阿米卡星脂质体的研制及体外抑菌试验
脂质体药物的制备
脂质体及脂质体药物的开发本项目是我所与加拿大脂质体技术研发中心、加拿大北方脂质体药业公司和西北工业大学的王昭博士和陈涛博士合作研究项目。
1 脂质体及脂质体药物发展概况与前景构成脂质体的主要成分是磷脂和其他类脂化合物。
早在1961年英国学者Bangham利Standish就发现当磷脂分子分散在水中时会自然形成有序排列的类似生物膜结构的多层囊泡(1)。
囊泡的每一脂质目也则有序排列的磷脂双分子构成；囊泡中央和各层之间被水相隔开。
后来人们将这种具有双层膜形态的娄仙生物膜结构的中空小球通称为脂质体。
近年来随着生物技术的发展，人们已有能力设计，并通过一定的讨程制备各种不同的脂质体药物转运系统，包括立体化学性质稳定的脂质体、长循环脂质体、靶向脂质体，酸敏脂质体、磁敏和热敏脂质体。
脂质体的制备工艺也更加完善，其优点充分得以体现，脂质体的研究愈来愈受到重视，且发展迅速。
脂质体技术的诱人市场前景和良好的技术性能使其已经渗透到制药、生物技术、免疫调节、遗传工程、基因药物等各个领域，脂质体在其它领域的应用也备受青睐。
从1988年第一个脂质体药物在美国进入临床试验，到目前已有多种脂质体药物工业化生产并上市销售，如脂质体阿霉素、脂质体柔红霉素、脂质体两性霉素、脂质体甲肝疫苗和脂质体乙肝疫苗等。
经过近四十年的不断努力，脂质体递药技术也从最初的普通脂质体，发展为长效脂质体、靶向脂质体和智能脂质体。
所涉及的药物也从常规化学合成药，延伸到蛋白药、基因药、疫苗和中药。
据统计国外现有美国脂质体公司(TheliposomeCompany)、SEQUEES公司、INEX制药公司、NORTERNLIPIDS公司、CELATOR科技公司等十多家公司专门从事脂质体药物制剂的研究。
世界制药十强企业都以控股、自研、合作等多种形式介入了脂质体药物开发领域，从这也不难看出脂质体技术已趋成熟。
脂质体药物的临床应用主要体现在其作为先进递药技术的优点上：(1)增强了药物的溶解性；(2)减低了药物毒性；(3)赋予药物靶向性；(4)增加了药物的缓释作用；(5)提高了对药物的保护作用；(6)通过融合作用将药物送入细胞浆或细胞核中。
抗结核药物的研究进展和发展趋势
综 述文章编号:100128689(2005)0420250204抗结核药物的研究进展和发展趋势Trends and advances i n an tituberculosis agen ts陆宇 段连山L u Yu and D uan L ian 2shan(北京市结核病胸部肿瘤研究所, 北京101149)(Beijing T uberculo sis and T ho racic T umo r R esearch Institute , Beijing 101149) 摘要: 结核病是除A I D S 外引起死亡最高的感染性疾病,严峻的结核病回升形势要求加速新型抗结核药物的研究开发。
缩短疗程,提高M DR 2TB 疗效及对结核潜伏感染(L TB I )提供更有效的治疗是开发新抗结核药物要实现的目标。
口恶唑烷酮类、硝基咪唑并吡喃类等药物是近年发现的新药,利用功能基因组学,蛋白质组学等加速药物筛选、有效传递药物至靶位的药物载体、联合抗结核药物的免疫辅助治疗剂等也是抗结核病药物的发展趋势。
关键词: 结核; 抗结核药物; 药物筛选; 载体中图分类号:R 978.3 文献标识码:A收稿日期:2004207227作者简介:陆宇,女,生于1971年,博士,助理研究员。
主要从事抗结核药物药理学研究。
结核病是除A I D S 外引起死亡最高的感染性疾病,是严重的全球性健康问题。
抗结核药物是结核病化学治疗的基础,结核病的化学治疗是人类控制结核病的主要手段。
结核病化疗的出现使结核病的控制有了划时代的改变,以异烟肼、利福平、吡嗪酰胺为核心的短程化疗曾取得令人瞩目的成就。
人类迈入新世纪的今天,现有的抗结核治疗方案还远远不够理想,严峻的结核病回升形势要求加速新型抗结核药物的研究开发。
目前,结核病治疗的两大难题在于结核分枝杆菌的持留性和耐药性,人们对结核分枝杆菌本质认识的逐步深入及新兴技术的发展,为抗结核药物的研究提供条件。
硫酸阿米卡星脂质体的研制及其药效学初步研究.
硫酸 阿 米 卡星传统制剂的主要缺点是生物半衰期短，用量大，且具有耳、’肾 和神经肌肉阻滞等毒副作用，而脂质体剂型能有效延长药物的半衰期，减少用量， 降低毒副作用。本文在研究了有关单一因素对硫酸阿米卡星脂质体包封率和稳定 性的影响的基础上，运用正交设计法优化了脂质体的制备工艺和处方。结果表明， 硫酸阿米卡星脂质体的最佳处方为：磷脂：胆固醇＝１．５：１，药物：（磷脂＋胆固 醇卜１：１５，Ｐ ＢＳ液的ｐＨ值为７．０，脂相二水相＝３：１，以乙醚为有机溶剂，采用逆 相蒸发法制备。在此条件下所制备的脂质体包封率为 ６４．８４５ ，具有较好的稳定性。
英文缩 写
Ｍ ＩＣ
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擂 略词
英文全名
ｍｅｄｉａｎｌ ｅｔｈａｌｄ ｏｓｅ ｍｉｎｉｍａｌｉ ｎｈｉｂｉｔｉｏｎｃ ｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｍｉｎｉｍａｌｂ ａｃｔｅｒｉｃｉｄｅｃ ｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
物残 留低的特点。
关键词：硫酸阿米卡星：硫酸阿米卡星脂质体；包封率；药动学；毒理学；抑
菌实验：链球菌病；临床疗效
ＡＢＳＴＲＡＣＴ
Ｔｈ ｅｍ ａｉ ｎｓ ｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇｏ ｆｔｈ ｅｔ ｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐ ｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏ ｆａ ｍｉｋａｃｉｎｓｕｌｆａｔｅｉ ｓｉｔ ｓ ｓｈｏｒｔｅ ｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｈ ａｌｆ－ｌｉｆｅ，ｇ ｒｅａｔｃｏ ｎｓｕｍｐｔｉｏｎａ ｎｄｔ ｏｘｉｃｉｔｙｏ ｆｅａ ｒ，ｋｉｄｎｅｙａ ｎｄｎ ｅｕｒａｌ ｍｕｓｃｌｅ．Ｌ ｉｐｏｓｏｍａｌａｍ ｉｋａｃｉｎｓｕｌｆａｔｅｃ ａｎｉｍ ｐｒｏｖｅａ ｂｏｖｅ－ｍｅｎｔｉｏｎｅｄｉ ｎｄｅｘ．Ｏ ｎｔｈ ｅｂ ａｓｉｓ ｏｆｅ ｖａｌｕａｔｉｎｇ ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆｓ ｅｖｅｒａｌｆ ａｃｔｏｒｓｏ ｎ ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙａ ｎｄｓ ｔａｂｉｌｉｔｙ，ｔ ｈｅｏ ｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅ ｓｉｇｎｗ ａｓｕ ｔｉｌｉｚｅｄｔｏ ｏ ｐｔｉｍｉｚｅｔｈ ｅｐ ｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄｆ ｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｏ ｆｌｉ ｐｏｓｏｍａｌａｍ ｉｋａｃｉｎｓｕｌｆａｔｅ．Ｔｈｅｒ ｅｓｕｌｔｓｓ ｈｏｗｅｄｔ ｈａｔｔｈ ｅｉｄ ｅａｌｒａ ｔｉｏ ｆｏｒｌｅ ｃｉｔｈｉｎ：ｃｈ ｏｌｅｓｔｅｒｏｌｉｓ １ ．５：１，ｔｈ ｅｒ ａｔｉｏｆ ｏｒａ ｍｉｋａｃｉｎｓｕｌｆａｔｅ：（ ｌｅｃｉｔｈｉｎ＋ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）ｉｓ １：１５ａ ｎｄｐ Ｈｏ ｆＰＢ Ｓｉｓ ７ ．０，ｔｈ ｅｒａ ｔｉｏｆｏ ｒｏｒ ｇａｎｉｃｓｏ ｌｖｅｎｔ：Ｐ ＢＳｉｓ ３ ：１．Ｔｈ ｅｅｎ ｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｉｓ ６ ４．８％，ａｎｄｉｔ ｓｓｔ ａｂｉｌｉｔｙｉ ｓｓａ ｔｉｓｆｙｉｎｇ
阿米卡星脂质体的研制及体外抑菌试验
阿米卡星脂质体的研制及体外抑菌试验陈小军;孙志良;崔建国;唐小武;杨惠麟;刘利跃【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2004(025)006【摘要】为研究阿米卡星脂质体的体外抑菌效果,采用逆相蒸发法制备阿米卡星脂质体,利用Hantzsh反应测定其包封率,并比较阿米卡星脂质体和游离阿米卡星对大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌、金葡菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度.结果表明:阿米卡星脂质体的包封率较高,达到61.8%,阿米卡星脂质体对大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌、金葡菌的最低抑菌浓度分别约为游离阿米卡星的1/3.5,1/7,1/2,1/2,最低杀菌浓度分别约为游离阿米卡星的1/4,1/4,1/1.8,1/4,证明阿米卡星脂质体的体外抗菌作用明显优于游离阿米卡星.【总页数】2页(P97-98)【作者】陈小军;孙志良;崔建国;唐小武;杨惠麟;刘利跃【作者单位】湖南农业大学动物科学技术学院,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院,湖南长沙,410128【正文语种】中文【中图分类】S859.796;S852.616.3【相关文献】1.硫酸阿米卡星脂质体对小鼠的毒性研究 [J], 陈小军;孙志良;董伟;王水莲;刘伟;王慧2.阿米卡星脂质体对猪肺疫的疗效试验 [J], 陈小军;陶志瑛;孙志良;刘进辉;刘伟;王慧;胡卫平3.大肠埃希菌血清抗体与阿米卡星偶联物的制备及革兰染色与体外抑菌试验 [J], 谭仑波;董伟;卢素云;钟佳;李雪冰;成丹凤;孙志良4.阿米卡星脂质体注射液的临床疗效研究 [J], 陈小军;孙志良;刘进辉;卓如意;王慧;刘伟;马沛5.采用吸入阿米卡星脂质体治疗鸟分枝杆菌复合群肺病 [J], 吴俊珍(摘译);刘笑芬(审校)因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2021脓肿分枝杆菌肺病治疗研究进展(全文)
2021脓肿分枝杆菌肺病治疗研究进展（全文）脓肿分枝杆菌肺病（Mycobacterium abscessus pulmonary disease，MAB-PD）是由脓肿分枝杆菌复合群（Mycobacterium abscessus complex，MABC）感染所致的肺部疾病。
MABC是一种可引起人体致病的重要的非结核分枝杆菌（NTM），由脓肿分枝杆菌脓肿亚种（M. abscessus subsp. Abscessus，MAB）、脓肿分枝杆菌马赛亚种（M. abscessus subsp.massiliense，MMA）和脓肿分枝杆菌博莱亚种（M. abscessus subsp. Bolletii，MBO）3个亚种组成。
尽管MABC的地理分布差异很大，但仍是全球范围内引起肺部NTM疾病的重要病原体之一，且发病率逐年增加。
美国报道MABC占致病性快速生长分枝杆菌的65%~80%，在囊性肺病、实体器官移植接受者（尤其是肺移植接受者）感染风险较高。
在某些东亚国家，脓肿分枝杆菌复合体是仅次于鸟-胞分枝杆菌的NTM肺病的第二大常见病原体。
我国南方的快速生长分枝杆菌比北方多，种类更具有多样性。
MABC在7 d内可在有机表面上定植并在固体培养基中生长，对诸如氯、戊二醛、氯胺、臭氧和有机汞等许多常用消毒剂具有抵抗力。
此外，包括MMA在内的MABC可引起全球暴发。
MABC对许多抗生素具有抗药性，治疗难度大。
本文对MAB-PD的治疗药物和方法的研究进展综述如下。
一、化学治疗（一）治疗药物脓肿分枝杆菌对标准一线抗结核药均耐药。
体外药敏试验结果显示，脓肿分枝杆菌对克拉霉素、阿米卡星和头孢西丁敏感，对利奈唑胺、替加环素、亚胺培南和氯法齐明等中度敏感，因此建议对所有临床上分离菌株进行抗生素敏感性测试，并根据药敏试验结果选择适合药物组成方案。
1. 大环内酯类：以克拉霉素和阿奇霉素为代表的大环内酯类抗生素是MABC感染所致疾病治疗的基石。
硫酸阿米卡星脂质体对小鼠的毒性研究
于 阿米卡 星口 ］ 。为 了研究 其特 性 ， 进行 了该制 剂 的
急性 毒性 试验 和 蓄积性 毒性 试验 ， 报道 如下 。 现
ｉ 材 料 与 方 法 ｉ ｉ 材 料 ．
星是半合 成 的氨 基糖 苷 类 抗 生 素 ， 其最 突 出 的优 点 在 于细菌对 庆大 霉 素 等 氨基 糖 苷 类 药 物 耐 药 时 ， 对 阿米 卡星仍 敏感 。但 由 于 阿 米卡 星生 物 半 衰 期 短 ，
中 圈 分类 号 ：８ ９ ７ ￥５．９ 文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ： ０ ７５ ３ （ ０ ８ ０ — ０ ８０ １ ０ —０ ８ ２ ０ ） ８ ０ ２ —３
脂质 体是 由磷脂 双分 子定 向排 列 而成 的脂 质 微 囊 ， 为一种新 型的药 物载 体 ， 作 具有 延 长 有效血 药 浓 度 时间和降低 毒 副 作 用 、 高 疗 效 的作 用 。 阿 米卡 提
用量 大 ， 且本 品具 有 耳 、 肾毒 性 ， 而 限 制 了 它 在 临 因 床 上的广 泛应 用［ 。 为 了提 高 阿 米卡 星 的疗 效 ， Ｊ ］ 降 低毒 副作 用 ， 延长药 物作 用 时间 ， 制 了阿米 卡 星脂 研
ｉ ｉ ｉ 硫酸 阿 米 卡 星脂 质 体 由本 课 题 组利 用 嵌 ． ． 合 海藻糖 以增 加 稳 定性 ， 用 改 良逆 相 蒸 发法 研 制 采
机分 为 ４组 ， １０ ７ 、５ｍｇ ｋ 即 ４ 、Ｏ ３ ／ ｇ和 阴性对 照组 ， 连续 ２ ０ｄ腹腔 注射硫 酸 阿 米卡 星 脂 质体后 ， 行血 液 学 、 进 血 清生化 学和 组织病 理 学检 查 ， 果与 对照组 无显 著性 差异 。表 明硫 酸 阿米 卡 星被 制成 脂质体 制剂后 ， 副 结 毒 作 用大大 降低 ， 对动 物无毒 副作 用。 关键 词 ： 酸 阿米卡 星 ； 质体 ； 硫 脂 毒性
硫酸阿米卡星脂质体注射液对猪细菌性疾病的疗效研究
［ 许 振 英 主 编． 国地 方 猪 种 种 质 研 究［ ］ 州 ： 江 科 学 ４ ］ 中 Ｍ． 杭 浙
大 围子 猪 的杂 种 优 势 。
参 考文 献 ：
［ 湖 南 省 畜禽 品 种 志 和 品 种 图谱 编 委 会 ． 南 省 畜 禽 品 种 ２ ］ 湖
志和 品种 图谱 ［ ． 沙 ： 南 科 技 技 术 出版 社 ，９ ４ １ Ｍ１ 长 湖 １ ８ ：３
２ Ｏ．
［ 朱 吉 ， 仕 柳 ， ． 分 湖 南地 方 猪 种 的 肉质 分 析［ ． 猪 ， ３ ］ 杨 等部 Ｊ养 】
１． ． ２治疗 方 案 ２
Ａ 组 ： ７５ ／ｇ体 重 ， 用 深 部 肌 肉注 射 ， 按 ．ｍｇｋ 采 每 天 用 药 ２次 ， 刚 ３天 。 连 Ｂ组 ： ２５ ｇｋ 体 重 ， 用 深 部 肌 肉注 射 ， 按 ．ｍ ／ｇ 采 每 天用 药 １次 ， 用 ３天 。 连
１１１药 物 ．． 硫 酸 阿米 卡 星ｆ 尔滨 制 药 三厂 ，Ｏ ｍ ／ｍＬ 哈 ｌＯ ｇ ２ ，
０６ ＝ ： ． 元／ 硫酸阿米卡星脂质体闽 南农业大学基 １ ． ４ 吏） ． ３判定 标 准 ２ 础兽 医教 研室 药理课 小 组研制 ，． 支 ） ０ ５元／ 。 治疗 ２ ４小时后 ， 病猪体温开始下降 ， 精神状 １１ ．． ２治疗 实 验 病 猪 的 选 择 态 明显好转 ， 食欲增多 ， 吸逐渐平缓 ， 呼 并在 ３ 天
１ ． 验 分 组 与 方 法 ２试
临床 上 敏 感 性 细 菌 导 致 的疾 病 的有 效 治 疗 药 物
之一 。为了进一步提高其临床疗效 、 降低用 药成 本 和 减 少 药 物 残 留 ， 们 研制 了硫 酸 阿 米 卡 星 脂 我 质体 ，为观察硫 酸阿米卡星脂质体的临床疗效 ， 进 行 了 硫 酸 阿米 卡 星 脂 质 体 与硫 酸 阿 米 卡 星 的
硫酸阿米卡星脂质体注射液对猪大肠杆菌的疗效研究
试 验猪 只通 过 ３ ｄ的 用药 治疗 。 白对 照 组病 情 日趋严 空
重 。 ５头 死 亡 。 有 药物对 照 组和 试验 治疗 组 结果 见 表 １ 。
维普资讯
动物 科学
《 代 农业 科技 ） ０ ７年 第 ２ 现 ） ０ ２ ２期
硫酸 阿米卡星脂质体 注射液对猪大肠杆 菌的疗效研 究
王 霞 李 晖
（ 西民族职业技术学院 。 南吉首 ４６０ 湘 湖 １０ ０）
摘 要 为探 明硫酸 阿米卡 星脂 质体 对猪 大肠 杆 菌病 的疗效 ， 进行 了临床 实验 。 果表 明 ： 酸 阿米卡 星在 临床 上 对猪 大肠杆 菌 病具 有 结 硫 较好 的疗效 ， 酸阿 米卡 星脂质 体 高 、 硫 中剂量 的 治疗 效果优 于 硫酸 阿 米卡 星， 差异 显 著 。 关 键 词 硫 酸 阿 米 卡 星 ； 质 体 ； 大 肠 杆 菌 ； 效 脂 猪 疗
１ ． 判 定 标 准 ３
就 是 养 殖 场 内畜 禽 的常 发 病 之 一 。 米卡 星 又 名 丁 胺卡 那 阿 霉素 ， 卡那 霉 素 Ａ 的半 合成 衍 生 物 ， 是 其理 化 、 理 学 和药 药 代动 力学 特 点类 似于 其他 氨基 糖 苷 类抗 生 素『 本 品对 多数 １ １ 。 肠杆 菌科 细 菌 ， 大肠埃 希 菌 、 雷伯 菌 属 、 杆菌 属 、 如 克 肠 变形 杆菌 属 、 门 菌属 、 贺 菌 属等 均 有 良 好作 用 。 品 最 突 出 沙 志 本 的优 点是 对许 多 肠道 革 兰 氏阴性 菌 所产 生 的氨 基糖 苷 类钝 化酶 稳 定 。 会 为 此类酶 钝 化 而 失 去 活性 。 此 ， 酸阿 米 不 因 硫
新药非临床药效学研究与评价
一、非临床药效学研究概述
药效学研究与其他研究的关系： ——药效学研究与毒理研究
试验设计上互相参考:动物种属、剂量、观察指标… 提供治疗窗或安全范围 评价新药在同类药中的地位 预测临床价值及开发前景
一、非临床药效学研究概述
药效学研究与其他研究的关系： ——药效学研究与临床研究
预测临床治疗价值和开发前景 提示临床试验拟定适应症范围 提示可能的患者人群 估算临床试验剂量 预计临床试验给药时间/间隔
主要研究内容： 在不同系统/模型上的有效性 有效剂量范围 最佳给药周期 起效时间和疗效维持时间 与阳性药物比较的作用特点 作用机制探索
一、非临床药效学研究概述
实验模型（体外、体内）： 药效学模型应能够表现出所预测的治疗指征，与人类疾病的治疗作用有相关性。
药效学模型需符合以下基本要求： 模型对标准药物有敏感的剂量依赖性特征。 受试物在模型中表现出的药效作用能与其临床的治疗作用相关联。 模型应该有选择性，即受试物在模型中的治疗指征与对其它指征的作用有明显区别，阳性
如：抗HIV药物 抗肿瘤药物 抗银屑病药物
一、非临床药效学研究概述
药效学研究与其他研究的关系： ——药效学研究与药代动力学研究
了解药物体内浓度变化与药效的关系（PK/PD） 了解药效种属差异在药代方面的原因（相关动物） 了解药物分布与药效的关系（适应症） 了解不同剂型与药效的关系（缓控释、脂质体、微球） 了解不同给药途径与药效的关系（给药途径选择）
MIC50 0.062 0.125 0.016 0.125
4 2 2
1
0.25 1 64
MIC（mg/L） MIC90 0.125 0.125 0.031
0.25 16 2 2
1
8 2 >256
2024非结核分枝杆菌病诊治要点(全文)
2024非结核分枝杆菌病诊治要点（全文）摘要人类发现非结核杆菌(nontuberculous mycobacteria，NTM)病已有60多年，对其诊治水平不断提高。
20世纪90年代，通过随机对照多中心研究，发现大环内酯为核心的方案对鸟分枝杆菌复合群疾病有较好疗效。
几乎同一时期，以分子生物学为基础的菌种鉴定取代了生化实验为基础的菌种鉴定，使医疗机构广泛开展NTM病的诊治成为可能。
近年，该领域也出现较多进步，如实现了临床标本分枝杆菌的快速菌种鉴定，发现再感染是NTM病治疗失败的重要原因，以及发现阿米卡星脂质体用于鸟分枝杆菌复合群肺病的价值。
基于结核病诊治的经验，未来的NTM诊治要不断探索核心药物敏感性快速诊断方法，实现短疗程的NTM病治疗新方案。
非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria，NTM)肺病最早于1959年被Beck报道，作者发现一组不同于肺结核的患者，尽管影像学表现与肺结核高度相似，呼吸道标本抗酸杆菌染色和分枝杆菌培养也均为阳性，但从这些患者临床标本分离出的细菌感染豚鼠后不会发病，患者也不会传染他人。
当时称这种细菌为“非典型分枝杆菌”。
以后又被称为机会性分枝杆菌、环境分枝杆菌。
20世纪90年代统一称为NTM。
除累及肺脏外。
NTM还可引起播散性病变、皮肤软组织病变和淋巴结病变。
一、分子生物学技术兴起前的NTM病诊治早期NTM 病的细菌学诊断通过表型分型，即观察细菌生长速度、色素沉着，然后结合细菌不同的生化反应判断菌种。
表型分型需要较长时间，而且建立在熟知其表型特点的常见NTM基础上，不能鉴定新的或少见的NTM，有时NTM临床分离株也会有不典型的生化试验结果而造成误判。
更重要的是，表型分型步骤繁琐，而且不能区分生物学特性相近的细菌，如鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌，严重限制了其临床应用。
1990年美国胸科学会(ATS)发布了第一个NTM病诊治指南，国内上海市肺科医院是为数不多开展NTM病诊疗的医院，如夏祥新和唐神结报道在上海市肺科医院，最常见的NTM肺病是堪萨斯分枝杆菌肺病、鸟分枝杆菌复合群(Mycobacterium avium complex，MAC)肺病和快生长分枝杆菌肺病。
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文献标识码 :A
文章编号 :100725038 (2004) 0620097202
摘 要 : 为研究阿米卡星脂质体的体外抑菌效 菌 ,均购自湖南省微生物研究所 。
果 ,采用逆相蒸发法制备阿米卡星脂质体 ,利用 1. 2 方法
Hantzsh 反应测定其包封率 ,并比较阿米卡星脂 1. 2. 1 阿米卡星脂质体的制备 采用逆相蒸发法。精 质体和游离阿米卡星对大肠杆菌 、链球菌 、巴氏 密称取大豆卵磷脂和胆固醇 (3∶2) 适量溶于 30 mL 乙醚
动物医学进展 ,2004 ,25 (6) :97298 Progress in Veterinary Medicine
阿米卡星脂质体的研制及体外抑菌试验 Ξ
陈小军 ,孙志良 ,崔建国 ,唐小武 ,杨惠麟 ,刘利跃
(湖南农业大学动物科学技术学院 ,湖南长沙 410128)
中图分类号 : S859. 796 ;S852. 616. 3
Pasteurella m ultoci d
金黄色葡萄球菌
2. 19
8. 0
S t aphylococcus aureus
3 讨论
实验结果表明 ,阿米卡星脂质体对大肠杆菌 、链球 菌 、巴氏杆菌 、金葡菌的最低抑菌浓度分别约为游离阿 米卡星的 1/ 3. 5 ,1/ 7 ,1/ 2 ,1/ 2 ,最低杀菌浓度分别约为 游离阿米卡星的 1/ 4 ,1/ 4 ,1/ 1. 8 ,1/ 4 ,结果与国外一些 文献报道的许多脂质体比其游离药物的抗菌强度增大 2～8 倍相符 。其可能的原因之一是由于脂质体的磷脂 双分子层可与细菌的细胞壁和胞浆膜相互融合 ,药物可 直接进入菌体内影响细菌蛋白质的合成而发挥抗菌作 用[5 ] 。体外抑菌实验说明将阿米卡星制成脂质体后可 增强抗菌效果 ,减少使用剂量 ,提高疗效 。阿米卡星脂 质体在机体内的抑菌作用还有待于进一步证实 。
杆菌 、金葡菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度 。
结果表明 :阿米卡星脂质体的包封率较高 ,达到 61. 8 % ,阿米卡星脂质体对大肠杆菌 、链球菌 、
中 ,精密称取阿米卡星和 VC 适量溶于 10 mL p H 7. 2的 PBS 液中 ,两者混合 ,超声至形成稳定 W/ O 型 ,减压旋转 蒸发 ,达胶态后 ,滴加 30 mL PBS 液洗膜 ,继续减压旋转 蒸发除去残余有机溶剂 ,得阿米卡星脂质体。
2. 0
Pasteurella m ultoci d
金黄色葡萄球菌
0. 55
1. 0
S taphylococcus aureus
表 2 阿米卡星脂质体与游离阿米卡星最低杀菌浓度测定 Table 2 The results of minimal bactericide concentration of AM K liposome
Preparation and Antibacterial Effect in Vitro of AM K Liposome
CHEN Xiao2jun , SUN Zhi2liang , CU I J ian2guo , TAN G Xiao2wu , YAN G Hui2lin ,L IU Li2yue
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孔培养物 ,分别吸取 100μL ,移种至不含药的琼脂平皿 培养基上 ,轻轻推开药液 ,置 37 ℃培养过夜 ,观察有无 菌生长 ,计数少于 5 个菌落者即为该药的最低杀菌浓度 (MBC) 。
2 结果 2. 1 阿米卡星脂质体的包封率
结果表明 :硫酸阿米卡星在 5～60 μg/ mL 浓度范 围内 ,药物溶液浓度与其相对应的吸光度呈良好的线性 关系 ,回归方程为 :
后 ,作为空白对照 ,于 356 nm 处测定吸光度 ,求回归方 程。
将阿米卡星脂质体适当稀释后 ,离心法分离游离药 物 ,用无水乙醇作破膜剂 ,同样利用 Hantzsch 反应 ,测 定脂质体中药物的含量和游离药物的含量 ,分别将所测 吸光度代入回归方程 ,求得药物含量 ,按下式计算包封
率[3] : 包封率 = (1 - 游离药物含量/ 系统中的总含量) ×100 % 1. 2. 3 阿米卡星脂质体体外抑菌实验 1. 2. 3. 1 菌液制备 所用菌株使用前将保存菌种先接 种平板 ,于 37 ℃培养 24 h 后 ,分离典型单个菌落接种 于肉汤培养基中 ,37 ℃孵育 16～18 h 后 ,以平板培养
1. 1. 2 试剂 大豆卵磷脂 (黑龙江三江食品有限公 米卡星的浓度分别为 16 ,8 ,4 ,2 ,1 ,0. 5 ,0. 25 ,0. 125 μg/
司) ,阿米卡星 (苏州第六制药厂生产) ,胆固醇 VC 、乙 mL 和0. 063μg/ mL ,阿米卡星脂质体的浓度分别为 8. 醚 、磷酸氢二钠 、磷酸二氢钠 (均可分析纯) , Hantzsh 反 76 ,4. 38 ,2. 19 ,1. 10 ,0. 55 ,0. 27 ,0. 14 ,0. 07 μg/ mL 和 0.
1. 1. 1 仪器 RE252A 旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪
长选择 356 nm[2 ] 。 精密 配 制 浓 度 分 别 为 5. 0 , 10. 0 , 15. 0 , 20. 0 ,
40. 0μg/ mL和 60. 0μg/ mL 的阿米卡星标准液 ,每种精 密吸取 3 mL 与等体积衍生化液混合 ,沸水浴 25 min , 迅速冷却至室温 。蒸馏水同样与衍生化试剂混合加热
A = 0. 0115C + 0. 0241 r = 0. 9990 ,测得其包封率为 61. 8 %。
2. 2 阿米卡星脂质体与游离阿米卡星的抑菌 实验结果比较
结果见表 1 和表 2 ,阿米卡星脂质体的最低抑菌浓 度及最低杀菌浓度明显低于游离阿米卡星 。
表 1 阿米卡星脂质体与游离阿米卡星的最低抑菌浓度测定 Table 1 The results of minimal inhibition concentration of AM K liposome
and free AM K
菌株 St rains
阿米卡星脂质体 M IC/ (μg·mL - 1)
AM K liposome
游离阿米卡星 M IC/ (μg·mL - 1)
Free AM K
大肠杆菌
0. 14
0. 5
E. coli
链球菌
0. 14
1. 0
S t reptococcus
巴氏杆菌
1. 10
热恒温水浴锅 (上海医疗器械五厂) ,J Y9823D 超声细胞 粉碎仪 (宁波新芝生物科技有限公司) ,低速离心机 (常 州华谱达科技有限公司) ,96 孔微量稀释板 (costar) ,微 量可调移液器 (德国 , Eppendorf) 。
菌的聚苯乙烯微孔板上的孔中 ,每孔 200μL ,然后在每孔 中加入稀释菌液 50μL ,最后二列孔其中一孔不加药物 (仅加培养基和细菌) 为细菌生长对照 ,另外留一列孔不 加细菌 (仅加培养基和药液) 作药液对照 ,使得各孔中阿
4 ,证明阿米卡星脂质体的体外抗菌作用明显优 于游离阿米卡星 。
关键词 :阿米卡星 ;脂质体 ;包封率 ;抑菌试验
阿米卡星 (amikacin ,AM K) 又名丁胺卡那霉素 ,是 卡那霉素 A 的半合成衍生物 ,其理化 、药理学和药代动 力学特点类似于其它氨基糖苷类抗生素 。由于阿米卡
星具有某些特殊的功能基团 ,可免受细菌产生的钝化酶 破坏 ,因而具有许多其它氨基糖苷类抗生素无法比拟的 优点 ,其最突出的优点在于许多对庆大霉素等氨基糖苷 类药物耐药的细菌 ,对阿米卡星仍敏感 。因此 ,阿米卡 星具有重要的临床意义 。但由于阿米卡星生物半衰期
短 ,用量大 ,且具有耳 、肾毒性 ,因而限制了它在临床上 的广泛应用 。脂质体是由磷脂双分子定向排列而成的
脂质微囊 ,具有良好的生物相容性和靶向性 ,能够延长
有效血药浓度时间 ,降低毒副作用 ,提高疗效[1 ] 。文章 用逆相蒸发法制备了阿米卡星脂质体 ,并进行了体外抑 菌试验的初步研究 。
1 材料与方法 1. 1 材料
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动物医学进展 2004 年 第 25 卷 第 6 期 (总第 134 期)
药物对照孔和细菌对照孔的情况 ,然后观察各实验孔中 细菌生长情况 ,混浊则判为该浓度药物无抗菌作用 ,完全 无细菌生长的最低药物浓度即为该药物的最小抑菌浓
度。实验重复 3 次 ,求其平均值。 取上述药物最低抑菌浓度以上未见细菌生长的各
( College of A ni m al Science and Technology , Hunan A gricult ural U niversity , Changsha , Hunan ,410128 , Chi na)
Abstract :AM K(amikacin) liposome , prepared by reverse phase evaporation film formation met hod , measured it s en2 t rap ment efficiency by Hantzsh reaction , was compared it s M IC and MBC against E. coli , S t reptococcus , Pasteu rell a m ultoci d and S t aphylococcus au reus wit h f ree AM K in order to st udy it s antibacterial effect i n vit ro. The encapsulation efficiency was 61. 8 %. The M IC of AM K liposome against t he bacteria mentioned above was 1/ 3. 5 ,1/ 7 ,1/ 2 ,1/ 2 of t hat of f ree AM K ,and t he MBC was 1/ 4 ,1/ 4 ,1/ 1. 8 ,1/ 4 of it . The result s showed t hat t he antibac2 teral effect of AM K liposome was superior to f ree AM K . Key words :amikacin ;liposome ;encapsulation efficiency ;antibacterial test