酵母双杂交 原理

酵母双杂交原理

酵母双杂交（Y2H）是一种广泛应用于分子生物学领域的实验技术。它基于酵母细胞内所含的转录因子结合区域分开的与激活区域结合的能力的原理而发展出来。

当把转录因子分成两个区域，一个称为DBD（DNA binding domain），另一个称为AD（activation domain），并使它们相互独立地与相应的配体结合时，它们就可以进行有效的转录激活。通常来说，DBD和AD都不具有激活作用，但它们可以相互结合并发挥起激活作用。因此，当DBD与某一DNA序列结合时，如果另一配体结合于AD，则该复合体就可以被转录激活。

基于这个原理，Y2H技术使用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）作为实验系统进行实验。它使用了两个重要的质粒：一个称为“鱼钩”质粒（bait plasmid），它含有DBD和一个感兴趣的基因的DNA序列；另一个称为“猎物”质粒（prey plasmid），它含有AD和另一感兴趣的基因的DNA序列。这两个质粒分别要被转化到两个不同的酿酒酵母分别作为它们的基因组。

当两个酵母的基因组都被转化后，它们被分别引入到含有选择性培养基的平板中去。在这些平板上，只有那些同时表达了成功酯化的双杂交融合DBD和AD的细胞才能成

长起来。因此，这个实验系统几乎可以保证筛选到高亲合力的蛋白质因子。

值得注意的是，由于酿酒酵母是真核生物，与含有DBD和AD的两个质粒的匹配也是在真核生物级别上完成的，而不是简单的受体和配体之间的作用。因此，这种技术可以很好地模拟在真核生物细胞内发生的相互作用。

Y2H技术不仅可以用于蛋白质因子的筛选，也可以用于检测DNA的相互作用。例如，在要求蛋白质－DNA相互作用的特定细胞系上建立的实验系统中，可以使用这种技术来筛选那些与基因诱导子结合的转录因子。因此，该技术可用于分析人类疾病中蛋白质相互作用的发生机制。

总的来说，酵母双杂交技术是一种强大而有效的分子生物学工具，可以用于研究蛋白质之间的相互作用以及转录机制。它不仅可以被用于大规模的筛选，还可以在分子水平上模拟真核生物细胞内的相互作用。在以后的研究中，这种技术还将发挥更广泛的作用，因此我们对它的进一步研究依然很有必要。