第三节 假单胞菌属 (Pseudomonas)
第3章-土壤生物
主要内容 (重点)：
1.土壤生物多样性 2.影响土壤微生物活性的环境因素（重点） 3.土壤微生物区系的发生和分布 4.土壤生物活性及表征
教学目标与要求：
了解土壤中的主要生物种类，认识土壤生物的 多样性；重点掌握影响土壤微生物活性的各种 因素；了解土壤细菌、真菌、防线菌、蚯蚓、 线虫等生物的特性及对土壤肥力的影响。
20000-30000 约 250% 约 12% 约 4% 约 10% > 90%
> 50%
自然界中95-99%的微生物种群不能被分离和描述
三 、 土 壤 生 物 空 间 分 布 多 样 性
四、土壤生物多样性的因素
第二节
土壤微生物
土壤微生物
•主要包括：病毒、细菌、真菌、藻类、地衣 •主要作用：
黑钙土 > 棕壤 > 灰壤 > 水稻土 > 砖红壤
用直接测数法测定前苏联土壤中的微生物数量
土壤类型 灰壤
森林灰化土
黑钙土
灰钙土
土壤状况 生荒土 生荒土 熟化土 生荒土 熟化土 生荒土 熟化土
1g 土壤中的微生物总数 3.0×108～6.0×108 6.0×108～1.0×109 1.0×109～2.0×109 2.0×109～2.5×109 2.5×109～3.0×109 1.2×109～1.6×109 1.8×109～3.0×109
确定群体结构 系统发育分析
土壤样品 经典方法
DNA 浸提
PCR PCR 扩增
DGGE（变 性土 壤 生 物 的 主 要
类 群 示
意 图
二、数量和种类多样性
微生物
真菌 细菌 病毒 节肢动物 高等植物 昆虫
园艺植物病理学 第三章(4) 其它病原生物
体内，2龄幼虫在体内进入休眠状态。其孵化与根系分泌物有
关。 一个生长季可发生3-4代。
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大豆胞囊线虫病根部胞囊放大27Leabharlann 菜用大豆胞囊线虫28
小麦禾谷胞囊线虫病
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(三)根结线虫属(Meloidogyne) 与胞囊线虫相似，区别是植物受害的根部肿大，形成瘤状 根结；雌雄异型。雄虫细长、尾短、无交合伞；成熟雌虫梨形。 雌虫的卵全部排入卵囊中；成熟雌虫的虫体不变厚，不变为深 褐色。 重要种：南方根结线虫、花生根结线虫（M. arenaria）、 北方根结线虫（M. hapla）和爪哇根结线虫（M. javanica）。 孵化出的2龄幼虫遇合适的寄主即侵入，雌虫的幼虫和成虫 内寄生，唾液可刺激细胞增大；雄虫的幼虫内寄生，雄虫成
生殖系统：卵巢、子宫、阴门、受精囊；精巢、输精管、泄 殖腔、交合刺、交合伞
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唇 口 口针 食道 中食道球 排泄孔 唾液腺 神经环 肠
唇区 口针 角皮 口针基部球
卵巢
精巢
真皮索 体壁肌 角质环纹
卵 受精囊 子宫 阴门 肛门
侧尾腺
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精子 交合刺 交合伞
植物病原线虫的生活史和生态 生活史：卵、幼虫、成虫、交配产卵的过程。 线虫一般有4个龄期；蜕皮一次，增长一龄。垫刃目线虫的 第一龄幼虫是在卵内发育的。
时，果实吸水膨胀开裂将种子弹射出去 (主动方式)。
桑寄生科种子表面有槲寄生碱保护，经过鸟类消化道时亦 不受损坏。列当、独脚金的种子极小，成熟时蒴果开裂，种子 随风飞散传播，一般可达数十米远。菟丝子等种子或蒴果常随 寄主种子的收获与调运而传播扩散。寄生藻靠游动孢子或接合
子萌发产生的游动孢子传播。
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寄生性植物的主要类群：
铜绿假单胞菌的菌种鉴定
铜绿假单胞菌的菌种鉴定全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，属于假单胞菌属（Pseudomonas），广泛存在于自然界中，是一种耐受力很强的细菌。
铜绿假单胞菌在人类和动植物体内都有可能成为病原菌，引起多种感染疾病，如呼吸道感染、尿路感染、皮肤感染等。
对铜绿假单胞菌的菌种鉴定十分重要。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定主要包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等。
形态学观察是最为简单直观的方法，通过观察细菌在琼脂培养基上的形态特征来初步鉴定。
铜绿假单胞菌在琼脂培养基上形成典型的青绿色凝块状菌落，通常呈金黄色至淡黄色，具有辛辣气味。
除了形态学观察外，生理生化特性检测也是菌种鉴定的重要方法之一。
铜绿假单胞菌具有一系列特殊的生理生化特性，如利用氧化物作为唯一氧化剂和膜脂组成特殊等。
铜绿假单胞菌产生溶血素、胞外聚合物酶、脂肪酶等多种外源酶，可以降解寡糖、脂质等物质。
分子生物学方法也成为现代菌种鉴定的重要手段。
通过PCR扩增和测序技术，可以对靶基因进行测序分析，比如16S rRNA基因序列分析。
铜绿假单胞菌16S rRNA序列具有较高的保守性，同时又有足够的变异性，能够帮助界定种和属的分类关系。
在进行铜绿假单胞菌菌种鉴定的过程中，需特别注意以下几点：1. 选择合适的菌落：铜绿假单胞菌菌落为青绿色，有金黄色至淡黄色的边缘。
需避免选择其他青绿假单胞菌属菌种带来的干扰。
2. 确认生理生化特性：对于一些特殊的生理生化特性，如氧化物利用情况、酶产生等，可以通过专门的生化试验进行验证。
3. 结合分子生物学方法：如果需要进一步确定菌种的归属，可结合分子生物学方法进行16S rRNA序列分析，加深对菌种的认识。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定是一项重要且复杂的工作，需要结合形态学观察、生理生化特性检测和分子生物学方法等多种手段进行综合分析。
只有准确鉴定出铜绿假单胞菌的菌种，才能更好地开展相关的医学、环境等研究工作，为防治相关感染病害提供科学依据。
假单胞菌属
铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)
检验结果分析与报告： 诊断一定要与临床表现相结合 治疗过程中，3－4天后重复药敏测试
铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)
耐药机制：
①产酶：金属酶，OXA酶
②外膜蛋白的改变（Outer membrane proteins，OMP）
为主要机制 ③主动泵出机制：对喹诺酮类，
假单胞菌属 (Pseudomonas)
一、 概述 1. 分类 2. 临床意义 3. 微生物特性 4.微生物检验 (1)检验程序 (2)鉴定 (3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test)
1.分类
• 假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA
同源群有关的种
• 生长温度范围广，最适生长温度为35℃
• 产生各种水溶性色பைடு நூலகம்：绿脓素、脓玉红素、荧光
素、脓褐素
• 对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药
4.微生物检验
• 检验程序 • 鉴定
• 药物敏感性试验按NCCLS（National
Committee for Clinical Laboratory Standards）推
MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj
④整合子：1类，3类
• 一群需氧、不发酵葡萄糖
• 无芽胞，有鞭毛
• 氧化酶阳性的革兰阴性杆菌
• 多为条件致病菌
2.临床意义
• 假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染 中，假单胞菌占70％～80％，主要为铜绿 假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽 窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌等
3.微生物特性
• 革兰阴性、无芽胞、专性需氧
嗜麦芽寡养单胞菌生物学分类
嗜麦芽寡养单胞菌生物学分类
嗜麦芽寡养单胞菌（Pseudomonas maltophilia）是一种革兰氏阴性杆菌，属于铜绿假单胞菌科（Pseudomonadaceae）属假单胞菌属（Pseudomonas）。
它最初被归类为一种假单胞菌，后来经过进一步研究和分类，被确定为一种新的单胞菌种。
从生物学分类的角度来看，嗜麦芽寡养单胞菌的分类包括以下几个方面：
1. 形态特征，嗜麦芽寡养单胞菌是革兰氏阴性杆菌，通常呈杆状。
在培养基上形成黄色粘液状的菌落。
2. 生理特征，嗜麦芽寡养单胞菌是一种嗜麦芽糖的细菌，它能够利用麦芽糖等麦芽类物质作为碳源进行生长。
此外，它还具有多重耐药性，对抗生素具有较强的耐药性。
3. 分子生物学特征，通过16S rRNA基因序列分析和分子生物学方法，可以更准确地确定嗜麦芽寡养单胞菌的分类位置，这有助于进一步了解其亲缘关系和系统发育。
4. 系统发育，嗜麦芽寡养单胞菌与其他假单胞菌科细菌的关系
也是分类的重要依据，通过对其系统发育关系的研究，可以更好地
理解其在细菌界的分类位置。
总的来说，嗜麦芽寡养单胞菌的生物学分类是一个综合性的过程，需要结合形态特征、生理特征、分子生物学特征和系统发育等
多个方面的信息进行综合分析，以确定其在分类体系中的准确位置。
这些分类信息有助于我们更好地理解和研究这一细菌种类的特点和
生物学行为。
假单胞菌属Pseudomonas Migula的检验
假单胞菌属Pseudomonas Migula的检验Gˉ，直或微弯的杆菌，0.5-1.0×1.5-5.0μm。
多单在。
不产芽孢。
以单极或数根极毛运动，有的种还具短波长的侧毛。
严格需氧。
不能在酸性下（pH4.5）生长，多数种不需要有机生长因子。
化能异养，有的种利用H2或CO为能源兼性化能自养。
接触酶阳性, 产生各种水溶性色素。
自然界分布极广，土壤、淡海水、污水、动植物体表等均存在。
引起疾病(Pseudomonas Disease)的有绿脓杆菌、荧光假单胞菌、鳗败血假单胞菌和恶臭假单胞菌等。
（一）铜绿假单胞菌（P. Aeruginosa）原称绿脓杆菌。
在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见的细菌之一。
各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在。
易从外伤、烧伤及尿道感染的标本分离。
本菌存在的重要条件是潮湿的环境。
1 形态及染色特征铜绿假单胞菌为非发酵革兰氏阴性菌，菌体细长，长短不一，呈球杆状或线状，成对或短链状排列。
菌体一端单鞭毛，暗视野或相差显微镜下可见细菌运动活泼。
2 生长特性专性需氧，生长温度25~42℃，最适25~30℃，4℃不生长，42℃可生长，可用以鉴别该菌。
普通培养基上生长18~24h可见扁平、湿润的菌落，能产生水溶性的色素，如绿脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等，使得培养基呈亮绿色。
血琼脂平板生长可见菌落周围有溶血环，菌落呈金属光泽；液体培养基呈浑浊状生长，液体表面形成菌膜，培养基底部生长不良。
3 生化特点该菌氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气，但不分解乳糖和蔗糖。
液化明胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气。
吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。
4 抗原性与分型该菌含O抗原（菌体抗原）及H抗原（鞭毛抗原）。
O 抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。
O抗原可用以分型。
铜绿假单胞菌的分类与特征分析
铜绿假单胞菌的分类与特征分析铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，被广泛分布于自然环境中，是一种常见的水生细菌。
本文将为您介绍铜绿假单胞菌的分类和特征分析。
一、分类：铜绿假单胞菌属于铜绿单胞菌属（Pseudomonas aeruginosa），是铜绿单胞菌科（Pseudomonadaceae）的成员。
在分类学上，铜绿假单胞菌属被分为以下几个层次：1. 界：细菌界（Bacteria）2. 门：变形菌门（Proteobacteria）3. 纲：伯克霍尔德菌纲（Burkholderiales）4. 目：假单胞菌目（Pseudomonadales）5. 科：假单胞菌科（Pseudomonadaceae）6. 属：铜绿单胞菌属（Pseudomonas）7. 种：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）二、特征分析：1. 形态特征：铜绿假单胞菌是革兰氏阴性的杆状细菌，通常为直杆状，具有一定的运动能力。
其细胞长度约为1.5-3微米，直径为0.5-0.8微米。
2. 纯培养特征：铜绿假单胞菌可以在一般的培养基上生长，例如血琼脂培养基、营养琼脂培养基等。
培养出的菌落呈糊状，表面带有绿色或蓝绿色。
3. 生理特征：铜绿假单胞菌具有很强的适应性，可以在广泛的环境中生存。
它是一种嗜热菌，生长适温范围一般为25-42摄氏度。
此外，铜绿假单胞菌是嗜氧菌，对氧气的需求较高。
4. 代谢特征：铜绿假单胞菌可以利用多种碳源进行代谢，包括葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
此外，它还可以分解多种有机物质，具有较强的生物降解能力。
5. 病原性：铜绿假单胞菌是一种重要的致病菌，它可以引起多种感染，尤其是对免疫功能低下的人群更为具有威胁。
铜绿假单胞菌常导致医院获得性感染，如呼吸道感染、尿路感染等。
6. 耐药性：铜绿假单胞菌对多种常规抗生素具有较强的耐药性，包括β-内酰胺类、氨基糖苷类等。
这使得治疗相关感染变得困难，加大了临床治疗的难度。
总结：铜绿假单胞菌属于铜绿单胞菌科，是一种革兰氏阴性杆菌。
假单胞菌属解析
尿、分泌物等临床标本可直接接种在血平板上，血液标本可先于 20℃~30℃进行增菌后再接种血平板分离。不能在35℃或37℃进行 培养，以免发生假阴性。本菌鞭毛3根以上，42℃不能生长，不产 生绿脓素，可以与铜绿假单胞菌相区别。本菌的最低鉴定特征有： 单端鞭毛3根以上，动力阳性；氧化分解葡萄糖，不分解麦芽糖， 氧化酶阳性，精氨酸水解阳性，明胶液化阳性；可产生荧光素， 不产生绿脓素，4℃生长，42℃不生长。
铜绿假单胞菌耐药机制的研究, 对监控医院内感染菌群、 检测其 耐药性、 指导抗生素的合理利用极为重要。同时, 由于铜绿假单 胞菌分布广泛, 可以推知其耐药机制在其他病原菌中也极可能广泛 存在, 对铜绿假单胞菌耐药机制的研究对其他许多病原菌的控制也 具有指导意义。
铜绿假单胞菌的耐药机理主要有 4 种, 一是产生抗生素灭活酶或 抗生素修饰酶; 二是改变抗菌药物的作用靶位, 逃避抗菌药物的抗 菌作用; 三是膜屏蔽与主动外排, 限制药物到达作用靶位; 四是形 成生物膜。
被检验的肉含有荧光假单胞菌
2．临床意义
荧光假单胞菌（P.fluorescens）存在于土壤和水等环境中，常与
食物（鸡蛋、血、牛乳等）腐败有关，可作为咽部的正常菌群存 在，是人类少见的条件致病菌，偶从泌尿道感染病人尿中分离出。 由于具有嗜冷性，可在冰箱储存血液中繁殖，若输入含有此菌的 血库血液，可导致病人不可逆性的休克而死亡。
铜绿假单胞菌－防治原则
加强一些特殊病房及检查室、诊疗器械的消毒管理。 避免医务人员与病人之间的交叉感染。 治疗过程中，应合理选择有效抗生素。
铜绿假单胞菌的耐药机制研究
铜绿假单胞菌常引起菌血症、肺炎、泌尿系统感染 烧伤感染和囊 性纤维化继发感染等疾病, 由于其耐药菌株不断产生, 耐药性不断 变化, 已成为医院内获得性感染最严重的条件致病菌之一。
假单胞菌属ppt课件
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被检验的肉含有荧光假单胞菌
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2．临床意义
荧光假单胞菌（P.fluorescens）存在于土壤和水等环境中，常与
食物（鸡蛋、血、牛乳等）腐败有关，可作为咽部的正常菌群存 在，是人类少见的条件致病菌，偶从泌尿道感染病人尿中分离出。 由于具有嗜冷性，可在冰箱储存血液中繁殖，若输入含有此菌的 血库血液，可导致病人不可逆性的休克而死亡。
3. 运用血清学实验，噬菌体分型做医院内感染的追踪调查
铜绿假单胞菌的菌落分型
典型型 大肠菌样型 粘液型 侏儒型 粗糙型
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菌落光滑凸起 成粘液状
粘液型（麦康凯平板）
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粘液型（血平板）
细小，无光泽 半透明菌落
侏儒型（麦康凯平板）
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菌落呈灰绿色 大小不一 扁平湿润 边缘不规 则呈伞状伸展 表面常可 见金属光泽
假单胞菌在环境的生物修复方面进行了广泛的研究, 大体可分为有机 物污染和重金属污染的生物修复两大类。
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由恶臭假单胞菌及荧光假单胞菌等革 兰氏阴性短杆菌引起。患病初期可见 鱼的体表有点状白色黏液物附着并逐 渐蔓延扩大，严重时鳞片基部充血、 竖起，鳞片脱落，体表及鳍基部充血， 肝、肾充血，靠边缓游不吃食，不久 即死亡。
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血平板检验
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斯氏假单胞菌
1．细菌特性 革兰阴性杆菌，一端单鞭毛，运动活泼；最适生长 温度35℃，4℃不生长，大部分菌株在42℃生长，氧化 葡萄糖产酸，在6.5%高盐培养基中可生长；营养要求 不高，普通平板可生长，新分离菌株在培养基上可形 成特征性干燥、皱缩样菌落，黏附于琼脂表面难以移 动，可产生黄色色素，无荧光。
第三节 绿脓杆菌
第三节绿脓杆菌绿脓杆菌（P.aeruginosa）属假单胞菌属(Pseudomonas)，广泛分布于自然界及正常人皮肤、肠道和呼吸道，是临床上较常见的条件致病菌之一。
一、生物学性状大小为1.5～3.0×0.5～0.8um，G-杆菌。
菌体一端一般有一根鞭毛，运动活泼。
无芽胞，米液型菌株有多糖荚膜或糖萼，具有抗吞噬作用。
在普通培养基上生长良好，专性需氧。
菌落形态不一，多数直径2～3mm，边缘不剂齐，扁平湿润。
在血琼脂平板上形成透明溶血环。
液体培养呈混浊生长，并有菌膜形成。
绿脓杆菌能产生两种水溶性色素：一种是绿脓素，为蓝绿色的吩嗪类分合物，无荧光性，具有抗菌作用。
另一种为荧光素，呈绿色。
绿脓素只有绿脓杆菌产生，故有诊断意义。
但广泛使用有效抗生素后筛选出的变异株常丧失其合成能力。
分解蛋白质能力甚强，而发酵糖类能力较低，分解葡萄糖，产酸不产气，不分解甘露醇、乳糖及蔗糖，能液化明胶。
分解尿素，不形成吲哚，氧化酶试验阳性，可利用枸椽酸盐。
绿脓杆菌有菌体O抗原和鞭毛H抗原。
O抗原含有内毒素和原内毒素蛋白质两种成份。
原内毒素蛋白质是一种高分子、低毒性，免疫原性强的保护性抗原，不仅存在于不同血清型绿脓杆菌中，而且广泛存在于假单胞菌属的其他细菌以及肺炎杆菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等G-细菌中，是一种良好的交叉保护抗原。
二、致病性与免疫性绿脓杆菌能产生多种与毒力有关的物质，如内毒素、外毒素A、弹性蛋白酶、胶原酶、胰肽酶等，其中以外毒素A最为重要。
绿脓杆菌外毒素A为一种热不稳定的单链多肽，分子量约66，000，经甲醛或戊二醛处理可脱毒为类毒素，并被特异性抗毒素中和。
毒性强，注入动物后，主要靶器官肝脏可出现细胞肿胀、脂肪变性及坏死；其他脏器病变有肺出血和肾脏坏死。
外毒素A机理与白喉毒素有些类似，即最终使核糖体上延长因子2（EF～2）失活，抑制宿主细胞的蛋白质合成，但具体过程不同。
此外，外毒素A和白喉毒素在蛋白质结构、免疫原性、鞭细胞和敏感动物等方面均有差异。