细菌人工染色体技术研究进展
鸭细菌人工染色体文库的构建及连锁群的FISH定位的开题报告
鸭细菌人工染色体文库的构建及连锁群的FISH定位的开题报告一、研究背景人工染色体（artificial chromosome，AC）是指在体外合成的、能够与真核细胞染色体相媲美的一个或多个染色体。
AC具有许多优点，如能够容纳大的外源DNA片段、稳定遗传和高效表达等。
由于AC的这些优点，目前在人类、动物和植物等领域均有广泛的应用。
鸭细菌是一种重要的饲料添加剂，在家禽和畜牧业中广泛使用。
但是鸭细菌对抗生素具有抗性，因此对鸭细菌的研究对于制定合适的饲养管理计划具有非常重要的意义。
二、研究目的本研究的主要目的是构建鸭细菌人工染色体文库，并利用FISH技术对连锁群进行定位，以期实现对鸭细菌的更深入研究。
三、研究内容和方法1.构建鸭细菌人工染色体文库本研究采用现代分子生物学技术，包括基因组DNA的提取、文库的构建、高通量测序和数据分析等步骤。
首先，利用列式法对鸭细菌进行基因组DNA提取，并使用限制酶将DNA片段进行切割。
然后，将DNA 片段连入人工染色体载体中，得到一个鸭细菌人工染色体文库。
最后，进行高通量测序和数据分析，鉴定所得序列。
2.连锁群的FISH定位首先，根据测序获得的序列信息设计合适的探针，并进行标记。
然后，准备与其亲缘关系较近的鸭细菌菌株作为目标，将探针引入目标细胞内，进行FISH技术的检测，定位目标序列及连锁群。
四、研究意义和预期结果本研究利用人工染色体技术构建了鸭细菌文库，并利用FISH技术对连锁群进行定位，实现对鸭细菌的深入研究。
预期结果包括：获得鸭细菌人工染色体文库，识别出鸭细菌基因组中的重要序列，为后续的生物学功能研究提供基础，并掌握FISH技术，为针对鸭细菌及其它细菌的基因定位研究提供基础设施。
《人工染色体》课件
人工染色体的结构特征
由DNA和蛋白质组成 具有特定的基因序列和结构 可以在细胞内复制和表达 可以进行遗传操作和改造
人工染色体的应 用
在基因治疗中的应用
基因治疗：通过人工染色体将正常基因导入患者体内，修复或替换缺陷基因 遗传病治疗：针对遗传性疾病，如血友病、地中海贫血等 癌症治疗：通过人工染色体将抗癌基因导入肿瘤细胞，抑制肿瘤生长 基因编辑：利用人工染色体进行基因编辑，如CRISPR/Cas9技术
人工染色体的研究历程
1977年，Paul Berg首 次提出人工染色体的概
念
1980年，Mario R. Capecchi和Martin Evans 等人成功构建了第一个人工
染色体
1983年，人工染色体 技术被应用于基因治疗
领域
1990年，人工染色体 技术被应用于基因工程
领域
2000年，人工染色体 技术被应用于细胞工程
领域
2010年，人工染色体 技术被应用于合成生物
学领域
人工染色体的构 建
人工染色体的构建方法
设计人工染色体：根据需要选择合 适的DNA序列和结构
组装人工染色体：将合成的DNA片 段组装成人工染色体
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
合成DNA片段：通过PCR、DNA 合成等方法合成DNA片段
验证人工染色体：通过测序、电泳 等方法验证人工染色体的准确性和 完整性
人工染色体的未 来发展
人工染色体技术的挑战与机遇
技术挑战：如何提高人工染色 体的稳定性和准确性
伦理挑战：如何解决人工染色 体可能带来的伦理问题
机遇：在生物医学、基因编辑 等领域的应用前景
挑战：如何应对市场竞争和知 识产权保护问题
细菌人工染色体基因组文库的构建及应用
ｄｉ Ｏ３６ ０ｉ ｎ１０— ５６２ １．１ １ ｏ： ． ９ ．ｓ． ８ ７ １． ００ ． ２ ｌ ９ ｓ ０ ０ ０细菌人工染 色体基 因组 的构 建及应用 任 斐
（ 南科 技 学 院 ， 南 新 乡 ４ ３ ０ ） 河 河 ５ ０ ３ 摘要： 细菌人工染色体 （Ａ ） Ｂ ｃ 载体由于稳定复制 、 嵌合体少 、 分离纯化简单、 转化效率高等优点 在 构 建 基 因组
ｇ ｎ ｍ ｉ ｉ ｒ ｒ ｅ ｏ ｃ ｌｂ ａ ｙ
Ｒｅ ｅ ｎＦ ｉ
（ ｅａ Ｉｓｔｔ ｏ ｃｅｃ ａ ｄＴ ｃ ｎｌｇ， ｉｘａｇ４ ３ ０ ， ｈｎ ） Ｈ ｎ ｎ ｎｔｕｅ ｆ ｉ ｅ ｎ ｅｈ ｏ ｙＸ ｎ ｉ ５ ０ ３Ｃ ｉａ ｉ Ｓ ｎ ｏ ｎ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ａ ｔｒ ｌ ｔ ｃａ ｈ ）ｌｓＨｅ （ ＡＣ）ｅ ｔｒ ｒ ｒａ ｌ ｓｄｉ ｅ ｏ ｃｌ ｒｒ ｃｎ ｔｕ ｔ ｎ ｂ ｃ ｕ ｅ ｓｒ ｃ ：Ｂ ｃｅｉ ｉ ｉｌ ￣ｎｏｏ ｌ Ｂ ａ Ａｒ ￣ ｃ ｖ ｃｏｓａｅｂｏ ｄｙｕ ｅ ｎｇ ｎ ｍｉ ｉ ａｙ ｏ ｓｒｃｉ ｅ ａ ｓ ｂ ＂ ｏ
关 键 词 ：Ａ Ｂ Ｃ载体 ； 因组 ； 基 图位克隆 ； 物理图谱
中图分类号 ： ３３ Ｑ４． １
文献标识 码 ： Ａ
文章 编号 ：０８７ １（ １ ）１０４—５ １０—５６２ ００—０４０ ０
Ｃｏ ｔ ｕ ｔｏ ａ ｐｐ ｉａ ｉ ｎ ｏ ａ ｔ ｒａ ｒ ｉ ｃａ ｈｒ ｍ ｏ ｏ ｅ ｎｓｒ ｃ ｉｎ ｎｄ ａ ｌｃ ｔｏ ｆｂ ｃ ｅ ｉ ｌａ ｔｆ ｉ ｌｃ ｏ ｉ ｓｍ
Ｋｅ ｒ ｙ ｗｏ ｄｓ：ＢＡＣ ｖ ｃｏ ，ｅ ｏ ｃｌ ｒｒ ， ｐ ｂ ｓｄ ｃｏ ｉｇ，ｈ ｓｃ ｌ ｐ ｅｔｒｇ ｎ ｍｉ ｉ ａｙ ｍａ — ａｅ ｌｎｎ ｐ ｙ ｉａ ｂ ｍａ
细菌人工染色体的研究和应用
体 ｐＣＯ Ｓ Ｉ１以来 ， 来越 多的克 隆载 体相 继 涌现 ， 得 越 使 克隆载体 的 整体 结 构 和克 隆效 率 有 了很 大改 善 。基 于生物体 的许 多 重要 性 状 牵涉 到 复杂 的生 理生 化 反 应系列 ， 多基 因或基 因簇 的控 制 ， 受 与几 百 ～几 万 ｋ ｈ Ｄ Ａ 片段 相关 。另 外 ，复杂 基 因组 的物 理 作 图 和基 Ｎ 因的图位克 隆 也 涉 及 到 大 片段 Ｄ Ａ 的研 究 。 因此 ， Ｎ 提高载体 的容 纳量 ， 直是 克隆载体 的 重要 发展方 向 一
之 一 。 随 着 脉 冲 交 变 电 泳 技 术 （ｃｗ ｒ ，９４ ［ 的 发 Ｓｈ ａ ｓ１８ ） ｔ ２ ７ 展 以及 基 因组 研 究 的 １ 深 入 ， 插 入 大 片 段 Ｄ Ａ， ３益 可 Ｎ
能独立 、 稳定存 在和遗 传 的人工染 色体 等 多方 面的研 究取得 了迅 速 的发 展 。所谓 人工 染色 体 ， 指一 类能 是
自主 复 制 序 列 和 端 粒 子 连 接 在 一起 ， 建 成 了第 一 个 构
植 物 人 工 染 色 体 （ Ａ ，ｐａｔａ ｉｃ ｈ ｍ ｓｍ ， Ｐ Ｃ ｌ ｒｆ ｉ ｃｒ ｏｏ ｅ ｎ ｔ ａ ｏ ｉ ｌ
Ｊ ｎ ，１ ９ 的 构 建 也 在 进 行 中 。 表 １总 结 了 人 工 染 ｉｇ ９ ） ａ ９
（ 国科 学 院遗 传 研 究 所 ８ ２组 中 ０ 北京 １０ ０ ） ０ １ １
摘 要 细 菌人 工 染 色体 （ ａｔ ａ ａ ｉｃ ｈｏ ｏｏ ｅ Ｂ Ｃ 是 第二代 大片段 Ｄ Ａ 的克 隆载 体 系统 。 Ｂ ｃ ｒ ｌ ｒｆ ｉ ｃｒ ｓｍ ， Ａ ） ｅ ｔ ａ ｉ ｉ ｌ ｍ Ｎ 因其嵌 合 率低 ， 传稳 定性好 ， 遗 重组 Ｄ Ａ 容 易分 离和 制 备 ， Ｎ 转化 效 率 高等 ， 补 了 Ｙ Ｃ 的 不 足 ， 弥 Ａ 很 快 在基 因组研 究 中处 于 中心地 位 。近 年 来 ， 已有 多种 Ｂ Ｃ载 体 被 构 建 出来 ， 些 Ｂ Ｃ 载体 在 复 杂 Ａ 这 Ａ
鸭细菌人工染色体文库的构建及连锁群的FISH定位
分类号：单位代码：10019密级：学号：B030381学位论文鸭细菌人工染色体文库的构建及连锁群的FISH定位Construction of a Duck Bacterial Artificial Chromosome Library and Physical Mapping of Linkage Group by FISH研究生：原晓俐指导教师：李宁教授合作指导教师：胡晓湘副教授申请学位门类级别：理学博士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：动物分子遗传所在学院：生物学院二零零七年六月Construction of a duck bacterial artificial chromosome library and physical mapping of linkage group by FISHXiaoli YuanDirected by Professor Ning LiChina Agricultural UniversityBeijingJune, 2007独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。
同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日国家重点基础研究发展规划（973）项目（G2*******）基金,国家自然科学基金（39725022），北京市自然科学基金（5011002）资助项目The work was funded by the fund of the State Major Basic Development Program of China (G2*******), NaturalScientific Foundation of China (39725022) and Beijing Natural Scientific Foundation (5011002).摘要鸭可作为活化石用于对鸟类进化的研究，和鸡一样有着很多的优势，可作为模式动物对重要数量性状和疾病进行研究。
双元细菌人工染色体基因组文库研究进展
２ ０ １ ３ 年第 ２ 期
农艺 杰伟 ｚ 陈亚娟 张少斌 魏建 华
（ 一 沈阳农业大学 ， 辽 宁沈 阳 １ １ ０ ８ ６ ６ ； 北京市农林科学院 ， 北京农业生物技术研究中心）
摘要 酵母 人 工 染 色体 （ Ｙ Ａ Ｃ ） 、 细 菌人 工染 色体 （ Ｂ Ａ Ｃ ） 是 伴 随着人 类基 因组计 划的 实施 而产 生的 ， 这些 大 片段 基 因克 隆栽 体的应 用推 动 了分 子生物 学、 遗传 学 等 学科 的快速发 展 。 以农杆 菌介 导 的直接 转 化植 物 为代表 的双 元细 菌人 工 染 色体 （ Ｂ Ｉ Ｂ Ａ Ｃ ） 栽体 的发展 ， 加 速植 物 基 因组 的研 究 ， 成为植 物 基 因组分 析 、 基 因功能鉴 定 、 染 色体 结构 与功 能关 系研 究 的重要 工 具 。 介 绍 了人 工 染 色体 文 库 的发展 史， 根 据 建库
（ Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ Ａ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ １ １ ０ ８ ６ ６ ； Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ａ ｇ ｒ ｏ ～ Ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈＣ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍｙ ｏ ｆ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｃ ｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ Ｙ Ａ Ｃ， Ｂ Ａ Ｃ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｇ ｅ ｎ ｏ ｍ ｅ ｐ ｒ ｏ ｊ ｅ ｃ ｔ ａ ｐ ｐ ｅ ａ ｒ ｉ ｎ ｇ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｌ ａ ｒ ｇ ｅ ｆ ｒ ａ ｇ ｍ ｅ ｎ ｔ ｇ ｅ ｎ ｅ ｃ ｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ 印ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
bac
发现小组发现话题小组、话题BAC及其转基因研究进展来自: 小蜉2007-09-29 19:09:17BAC及其转基因研究进展胡炜朱作言(中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉10087)摘要：奉文综述了细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromsomes，BAC)的构建、物理图谱制作方法及其靶位精细操作策略的研究进展同时，简要介绍了BAC转基因在基因功能以及基因表达与调控研究中的应用。
关键词：细菌人工染色体转基因利用转基因动物可有效地研究基因的表达调控及其功能。
增强子，座位控制区(MR)及insulators等调控元件对于转基因的高水平组织特异表达和整合十分重要，但这些调控元件常距基因约50kb之遥。
传统上，由于受DNA克隆载体容量的限制，制作转基因动物的外源基因片段通常小于20kb，因此某些调控基因活性的重要元素不可避免地被丢失，从而导致转基因的低水平表达及位置效应的产生。
人工染色体技术的建立和不断发展，为大基因和太基因簇的转基因研究提供了技术准备。
1987年，克隆容量可达几百至几千kb的酵母人工染色体(Yeast Artificial Chromosomes，YAC)问世，并可以通过同源重组的方式在酵母菌中对携带有基因组插人大片段的YAC进行操作，这些操作包括高效地引入报告基因、特定的缺失突变等，鉴于YAC转基因技术不仅保证巨大基因的完整性，保证所有顺式因子的完整并与结构基因的位置关系不变，而且目的基因上下游的侧翼序列可以作为缓冲区域，消除或减弱基因整台后的“位置效应”，使外源基因的表达更接近于真实情况，并为研究基因的功能提供便利。
为此，几个研究小组在YAC诞生之始即致力于建立YAC转基因技术。
1993年，Schedl等首次报道用显微注射法制备得到含35kb酪氨酸酶基因以及侧翼序列的转基因鼠，并在后代中检测到酪氨酸酶的表达。
同年，Yale大学医学院Forget教授随即在美国科学院院刊上以“YAC transgenes：bigger is probably better”为题发表述评，对这类大片段的转基因研究给予了高度评价。
细菌人工染色体 电转
细菌人工染色体电转
细菌人工染色体是指通过基因工程技术将外源DNA序列整合到细菌染色体中，从而使得细菌携带了人工构建的染色体。
这项技术的发展为生物学研究和生物技术应用提供了新的可能性。
首先，让我们来看一下细菌人工染色体的意义和应用。
人工染色体的引入可以用于携带和稳定外源基因，这对于生物技术的研究和应用具有重要意义。
例如，通过将人工染色体引入细菌，可以实现对目标基因的稳定表达和大规模生产。
此外，人工染色体还可以用于研究细菌的遗传调控机制和基因组稳定性等方面的基础研究。
其次，让我们来谈一下电转。
电转（Electroporation）是一种常用的细胞转化技术，通过利用高压脉冲使细胞膜通透性增加，从而实现外源DNA的转化。
在细菌人工染色体的研究中，电转技术常常被用来将人工染色体导入细菌细胞内。
通过电转，可以有效地将人工染色体导入细菌细胞内，实现外源DNA的整合和稳定表达。
此外，还需要考虑到细菌人工染色体和电转技术在生物安全和伦理方面的问题。
在进行相关研究和应用时，需要严格遵守相关的生物安全规范和伦理准则，确保实验操作的安全性和合法性。
综上所述，细菌人工染色体和电转技术在生物学研究和生物技术应用中具有重要的意义和潜在的应用前景。
然而，在推进相关研究和应用的过程中，需要充分考虑生物安全和伦理等方面的问题，确保相关工作的安全性和合法性。
人工染色体载体的研究和应用
】 。 述 ・
基 因 【 技 术 的 迅 速 发 埏 ，他 人 类 埘 ： 体 基 冈 的 结 Ｉ 物 卡 功 能 、 达及 其 捌拧 的 研 究 深 入 钊 分 子水 平 。而对 特 定 基 勾、 表 片段 的分 离和 获 ， ｌ 【 足上 述研 究 的筛 选 和 扶 得 均 为 可能 因 使 Ａ 此， 艇 纽 丈库 是 进 行 分 子兜 隆 和 基冈 组 结 构 功 能 研 究 的 撼 础 ： ０年 代 人 们 就 已提 …臧 阏 组 文 库 的概 念 Ｉ １ ７ ７ ９８ ．
隆 效 率 有 ｒ很 大 改 善 。 所 谓 人 ｌ染 色体 ． 指 一 类 能 在 生 物 细 胞 叶 独 立 、 定 ｒ 是 １ 稳 仔 往 和 遗传 的人 丁晕 组 Ｄ Ａ分 子， 至 少 应 具染 色 体 系 统 ， 哺 乳 动 物 人 Ｔ 染 色 体 ｆ ｍｍ ｌ ｎ ａ ｉｃａ ｍａ ａｉ ｒｆ ｉ ａ ｔ ｉ ｌ ｃ ｒｍ ｓ ｍ ， Ｃ ， 大 能 容 纳 ２ ０ ｋ ｈｏ ｏ ｏ ｅ ＭＡ ）最 ０ ０ ｐ的外 源 Ｄ Ａ， 以携 Ｎ 可 带 足 够 长 的 包 括 编码 顺 序 和 可 以 有 效 调 控 治 疗 基 因 表达 的
得 多种 类 型 ＨＡＣ 。ＨＡＣ ｓ ｓ可 以携 带 大 片段 基 因 组 ＤＮＡ， 建 是 立 转 基 因动 物 模 型 的重 要 手 段 ， 基 因 治疗 方 面 也 有 着 广 阔 在 的应 用 前 景 为 方 便 从 各 种 文 库 筛 选 到 的 一 新 基 进 行 功 能 研 究
什 的 类 似组 份 ：复 制 原 点 ｆ ｉｉ ｏ ｐｉ ｔｎ 、着 丝 ｃｎ ｏ ｇｎ ｆｅ ｌａｉ １ ｒ ｒ ｃ ｏ ￣（ — ｅ ｔ ｍ ｒ）Ｈ 粒 ＂ｅｍｅｅ。 ｌ８ ｒ ｅｅ￣ 端 ｏ ｆｔｈ ｌ ） ９ ３年 ， ｒ Ｉ 酵 母 染 色体 的 （ ｒ Ｍｕｒ ｙ１ 把
在人类DNA重组技术中应用的发现和最新进展
在人类DNA重组技术中应用的发现和最新进展DNA重组技术是现代生物科技中极为重要的一环，它可以改变生物的染色体构成，从而获得特定的遗传特性和精准编辑生物DNA。
DNA重组技术正越来越广泛应用于生物医学、农业、环境保护等领域。
本文将介绍DNA重组技术的发现和最新进展。
DNA重组技术的发现DNA重组技术最初的发现可以追溯到20世纪50年代。
当时，研究人员发现大肠杆菌的染色体可以被细菌噬菌体感染后改变。
这一发现揭示了染色体的遗传信息是可以改变的。
接着，研究人员陆续发现了DNA重组技术的两个基本原理。
第一个原理是同源重组。
同源重组是指两段DNA序列之间的杂交和重组。
这种重组方式重要性体现在当DNA受损时，细胞会运用同源重组机制对DNA进行修复。
第二个原理是非同源重组。
与同源重组不同的是，非同源重组是指来自不同DNA的两段序列之间的重组。
它是以噬菌体改变大肠杆菌染色体的过程为基础的，使得DNA重组技术之后可以准确实现特定的DNA序列的合成和定向准确的遗传编辑。
DNA重组技术的最新进展DNA重组技术自20世纪60年代以后得到广泛的应用拓展，并且目前仍在不断深化和发展。
以下是DNA重组技术的最新进展：1. 人类克隆随着各项技术的迅速发展，人类克隆技术也得到了越来越多的关注。
人类克隆技术通过人工重组DNA来实现进行克隆。
在2004年，韩国科学家崔钟允宣布成功通过克隆技术产生了人类胚胎，这标志着人类克隆技术取得了巨大进展，同时也引起了人们极大地争议。
虽然近年来，一些将人类克隆技术应用于生殖和医学领域的尝试在不断进行，但是我们依然要警惕科技发展滥用和伦理问题的出现，积极引导生物技术的应用。
2. 基因编辑技术基因编辑技术是目前非常炙手可热的重要技术之一，它主要用来研究特定基因在人类身体中的作用。
其中一种基因编辑技术是CRISPR-Cas9技术。
CRISPR-Cas9是一种可编程的基因编辑技术，它可以针对特定的基因进行割除或者修改，甚至可以在基因中加入新的DNA序列等操作。
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中圈 分 类 号 ： ８ ３ Ｑ １． ４
文献标识码： Ａ
文 章 顺 序 编号 ： ６ ２ ５ ９ （ Ｏ ８ ０ 一 ３ — ４ １７ — １０ ２Ｏ ）５ Ｏ ３ ０
隆 ， 少 用 于 Ｄ Ａ文 库 （ Ｎ ｂａｙ 的构 建 ， 很 Ｎ Ｄ Ａ ｌ ｒｒ） ｉ 尤
其 是 真 核 生 物 的 文 库 构 建 ； 黏 粒 容 量 虽 有 所 增 大
究 中都 有 着 广 泛 的 应 用 ，对 促 进 分 子 生 物 学 研 究
的迅速 发展起到 了重要作 用 但 随着研 究 的深 入 ， 以上 系统 也 逐 渐显 现 了它 们 的一 些 固有 缺 陷 ： 质
粒 系 统 容 量 小 （ ｌ ｈ ，只 适 用 于 一 般 基 因 的 克 ＜ ５ｋ ）
系 ， 在 含 Ｘ ｇｌＩＴ 的 平 板 上 生 长 ４ — ａ、 Ｇ Ｐ ８ｈ后 ， 出
现 １ ０％～ １ ４． ５％的 蓝 色 细胞 ； 同年 Ｂ ｋ ｒ 建 了 ａｅ 构
含 荧 光 素 酶 或 绿 色 荧 光 蛋 白 Ｇ Ｐ的 Ｂ Ｃ载 体 ， Ｆ Ａ
以 此 载 体 克 隆 ７ ～ ７ ｂ 的 人 类 基 因 组 Ｄ Ａ， ０ １０ ｋ Ｎ
繁琐局 限 了它 的使用 。能否建 立一种 容量大 ， 能够 稳定遗 传且 易于操 作 的载 体 系统 成 为众 多分 子生 物学工 作 者的愿 望 真核 基 因组 克 隆载 体 的特点 及其 比较见表 １ ： 细菌人 工 染 色 体 （ ａｔ ｉ ｒｆ ｉ ｈｏ — ｂｃｅ ａ ａ ｉｃａ ｃ ｒ ｒ ｌ ｔｉ ｌ ｍｏ
（ ５ ｂ ， 对于一 些较大 的基 因簇 （ｅ ｅ ｌｓ ｒ ＜４ ）但 ｋ ｇｎ ｕｔ ） ｃ ｅ 的研究 仍然无能 为力 ； Ａ Ｙ Ｃ系统 容量很 大 （ 至数 可 Ｍ ） ｂ ，已被广泛应 用于 Ｄ Ａ文 库的构 和基 因簇研 Ｎ
究 ， 其 易 于 发 生 重 组 ， 乏 稳 定 性 及 制 备 工 艺 的 但 缺
Ｂ Ｃ载 体 在 第 １代 Ｂ Ｃ 载 体 的 基 础 上 构 建 ， Ａ Ａ 为 进 一步 方 便 克隆 的筛 选 ， 多 在 常规 质 粒 载 体 中 许
已成 熟 使 用 的选 择 性 标 志 基 因 纷 纷 被 引 入 第 １
载 冁 宿 体 主
噬 菌体 １７ Ｅｃｌ ９ ２ ９８ ｏ ～４ ｉ
易 难 易 ０ 一 Ａ ９７ ０ ～ Ｏｏ Ｐ 载体 ｌ ｌ９ Ｅｃｌ ５ １０ ９Ｏ ｏ ７ ０ ｉ ＋ ＋
ｐ Ａ １８ Ｂ Ｃ ０ Ｌ载 体 ，转 染 人 类 ｆ— ｒｓｒｏ ａ细 胞 ｉ ｂｏａｃｍ
稳性 △ Ｄ 蒡 定嵌性制 Ｎ 备 Ａ
＋ 一 易 一
代 Ｂ Ｃ载体 中。１９ Ａ ９ ７年 ， ｊ Ｍｅｉ ａ等将 Ｂ半 乳 糖甘
酶 Ｌ ｃ 基 因 及 抗 新 霉 素 ｎ ｏ 基 因 插 入 ａＺ ｅ
黏粒载体
１７ 最ｃｌ ３ ４ ９９ ｏ ３ ～ ７ ｉ
４ －
一 ＋ 一 一
ｓｍ ， Ａ ｏ ｅ Ｂ Ｃ） 是 ２ ０世 纪 ９ Ｏ年 代 新 发 展 起 来 的 一
并 转 染 Ｈｅ ａ细 胞 和 成 纤 维 细 胞 后 ， 利 地 筛选 Ｌ 便 出表 达 Ｇ Ｐ的 克 隆 ， Ｆ 随后 ， 多 的动 物 病 毒 基 因 很 组 也 因此 而 克 隆成 功 。至 此 ， 有 快 速筛 选 克 隆 具
（ 蒙古 农业 大 学 动物 科 学 与医学 学 院 ， 内 内蒙 古 呼 和浩 特 ０ ０ １） １０ ８
１ Ｂ ＡＣ 载 体 系 统 简 述
用 于 Ｄ Ａ 片段 克隆 的载 体 系统 （ｅｔｒ一 直 Ｎ ｖｃ ） ｏ
是 分 子 生 物 学 中 不 可 或 缺 的 重 要 工 具 ，历 经 数 十
摘要 ： 菌人 工染 色体 是一种 新发展起 来的 细 Ｄ Ａ 载体 系统 ， Ｎ 它具有 容量 大、 遗传 特广泛 的应 用。笔 者 综 述 了近年 来发展起 来的对 Ｂ Ｃ进行 分析 和 Ａ
修饰 的一 些方法 。
关键 词 ： 菌人 工 染色 体 ； 细 定位 修 饰 ； 源重 组 同
年 的发 展 ， 后 建立 了质 粒 （ｌ ｍｉ） 黏 粒 （Ｏ— 先 ｐａ ｄ 、 ｓ ＣＳ ｍｉ 、酵母 人 染 色 体 （ｅｓ ａｔ ｃ ｌ ｈｏ ｏ ｄ） ｙａｔ ｒｆ ｉ ｒｍ ． ｉ ａｃ ｉ ｓｍｅ Ｙ Ｃ） 系统…， 们在 今天 的分子 生物学 研 ｏ ，Ａ 等 它
能 力 的 第 ２代 Ｂ ＡＣ 载 体 业 已 构 建 完 成
２ Ｂ ＡＣ 分 子 克 隆 化 病 毒
Ｂ Ｃ分子克 隆化病 毒 的设 计原 则 ： 理论上 ， Ａ 在 Ｂ Ｃ分 子 的 过 将 Ｂ Ｃ载 体 和 Ａ Ａ
表 １ 真核 基 因 组克 隆 载体 及 其特 点
种 Ｄ Ａ 载 体 系统 ，它具 有 容量 大 、遗 传 特性 稳 Ｎ 定 、 于操 作 等 优点 在基 因 文 库构 建 和 基 因功 易
能 分 析 等 方 面 有 广 泛 的 应 用 第 ｌ代 Ｂ Ｃ 载 体 Ａ
的选 择 性 标志 基 因就 是 氯霉 素 抗性 基 因 ； ２代 第
一是完整的bac载体基因功能序列如何插入病毒基因组dna分子因为插入不是任意的必须插入病毒基因组dna分子的非必需区或者非必需位点最好是体内体外非必需区或者非必需位点但至少保证是体外非必需区或者非必需位点因此目前只能利用普通同源重组的方法来实现至少第一步必须这样
综
述
细菌人工染色体技术研究进展
韩文雄 ， 曹贵 方
收 稿 日期 ：０ ８ ｏ — ５ ２０ ＿ ６ ０ 改 回 日期 ：０ ８ ０ — １ ２０ － ８ ２
Ｂ Ｃ载体 １９ Ｅｃｌ ０ ３０ Ａ ９ ２ ． ｉ ～ ５ ｏ ５