载5-FU纳米微粒抗肿瘤的实验研究

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5-氟尿嘧啶纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内靶向性分布

5-氟尿嘧啶纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内靶向性分布郑建伟;徐戎;唐滔;王剑明;曾繁典;邹声泉【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2007(036)002【摘要】目的研究5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米磁性颗粒在荷瘤裸鼠体内的靶向性分布.方法制备荷瘤小鼠异位肝癌模型(荷瘤鼠),随机分3组,每组8只.A组:5-FU原液治疗组;B组:单纯5-FU纳米磁性颗粒治疗组,无磁场应用;C组:实验组,在肿瘤内部建立300高斯(GS)的磁场,药物应用同B组.采用高效液相色谱(HPLC)分析法检测离体组织中5-FU药物浓度,原子吸收光谱法(AAS)测定荷瘤鼠组织中的铁浓度,磁共振成像(MRI)检测5-FU纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内组织分布.结果在肿瘤组织内建立内磁场后,尾静脉注射5-FU纳米磁性颗粒(250 mg/kg),与无磁场的相同药物治疗组及单纯5-FU对照组比较,HPLC检测荷瘤鼠的肿瘤组织中5-FU浓度显著增加(P ＜0.01),AAS检测肿瘤组织中铁浓度也显著增加,肿瘤组织MRI的T2加权像发生变化,呈现低信号.结论在磁场引导下,5-FU纳米磁性颗粒中磁性载体和所载药物在荷瘤鼠体内具有肿瘤靶向性分布.【总页数】4页(P202-205)【作者】郑建伟;徐戎;唐滔;王剑明;曾繁典;邹声泉【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院临床药理研究所,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院临床药理研究所,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.双靶向5-氟尿嘧啶纳米粒对小鼠原位肝癌模型的抑制作用 [J], 侯益明;徐宏智2.5-氟尿嘧啶固体脂质纳米粒在小鼠体内的分布 [J], 曹钰然;李赢;王舒雨;仝留良;王萍;张萍;杜斌3.磁性碳纳米管载附5-氟尿嘧啶对结肠癌淋巴结转移的靶向抑制作用 [J], 金彦召;谭敏4.磁性碳纳米管载附5-氟尿嘧啶对结肠癌淋巴结转移的靶向抑制作用 [J], 金彦召;谭敏5.5-氟尿嘧啶磁性纳米脂质体在大鼠肝癌模型体内的靶向分布 [J], 彭健;刘鑫;王荣兵;刘路;邬力祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基于5-FU开发抗肿瘤药物的最新进展

基于5-FU开发抗肿瘤药物的最新进展王妮妮;陈婷婷;张学鹏;钟光祥【期刊名称】《浙江化工》【年(卷),期】2012(043)005【摘要】5-Fluorouracil and its derivatives are a kind of effective antimetabolic drug used in clinic and have a broad antitamor spectrum. The search for highly effective, lowly toxic, highly selectivity and targeting activity 5- fluorouraeil derivatives has become a hot point in the field of antitumor drugs research now. In this paper, varied structure modification of 5-fluorouracil derivatives and their biological activity studies were reviewed, which will accelerate the further research of 5-fluorouracil derivatives.%5-氟尿嘧啶及其衍生物是临床上一类抗瘤谱广、效率高的抗代谢药物。

寻求高效低毒、高选择性和高靶向性的5-氟尿嘧啶衍生物是目前抗肿瘤药物研究领域的一个热点。

本文对5-氟尿嘧啶的各种结构修饰及其生物活性研究进行了总结，将为5-氟尿嘧啶衍生物的研究产生较大的促进作用。

【总页数】6页(P11-15,21)【作者】王妮妮;陈婷婷;张学鹏;钟光祥【作者单位】浙江工业大学药学院,浙江杭州310012;浙江工业大学药学院,浙江杭州310012;浙江工业大学药学院,浙江杭州310012;浙江工业大学药学院,浙江杭州310012【正文语种】中文【中图分类】TQ464.7【相关文献】1.基于竞争的新技术产品开发研究:最新进展及其展望 [J], 孙理军;方齐云2.Celgene投资3700万美元支持开发新型抗肿瘤药物 [J], ;3.抗肿瘤药物顺铂的剂型开发研究现状 [J], 王琳4.对上海市行政记录的统计开发与应用研究——基于加拿大的最新进展与经验借鉴[J], 周群艳5.对上海市行政记录的统计开发与应用研究——基于加拿大的最新进展与经验借鉴[J], 周群艳;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

替吉奥单药对比5-FU治疗局部晚期或转移性胃癌的有效性研究

2 结果
2.1 两组患者临床疗效分析
观察组治疗无进展生存期，疾病控制率及客观缓解率均高于观察组（ P <0.05）。
2.2 两组患者不良反应发生情况分析
两组治疗患者的不良反应是从胃肠道反应，骨髓抑制，肝功能损害及皮肤色素沉着四个方面进行对比，观察组明显好于对照组（ P <0.05）。
1.3 疗效评价标准
两组患者治疗结束后进行疗效评价，详见表2：
表 2 两组患者治疗后疗效评价
（m） PFS（无进展生存期） 5-FU 组替吉奥组 3.2 4.5 DCR （疾病控制率）（%） ORR（客观（%）缓解率） 12% 31% 48% 52%
1.4 不良反应对比
并对于患者出现不良反应进行对比，详见表3：
1.2 治疗方法
对照组给予5-FU0.75g，静脉滴注4.5g，持续46 小时持续滴注， 21 天为1 个疗程。给药6 周期。观察组给予替吉奥胶囊口服，剂量如表1 所示， 21 天1 个疗程，共6 个周期。
表 1 计量详情
体表面积 <1.25m2 <1.5m2 ≥ 1.25m2， ≥ 1.5m2 初次标准量 40mg， BID 50mg， BID 60mg， BID
0 引言
胃癌是最常见恶性肿瘤之一，在世界范围内发病率仅次于肺癌，我国每年发病率60/10 万，死亡率30/10 万 [1]，位居所有恶性肿瘤死亡第一位，早期胃癌所占比例不足10%，多数患者就诊已属于进展期，而局部晚期或转移性胃癌治疗目前无统一标准方案，治疗形势严峻，有效可行的治疗方案有待于进一步研究探索。替吉奥（S-1）是一种氟尿嘧啶衍生物口服抗癌剂，它包括替加氟（FT），吉美嘧啶（CDHP）及奥替拉西（Oxo）。FT 是5-Fu 的前体药物，具有优良的口服生物利用度，能在活体内转化为5-Fu。DHP 能够抑制在二氢嘧啶脱氢酶作用下从 FT 释放出来的5-Fu 的分解代谢，有助于长时间血中和肿瘤组织中5-Fu 有效深度，从而取得与5-Fu 持续静脉输注类似的疗效 [2]。Oxo 能够阻断5-Fu 的磷酸化，口服给药之后， Oxo 在胃肠组织中具有很高的分布浓度，从而影响5-Fu 在胃肠道的分布，进而降低5-Fu 毒性的作用。（ 1）能维持较高的血药浓度并提高抗癌性；（ 2）明显减少药物毒性，减少静脉用药的副作用；（ 3）口服用药，给药方便。在日本，替吉奥于1999 年被批准用来治疗晚期胃癌， 2001 年被批准用来治疗头颈部癌症， 2003 年被批准用来治疗结直肠癌。2004 年被批准用来治疗非小细胞肺癌 [3]。多年临床应用证明，替吉奥是安全有效的抗癌药物。而我国近年来对于替吉奥的应用逐渐增加，大量，有价值的临床资料需要进一步证实我国替吉奥胶囊应用的可行性，对此，选取本院2014 年4 月 -2016 年4 月局部晚期或转移性胃癌患者共56 例，分析替吉奥单药对比5-FU 显著提高局部晚期或转移性胃癌的无进展生存期，疾病控制力及客观缓解率。现报告如下：

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究杜卫东;袁祖荣;倪泉兴;华鲁纯;唐健雄;沈达明;张群华;竺越【期刊名称】《外科理论与实践》【年(卷),期】2004(9)3【摘要】目的:观察5FU缓释剂瘤内注射对裸鼠胰腺癌肿瘤细胞的影响,探讨其作用机制。

方法:体外培养胰腺癌细胞株PC3,以2×106个细胞分别接种于70只裸鼠。

4周后挑选肿瘤大小一致的裸鼠60只,随机分成5组,即静脉NS对照组、5FU静注组(10mg/kg)、基质植入组、5FU缓释剂(4mg/kg)植入组及5FU缓释剂(1mg/kg)植入组。

于治疗前及治疗后14d内测量肿瘤大小,计算肿瘤生长速度;观察组织学变化和细胞分裂指数;免疫组化法测定bcl2和Bax的蛋白表达水平;采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡指数(AI)。

结果:5FU缓释剂瘤内注射组裸鼠移植瘤生长速度减慢(P<0.05),最终瘤重小于其他各组(P<0.05);细胞分裂指数亦均低于其他各组(P<0.05)。

5FU缓释剂瘤内注射组肿瘤组织中炎症反应和血管内膜增厚程度明显高于其他各组(P<0.05)。

5FU缓释剂瘤内注射组荷瘤裸鼠的bcl2基因蛋白表达明显低于其他各组,而Bax基因的蛋白表达明显高于其他各组,其肿瘤细胞的AI明显高于其他各组(P<0.05)。

结论:5FU缓释剂瘤内注射可明显抑制裸鼠胰腺癌瘤体的生长,其作用机制与药物在肿瘤组织中引起的炎症反应和血管内膜增厚等因素有关,并可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。

【总页数】4页(P204-207)【关键词】胰腺肿瘤;细胞株;5-氟尿嘧啶缓释剂;瘤内注射【作者】杜卫东;袁祖荣;倪泉兴;华鲁纯;唐健雄;沈达明;张群华;竺越【作者单位】上海市华东医院普外科;上海市华山医院胰腺癌诊治中心;上海市华东医院消化科【正文语种】中文【中图分类】R735.9【相关文献】1.氟尿嘧啶壳聚糖缓释剂瘤内注射治疗小鼠肝癌的实验研究 [J], 刘朝阳;傅军;田海梅;邵长君;刘义;李茉;曲平;张伟2.三氧化二砷泊洛沙姆407缓释剂瘤内注射治疗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究 [J], 张鹏;王文;行利;杜永平;冯佳;保宏祥3.术中125I植入加5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗中晚期胰腺癌的临床观察 [J], 覃慧强4.5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究和临床研究 [J], 杜卫东;袁祖荣;倪泉兴;华鲁纯;沈达明;唐健雄;张群华;竺越5.5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内植入治疗胰腺癌的实验研究和临床研究(英文) [J], 杜卫东;袁祖荣;倪泉兴;华鲁纯;沈达明;唐健雄;张群华;竺越因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

99mTc-5-FU免疫纳米粒在荷人胃癌SCID鼠模型体内的分布

99mTc-5-FU免疫纳米粒在荷人胃癌SCID鼠模型体内的分布黄开红;刘建化;朱兆华;李学先;卢献平;周淑英【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2007(027)008【摘要】目的探索制备99mTc标记载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米粒(99mTc-5-FU-Ab-NPs)的方法,并观察99mTc-5-FU-Ab-NPs胃癌移植瘤模型体内的分布情况.方法用改进的Schwarz方法对载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米粒进行99mTc标记,经SephadexG250柱分离纯化,用纸层析法测定标记率与放化纯度;ELISA法和免疫组化法测定标记物的免疫活性;经荷人胃癌鼠静脉注射99mTc-Ab-5-FU-NPs(实验组)及99mTc标记鼠源性多克隆IgG纳米粒(对照组),并于2、6 h行放射免疫ECT显像,用感兴趣区(ROI)技术获得实验组和对照组荷人胃癌鼠全身和肿瘤放射性计数及肿瘤与对侧正常组织(T/NT)的放射性比值;24 h显像后处死鼠,测定体内放射性分布,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及T/NT比值.高效液相色谱法检测两组鼠肿瘤组织和血液中5-FU的浓度.结果制备所得99mTc-5-FU-Ab-NPs标记率为90%～95%,抗体的活性在标记前后无明显下降;荷人胃癌鼠放射免疫显像结果提示静脉注射99mTc-5-FU-Ab-NPs 2 h后肿瘤已显影,随时间延长到6 h更清晰,2和6 h肿瘤组织ID%/g均显著高于对照组;6 h时实验组肿瘤组织ID%/g和肿瘤与血液的放射性比值较2 h时升高;同时,实验组肿瘤组织中5-FU浓度随着时间延长呈持续升高且与对照组5-FU浓度相比有显著性差别.结论本研究制备所得99mTc-5-FU-Ab-NPs能较好地满足放射免疫显像的要求;抗VEGF单克隆抗体的免疫导向作用可靠,注射后6 h,99mTc-5-FU-Ab-NPs在肿瘤组织中有相对较高的特异性浓聚.【总页数】4页(P1137-1140)【作者】黄开红;刘建化;朱兆华;李学先;卢献平;周淑英【作者单位】中山大学附属第二医院消化疾病研究所,广东,广州,510120;中山大学附属第二医院消化疾病研究所,广东,广州,510120;中山大学附属第二医院消化疾病研究所,广东,广州,510120;中山大学附属第二医院消化疾病研究所,广东,广州,510120;中山大学附属第二医院核医学科,广东,广州,510120;中山大学附属第二医院消化疾病研究所,广东,广州,510120【正文语种】中文【中图分类】R739.65【相关文献】1.125I标记抗人CD40 mAb 5H6在荷人卵巢癌(HO8910)BALB/c裸鼠体内分布及放射免疫显像 [J], 罗先富;章斌;马泓冰;汤琳;郑舒丹;徐耀瑜;吴翼伟;张学光2.免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型的建立及其鉴定 [J], 李文新;张秀敏;胡沛臻;隋延仿;师建国;王军伟;史琪琪3.131I标记凝集素PNA在荷人胃癌裸鼠体内的分布 [J], 甘润良;胡平玲4.免疫重建荷人卵巢癌-SCID鼠模型的建立 [J], 赵卫东;张爱君;凌斌;王群华;陈峥峥;姚凤球;周颖;申震5.人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID鼠模型的建立及其生物学特征研究[J], 梁朝霞;程琪;陈怀增;谢幸;叶大风因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

纳米碳吸附5-氟尿嘧啶在大肠癌淋巴化疗中的临床研究

ｔｈｅｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅｃｏｌｏｎｏｓｃｏｐｙ．ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＩｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙｍｐｈｂｌａｃｋｉｎｇｎｌａｒｋｅｒｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｅａｎｅｅｒｒａｄｉｃａｌｍａｓｔｅｅｔｏｍｙｇｕｉｄａｎｃｅｌｙｍｐｈｎｏｄｅｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ。ｂｏｔｈｇｒｏｕｐｓｕｎｄｅｒｗｅｎｔｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒａｎｄｌｙｍｐｈｎｏｄｅｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＶａｒｉｏｕｓｄｅｇｒｅｅｓｏｔｓｔａｉｎｅｄｌｙｍｐｈｎｏｄｅｓｗｅｒｅｓｅｅｎｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｎｅｃｒｏｓｉｓｒａｔｅｓｏｆｅｌｉｍｉｎａｔｅｄｌｙｍｐｈｎｏｄｅｓｉｎｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｇｒｏｕｐｓ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ（ｎ＝３０），ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｎ＝２８）．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｉｎｊｅｃｔｉｏｎｔｈｅｎａｎｏｃａｒｂｏｎ５－Ｆｕｍｉｘｔｕｒｅｂｅｆｏｒｅ

5-FU纳米微粒的制备及其释药特性研究

5-FU纳米微粒的制备及其释药特性研究
孔璐;张阳德
【期刊名称】《解放军医学杂志》
【年(卷),期】2007(32)1
【摘要】目的制备一种新型的载氟尿嘧啶(5-FU)纳米微粒并对其体内释药特性进行研究.方法运用聚合物交联法制备出壳聚糖载氟尿嘧啶纳米粒,通过扫描电镜、激光粒度分析仪对其表征进行检测,紫外分光光度法测定载药量,高效液相色谱法检测体内的释药特性.结果壳聚糖载氟尿嘧啶纳米粒呈圆形或椭圆形,分散性良好,粒径在120～150nm;载药量为31.000%±0.001%;壳聚糖-5-FU纳米粒注射入兔体内后,初期突释相约在1.5h,峰浓度为5 069.6μg/L,随即进入缓释相,浓度维持在
76μg/L,时间长达48h.结论壳聚糖纳米药物载体可改变5-FU在体内的药代动力学行为,延长其循环时间,具有良好的缓释作用.
【总页数】3页(P32-34)
【作者】孔璐;张阳德
【作者单位】410006,长沙,湖南省疾病预防控制中心;中南大学湘雅医学院肝胆肠外科研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.载5-FU免疫纳米微粒的体外释药及其抗癌效应研究 [J], 黄开红;刘建化;王凌云;朱兆华;陈其奎;闵军;陈汝福
2.5-FU核-壳型共聚物纳米胶束的制备及其体内释药的研究 [J], 李苏;姜文奇;王安训;管忠震;潘仕荣
3.三氧化二砷纳米微粒的制备及体外释药特性 [J], 徐丽姝;刘建化;林萍;黄开红;陈茵婷;陈其奎
4.医用葡聚糖磁性纳米微粒的制备及特性研究 [J], 陶凯雄;夏泽锋;王国斌
5.PEG-PLGA载5-FU纳米缓释微球的制备及体外释药研究 [J], 王锡山;汤庆超;汤钧;林航
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经微量泵持续低剂量输注5-Fu治疗晚期肿瘤的疗效观察

ＣｌｎｃｌＩｖｓｉａｉｎｏ－ｌｏｏｒｃｌｗｉｈＬｏｄｓｆＩｆｓｏｙｉｉａｎｅｔｇｔｏｆ５ｆｕｒｕａｉｔｗｏｅｏｎｕｉｎｂＭｉｒ ‘ ｍｐＣｏｉａｌｎＴｒａｍｅｔｏｖｎｃｄＳａｅＴｕｏｓｃｏ。ｐｕｎｔｎｕｌｙｉｅｔｎｆＡｄａｅｔｇｍｒ
ＸＩＣｈａ－ａ，ＬＩＹｕｓｎｇ，ＺＥＮＧｎ－ｕＫＮＧＺａ－ｕ，ＵｈｕｎＺＮｎ－ｎＥｕｎｈｕＮ－ｈｅｈｏｇｘｅ，ＡｈｏｘｎＧＯＳｏ￣ｕ，ＥＧＱｉｇｆｇａ
（ｐｒｍｅｔｆｃｅｔｅａｙ，Ｇａｚｏｍｏｏｐｉａｌ，ｎｈｏ４１０Ｃｈｉａ）ＤｅａｔｎｈｍｏｈｒｐｏｎｈｕＴｕｒＨｓｔＧａｚｕ３００，ｎＡｂｔａｔｓｒｃ：ＯｂｅｔｅＴｏｏｓｒｅｔｅｔｅａｅｔｃｅｆｃｎｔｅｎａｕｕｅｏ一ｌｏｏｒｃｌｔｏｊｃｉ：ｂｅｖｈｈｒｐｕｉｆｅｔｉｈｅｒｆｔｒｆ５ｆｕｒｕａｉｗｉｌｗｖｈ
谢传华，林玉盛，曾红学，昭洵，康郭守俊，曾庆芳
（州市肿瘤医院化疗科，西赣州３１０）赣江４００
摘要：目的：探讨经微量泵持续低剂量输注及经静脉滴注５Ｆ一ｕ治疗晚期肿瘤的临床疗效。方法：１０例晚期胃将２
ｇｏｐａｄｍｌｒｕｓｒｎｏｙ，ｗｈｃｒｏｈｒｃｉｅｈａｈｍｉｔｅａｙｐｏｔｉｈｗｅｅｂｔｅｅｖｄｔｅｓｍｅｃｅｏｈｒｐｒｊｃ．Ｔｈｒａｒｕｓｅｅｔｉｌｇｏｐ

不同5-FU剂量的FOLFIRI方案联合西妥昔单抗治疗转移性结直肠癌的疗效观察

周铄【摘要】目的:探讨不同5-FU剂量的FOLFIRI方案联合西妥昔单抗治疗转移性结直肠癌的疗效.方法:分析我院含5-FU的FOLFIRI方案联合西妥昔单抗治疗转移性结直肠癌患者的24例,并对剂量限制性毒性、疗效、耐受性及不良反应进行评价.结果:LD 5-FU的治疗没有发生剂量限制性毒性症状,HD 5-FU的治疗中6.7%患者发生剂量限制性毒性症状.西妥昔单抗相关的不良事件患者数占总人数的45.8%,严重的不良事件患者数占总人数的33.3%.LD或HD的5-FU处理组的最佳总客观有效率分别为55.5%和53.3%,病情控制率分别为88.8%和93.3%,有效持续期分别为3.2~11.8个月和7.6~13.2个月.结论:西妥昔单抗联合每2周的伊立替康和改良的FOLFIRI方案中通常剂量5-FU或FA,形成的高剂量5-FU方案可以安全的应用于转移性结直肠癌患者的治疗;西妥昔单抗联合FOLFIRI方案在转移性结直肠癌临床治疗中可提高耐受性与疗效.

【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2017(030)001 【总页数】3页(P11-13) 【关键词】西妥昔单抗;转移性结直肠癌;5-FU剂量;FOLFIRI方案【作者】周铄【作者单位】吉林省吉林市中心医院肿瘤内科 132000 【正文语种】中文【中图分类】R735.3 截至目前，结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)已成为全球第三大恶性肿瘤[1]。尽管伊立替康[2]或奥沙利铂[3]联合5-FU/FA治疗方法提高了疗效，为患者增加了约20个月的总生存期(Overall survival，OS)，但同时也增加了毒性；伊立替康治疗方法会导致可控的腹泻和中性粒细胞减少[4]。肿瘤客观有效率和转移切除率之间的正相关性已在接受辅助化疗的转移性结直肠癌(mCRC)患者中得到证实[5，6]。西妥昔单抗阻断EGFR导致对肿瘤的生长、侵袭、转移和血管生成过程的抑制[7]，联合伊立替康或作为单药治疗mCRC中均有很好的疗效[8]。本研究主要评估首次接受西妥昔单抗联合FOLFIRI方案在治疗mCRC患者的有效性和安全性，同时基于剂量限制性毒性和不良事件，确定mCRC临床治疗中5-FU联合西妥昔单抗、伊立替康和FA的间歇静脉滴注最高安全剂量，现将结果报告如下。 1.1 一般资料纳入标准：患者年龄>18岁，存在组织学证实的转移性结肠癌(mCRC)晚期病灶，通过免疫组织化学检测原发肿瘤或转移瘤具有EGFR表达，有至少一处可测量评价的靶病灶的病例；预计生存期≥3个月；KPS评分≥60；已完成>4周的辅助化疗并在先前的化疗或放疗中有恢复。心肺、肝肾、骨髓、凝血功能无明显异常；签署知情同意书，本研究同时经医院伦理道德委员会审核通过。在患者知情同意的基础上，对纳入的24例患者进行随机性分组，其中LD 5-FU组患者9例，HD 5-FU患者组15例；出现下列情况之一者终止治疗：疾病进展、出现不能耐受的不良事件、死亡。患者的临床基本情况如表1所示。 1.2 治疗方法所有患者接受每周的西妥昔单抗，联合每2周的化疗、伊立替康、高剂量(HD,2 600mg/m2)或低剂量(LD,2 100mg/m2)的5-FU和FA组合治疗，每2周为2个疗程。在治疗的第一部分，根据前期分组设定为LD和HD的5-FU处理组。处理组治疗有效果的患者(至少病情稳定，SD)2个疗程后(4周，A阶段)，继续同样剂量的5-FU治疗直到病情有进展(PD)或产生不可接受的毒性(B阶段)。在治疗的第二部分，5-FU的剂量选择基于治疗第一部分A阶段的剂量限制性毒性评价。治疗有效果的患者(至少病情稳定，SD)2个疗程后(4周)，继续联合治疗直到病情有进展(PD)或产生不可接受的毒性。联合治疗有效果但对伊立替康和5-FU/FA有不可接受的非耐受性的患者，接受单独西妥昔单抗治疗直到病情有进展(PD)或产生不可接受的毒性。 1.3 近期疗效和毒性评价根据实体瘤疗效评价标准(RECIST)客观评价肿瘤疗效，分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)，以CR+PR计算总有效率。根据CTCAE v4.0评价患者的毒性反应[9]。 1.4 数据分析采用SPSS19.0软件对数据进行分析。计量资料采用均数±标准差±s)表示，使用t检验进行假设检验分析；计数资料采用例数与率来表示，使用四格表资料比较的χ2检验或“行×列”表资料比较的χ2检验进行假设检验分析；生存资料采用生存数据表示，使用生存函数比较的log-rank检验进行假设检验分析。其中检验水准均为α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。 2.1 剂量限制性毒性评价在本研究第一部分A阶段，LD 5-FU的治疗无剂量限制性毒性症状发生，HD 5-FU的治疗仅6.7%患者发生剂量限制性毒性症状。所以HD 5-FU治疗可作为安全剂量的治疗方案并在后续第二部分中被采用。见表2。 2.2 耐受性治疗方案具有较好耐受性，不良事件也在治疗方案的预期之中或源于疾病本身。不良症状整体上多为腹泻、皮疹、反胃或虚弱。3/4级不良事件多为白细胞减少症、痤疮样皮疹、腹泻、呕吐和乏力。西妥昔单抗相关的不良事件患者数占总人数的45.8%，严重的不良事件患者数占总人数的33.3%。由于不良事件而中断化疗或西妥昔单抗治疗的占总人数的4.2%，但未出现由于西妥昔单抗治疗而致死的事件发生。见表3。 2.3 疗效研究所纳入患者的中位无进展生存期和总生存期分别为6.7个月和21.6个月；LD或HD的5-FU处理组的最佳客观有效率分别为55.5%和53.3%，病情控制率分别为88.8%和93.3%，有效持续期分别为3.2～11.8个月和7.6～13.2个月(表4)。LD和HD的5-FU处理组的中位无进展存活期分别是5.5个月和7.3个月，中位总生存期分别为18.6个月和23.2个月。本研究证实了西妥昔单抗联合每2周的伊立替康和改良的FOLFIRI方案(400mg/m2静脉推注加2 400mg/m2)中通常剂量5-FU或FA，形成的高剂量5-FU方案可以安全的应用于转移性结直肠癌患者的治疗。同时，本研究也证实了西妥昔单抗联合FOLFIRI方案在转移性结直肠癌临床治疗中可提高耐受性与疗效。在15例HD 5-FU治疗的患者中，53.3%达到客观的响应。本研究中21.6个月的存活期相比于以前报道的FOLFIRI方案单独治疗中17.4个月的存活期[10]具有明显优势，相比于增加血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂贝伐单抗方案中20.3个月[11]的存活期也更好。患者对治疗均有较好的耐受性，大多数患者能够获得超过计划剂量80%的药物并无与疗相关的死亡。额外西妥昔单抗联合每2周的FOLFIRI方案导致一些副作用的发生，但未加剧与此化疗方案相关的3/4级毒性事件的发生。其他研究所报道的伊立替康和静脉推注5-FU/甲酰四氢叶酸有效率[12]也支持了本研究的结果。西妥昔单抗联合5-FU/FA/奥沙利铂(FUFOX)治疗也被报道具有较好疗效，而另一研究中该方案可证实有效率为57%，并具有28.2个月的存活期[13]。直结肠癌切除手术被认为是提高此类患者长期生存的有效方式，而有效率则是作为该方法的评价的指示参数。本研究中26%患者有最初不能切除的转移性疾病但在该治疗后获得切除，该结果也支持了西妥昔单抗联合FUFOX治疗研究中23%和AIO混合5-FU/FA方案中24%的结果一致[14]，并在此证实了本研究治疗方案具有较好疗效。此外，利用分子生物标志物来预测治疗的响应已成为关注的焦点。已有数据表明KRAS基因突变可以预测直结肠癌患者临床治疗中对西妥昔单抗的抗性[15]，并在最近西妥昔单抗联合FUFOX 或FUFOX方案的临床治疗研究中得以证实。这将会是西妥昔单抗治疗中更有效和针对性发展的重要方向。

载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116_的杀伤作用

胞内功能,包括自噬㊁线粒体功能障碍和细胞凋亡[11]㊂Xu 等[5]发现上调Sirt1/FoxO1信号轴可以缓解DM 大鼠肾损伤㊂本研究结果显示,与NR 组相比,HG 组p -Sirt1/Sirt1㊁p -FoxO1/FoxO1蛋白水平显著降低,而CT 使p -Sirt1/Sirt1㊁p -FoxO1/FoxO1蛋白水平显著上调,暗示CT 可以通过激活Sirt1/FoxO1信号轴激活细胞自噬以及细胞凋亡,进而缓解高糖诱导的GEC 炎性损伤以及氧化应激损伤㊂本研究用Sirt1/FoxO1信号轴抑制剂和CT 共同处理GEC ,结果发现SIRT1-IN -1逆转了CT 对GEC 的有利作用㊂综上所述,CT 可以通过上调Sirt1/FoxO1信号轴激活自噬,减轻高糖诱导的炎性损伤㊁氧化应激损伤㊂本文不足是研究机制较浅,我们将在下步实验深入研究㊂ʌ参考文献ɔ[1]㊀Orr P ,Shank BC ,Hickson S ,et al.Clinical management ofglomerular diseases [J ].Nurs Clin North Am ,2018,53(4):551-567.[2]㊀Daehn IS ,Duffield JS.The glomerular filtration barrier :astructural target for novel kidney therapies [J ].Nat RevDrug Discov ,2021,20(10):770-788.[3]㊀Sun L ,Sun C ,Zhou S ,Zhang L ,et al.Tamsulosin attenuateshigh glucose -induced injury in glomerular endothelial cells[J ].Bioengineered ,2021,12(1):5184-5194.[4]㊀Song M ,Chen L ,Zhang L ,et al.Cryptotanshinone enhanceswound healing in type 2diabetes with modulatory effects on inflammation ,angiogenesis and extracellular matrix remodel-ling [J ].Pharm Biol ,2020,58(1):845-853.[5]㊀Xu J ,Liu LQ ,Xu LL ,et al.Metformin alleviates renal injuryin diabetic rats by inducing Sirt1/FoxO1autophagic signalaxis [J ].Clin Exp Pharmacol Physiol ,2020,47(4):599-608.[6]㊀Shan MY ,Dai Y ,Ren XD ,et al.Berberine mitigates nonalco-holic hepatic steatosis by downregulating SIRT1-FoxO1-SREBP2pathway for cholesterol synthesis [J ].Integr Med ,2021,19(6):545-554.[7]㊀Lo SH ,Hsu CT ,Niu HS ,et al.Cryptotanshinone inhibitsSTAT3signaling to alleviate cardiac fibrosis in type 1-like diabetic rats [J ].Phytother Res ,2017,31(4):638-646.[8]㊀Mukohara S ,Mifune Y ,Inui A ,et al.In vitro and in vivotenocyte -protective effectiveness of dehydroepiandrosteroneagainst high glucose -induced oxidative stress [J ].BMCMusculoskelet Disord ,2021,22(1):519-529.[9]㊀Tang PM ,Nikolic -Paterson DJ ,Lan HY.Macrophages :ver-satile players in renal inflammation and fibrosis [J ].Nat Rev Nephrol ,2019,15(3):144-158.[10]㊀Koch EAT ,Nakhoul R ,Nakhoul F ,et 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-128水平明显高于5-氟尿嘧啶组(P <0.05)㊂结论:细胞外㊃398㊃ʌ基金项目ɔ湖北省卫健委2019年科研项目,(编号:WJ2019F184)ʌ通讯作者ɔ马燕凌囊泡装载5-氟尿嘧啶能明显抑制结直肠癌细胞株HCT116增殖㊁侵袭水平,增强其凋亡水平,其机制可能与细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能促进结直肠癌细胞株HCT116高表达miR-128,低表达PI3K有关㊂ʌ关键词ɔ㊀载5-氟尿嘧啶细胞囊泡;㊀结直肠癌;㊀细胞增殖ʌ文献标识码ɔ㊀A㊀㊀㊀㊀㊀ʌdoiɔ10.3969/j.issn.1006-6233.2023.06.03Killing Effect of5-Fluorouracil Cell Vesicles onColorectal Cancer Cell Line HCT116SUN Jianhai,YAN Fei,WEI Wujie,et al(Hubei Third People's Hospital Affiliated to Jianghan University,Hubei Wuhan430000,China)ʌAbstractɔObjective:To explore the killing effect of5-fluorouracil cell vesicles on colorectal cancer cell line HCT116.Methods:The HCT116group,cell vesicles group(EVs suspension5mL,106cells/mL), 5-fluorouracil group(5-fluorouracil5mL,30μg/mL),and5-fluorouracil drug-loaded vesicles group(EVs suspension5mL,106cells/mL+5-fluorouracil5mL,30μg/mL)were set up,and6parallel samples of each well of the above groups were incubated for72h.After incubation,the levels of cell proliferation,invasion and apoptosis were determined,and the levels of miR-128and PIK3were determined by RT-PCR and western blotting.Results:The OD value,survival rate,number of monoclonal formation,number of membrane pene-tration,migration distance,apoptosis rate,miR-128level,PI3K mRNA and protein levels in cell vesicles group were not significantly different from those in HCT116group(P>0.05).OD value,survival rate,num-ber of monoclonal formation,number of membrane penetration,migration distance,PI3KmRNA and protein levels in5-fluorouracil group and5-fluorouracil drug-loaded vesicles group were significantly lower than those in HCT116group and cell vesicles group(P<0.05),and the apoptosis rate and the level of miR-128were significantly higher than those in HCT116group and cell vesicle group(P<0.05).OD value,survival rate, number of monoclonal formation,number of membrane penetration,migration distance,PI3K mRNA and pro-tein levels in5-fluorouracil drug-loaded vesicles group were significantly lower than those in5-fluorouracil group,and the apoptosis rate and miR-128level were significantly higher than those in5-fluorouracil group (P<0.05).Conclusion:Extracellular vesicles loaded with5-fluorouracil can significantly inhibit the prolif-eration and invasion level of colorectal cancer cell line HCT116,and enhance its apoptosis level,which may be related to the mechanism that extracellular vesicles loaded with5-fluorouracil can promote the high expres-sion of miR-128and low expression of PI3K in colorectal cancer cell line HCT116.ʌKey wordsɔ㊀5-fluorouracil;㊀Colorectal cancer;㊀Proliferation of cells㊀㊀结直肠癌(CRC)可导致正常结肠黏膜恶化为浸润性肠黏膜[1],遗传和环境因素等许多风险因素都会导致CRC的发生[2]㊂手术是早期CRC病例的金标准治疗方法,但绝大多数CRC患者术后生存率较低㊂细胞外囊泡(EV)是一种球形脂质双层,EV可以将蛋白质㊁糖蛋白㊁脂质㊁核酸和细胞因子从母体细胞转移到受体细胞,以促进受体细胞的表型变化,并在细胞间通讯中发挥重要作用㊂EV可以携带母体细胞成分以影响各种生物过程,包括:DNA转移㊁细胞代谢物输出㊁细胞间通讯等㊂细胞外囊泡由于其可修饰性㊁有效的装载能力和天然的肿瘤靶向特性而被广泛用作抗肿瘤药物的递送工具[3,4]㊂研究发现,5-氟尿嘧啶与结直肠癌患者来源的EV有机结合就形成了载5-氟尿嘧啶细胞囊泡,其具有高效靶向性㊁特异性高以及副作用小等特点㊂微小RNA(miRNA)是19-24个核苷酸的小型非编码RNA,已被确定为多种癌症类型的潜在标志物,包括CRC[5]㊂大量的miRNA与CRC的发展或总体存活率低有关㊂例如,在转移性CRC患者中,miR-30d-5p血浆水平有所提高㊂基于miRNA的微阵列显示miR-128是CRC细胞中最显著上调的miRNA之一,miR-128过表达有助于促进细胞迁移和侵袭[6]㊂本研究拟探讨载5-氟尿嘧啶细胞囊泡对结直肠癌细胞株HCT116的杀伤作用,为结直肠癌的治疗提供依据㊂1㊀材料与方法1.1㊀试剂及仪器:DMEM-F12(Sigma-Aldrich Chemi-㊃498㊃cal Company),FBS(System Biosciences),1ˑ抗生素和抗真菌剂(Life technologies),10%胎牛血清(FBS;Hy-clone;GE Healthcare Life Sciences),Dulbecco改良Ea-gle培养基(DMEM)完全培养基(Sigma),链霉素㊁青霉素(Gibco;Thermo Fisher Scientific),CCK-8溶液(Ye-asen),FITC-膜联蛋白㊁碘化丙锭(PI)(BioLegend), Transwell室(BD Biosciences)㊁Matrigel(Corning),TR-Izol试剂盒(Invitrogen),miScript逆转录试剂盒(Qia-gen),SYBR Premix EX Taq(TaKaRa Otsu Shiga),逆转录试剂盒(Promega),IQTM SYBR Green Supermix试剂盒(Bio-Rad),Radio Immunoprecipitation Assay裂解缓冲液㊁二辛可宁酸蛋白质测定试剂盒(Thermo Fisher),一抗PIK3兔多克隆抗体㊁GAPDH兔铵多克隆抗体(Abcam,Cambridge),辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG(Abcam Cambridge)㊂SpectraMax M5酶标仪(Molecular Devices),流式细胞仪(BD Biosciences), Cell QuestPro软件(BD Biosciences),Applied Biosys-tems7500系统(Applied Biosystems)㊂1.2㊀细胞外囊泡分离:结直肠癌细胞株HCT116在DMEM-F12中生长,含有10%EV消耗的FBS和1ˑ抗生素和抗真菌剂培养48h后,通过不同的离心方法将EV从培养基中分离出来㊂将收集的培养基以300g离心10min,然后以2000g离心25min㊂通过0.22μm过滤器收集上清液㊂使用获得的培养基在100000g和4ħ下离心60min来制造EV㊂然后弃去上清液㊂在相同条件下,将培养基超速离心并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)重悬用于后续分析㊂提取的EV由日立JEM-2100透射电子显微镜(日本电子有限公司)鉴定㊂1.3㊀细胞培养及分组:结直肠癌细胞株HCT116购自Be Na Culture Collection㊂细胞系均在含有10%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)完全培养基中培养,添加100U/mL链霉素和100U/mL青霉素㊂所有细胞系均置于37ħ㊁5%CO2恒温培养箱中培养备用㊂HCT116组㊁细胞囊泡组㊁5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组培养方法HCT116组的培养方法如前所述;细胞囊泡组加入EV混悬液5mL(106个/mL);5 -氟尿嘧啶组加入5-氟尿嘧啶5mL(30μg/mL);5-氟尿嘧啶载药囊泡组加入载药囊泡混悬液5mL,载药囊泡混悬液的制备方法如下:取5-氟尿嘧啶30μg,溶于1mL EVs混悬液中,在37ħ恒温培养箱中孵育1h, 9168r/min离心10min,经0.22μm过滤器过滤; 30900r/min离心70min,将沉淀溶于PBS,即得载药囊泡混悬液㊂各组设6个平行样,培养72h㊂1.4㊀HCT116细胞活力及单克隆形成数目检测:将细胞接种到96孔板中,每孔1ˑ103个细胞,在5%CO2, 37ħ环境下孵育72h,将10μL CCK-8溶液加入每个孔中㊂在37ħ下孵育1.5h后,使用SpectraMax M5检测450nm处的光密度值㊂细胞存活率=(实验组OD-空白组OD)/(HCT116组OD-空白组OD)㊂将各组结直肠癌细胞株HCT116用0.25%胰蛋白酶消化成单细胞,以4ˑ105细胞/孔的密度接种到6孔培养板中, 24h后,将50个细胞接种于6孔组织培养板中,继续培养2周,然后将细胞用结晶紫-福尔马林溶液染色10min并计数㊂1.5㊀HCT116细胞凋亡测定:使用FITC-膜联蛋白V 和碘化丙锭(PI)通过流式细胞术分析细胞凋亡㊂将2mL细胞(5ˑ104个细胞/mL)接种到6孔板中,48h 后,用PBS洗涤细胞两次,消化并重悬于100μL结合缓冲液中㊂细胞密度调整为0.5ˑ106个/mL细胞,使用5μL Annexin V/FITC在室温下黑暗染色细胞10min,加入100μL结合缓冲液,将细胞在室温下在黑暗中用5μL PI染色5min㊂用流式细胞术分析细胞凋亡率,用Cell Quest Pro软件计算凋亡细胞百分比㊂1.6㊀HCT116细胞侵袭㊁迁移测定:通过Transwell小室评估细胞的侵袭能力㊂Transwell室底部膜的孔径为8μm,底室充满600μL含有10%FBS的DMEM营养液,顶室的大小为200μL,接种5ˑ105个细胞,在37ħ㊁5%CO2的培养箱中培养24h,将Transwell小室取出并固定在由甲醇和冰醋酸(3:1)组成的液体中30min,用PBS洗涤腔室,用0.5%结晶紫染色并最后固定,在显微镜下随机取5个视野观察并计数染色细胞数㊂迁移水平测定,将约5ˑ104个细胞加入涂有500ng/mL Ma-trigel的24孔Transwell上室㊂下室充满10%FBS补充的DMEM培养基,将细胞在37ħ㊁5%CO2的培养箱中培养㊂24h后,取出Transwell插入物,使用无菌镊子移除插入物以产生均匀的500μm无细胞间隙,用4%多聚甲醛固定30min,在显微镜下计算迁移距离㊂1.7㊀HCT116细胞miR-128㊁PIK3mRNA水平测定: TRIzol试剂盒提取总RNA㊂为了量化miR-128的表达,采用miScript逆转录试剂盒(Qiagen)合成互补DNA,并使用SYBRPremixEXTaq以U6作为内标进行qRT-PCR参考miR-128㊂为了量化PIK3mRNA的表达,使用逆转录试剂盒(Promega)生成cDNA,并应用IQTM SYBR Green Supermix试剂盒以GAPDH作为内源对照进行扩增㊂结果用2-ΔΔCt值进行量化和归一化㊂qRT-PCR检测均在Applied Biosystems7500系统上进行㊂1.8㊀结直肠癌细胞株HCT116PIK3蛋白表达水平测㊃598㊃定:不同处理组的细胞转染72h后,用Radio Immuno-precipitation Assay裂解缓冲液在冰上裂解10min,二辛可宁酸蛋白质测定法定量蛋白质,将蛋白质在100V 电压下加载到十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中,转移到聚偏二氟乙烯膜上,用5%BSA/TBST封闭60min,将膜与一抗PIK3兔多克隆抗体和GAPDH兔铵多克隆抗体在4ħ下孵育过夜,在室温下用1ˑTBST 溶液洗涤每次5min,重复3次㊂室温下,将膜与辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG孵育1h,并用TBST 洗涤3次㊂每20min应用电化学发光检测发光反应,并拍摄蛋白质印记以供观察㊂1.9㊀统计学分析:SPSS24.0软件进行统计分析,定量数据以均值ʃ标准差表示,多组均数比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验,P<0.05表示差异有统计学意义㊂2㊀结㊀果2.1㊀各组结直肠癌细胞株HCT116OD值㊁存活率比较:细胞囊泡组OD值㊁存活率与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD值㊁存活率明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组OD值㊁存活率明显低于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表1㊂表1㊀各组结直肠癌细胞株HCT116OD值存活率比较组别复孔数OD值存活率(%) HCT116组60.80ʃ0.0773.52ʃ5.73细胞囊泡组60.81ʃ0.0872.85ʃ5.37 5-氟尿嘧啶组60.54ʃ0.05b52.10ʃ3.27b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组60.24ʃ0.05bc30.12ʃ4.04bc F19.65821.365 P0.0000.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.052.2㊀各组结直肠癌细胞株HCT116单克隆形成数目比较:细胞囊泡组单克隆形成数目与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组单克隆形成数目明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组单克隆形成数目明显低于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表2㊁图1㊂表2㊀各组结直肠癌细胞株HCT116克隆形成数目比较组别复孔数单克隆形成数目HCT116组6647.77ʃ99.47细胞囊泡组6652.59ʃ95.35 5-氟尿嘧啶组6453.54ʃ55.87b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组6124.29ʃ22.47bc F25.297 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.05图1㊀各组结直肠癌细胞株HCT116克隆形成数目比较(结晶紫染色,ˑ400)(A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.3㊀各组结直肠癌细胞株HCT116凋亡率比较:细胞囊泡组凋亡率与HCT116组比较无统计学意义(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组凋亡率明显高于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组凋亡率明显高于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表3㊁图2㊂表3㊀各组结直肠癌细胞株HCT116凋亡率比较组别复孔数凋亡率(%) HCT116组6 2.06ʃ0.32细胞囊泡组6 2.02ʃ0.33 5-氟尿嘧啶组6 3.04ʃ0.52b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组614.75ʃ2.14bc F15.632 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比㊃698㊃P<0.05图2㊀各组结直肠癌细胞株HCT116凋亡率比较流式细胞图(A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.4㊀各组结直肠癌细胞株HCT116侵袭能力比较:细胞囊泡组穿膜数与HCT116组比较无统计学差异(P> 0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组穿膜数明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组穿膜数明显低于5-氟尿嘧啶组(P< 0.05)㊂见表4㊁图3㊂表4㊀各组结直肠癌细胞株HCT116穿膜数比较组别复孔数穿膜数(个) HCT116组62654.69ʃ484.30细胞囊泡组62701.74ʃ411.88 5-氟尿嘧啶组61247.02ʃ205.59b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组6423.63ʃ85.89bc F29.667 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.05图3㊀各组结直肠癌细胞株HCT116穿膜数数目比较(结晶紫染色,ˑ400)(A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.5㊀各组结直肠癌细胞株HCT116迁移能力比较:细胞囊泡组迁移距离与HCT116组比较无统计学差异(P >0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组迁移距离明显低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组迁移距离明显低于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表5㊁图4㊂表5㊀各组结直肠癌细胞株HCT116迁移距离比较组别复孔数迁移距离(μm) HCT116组628.92ʃ5.02细胞囊泡组629.02ʃ5.03 5-氟尿嘧啶组615.80ʃ2.00b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组6 6.41ʃ1.32bc F36.257 P0.000㊀㊀注:b与HCT116组相比P<0.05;c与5-氟尿嘧啶组相比P<0.05图4㊀各组结直肠癌细胞株HCT116迁移距离比较(ˑ400) (A:HCT116组B:细胞囊泡组C:5-氟尿嘧啶组C:5-氟尿嘧啶载药囊泡组)2.6㊀各组结直肠癌细胞株HCT116miR-128㊁PI3K mRNA和蛋白水平比较:细胞囊泡组miR-128水平与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组miR-128高于HCT116组㊁细胞囊泡组(P<0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组miR-128高于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂细胞囊泡组PI3K mRNA和蛋白与HCT116组比较无统计学差异(P>0.05);5-氟尿嘧啶组㊁5-氟尿嘧啶载药囊泡组PI3K mRNA和蛋白低于HCT116组㊁细胞囊泡组(P< 0.05),5-氟尿嘧啶载药囊泡组PI3KmRNA和蛋白低㊃798㊃于5-氟尿嘧啶组(P<0.05)㊂见表6㊂表6㊀各组结直肠癌细胞株HCT116miR -128PI3K mRNA 和蛋白表达水平比较组别复孔数miR -128PI3KmRNA PI3K 蛋白(/GAPDH )HCT116组6 1.17ʃ0.23 3.85ʃ0.65 3.95ʃ0.79细胞囊泡组6 1.15ʃ0.26 3.90ʃ0.63 3.89ʃ0.785-氟尿嘧啶组6 3.68ʃ0.57b 2.54ʃ0.44b 2.34ʃ0.47b 5-氟尿嘧啶载药囊泡组65.42ʃ0.98bc1.63ʃ0.28bc1.44ʃ0.21bcF 29.85732.25818.578P0.0000.0000.000㊀㊀注:b 与HCT116组相比P<0.05;c 与5-氟尿嘧啶组相比P<0.053㊀讨㊀论EV 作为一种纳米级的膜结构,主要负责携带各种内容物,通过质膜融合㊁内吞㊁与细胞表面受体结合等机制广泛参与肿瘤的生物学过程㊂EV 作为肿瘤侵袭转移的分子基础之一,对肺癌的早期诊断和靶向治疗具有重要意义㊂研究发现,来源于高转移肺癌细胞和晚期肺癌患者血清的EV 诱导波形蛋白表达,诱导HBECs 上皮-间质转化,诱导非转移癌细胞的迁移㊁侵袭和增殖[7];与来自早期非小细胞肺癌(NSCLC )细胞的EV 相比,来自转移性SCLC 细胞的EV 对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响更大㊂特别是在缺氧条件下,转移性小细胞肺癌细胞EV 中与肿瘤细胞迁移和侵袭密切相关的转化生长因子-β和白细胞介素-10含量增加[8,9]㊂EV 作为细胞间信息交换的重要物质,通过自分泌或远距离传播的方式将相关信号分子传递给靶细胞,从而产生一系列生物学效应㊂因此,EV 靶向肿瘤治疗方法可能具有广阔的前景㊂已经确定了EV 中常见的三个蛋白质家族,分别是热休克蛋白70(HSP70)㊁S -腺苷同型半胱氨酸酶和甘油醛3-磷酸脱氢酶㊂在这项研究中,我们对EV 进行了蛋白质组学分析,发现了所有三种蛋白质,进一步证实了EV 的纯化㊂同时,我们在EV 中发现了MAP30㊁MAP30可以增加细胞内Ca 2+离子浓度,从而通过细胞凋亡触发ROS 介导的癌细胞凋亡㊂本研究发现5-氟尿嘧啶载药囊泡处理后细胞凋亡的产生,这可能是由EV 中的MAP30蛋白介导的㊂氟尿嘧啶可诱导线粒体ROS ,导致癌细胞增殖㊁侵袭能力下降,ROS 的产生增强了5-氟尿嘧啶对癌细胞的抗肿瘤作用㊂而抗氧化剂降低了5-氟尿嘧啶在结肠癌中的凋亡作用㊂本研究发现载5-氟尿嘧啶细胞囊泡能明显抑制结直肠癌细胞株HCT116增殖㊁侵袭水平,增强其凋亡水平㊂PI3K 蛋白家族是由调节亚基p85和催化亚基p110组成的二聚体,广泛参与调控细胞增殖㊁分化㊁凋亡和迁移等表型㊂有报道[10,11]称PI3K 信号的异常激活参与5-氟尿嘧啶耐药的发生发展,而EV 通过激活细胞凋亡信号通路和负向调节PI3K /Akt 信号通路,抑制5-氟尿嘧啶耐药NSCLC 细胞增殖并诱导细胞凋亡,延缓5-氟尿嘧啶耐药NSCLC 细胞的增殖和凋亡㊂此外,炎症是肿瘤进展的重要组成部分㊂化疗增强炎症可能导致治疗失败和转移㊂PI3K 是先天免疫系统的重要组成部分之一,在癌症中起着重要作用㊂许多因素可以激活PI3K ,包括K +流出㊁细胞内钙㊁内质网(ER )应激和ROS [12]㊂之前的研究结果表明,5-氟尿嘧啶治疗增加了口腔癌(OSCC )中PI3K 的表达,从而介导了5-氟尿嘧啶耐药耐药性,而5-氟尿嘧啶耐药可以促进OSCC 中的肿瘤生长和转移㊂Fer 样家族成员4(Ferrostatin -4)是PI3K 的下游调控因子,其在肺癌细胞系A549和95D 中的过表达抑制集落形成㊁细胞增殖和迁移,导致细胞中PI3K /Akt 表达降低,同时使用小分子抑制剂激活PI3K /Akt 信号磷酸酶和张力蛋白同系物逆转了Ferrostatin -4对细胞增殖和转移的抑制作用㊂同样,miR -128表达在肺癌组织或细胞中下调,miR -128的敲低通过激活PI3K /Akt 通路促进A549细胞活力㊁集落形成和侵袭,加速肿瘤转移和复发㊂本研究结果与上述研究结果一致,发现细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能促进结直肠癌细胞株HCT116高表达miR -128,低表达PI3K ㊂本研究未探讨细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶对直肠癌细胞株HCT116Ferrostatin -4表达的影响,这将在后续研究中进行㊂㊃898㊃综上所述,细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能明显抑制结直肠癌细胞株HCT116增殖㊁侵袭水平,增强其凋亡水平,其机制可能与细胞外囊泡装载5-氟尿嘧啶能促进结直肠癌细胞株HCT116高表达miR -128,低表达PI3K 有关㊂ʌ参考文献ɔ[1]㊀Xi Y ,Xu P.Global colorectal cancer burden in 2020and pro-jections to 2040[J ].Transl Oncol ,2021,14(10):101174.[2]㊀Biller LH ,Schrag D.Diagnosis and treatment of metastaticcolorectal cancer :a review [J ].JAMA ,2021,325(7):669-685.[3]㊀Herrmann IK ,Wood MJA ,Fuhrmann G.Extracellular vesiclesas a next -generation drug delivery platform [J ].Nat Nano-technol 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㊂并用CD31蛋白作为标志物用免疫荧光化学法(IF )鉴定股骨头MVECs ㊂将MVECs 分为过表达circRNA YAP1组(pcDNA -YAP1组)㊁阴性对照组(pcDNA -NC 组)㊁以及pcDNA -YAP1联合Wnt1/β-catenin 通路拮抗剂dickkopf -1处理组(pcDNA -YAP1+dickkopf -1组)㊂用qPCR 检测circRNA YAP1表达,Western blot 法分别检测Wnt1㊁β-catenin ㊁VEGF -A 和vimentin 的表达㊂用CCK -8实验检测各组细胞的增殖活性㊂Transwell 小室检测细胞的迁移率㊂管形成实验检测细胞的血管生成能力㊂结果:HE 染色结果显示Ctrl 组表现为健康状态,无骨坏死,SONFH 组大鼠均重度股骨头坏死,股骨头恶化㊂micro -CT 扫描的结果显示Ctrl 组表现骨小梁致密规则,骨小梁数量和形态均正常,SONFH 组伴空骨陷窝,骨小梁减少,骨小梁缩短㊂与Ctrl 组(1.00ʃ0.08;1.00ʃ0.12;1.00ʃ0.15)比较,SONFH 组股骨组织中circRNA YAP1(0.27ʃ0.04)㊁Wnt1(0.49ʃ0.03)㊁β-catenin (0.33ʃ0.03)表达量均显著减少(t =12.158,P =0.009;t =10.596,P =0.012;t =10.080,P =0.014)㊂另外,成功分离Ctrl 组和SONFH 组的股骨头MVECs ㊂与Ctrl 组(1.00ʃ0.㊃998㊃ʌ基金项目ɔ新疆维吾尔自治区自然科学基金项目,(编号:2021D01C426)ʌ通讯作者ɔ吕㊀青。

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载５一ＦＵ纳米微粒抗肿瘤的实验研究
黄开红刘建化王凌云朱兆华，陈其奎闵军陈汝福，，，，，
（中山大学附属第二医院消化内科，普通外科，东广州５０２）广１１０
［摘
要］目的：研究抗癌药５一Ｕ纳米控释静脉注射微粒的制备工艺及其体内外抗肿瘤作用。方法：以Ｆ
ａｎｖｌａｏａｔｌｏｔｌｅｅｓｇｐｅａｔｎｏｌｏｕａｉ５一Ｆｏｅｎｐｒｃｓｃｎｒ —ｒｌａｉｒｐａｉｆｎｉｅｏｎｒｏ５一ｆｒｒｃｌ（ｕｏＵ）ｂｔｖｎｕｎｃｉ．ＭＥＨＯＤＳｙｉｒｅｏｓｉｊｔｎｎａｅｏＴ：Ｗｉｏｙｃｃａｉ（ＬｓａｉｍｔｒｓｅａｏｔｄｕｔｓｕｄｅｕｓｃｔｎｍｔｄｔｒｐｅＰＡｅｖｌｅｈｔｐｌｌｔｃＰＡ）ａｍｒａｅａ，ｗｄｐｅｌａｏｎｍｌｆａｏｅｏｐｅａＬｎｅｏｄａｉｄｘｉｌｒｉｉｉｈｏｒｐ
（ａｉ）ｏｅｎｏａｔｌｓａｅｒｉｅｙｍｅｓｏｉｒｏｆａｐｒｃｓｄｔｎｂａｆｇｔｈｔｎｉｅＷｅｍｄｎｈｈ—ｐｗｒｉｕｄｃｒｍｔｇｐｙＨＬ）ａｄＭＹｔｔａｏｅｌｉｈｏａｏｒｈ（ＰＣｎＴｓＷｑａｅｓ
ＨＵＡＮＧＫｉａ —ｈｎｏｇ，ＬＵＪａＩｉｎ—ｈａ，ＷＡＮＧＬｎｕｉｇ—ｙｎ，Ｚｈｏ—ｈａ，ＣｕＨＵＺａｕＨＥＮ
Ｑ —ｋｉ，ＮＪｎ，ＣＥｕ—ｆｉｕＭＩｕＨＮＲｕ
［ＢＳＲＴ］ＡＭ：ｏｉｖｓｇｔｔｅｐｅａｔｎｔｃｍｑｅｎｔ—ｔｍｒｆｃｏｈｉｉｏａｄｉｖｆＡＴＡＣＩＴｅｔａｒｐｒｏｈｕｓｄａｉｕｏｅｔｂｔｖｒｖｏｏｎｉｅｈａｉｅａｎｅｓｎｔｎｎｉ
Ｅｘｒｍｅａｔｙｏ－ｆｕｏｏａｉｌａｅｌｌｃｉｃｄｎｎｏａｔｃｅｐｅｉｎｔｌｓｕｄｆ５－ｌｒｕｒｃｌｏｄｄｐｏｙａｔｃａｉａｐｒｉｌｓｃｎｔｏ－ｅｅｓｎｇｐｒｐｒｔｏｎｕｍｏｏｒｌ－ｒｌａｉｅａａｉｎｏｔｒ
聚乳酸（Ｌ作为基质材料，ＰＡ）采用超声乳化一剂挥发法制备ＰＡ包载５一Ｆ溶ＬＵ的纳米微粒（５一ＦＵ～Ｎｓ。扫描Ｐ）电镜观察５一ＦＵ—ＮｓＰ形态，通过激光光散射实验测定５一ＦＵ～Ｎｓ的粒径分布。利用高效液相色谱（ＰＣ）定ＰＨＬ测５一Ｕ—ＮｓＦＰ的载药率，ＭＴ以Ｙ方法检测５～ＦＵ—ＮｓＰ体外杀伤癌细胞效应，５一Ｕ— Ｐ不同剂量、用ＦＮｓ给药频度条件下体内抑瘤实验。结果：电镜观察５一ＦＵ—ＮｓＰ为表面光滑的球形微粒，粒径分布平均值是１１１ｎ呈正态分９．ｍ，布。５一ＦＮｓＵ— Ｐ载药率为１．％。体外ＭＴ实验提示５一Ｆ５２１ｒＵ—ＮｓＰ作用明显优于５一ＦＰ＜．５。体内抑瘤Ｕ（００）
５一Ｕｎｎｐｒｃｓ（Ｆａｏａｔｌ５一ＦｉｅＵ—Ｎｓ．ｃｎｉｇｅｃｉｔｍｃｏｃｐａｓｂｅｖｅｍｒｈｌｙｆＰ）ＳａｎｎｌｔｃｙｉｒｓｏｙＷｕｅｔｏｓｒｅｏｐｏｏｅｒｉｓｄｏｈｔｇｏ５一ＦＵ—ＮｓＰ
ｎａｒｏｔｌｓａｔｉｘｅｍｅｔａｄｌｅｐｉａｃｔｒｇｅｐｒｎｓｃｎｕｔｄｔｅｅｍｉｅｉｉｍｅｅｉｔｂｔｎｓｃｅｎｉｗａｏｄｃｅｏｄｔｒｎｔｄａｔｒｄｓｒ ห้องสมุดไป่ตู้ ｉ．Ｔｅｄｕｓｉｏｈｒｇ—ｃｒｙｎａａｉａｒｉｇｃｐｃｔｙ
维普资讯
・
ｌ０７６・
坚国病理生理杂志
ＣｉｓＪｕｎｌｆａｏｈｓｌｙ２０，３９：７６—１０ｈｅｅｏｒａｏｔｐｙｉｏ０７２（）１０ｎＰｈｏｇ７９
［文章编号］１０４１【０７０００－７８２０）９—１００７６－４
实验表明：Ｕ—Ｎｓ５一ＦＰ间隔给药疗效优于未包载药物每日给药的疗效，一效关系明显，量且毒性减低。结论：５一
ＦＮｓＵ— Ｐ可以作为５一Ｕ的有效载体，Ｆ实现药物控制释放并减低毒性，发挥药物更佳的抗肿瘤作用。
［关键词］纳米微粒；氟尿嘧啶；肿瘤；缓释作用［中图分类号］Ｒ３７３［文献标识码］Ａ
（ｎｔｕｅｆＧｓｏｎｒｌｙＤｐｒｅｔＧｎｒｌｕｇｒ，ｈｅｎＺｅｏｉｌＳｎＹｔｓｎｖｒｔ，Ｉｉｔｏａｔｅｔｏｇ，ｅａｔｎｏｅｅａＳｎｅｙＴｅｃｄｓｔｒｅｏｍｆＳｏｄＨｓｔｕａ一．ＵｉｓｙｐａｏｆｅｎｅｉＧａｇｈｕ５０２Ｃｉ．Ｅ—ｍｉｈａｇａｈ１ｎｃｍ）ｕｎｚｏ１１０，ｈｎａａｌｕｎｋｉ＠２ｃ．ｏ：