微生物标本接种操作规程
微生物接种流程规范版本
一、痰液标本1.痰液标本接种流程1)接种编号：1401xx2)接种培养基：血平板中国蓝平板嗜血巧克力平板金黄色葡萄球菌显色板（CHRO）附加：呼吸科，血液科，肿瘤科，ICU，感染科种沙保弱平板3)培养条件：35℃温箱:血平板、中国蓝平板、金黄色葡萄球菌显色板（CHRO）35℃ + 5%CO2温箱：嗜血巧克力平板25℃温箱：沙保弱平板（装进塑料密封袋或纸胶带封口）2.痰涂片及染色镜检流程1)涂片编号：革兰氏染色：1404xx抗酸染色：1406xx2)一般细菌涂片镜检A.涂片：挑取痰液均匀涂于玻片表面，风干备用。
B.革兰氏染色：龙胆紫（30S）→碘液（60S）→丙酮乙醇（30S）→沙黄（30S）C.痰样本质量评估：上皮细胞≥25/LP,判定为不合格标本上皮细胞≤25/LP，判定为合格标本3.浓集法抗酸杆菌涂片镜检1)痰标本制备：取全部标本于50ml离心管中，加等量84消毒液混匀后静置15min， 3000rpm/min离心30min，弃上清取沉淀涂片2)抗酸染色：石碳酸复红（5min）→盐酸酒精（60S）→亚甲蓝（30S）3)结果判读：二、咽拭子标本1.咽拭子标本接种流程接种编号：1401xx接种培养基：血平板培养条件：35℃温箱一般细菌涂片镜检:同痰标本1404xx三、尿液标本1.尿液标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板（1ul尿液标本均匀涂抹,行菌落计数）中国蓝板(四区划线)培养条件：35℃温箱一般细菌涂片镜检(1404xx)尿标本制备：取15ml标本3000rpm/min离心15min，取沉淀涂片涂片染色：步骤同痰样本四、生殖道分泌物标本1. 生殖道分泌物标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板中国蓝平板淋球菌TM平板培养条件：35℃温箱：血平板、中国蓝平板35℃ + 5%CO2温箱：淋球菌TM平板2. 一般细菌涂片镜检(1404xx)同痰标本五、宫颈分泌物（B族链球菌培养）1.宫颈分泌物接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板B群链球菌筛选平板（STRB）[一块种六个标本] 培养条件：35℃温箱六、脓液标本1.开放性脓液标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板中国蓝平板复合因子巧克力平板培养条件：35℃温箱2.封闭腔脓液标本接种流程接种编号：1402xx接种培养基：血平板中国蓝平板厌氧平板（放于厌氧产气袋GENbag anaer中）培养条件：35℃温箱3.一般细菌涂片镜检(1404xx)同痰标本七、无菌体液标本1.无菌体液标本接种流程接种编号：1407xx接种瓶：取1-3ml标本直接注入儿童瓶增菌培养。
微生物标本的接种及流程
微生物标本的接种及流程Microbial specimen inoculation is an essential process in microbiology that involves the transfer of a specific microorganism onto a solid culture medium for growth and analysis. This process is crucial for identifying and studying various pathogens, determining antibiotic susceptibility, and conducting research on different microbial species. 微生物标本接种是微生物学中一个至关重要的过程，涉及将特定微生物转移到固体培养基上进行生长和分析。
这个过程对于识别和研究各种病原体、确定抗生素敏感性以及对不同微生物种类进行研究至关重要。
The first step in the inoculation process involves obtaining a sample of the microorganism through various techniques such as swabbing, scraping, or collecting specimens from clinical samples. It is crucial to handle the sample carefully to prevent contamination and ensure the accuracy of the results. 接种过程中的第一步涉及通过擦拭、刮取或从临床样本中收集标本等各种技术获得微生物样本。
必须小心处理样本，以防止污染并确保结果的准确性。
微生物的无菌操作及接种
202X
2、常用的接种方法
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连续划 ※划线 线法 接种
2、常用的接种方法
用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。
○ 用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。 ○ 只适宜于细菌和酵母的接种培养
穿刺接种
2、常用的接种 方法
穿刺接种
斜面接种
三．接种：
四．接种:
○ 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。 从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划 破培养基。
○ 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线 作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
斜面接种
3）接种：
七．塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎 棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。
殖动态。
无菌环境 的要求与 保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验 室工作提供无菌操作 环境的设施，以保护 实验免受外部环境的 影响，同时为外部环 境提供某些程度的保 护以防污染并保护操 作者。
原理：超净工作台的 洁净环境是在特定的 空间内，洁净空气(进 滤空气)按设定的方向 流动而形成的。以气 流方向来分，现有的 超净工作台可分为垂 直式，由内向外式以 及侧向式。
八
七
六
五四
三
二一
接 穿 透 培 养 基 ？
． 穿 刺 接 种 时 能 否
放 ？
． 种 时
，
为
何
要
尽
包 括 哪 些 内 容 ？
． 验 操 作 过 程 的 无
备 工 作 ？
． 进 入 无 菌
室
微生物接种方法
微生物接种1、平板倾注法1）、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。
2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。
3）、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1.0ml 吸管。
4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照。
6）、待稀释液入平皿后，翻转平板，置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。
2、平板表面涂布法将营养琼脂制成平板，经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后，于其上滴加检样稀释液0．2ml，用L捧涂布于整个平板的表面，放置片刻(约lO分钟)，将平板翻转，移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时)，取出，按前述方式进行菌落计数，然后乘以5(由O．2m1换算为1m1)，再乘以样品稀释的倍数，即得每g或m1 检样所含菌落数。
此法较上述倾注法为优，因菌落生长在表面，便于识别和检查其形态，虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆，同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长，从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。
标本接种流程
标本接种流程
1. 目的：规范标本接种方法，确保检验结果准确可靠。
2. 适用范围
微生物实验室所有标本，环境。
3. 职责范围
微生物实验室各工作人员。
4. 接种方法（密集接种）
4.1 分区划线法
4.1.1 此法多用于粪便、痰液菌量较多的标本。
4.1.2 用接种环先将标本涂布在第一区并作数次划线，再在二、三……区依次用接种环划线。
每划分一个区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2～3次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。
4.2 定量接种法：本法用于尿液等标本的细菌计数
4.2.1 定量接种环法：用无菌的一次性定量接种环沾取1 μl或10 μl标本在平板中划一直线，然后沿直线左右划线，从上而下一次完成。
4.3 斜面接种法
4.3.1 此法主要用于鉴定或保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力。
4.3.2 用左手握住菌种管和斜面培养管底部，右手持接种针（环）。
用接种针（环）伸入菌种管内挑取移种之菌落。
伸入斜面培养管内，先将斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上地蜿蜒划线，或直接自下而上的蜿蜒划线。
4.4 穿刺培养法
4.4.1 此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。
4.4.2 以接种针挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基的底部，然后沿原穿刺线退出接种针。
4.5 液体培养基接种法用灭菌接种环挑取菌落或标本。
在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀在液体培养基中。
微生物接种方法
微生物接种方法微生物接种是生物实验中的一项基本技术，也是各种微生物检测和研究中不可缺少的步骤。
本文将介绍一些常见的微生物接种方法，包括平板划线法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法等。
平板划线法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种纯化，得到单一的菌落。
该方法通过在固体培养基上划线，使菌种在培养基上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将固体培养基灭菌后倒入培养皿中，待凝固后加入适量菌液。
(2)用接种环取适量菌液，在培养皿表面划线。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到斜面培养基上，以便于观察和保存。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的斜面培养基中，使菌种在斜面上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将斜面培养基灭菌后放置在实验台上，用无菌操作法加入适量菌液。
(2)将接种环放入菌液中沾取少量菌种，然后在斜面培养基上划线接种。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
液体培养基接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到液体培养基中，以便于微生物的生长和繁殖。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的液体培养基中，使菌种在液体培养基中繁殖并形成微生物。
具体步骤如下：(1)将液体培养基灭菌后倒入试管中，加入适量菌液。
(2)用摇床或其他设备将试管中的培养基混合均匀。
(3)将试管放入适宜的温度下培养，观察微生物的生长情况。
微生物接种技术是生物工程中一项重要的技术，广泛应用于生物制品制造、环境生物治理、医学诊断等领域。
本文将介绍微生物接种技术的基本原理、应用场景以及发展前景。
微生物接种技术是指将目的微生物通过一定的方式引入到培养基或发酵系统中，使其在特定的环境下生长繁殖，以达到特定的生物制品或环境治理的目的。
该技术的主要环节包括菌种选择、接种量确定、接种方法选择和培养条件控制等。
微生物试管法标准
微生物试管法标准
微生物试管法标准如下：
1. 在肉膏蛋白胨斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者。
2. 点燃酒精灯或煤气灯。
3. 将菌种试管和待接种的斜面试管，用大拇指和食指、中指、无名指握在左手中，并将中指夹在两试管之间，使斜面向上，成水平状态。
在火焰边用右手松动试管塞，以利于接种时拔出。
4. 右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用右手的手掌边缘和小指、无名指分别夹持棉塞（或试管帽），将其取出，并迅速烧灼管口。
5. 将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试管内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再挑取少许菌苔。
将接种环退出菌种试管，迅速伸入待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接触管壁或管口。
6. 接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上。
将接种环逐渐接近火焰，再烧灼。
请注意，以上是操作步骤的大致流程，实际操作时可能需要根据具体情况进行调整。
在进行微生物实验时，务必注意安全问题，并严格遵守实验室的各项规定。
微生物标本接种
痰培养-操作步骤
• 痰标本涂片染色显微镜检查的分类：判断标准
• 比较简单的方法就是确定鳞状上皮细胞数量：细胞数＞ 10/低倍视野，说明混有痰液。
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球菌
Yeast 酵母菌
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大肠埃希菌与膀胱上皮细胞相互作用
伞状粘附
膀胱上皮细胞
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尿液运输方法
无需冷藏
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有症状妇女的尿路感染诊断性试验
Test 检测 >100 cfu >105 cfu
Sens 灵敏 度
95
Spec 特异度 PPV 阳性预 示值
• 将革兰染色结果立即向临床电话初级报告。 • 待细菌鉴定及药敏结果出来后再向临床发出最终报告。
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血液培养
• 【特别提醒】 • 厌氧菌 从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不
推荐每个病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要， 选用其配套的厌氧培养基来培养厌氧菌。 • 营养苛刻的细菌（Fastidious Bacteria） • 布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可 以在三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进 行末次接种。 • HACEK群细菌—嗜泡沫嗜血杆菌（Haemphilus aphrophilus）、放线共生放线杆菌（Actinobacillus actinomycemcomitans）、人心杆菌 (Cardiobacterium hominis)、侵袭埃肯菌 (Eikenellus corrodens)和金氏杆菌（Kingella kingae）与细菌性心内膜炎有关，常规血培养基中可 以分离，但培养14天和进行肉汤末次接种会更有效。
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微生物标本接种操作规程
微生物标本接种操作规程
一、接种前准备
1. 检查试剂和培养基的使用期限和保存情况，确保其质量可靠。
2. 准备好所需的培养器具和实验用具，如试管、培养皿、培养瓶、个体接种环、接种针、显微镜等。
二、接种环境准备
1. 实验室内要保持整洁，无杂物和灰尘，防止外界微生物的污染。
2. 实验室要保持恒定的温度和湿度，避免温度过高或过低、湿度过低或过高对微生物生长的影响。
3. 空气中要保持无菌状态，使用高效过滤器过滤空气，防止微生物的传播和污染。
三、接种手部消毒
1. 洗手后，戴上实验手套，确保双手干燥。
2. 取适量洗手液，搓揉双手至起泡，按照手部清洁步骤进行洗手。
3. 洗手液清洗后，用自来水充分冲洗干净。
4. 用干净的纸巾或者吹风机将双手彻底擦干。
5. 手套使用后，及时更换。
四、接种操作
1. 将待接种的微生物培养物摇匀，取适量的培养物。
2. 打开培养器具和培养基，注意避免接触容器口和培养基内壁，避免污染。
3. 将所取的适量培养物分别接种在相应的培养器具中，如试管、培养皿、培养瓶等。
4. 接种时要避免接触到环境中的空气，以免引入外来微生物。
5. 接种环具要经过高温灭菌处理后再取用，避免对微生物生长的影响。
6. 接种完毕后，及时将培养器具密封，避免细菌外界的污染。
五、接种后处理
1. 接种完毕后，将接种环具和接种针等实验用具用适当方法进行处理，如高温炙烧、高压灭菌等。
2. 培养器具和培养基未使用完的部分要密封保存，避免受到外界的污染。
3. 接种完毕后，要及时将工作台面清洁干净，防止微生物交叉污染。
六、接种操作注意事项
1. 接种操作要迅速而准确，避免接触到环境中的空气，以免引入外来微生物。
2. 接种环境要保持无菌状态，严格控制操作员的接触，避免污染。
3. 接种操作要注意卫生与安全，避免操作员自身的污染和微生物的传播。
4. 接种操作之间要经常更换实验用具，避免传播微生物。
七、接种结果判断与记录
1. 接种完成后，根据培养基的特性，放置在相应的培养条件下进行培养。
2. 按照培养基的要求和相关标准，观察培养物的生长情况，判断是否接种成功。
3. 将接种结果记录在相应的实验记录中，包括接种菌株的信息、培养基的信息以及观察结果等。
以上就是微生物标本接种操作规程的内容，希望对您有所帮助。