场地的土质条件进 行现场试验。 加固地基 复合地基 承载力 检测数量为总数的0.5%～1%，但不 应少于3处。有单桩强度检验要求 时，数量为总数的0.5%～1%，但不 应少于3根。 根据现场施工条件，选择具有代 表性的场地进行现场试验桩基 承载力 《建筑桩基检测技术规范》JGJ 106 检测数量在同一条件下不应少于3 根，且不宜少于总桩数的1%；当工 程桩总数在50根以内时，不应少 于2根。 1、施工质量有疑问的桩， 2、设计方认为重要的桩， 3、局部地质条件出现异常的桩， 4、施工工艺不同的桩， 5、承载力验收检测时适量选择 完整性检测中判定的Ⅲ类桩， 6、同类型桩宜均匀分布， 7、完整性检测时，柱下三桩或 三桩以下的承台抽检桩数不得 少于1根。 桩身完整性 设计等级为甲级，或地质条件复 杂、成桩质量可靠性较低的灌注 桩，抽检数量不应少于总桩数的 30%，且不得少于20根；其他桩基 工程的抽检数量不应少于总桩数 的20%，且不得少于10根；对混凝 土预制桩及地下水位以上且终成 孔后经过核验的灌注桩，检验数量 不应少于总桩数的10%，且不得少 于10根。每个柱子承台下不得少 于1根。
常见猪病预防和治疗
一、猪口蹄疫 （一）临床诊断要点 体温升高到40℃以上；成年病猪以蹄部水泡为主要特征，口腔粘膜、鼻端、蹄部和乳房皮肤发生水疱溃烂；乳猪多表现急性胃肠炎、腹泻、以及心肌炎而突然死亡。 （二）防制 1、控制：免疫O型口蹄疫灭活油苗，所用疫苗的病毒型必须与该地区流行的口蹄疫病毒型相一致；选用对口蹄疫病毒有效的消毒剂。 2、预防：后备母猪（4月龄）、生产母猪配种前、产前1个月、断奶后1周龄时肌注猪O型口蹄疫灭活油苗；所有猪只在每年十月份注射口蹄疫灭活苗。 治疗措施 处方1 （1）口蹄疫外源性抗体（超免蛋白—Ⅴ）用法：一次肌肉注射，按1kg体重0.1ml 用药，首次量加倍，可有效控制引发的心肌炎，有效控制死亡；也可用本品做紧急免疫。（如有混感症状需要配合比较敏感的抗生素使用，如头孢噻呋钠、头孢喹肟等）。配合荆防败毒散（瑞特灵）1kg拌500kg饲料，可全群治疗和预防。 （2）0.1%高锰酸钾溶液适量碘甘油或1%-2%龙胆紫液适量用法：先以0.1%高锰酸钾溶液冲洗患部，然后涂碘甘油或龙胆紫溶液。 处方2 冰冰片5g 硼砂5g 黄连5g 明矾5g 儿茶5g 用法:患部以消毒水洗净后,研末撒布 处方3 贯众散贯众15g 桔梗12g 山豆根15g 连翘12g 大黄12g 赤芍9g生地9g 花粉9g 荆芥9g 木通9g 甘草9g 绿豆粉30g 用法：共研末加蜂蜜100g为引，开水冲服，每日一剂，连用2－3剂。 二、伪狂犬病 （一）临床诊断要点 公猪睾丸肿胀，萎缩，甚至丧失种用能力；母猪返情率高；妊娠母猪发生流产、产死胎、木乃伊；新生仔猪大量死亡，4—6日龄是死亡高峰；病仔猪发热、发抖、流涎、呼吸困难、拉稀、有神经症状；扁桃体有坏死、炎症；肺水肿；肝、脾有直径1—2毫米坏死灶，周有红色晕圈；肾脏布满针尖样出血点。 （二）防治 1、控制 正发伪狂犬病猪场：用gE缺失弱毒苗对全猪群进行紧急预防接种，4周龄内仔猪鼻内接种免疫，4周龄以上猪只肌肉注射；2-4周后所有猪再次加强免疫，并结合消毒、灭鼠、驱杀蚊蝇等全面的兽医卫生措施，以较快控制发病。
常见猪病检测方法
猪病诊断技术规 一、致病性大肠杆菌的检测 1 引用标准 参考NY/T 555-2002（动物产品大肠杆菌、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法）。 2 围 适用于猪大肠杆菌病的诊断。 3 检测方法 3.1 材料 3.1.1 营养肉汤 3.1.2 营养琼脂 3.1.3 EMB 3.1.4 TSI 3.1.5 IMViC生化鉴定管 3.1.6 小白鼠 3.2 分离培养 a)将采集的肝、脾、心血或肠容物等分别接种伊红美兰琼脂平板（同时接种营养 肉汤增菌备用），置37 ℃培养18~24 h。 b)观察培养特性，挑取黑色有金属光泽的菌落，用该菌落涂片，革兰氏染色，镜 检。 c)如可见到两端钝圆并多以单个存在的革兰氏阴性粗短杆菌，应取5~10个典型 菌落再接种于TSI琼脂。
d)同时挑取典型菌落接种营养琼脂，37 ℃培养16~18 h的菌液用于生化特性鉴 定。 3.3 生化鉴定 挑取上述菌落纯培养物接种以下生化培养基和乳糖发酵管，(36±1) ℃培养24 h 后观察结果。 3.3.1 靛基质试验： a)滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 mL于靛基质试验培养基中混合，观察结果。 b)出现红色环的为反应阳性；出现黄色环的为反应阴性。 3.3.2 甲基红（MR）试验 a)滴加甲基红指示剂0.2 mL于MR-VP培养基中混合，观察结果。 b)出现红色为阳性反应；出现黄色为阴性反应。 3.3.3VP试验 a)滴加VP试剂甲液0.2 mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1 mL 混匀，静置，观察结果。 b)在15 min出现红色的为阳性反应；无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1 h 后再观察一次，出现红色也为阳性反应。 3.3.4 枸橼酸盐试验：观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应；不变色为阴性反应。 3.4 大肠杆菌鉴定结果 应符合表1要求。 表1 大肠杆菌鉴定结果
猪只病理尸体解剖诊断手册范本
猪只病理尸体解剖 诊断手册 美国礼来大药房 作者：Dr. Marcelo De Las Heras Guillamón Dr. José A. García de Jalón Ciércoles
前言 Dr. Marcelo De Las Heras Guillamón 和Dr. José A. García de Jalón Ciércoles 是西班牙大学兽医学院，动物病理系教授。他们于西班牙大学获取兽医药理学士和博士学位，各自有40年以上的教学和病理诊断经验，同时于兽医学院提供诊断服务。由他们对外了解及业界反应，希望借助此书为兽医从业人员提供广榷专业技术知识，从而丰富日常工作容，也可以提供田间技术服务给他们的客户。 序 我们非常充心感有关的兽医从业人员，和其它猪病专家，他们多年来的信任和寄望。并多所有在解剖室，一起工作的伙伴和他们的贡献，非常有助我们工作的进展。通过此诊断手册，我们更认识我们的工作，和考虑如何充实此工具。我们也非常感提供有关病材的各位，他们一起参与，有如和作者一起撰写此书。 在此我们再次感SERVET团队的顶力帮忙和较对工作。 最后我们要感的是美国礼来公司动物保健处的赞助出版，由其是Dr. Ignacio Lanza和Dr. Juan Pascual多年在遥远一方的信任和合作，并提供必要的支持，促成此书的完成。
目录 序言 (1) 第一章尸体打开技巧和观察面 (2) 第二章外观检察：皮肤、蹄、吻部和其它天然开孔 (3) 第三章皮下组织和肌肉骨骼系统 (3) 第四章颈和胸 (4) 第五章腹：消化管 (6) 第六章腹：肝、脾、肾和生殖泌尿道 (7) 第七章头：头骨和鼻腔 (9)
猪病解剖诊断
病猪尸体解剖技术与常见疾病的病理学诊断 1外部检查 在进行尸体解剖之前,应先了解病死猪的流行病学情况、临床症状和治疗效果,观察其天然孔、皮肤、可视黏膜等变化，对病情有个初步诊断，以避免解剖不可解剖的尸体。猪体表病理变化和可能涉及的疾病见表1。 表1体表器官病变及可能涉及的疾病 器官病变可能涉及的疾病 眼眼角有泪痕或眼屎流感、猪瘟 眼结膜充血、苍白、 黄染 慢性传染病、贫血、 黄疸（附红细胞体）眼睑水肿、眼结膜炎猪蓝耳病、猪水肿病 口鼻鼻孔有液性渗出物流 出 流感、气喘病、萎缩 性鼻炎 鼻歪斜、颜面部变形萎缩性鼻炎 上唇吻突及鼻孔有水 泡、糜烂 口蹄疫、水泡病 齿龈、口角有点状出 血 猪瘟 唇、齿龈、颊部粘膜 溃疡 猪瘟
齿龈水肿猪水肿病 皮肤胸腹、四肢内侧有大 小不一的出血斑点 猪瘟、湿疹 方形、菱形或圆形红 色疹块 亚急性猪丹毒 耳尖、鼻端、四蹄呈 紫色 副伤寒（沙门氏菌病） 下腹、四肢内侧有痘 疹 猪痘 后肢、背部、腹部皮 肤有圆形或不规则形 红斑，中央黑色 圆环病毒引起的皮炎 肾病 蹄部皮肤出现水泡、 糜烂、溃疡 口蹄疫、水泡病 皮肤粗糙、有皮屑、 背毛脱落、皮肤潮红、 甚至出血有痂皮 猪疥螨病 咽喉明显肿大咽型炭疽、链球菌病、 猪肺疫 肛门肛门及尾部有粪污染腹泻等消化系统疾病2内部检查 2.1皮下检查
皮下检查在剥皮过程中进行。从颈、胸及腹中线切开皮肤，在剥皮的同时检查皮下有无充血、炎症、出血、淤血、水肿以及体表淋巴结的大小、颜色和病理变化。 2.2固定、剖开腹腔将腹腔器官摘出 尸体取背卧位。一般先切断肩胛骨内侧和髋关节周围的肌肉（仅以部分皮肤与躯体相连），将四肢向外侧摊开以保持尸体仰卧位置。从剑状软骨后方沿腹壁正中线由前向后至耻骨联合切开腹壁，再从剑状软骨沿左右两侧肋骨后缘切开至腰椎横突。这样腹壁被切成大小相等的两楔形。将其向两侧分开，腹腔脏器即可全部露出。 剖开腹腔时应结合进行皮下检查。看皮下有无出血点、黄染等。在切开皮肤时需要检查腹股沟浅淋巴结，看有无肿大、出血等异常现象。腹腔切开后，须先检查腹腔脏器的位置和有无异物、腹腔器官浆膜是否光滑，肠壁有无粘连。 依次摘出肝、脾、胃网膜、胃、十二指肠、小肠、大肠、直肠和肾脏。分离肠系膜时，要注意观察肠系膜有无出血、水肿及淋巴结变化。 2.3剖开胸腔将胸腔器官摘出 先分离胸壁脂肪和肌肉，检查胸腔压力，切断肋骨与肋软骨结合部，切断肋间肌等软组织，暴露胸腔内器官，检查胸腔和心包有无积液及其性状，胸膜是否光滑，有无粘连。 2.4 口腔和颈部器官的采出 剥去颈部和下颌部皮肤后，用刀切断两下颌支内侧和舌连接的