高中生物第2章酶技术第6课时酶活力的测定同步备课教学案北师大选修1

1 第6课时 酶活力的测定 [学习导航] 1.阅读教材P33、P35内容，了解酶活力和酶反应速度的关系。2.结合教材P32～33

内容，检测果胶酶的活力。3.结合教材P34内容，探究果胶酶作用的最佳条件。

[重难点击] 1.解释果胶酶活力测定原理及方法。2.探究果胶酶作用的最佳条件。 一、检测果胶酶的活力

不同条件下，酶的活性是不同的，要定量地比较酶活力的差别就要进行酶活力的测定。结合教材实验，完成下面的探究内容。 1.酶活力单位及其测定方法 (1)酶活力单位是指在一定条件下，1 min内能转化1 μmol底物的酶量。测定过程中温度保持在25 ℃，其他条件如pH和底物浓度等均应采用最适条件。 (2)测定方法 ①一是测定完成一定量反应所需的时间，所需时间越短，说明酶活力越高；反之，酶活力越低。 ②二是测定在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度，酶催化的反应速度越大，说明酶活力越高；反之，酶活力越低。 2.果胶酶活力的测定 (1)实验原理 果胶酶可将果胶水解生成β­半乳糖醛酸，产物可用次碘酸钠法进行定量测定，从而计算出果胶酶的活力。 (2)方法步骤

步骤 操作 提示 ①保温 两个锥形瓶，1号瓶内加入果胶、果胶酶；2号瓶内加入等量的果胶和蒸馏水，均用保温的目的是使酶对底物很好地发挥作用，温度和pH都应是 2

冰乙酸将pH调至3.5，放在恒温水浴锅中50 ℃保温2 h 最适宜的 ②加碘氧化 从1、2号瓶中分别取5 mL反应液加入两个碘量瓶中，加热煮沸，冷却后分别加入1 mL 1mol/L的碳酸钠溶液和5 mL0.1 mol/L的碘液，混匀 这一步的目的是在碱性条件下(碳酸钠提供碱性条件)，碘可以和果胶酶的水解产物β­半乳糖醛酸作用，生成糖酸盐

③滴定 分别加入2 mL1 mol/L的硫酸，用0.05 mol/L硫代硫酸钠滴定至溶液呈淡黄色，再加入质量分数为0.5%的淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为止，记录所用硫代硫酸钠的体积，分别用A和B表示 滴定时加入硫酸的目的是使酶促反应终止，然后用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，根据化学反应中的定量关系即可求出半乳糖醛酸的量

④计算 酶活力(单位)＝(B－A)×M×1÷2×20÷5 B表示空白滴定所消耗的硫代硫酸钠毫升数；A表示样品滴定消耗的硫代硫酸钠毫升数； M表示硫代硫酸钠的摩尔浓度；1表示1 mol硫代硫酸钠相当于1 mol β ­半乳糖醛酸；2表示作用时间；20表示反应液总体积；5表示检测时所取反应液的毫升数

1.影响酶促反应速度的外界因素有哪些？它们是否都影响酶活力？请举例说明。 答案 (1)影响酶促反应速度的外界因素有温度、pH、酶抑制剂、酶的用量、底物浓度等。(2)不一定。例如，温度、pH和酶抑制剂能通过改变酶的结构而影响酶活力，但酶的用量和底物浓度只影响反应速度，并不影响酶活力。 2.甲、乙两图是温度、pH对酶活力的影响的数学模型。

(1)甲、乙两图中B点代表的含义分别是什么？ 3

答案 甲、乙两图B点所对应的温度和pH分别是酶的最适温度和最适pH。 (2)甲、乙两图中A点对应的值对酶活力的影响相同吗？ 答案 不相同。甲图A点对应的酶活力较低，乙图A点对应的酶已失活。 (3)甲、乙两图中C点对应的值对酶活力的影响相同吗？ 答案 相同。两图C点所对应酶均已失活。 归纳总结 1为了得到一种高纯度、高活力的酶制剂，往往要经过一系列复杂的分离纯化过程，而各个过程中采取的手段可能很温和，也可能很激烈，这些手段都或多或少地影响到酶的活性。为了掌握了解每一个过程中的酶活力的损失程度以及所采取的手段是否合适，以决定是否进行下一步操作，就必须在完成了每一步操作后都要对酶活力进行测定。 (2)果胶酶可以将果胶水解成β­半乳糖醛酸，而半乳糖醛酸具有还原性糖醛基，可用次碘酸钠法定量测量，其原理如下：碘在碱性溶液中可以生成具有强氧化性的次碘酸盐，次碘酸盐能与醛糖反应，从而使醛糖氧化成糖酸盐。 RCHO＋I2＋3NaOH→RCOONa＋2NaI＋2H2O 醛糖 糖酸盐 利用过量的碘在碱性条件下氧化醛糖形成糖酸盐，然后用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可求出半乳糖醛酸的量，以此来表示果胶酶的活性。

1.下列关于酶活力与酶促反应速率的叙述中，错误的是( ) A.酶活力是指酶催化某一化学反应的能力 B.酶活力大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度来表示 C.酶催化的反应速度越大，酶的活力越高 D.酶催化的反应速度越大，酶的活力越低 答案 D 解析 酶活力又叫酶活性，是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度来表示，酶催化的反应速度越大，酶的活力越高；反之，酶的活力越低。 2.果胶酶的反应速度可用哪一项来表示( ) A.单位时间内果胶的减少量 B.单位体积内半乳糖醛酸的增加量 C.单位时间内半乳糖醛酸的增加量 D.单位时间内、单位体积中果胶的减少量或半乳糖醛酸的增加量 答案 D 4

技巧提炼 1.酶促反应速率：是用酶做催化剂分解底物的快慢程度。 2.酶活力：是在一定条件(温度、pH)下酶分解底物的能力高低，可以用酶促反应速率的大小来判断酶活性的大小。 二、探究果胶酶作用的最佳条件

酶的活性受多种因素的影响，实际应用中为了最大限度地利用酶，就要先确定酶的最佳作用条件，结合下列实验体会探究酶最佳作用条件的方法。 1.探究温度对果胶酶活性的影响

(1)果胶酶的最适温度为45～50 ℃。设置温度梯度时，要以这个范围为中心设置，上图实验中的温度梯度为5 ℃。 (2)该实验的自变量是温度，根据单一变量原则，应确保各实验组相同的变量有果泥量、果胶酶的浓度和用量、水浴时间和混合物的pH等。 (3)果胶酶的活性是通过相同反应时间内产生的果汁的体积来体现的。 2.探究pH对果胶酶活性的影响 (1)果胶酶的最适pH范围为6.0左右。因此设置pH时要以此为中心设置pH梯度，如：可设置系列：4、5、6、7、8五组。 (2)本实验步骤中，在完成“烧杯中分别加入苹果泥(假定pH的改变对苹果泥成分无影响)，试管中分别注入果胶酶溶液、编号、编组”之后，有下面两种操作： 方法一：将试管中的果胶酶溶液和烧杯中的苹果泥相混合，再把混合液的pH分别调至4、5、6、7、8。 方法二：将试管中果胶酶溶液和烧杯中苹果泥的pH分别调到4、5、6、7、8，再把pH相等的果胶酶溶液和苹果泥相混合。 5

请问哪一种方法更为科学： ，并说明理由： 。 答案 方法二。方法二的操作能够确保酶的反应环境从一开始达到实验预设的pH(或“方法一的操作会在达到预定pH之前就发生了酶的催化反应”) 3.探究果胶酶浓度的影响

(1)此探究实验是建立在温度和pH对果胶酶活性影响的基础之上的。此时，研究的变量是果胶酶的用量，温度和pH都应保持相同并适宜。 (2)实验时可以配制不同浓度的果胶酶溶液，也可以只配制一种浓度的果胶酶溶液，然后使用不同的体积即可，但必须保证反应液的用量相同，否则影响实验结果的准确性。

1.实验方案 (1)当探究温度(或pH)对果胶酶活力的影响时，自变量是什么？无关变量有哪些？ 答案 温度(或pH)是自变量。果泥量、果胶酶的用量、水浴时间和pH(或温度)等属于无关变量。 (2)在探究温度或pH对酶活力的影响时，如何设置对照实验？ 答案 不同的温度梯度之间或不同的pH梯度之间可以作为对照，这种对照称为相互对照。 2.实验操作 在苹果泥和果胶酶混合之前，为什么要将苹果泥和果胶酶分装在不同的试管中用同一恒温处理？ 答案 使酶与反应物混合前就分别达到预设的温度，避免混合时改变温度进而导致实验误差。 3.结果分析 (1)为什么可以根据滤出的苹果汁的体积大小来判断果胶酶活力的高低？ 答案 果胶酶将果胶分解为小分子物质，小分子物质可以通过滤纸，因此可以根据滤出的苹果汁的体积判断果胶酶的活力。 (2)除果汁的体积外，根据哪个因变量也能判断果胶酶活力的高低？该因变量与果胶酶活力有何对应关系？ 6

答案 果汁的澄清度。果汁越澄清，表明果胶酶的活力越高。 4.绘制曲线 (1)请绘制温度和pH对果胶酶活力的影响曲线图。 答案

(2)请绘制不同果胶酶用量对出汁量影响的曲线图(在浓度和体积相同的条件下)。 答案

归纳总结 (1)酶相关实验的变量控制 (1)探究温度对酶活力的影响：可以选用10 ℃作为梯度差，设置的具体温度为10 ℃、20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃和60 ℃等，也可以尝试以5 ℃作为梯度差。 (2)探究pH对酶活力的影响：只需将温度梯度改成pH梯度，并选定一个适宜的温度进行水浴加热。反应液的pH可以用体积分数为0.1%的氢氧化钠溶液或盐酸溶液进行调节。 (3)探究酶的用量：该实验是建立在探究最适温度和pH对酶活性影响的基础之上的，此时，研究的变量是酶的用量，其他因素都应保持不变。 (2)极端条件对酶活性的影响区别 影响因素 酶的活性 酶的结构 活性恢复情况 低温 降低 未破坏 可恢复 高温 降低或失活 破坏 不可恢复 过酸 失活 破坏 不可恢复 过碱 失活 破坏 不可恢复

3.探究温度对果胶酶活力的影响、pH对酶活力的影响、果胶酶的用量三个实验中，实验变量依次为( ) A.温度、酶活性、酶用量