实验 植物脱毒与快繁
最新第五章-植物离体快速繁殖和脱毒培养精品文档
玻璃化及预防
玻璃化苗中因其体内含水量高，干物 质、叶绿素、蛋白质、纤维素和酶活性降 低，组织畸形，器官功能不全，分化能力 降低，所以很难成活，严重影响组培苗繁 殖率的提高。
玻璃化及预防
一、玻璃现象及其产生原因 玻璃化的起因是细胞生长过程中的环
境变化。产生玻璃化苗的因素主要有培养 基成分（激素浓度、琼脂用量、离子水 平）、环境条件（温度、光照时间、通风 条件）等。
果营养离子之间失去平衡，试管苗生长就 会受到影响。植物种类不同，对矿物质的 量、离子形态、离子间的比例要求不同。 如果培养基中离子种类及其比例不适宜该 种植物，玻璃化苗的比例就会增加。
玻璃化及预防
4.环境条件-温度 适宜的温度可以使试管苗生长良好，
当温度低时，容易形成玻璃化苗，温度越 低玻璃化苗的比例越高。温度高时玻璃化 苗减少，且发生的时间较晚。
玻璃化及预防
2.培养基成分-琼脂浓度 培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例
增加，水浸状严重，苗向上长。随着琼脂 浓度的增加，玻璃化苗比例减少，但由于 硬化的培养基影响了养分的吸收，试管苗 生长减慢，分蘖亦减少。因此，琼脂的浓 度一定要适当。
玻璃化及预防
3.培养基成分-离子水平 植物生长需要一定的矿物质营养，如
玻璃化及预防
1)培养基中一次性加入过多细胞分裂素，比如 6—BA、ZT等；
2)细胞分裂素与生长素比例失调，细胞分裂素 含量远远高于生长素，而使植物过多吸收细 胞分裂素，体内激素比例严重失调试管苗无 法正常生长，而导致玻璃化；
3)在多次继代培养时愈伤组织和试管苗体内累 积过量的细胞分裂素。在初级培养相同的培 养基，最初的几代玻璃化现象很少，通常是 继代次数越多玻璃化苗的比例越大。
蝴蝶兰的组织培养过程
《园艺植物快繁与脱毒技术》教材大纲
《园艺植物快繁与脱毒技术》教材大纲一、大纲依据１、植物组织培养已形成产业近40年来，植物组织培养技术得到了迅速发展，大量名贵花卉、苗木、药用植物及部分大田作物组织培养工厂化生产技术已经成熟，形成了组织培养产业，产生了巨大的经济效益和社会效益，组织培养工岗位需求量也越来越大。
通过本课程教学，使学生掌握植物组织培养这门技术，拓展就业途径。
２、相关教学文件本大纲根据《教育部关于加强高职高专教育教材建设的若干意见》、《关于制定高职高专教学计划的原则意见》、《三年制园艺专业教学计划》、《三年制园林专业教学计划》、《三年制生物技术专业教学计划》及《组织培养工种考核标准》而制定的。
二、前后续课程本课程的前续课为植物与植物生理、果树生产技术、花卉栽培技术等。
后续课程为无土栽培技术、园艺植物育种、园艺技术推广、顶岗实习毕业设计等专业课程。
该课程为后续课程提供新技术、新方法支持。
在课程定位上，强调工学结合，培养学生的组培快繁岗位职业能力。
三、教学目标定位1.理念定位：主动服务社会和区域经济2.服务面向定位：组织培养生产第一线3.目标规格定位：通过理论学习和实践锻炼，掌握植物组织培养的基本知识、基本理论和组培技能，培养适应植物组培生产、管理、组培苗木销售与服务需要的高技术技能型人才4.职业知识目标：理解植物组织培养的基本理论，识别常见的污染、褐变、玻璃化等现象，掌握组织培养方案设计程序和器官培养要求，掌握组培各流程环节与技术要求5.职业能力目标：实验室设计与管理能力，成本效益分析能力，个体植物培养能力，继续学习专业能力，组织与合作能力，选择方法策略能力，心理承受能力，适应能力、爱岗敬业，诚实守信，遵纪守法，团结合作，开拓创新四、执行大纲方法1.以辩证唯物主义思想指导教学全过程，要求采用理论与实践相结合的一体化教学模式，理论讲授少而精，重点培养学生实践操作能力。
2.教学与科研紧密联系，不断将科研新成果、新技术、新方法充实到教学内容中，引导学生阅读大量的参考文献并开展探究式试验。
茎尖脱毒与快繁概论
• 8、在无菌条件下，将试管苗切割成带一腋 芽的茎段，接种在培养基：MS+6-BA 1.0+ 蔗糖3%+琼脂0.6%上成苗和快繁。之后进 行炼苗移栽或进行试管微薯的培育。
• 作业 • 1、茎尖培养为什么能脱出植物病毒？ • 2、常用的病毒植株的检测方法有哪些？ • 3、如何提高茎尖培养脱毒效果？
• 2、待芽长至2cm时，将发芽块茎放入37℃ 的光照培养箱，光照时间12h/d，处理时间 28d左右。
• 3、剪取经过热处理的发芽块茎的茎尖 1~2cm，自来水冲洗0.5h，剥去外面的叶 片。在超净工作台上进行严格的消毒。
• 4、用75%的酒精浸15s，无菌水冲洗2次，再用 0.1%的升汞浸泡8~10min，无菌水冲洗3~5次， 每次冲5min，放在灭过菌的培养皿中待用。
• [仪器与用具]
• 光照培养箱、超净工作台、镊子、酒精灯、 棉球、三角瓶、培养皿、解剖刀、解剖针、 解剖镜
• [材料与试剂]
• 1材料：马铃薯块茎、或大蒜鳞茎，
• 2试剂MS各种母液、6-BA、NAA、GA3、 酒精、升汞、蔗糖。
• [方法步骤]
• 1、将表面光滑的马铃薯切块，埋在湿润的 沙土中在室温下催芽。
• 炼苗移栽
• （1） 、当试管苗长高到3~4cm，具有5~7个浓绿 色的小叶时进行移栽。在移栽前4~5d开盖炼苗， 然后取出苗，洗净根部培养基，将其移入珍珠岩 基质。移栽时用镊子将基质压割成1~2cm深的槽 沟，覆上基质，用水浇湿，以便根部与土壤密接， 易于成活。保持较高空气湿度，土壤不要过湿， 光照应当充足，气温不宜超过30℃。
• （5） 20d后，培养温度升高。
• [思考题] • 1、茎尖培养为什么能脱出植物病毒？ • 2、常用的病毒植株的检测方法有哪些？ • 3、影响微薯诱导的因素有哪些
组织培养常见植物脱毒与快繁
为微型薯 不带病毒;增产效果一般在40%以上 1 试管生产 微型薯一般只有1～5g 用组织培养
方法生产微型薯分以下两个步骤： 1单茎段扩大繁殖 2微型薯的诱导
2 温室多层架盘工厂化生产 3 低网畦生产
二 甘薯的脱毒与快繁
一茎尖培养 1 茎尖培养脱毒
取高产 优质母株枝条;切成带1芽小段 自来水 流水冲洗; 70%酒精10s; 0 1%的升汞10min; 无菌水4～5次;或2%次氯酸钠5min;无菌水3～ 4次 2 茎尖剥离和培养 解剖镜下剥去芽上较大幼叶;切取0 3～0 5mm含1～2个叶原基的茎尖分生组织;迅速接 种到制备好的培养基上
原 球 茎 的 增 殖
3 苗的分化培养 兰科植物与其他草本花卉不同;它不易受生
长调节物质的影响;一般是将原球茎转入离子浓 度较低的培养基中;加入一些如椰子汁等天然提 取物质;效果会更好;原球茎很快再生成植株
lcm高的幼苗转移到壮苗培养基上培养3～6 个月;使其长3～4片叶 3～4条根 3～10cm高; 可移栽在泥炭和蛭石中;保湿弱光施肥
所结薯块即为生产用种薯良种
红薯原原种炼苗
第二节 果树脱毒快繁
利用组织培养方法繁殖果树植株具有占地面积 小;繁殖周期短;全年都能进行繁殖;繁殖系数高等特 点 还可以消除果树的某些病毒病;适应果树向品种 更新快 矮化密植以及无病毒栽培方向发展的需要
一 草莓 一草莓离体快繁技术 1 外植体 6～7月份匍匐茎15～20cm长时取材 2 培养基 初代MS+6BA0 5mg/L+GA30 1mg/L+IBA
0 2mg/L 增殖MS+6BA0 5～1 0mg/L 3 生根和驯化 1/2MS+IBA0 2～1 0mg/L 根2～3cm时炼苗;一周后发新根;四周后可移栽
植物的快繁与脱毒培养PPT课件
第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
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二，（茎尖培养）脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死，在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死，在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形，器官变形，如茎间缩短，植株矮化，生
长点异常分化形成丛枝或丛簇，叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶，卷叶病毒
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番茄病毒病（植株）
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公)，病株一般 不抽花蕾，因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%～10%, 产量损失 30%～60%。
香蕉束顶病
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1.病毒病及其危害（续）
• （1）症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒：退化，叶片卷缩，产量逐年下降，
到PVS，PVA，PVM，PVX
• 卷叶型马铃薯病毒：PLRV • 香蕉束顶病：叶片越来越短小，植株矮缩，叶硬
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1.病毒病及其危害
• 脱毒（virus elimination)培养： • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中的
病毒，生产健康的无毒繁殖材料的过程。
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1.2.植物病毒病及其危害
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
植物离体快速繁殖和脱病毒技术课件
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
➢ ③培养基成分 无机盐浓度过高、细胞分裂素的水平过 高等都会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而 使褐变现象加深。
➢ ④培养条件不当 如果光照过强、温度过高、培养时间 过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速褐 变程度。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
• 特点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工； 可大量繁殖脱毒苗；利于种质资源的保存和交换等；节约 空间，不受季节限制，有利于植物的工厂化生产；在无菌 条件下进行，不受病虫害侵害。
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
一是作为领导干部一定要树立正确的 权力观 和科学 的发展 观，权 力必须 为职工 群众谋 利益， 绝不能 为个人 或少数 人谋取 私利
第5章 植物离体快速繁殖和 脱病毒技术
• 5.1 植物快速繁殖技术 • 5.2 无病毒植物的培养
5.1 植物快速繁殖技术
• 概念：所谓快速繁殖，就是将外植体在人工培养基和合适 的条件下进行培养，以在短期内获得大量遗传性一致的个 体的方法。
最新植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖教案资料
一、草莓简介草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。
草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。
草莓具有极其丰富的营养价值。
1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用;2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用;3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效;4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用;（回主页）草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。
但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。
下面就简单介绍几种草莓易得的病：二、草莓易得的病1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。
在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。
2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。
叶片上卷呈汤匙状。
花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。
近熟期草莓受到为害会失去商品价值。
3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。
在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。
4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。
支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。
5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。
随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。
6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如：线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。
蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。
7.3植物组培快繁和脱毒技术
鉴定方法
1、直观测定法 2、指示植物法
利用病毒在其他植物上 出现症状的特征，作为 鉴别病毒种类的标准， 这种专门用以生产症状 的寄主植物即为指示植 物，又称鉴别寄主。
3、抗血清鉴定法
4、酶联免疫吸附法（ELISA） 5、电子显微镜检查法
6、免疫吸附电镜法
• 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织的上部，直接起源于中柱 鞘细胞，由于发生与茎的中柱相连，故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念： 离体培养下起源 于非合子细胞，经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
原球茎形成
3、试管苗的增殖与继代培养
• 1）、试管繁殖速率及计算
• 理论计算：
接种一个芽或一块增殖的培养物，经一段时间的培养后看能 得到多少个芽或苗，从而推算理论上一年能繁殖出多少苗。
第一节 植物的离体快繁
植物离体快繁（Micropropagation） 又叫微型繁殖或试管繁殖，它是把植物 材料放在试管内，给予人工培养基和合 适培养条件，达到高速增殖，属离体无 性繁殖。
其特点是快速，每年能以千百万倍
一 .离体快繁的应用
良种快繁 脱毒良种苗快繁和无病毒苗大量快繁； 特殊育种材料快繁； 制种材料快速繁殖； 自然和人工诱变有用突变体的快繁； 基因工程植株的快繁；
四、离体快繁中的有关问题
• 培养物的增殖方式 • 外源生长调节物质对品种典 型性的影响 • 继代次数与变异
第二节 术
• 怎样脱毒？
植物的组培脱毒技
• 为什么要脱毒？
• 怎样鉴定无病毒植株？
病毒不仅使人患病，同样也侵害植物，使植物出现皱叶、黄 叶、落叶，以致品质变劣、花色变淡、花数减少、产量降低。 多数农作物，特别是无性繁殖作物，都易受到一种或多种病原 菌的周身浸染。病原菌的浸染不一定都会造成植物的死亡，很多病 毒甚至可能不表现任何可见症状。但在植物中病毒的存在会减少作 物的产量和降低作物的品质。