气相色谱-质谱法测定白酒中氨基甲酸乙酯的分析

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食品安全地方标准酒精饮料中氨基甲酸乙酯的测定

食品安全地方标准酒精饮料中氨基甲酸乙酯的测定气相色谱-质谱法1 范围本标准规定了酒精饮料中氨基甲酸乙酯的气相色谱-质谱测定方法。

本标准适用于白酒、啤酒、黄酒、葡萄酒等酒精饮料中氨基甲酸乙酯的测定。

本标准的检出限：当试样取2.0g时，本方法氨基甲酸乙酯含量的检出限为1.0μg/kg。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义酒精饮料系指供人们饮用的且乙醇含量在0.5%(vol)以上的饮料，包括各种发酵酒、蒸馏酒及配制酒。

4 原理酒精饮料加氨基甲酸乙酯同位素内标后，经过硅藻土固相萃取柱净化、洗脱，洗脱液浓缩后，用气相色谱—质谱仪测定，内标法定量。

5 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

5.1无水硫酸钠(Na2SO4)：450℃灼烧4h，冷却后贮于干燥器中备用。

5.2CLE-硅藻土固相萃取柱：4000 mg/12 mL。

5.3正己烷(C6H14): 色谱纯。

5.4乙酸乙酯(C4H8O2): 色谱纯。

5.5乙醚(C4H10O): 色谱纯。

5.6甲醇（CH3OH）: 色谱纯。

5.7氨基甲酸乙酯标准品（C3H7O2N，CAS：51-79-6）：纯度>99.0％。

5.8D5-氨基甲酸乙酯(C3H7O2N-d5)。

5.95%乙酸乙酯-乙醚溶液（V/V）。

5.10D5-氨基甲酸乙酯溶液：准确称取适量的D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液，使用时用甲醇稀释至1.0μg/mL。

5.11氨基甲酸乙酯标准溶液：准确称取适量的氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液，使用时用甲醇稀释至0.2μg/mL。

5.12氨基甲酸乙酯标准使用液：准确吸取0.2μg/mL氨基甲酸乙酯标准溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL，各加1.0μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液100μL，用甲醇定容至1.0 mL，得到浓度为20.0 ng/mL，40.0 ng/mL，80.0 ng/mL，120.0 ng/mL，160.0 ng/mL的标准使用液（含100.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）。

气相色谱法测定饮料酒中氨基甲酸乙酯的含量

气相色谱法测定饮料酒中氨基甲酸乙酯的含量蒙法双【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)009【总页数】1页(P77-77)【作者】蒙法双【作者单位】广西壮族自治区北海食品药品检验所【正文语种】中文氨基甲酸乙酯（Ethyl carbonate，EC）是一种已被证实可以致癌的物质，在21世纪初国际癌症研究机构已经将EC归类为可能会造成人类患癌症的2A组之中。

研究发现EC会引发诸如肝癌、肺癌等恶性肿瘤，对患者的免疫系统也造成严重损伤。

我国现在针对酒类制品中EC物质的含量制定了一定测定标准，但就珠江啤酒中EC含量的研究尚不多见，本文由此出发简单对气相色谱法检测酒类饮料中EC 的含量进行分析。

样品、实验仪器和试剂样品：从市场上采购某啤酒若干（批号20151009-20151211）；仪器：Agilent 7890B气相色谱仪、FID检测器、纯水器（由国内上海爱朗仪器所生产，型号为Mili-Q）、氮吹仪（由德国海道夫公司生产，型号为DC-12）、玻璃层析柱（由上海安谱公司提供）；试剂：试剂均由美国西格玛奥德里奇公司生产的相应试剂，氨基甲酸乙酯标准品购自Sigma公司，其纯度在100.0%。

实验方法▲溶液的制备先称取适量氨基甲酸乙酯的标准品放置于100mL规格的容量瓶中，使用CH2Cl2稀释处理至氨基甲酸乙酯的浓度为1mg/mL，并将其放置于冰箱中冷藏处理，待用时，放置室温后然后分别配置浓度为10、100、500、1000μg/L 4种不同的溶液。

内标溶液的制备：500ng/mL，即将5mL的PC标准溶液溶入100mL的容量瓶中，使用蒸馏水稀释到要求的刻度。

内标物质由Sigma公司提供，其纯度在98%以上。

▲气相色谱条件毛细管柱型号为DB-225MS（30m*0.25mm*0.25μm），其进样口的温度设定为230℃，其氦气体的流速控制在1.0mL/min；程序升温：50℃1min120℃，3min230℃，10min进样量：1μL，不分流进样，进样1min后以20mL/min进行吹扫，检测器温度250℃。

气相色谱-三重四极杆串联质谱法同时测定调味品中的氨基甲酸乙酯和氯丙醇

ｆｏｕｎｄｉｎｓｏｍｅｏｆｔｈｅｓａｌａｍｉｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓａｃｃｕｒａｔｅ，ｆａｓｔａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｓｉｍｕｌｔａ —
９９％，美国Ｓｉｇｍａ — Ａｌｄｒｉｃｈ公司），２－ＭＣＰＤ（纯度：
９９％，加拿大ＴｏｒｏｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｈｅｍｉｃａｌｓ公司），
３－ＭＣＰＤ— ｄ（纯度：９９％，德国Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ公
两类有害物质在调味品中的污染水平，以帮助指导
（ＨＰＬＣ级，美国ＴＥＤＩＡ公司）；无水硫酸钠（分析纯，上海试四赫维化工有限公司，使用前经５００ ℃ 干燥８ｈ）。分别用甲醇配制质量浓度为１０００ｍｇ／Ｌ的单
副产物，主要存在于酒类、酿造酱油、面包等发酵类
中的ＥＣ、３－ＭＣＰＤ和２－ＭＣＰＤ。
食品
中。食品中的氯丙醇（３－氯一１，２－丙二醇（３一
１实验部分
１．１仪器、试剂与材料
ＭＣＰＤ）和２一氯一１，３一丙二醇（２－ＭＣＰＤ））主要来自于酸水解植物蛋白液，此类水解蛋白液主要作为风味原料被添加于配制酱油、沙拉酱、方便面调味料等调味品中，自然发酵的食品也能产生微量的３一ＭＣＰＤ，含量低于２０￣ｇ／ｋｇ。这两类有害物质有可能同时存在于调味品中。ＥＣ被国际癌症研究机构（ＩＡＲＣ）于２００７年评定为２Ａ类对人类可能的致癌物，３－ＭＣＰＤ虽然已经被证明没有致癌作用，但长期低剂量的摄入可能损害肾功能和影响精子的

气质联用技术在白酒中氨基甲酸乙酯检测的应用实验

ｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－－ｏｌｆａｃｔｏｍｅｔｒｙｄｉｌｕｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｙｏｕｎｇａｎｄ
［６］李维青．白酒的香气与香型［Ｊ］，酿酒，２００７。（２）５ — ７
判定满意。
关键词：气相色谱一质谱仪（ＧＣ— ＭＳ）；氨基甲酸乙酯（Ｅｃ）；白酒中图分类号：ＴＳ２６２．３；ＴＳ２０７．３文献标识码：Ｂ
氨基甲酸乙酯（ＥｔｈｙｌＣａｒｂａｍａｔｅ，ＥＣ），又称为
中也发现有微量的存在ｌ３ｌ。食品中的ＥＣ不是人为添
加的，而是在食品发酵过程中自然形成的，有一种测网在２００８年将ＥＣ列为新增检测项目，并且目前
收稿日期：２０１６－０８－２８
作者简介：陈路露，工程师，主要从事仪器分析检测。
【７】王敏，张煜行，李泽霞，姜东明，等．老白干风味物质ＨＳ — ＳＰＭＥ — ＧＣ
—
ＭＳ指纹图谱的建立ｌＪ１．酿酒科技，２０１５，（１０）：３２ — ３４
ＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００１，４９：２９２４ — ２９２９
形成的复合香在老白干酒中产生了舒适的枣香。试
验中显示了ＧＣ一０技术的强大优势，表明了人鼻是最佳的检测器。下一步应该对衡水老白干酒中呈现

崇明老白酒酿造贮存过程中氨基甲酸乙酯变化及检测方法优化

ｏｆｈｅｔｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄａｎｄａｆｔｅｒｗａｒｄｓａｄｄｉｎｇ１０ｍＬｏｆｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｈｌｏｉｄｒｅｉｎｔｈｒｅｅｐｏｔｉｏｎｓａｓａｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｏｌｖｅｎｔ．Ｔｈｅ
（ＥＣ）ｗａｓｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｏｍｏｎｉｔｏｒｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎＥＣｃｏｎｔｅｎｔｉｎＣｈｏｎｇｍｉｎｇｉｒｃｅｗｉｎｅｄｕｒｉｎｇｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｓｔｏｒａｇｅ．Ｏｐｔｉｍａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｒｆｓａｍｐｌｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ａｄｊｕｓｔｉｎｇｔｈｅｐＨｔｏ９．０ｆｏｌｌｏｗｉｎｇａｄｄｉｔｉｏｎ
２．ＳｈａｎｇｈｉａＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅＴｅｃｈｎｏｌｇｙＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｓｈｎｇａｈａｉ２００２３３，Ｃｈｉｎａ）
ＳａｍｐｌｅＰｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｆｏｒＥｈｙｔｌＣａｒｂｍａａｔｅ（ＥＣ）Ｄｅｔｅｃｉｔｏｎ

白酒中氨基甲酸乙酯含量检测及在不同香型白酒中的含量分析

青睐。近年来，白酒中潜在的氨基甲份样品。
萃取柱中，并静置 10 min。经 10 mL
酸乙酯愈加引人关注 [6-7]。早在 1985 年， 1.2 仪器和设备
正己烷淋洗后，用 15 mL5% 乙酸乙酯 -
加拿大规定了氨基甲酸乙酯的限量标
气相色谱 - 质谱仪（7890B-5977A，乙醚溶液以约 1 mL/min 的流速进行
限量指标。本研究旨在通过对 2018 年士梅特勒托利多）、氮吹仪（ORG，至 1.00 mL，过 0.22 μm 有机滤膜，
从河南省各地市生产企业、超市、小 N-EVAP24）、固相萃取装置（安捷伦）制成测定液，供 GC-MS 分析。
136 食品安全导刊 2019年6月 Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
Technology 科技分析与检测
白酒中氨基甲酸乙酯含量检测及在不同香型白酒中的含量分析
□ 姚晓洁谷瑞丽姬建生杨森楠夏嘉河南省口岸食品检验检测所
摘要：采用 SPE 结合气相色谱 - 质谱联用（GC-MS）法对从河南省各地市抽取的 1 882 批白酒的 EC 进行检测。结果表明，所检测的白酒中 EC 的检出率为 52.3%，最大值 1 680 μg/kg，平均含量为 49.9 μg/kg。7.6% 的白酒中 EC 含量超过国际常用蒸馏酒的 EC 限量标准（150 μg/kg）。针对不同香型白酒进行分析，EC 平均含量最高的是酱香型白酒，为 92.1 μg/kg；其次是董香型白酒，为 91.4 μg/kg；第三是陶香型白酒，为 84.0 μg/kg，之后依次是凤香型白酒 63.7 μg/kg，浓香型白酒 56.7 μg/kg。此研究期望能为我国食品安全部门制定白酒中 EC 的限量标准提供有效的参考。

吉林食品安全地方标准饮料酒中氨基甲酸乙酯的测定气相色谱-质谱法

《吉林省食品安全地方标准饮料酒中氨基甲酸乙酯的测定气相色谱-质谱法》编制说明吉林省疾病预防控制中心二〇一三年八月一、研究背景氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbam ate,又叫Urethane)是一种具有遗传毒性及致癌性的物质,可导致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌等疾病。

氨基甲酸乙酯被广泛用于工业涂料及动物麻醉[1]，它不仅是烟草叶及香烟的天然成分,也是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物，它广泛存在于发酵食品(如面包、酸牛奶、乳酪、酱油等)和酒(如葡萄酒、苹果酒、中国黄酒和口本清酒等)中。

不同的酒精饮品检出的氨基甲酸乙酯含量是不一样的，例如烈酒（特别是由樱桃、杏和梅等核果制造的烈酒）的含量一般较高，而啤酒的含量则偏低。

不同种类的酒精饮品的氨基甲酸乙酯含量差异很大（见图1）。

自从1943年,Nettle ship用实验证明了氨基甲酸乙酯具有致癌作用后，1971年Lofroth和 Gejvell 在发酵食品中发现了氨基甲酸乙酯，并测定了葡萄酒中的氨基甲酸乙酯含量。

人体摄取氨基甲酸乙酯主要是通过饮用酒，调查显示, 如果饮用氨基甲酸乙酯含量大于30×10-5g/L的酒，人饮用后易患癌的机率大大增加。

根据加利福尼亚环保机构的一项统计数据得知, 假设每个人的患癌症的几率为1×10-5, 可推断这个人氨基甲酸乙酯的摄入量大约为0.7μg/day[2]。

由此可见，氨基甲酸乙酯是危害人类健康的一个不容忽视的因素。

北美等国家法规规定了不同酒中所含氨基甲酸乙酯的数量及水平。

1985年,加拿大报道了某些酒中氨基甲酸乙酯含量高,同年加拿大的卫生与预防部门规定了各类酒中的氨基甲酸乙酯的限量标准: 如佐餐葡萄酒中氨基甲酸乙酯质量浓度不得超过30μg/L；强化葡萄酒100μg/L；蒸馏酒150μg/L；烈性酒、水果白兰地400μg/L。

美国食品和药品管理局规定1988年以后生产的佐餐葡萄酒（酒精度14% V/V）氨基甲酸乙酯质量浓度不得超过15μg/L，餐后甜葡萄酒60μg/L。

GC-MS测定白酒中氨基甲酸乙酯的不同预处理方法的比较

Liquor Using Gas Chromatography-mass Spectrometry
GUO Xue-wu, LI Yuan-zi, HUANG Shi-yong, DU Li-ping, CHEN Ye-fu, XIAO Dong-guang (Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology, Ministry of Education, Tianjin, Tianjin Industrial Microbiology Key Lab,
249
现代食品科技
Modern Food Science and Technology
2016, Vol.32, No.4
蒸馏）和储存过程中产生[1]，早在 20 世纪 40 年代， 1.3.1 标准系列溶液的配制
NETTLESHIP 实验证明了 EC 具有潜在致癌作用，可
分别用无水乙醇、甲醇配制 EC 与氨基甲酸丙酯
Key words: ethyl carbamate; pretreatment; extraction; analysis; gas chromatography-mass spectrometry; liquor
白酒，又称烧酒，它是以粮谷为原料，以酒曲为
收稿日期：2015-06-08 基金项目：国家 863 科技计划项目（2013AA102108）；天津市科技支撑计划项目(15ZCZDNC00110) 作者简介：郭学武（1980-），男，博士，副研究员，研究方向：现代酿造技术通讯作者：肖冬光（1956-），男，教授，博导，研究方向：现代酿造技术
1.3.4 固相微萃取（SPME）
1 材料与方法
取试样 10 mL 于烧杯中，加水调节样品的酒精度至 20%（酒度低于 20%的样品不用再稀释），然后取

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氨基甲酸乙酯回收率高，完全可以满足白酒中氨基甲酸乙酯的测定。关键词：气相色谱一质谱法；白酒；氨基甲酸乙酯中图分类号：ＴＳ２６２文献标志码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊｉｓｓｎ．１６７１ — ９６４６（Ｘ）．２０１３．１２．０５３
文章编号：１６７１ — ９６４６（２０１３）１２ｂ一００６４ — ０２
气相色谱一质谱法测定白酒中氨基甲酸乙酯的分析
包志华，娜仁高娃，马俊华
（１．内蒙古商贸职业学院，内蒙古呼和浩特０１００７０；２．呼和浩特市疾病预防控制中心，内蒙古呼和浩特０１００７０）摘要：探讨气相色谱一质谱法测定白酒中氨基甲酸乙酯的分析方法。白酒中氨基甲酸乙酯经过硅藻土固相萃取柱净化
第ｌ２期（总第３３８期）
２０１３年ｌ２月
农产品加工（学刊）
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｅｉｒｏｄｉｃａｌｏｆＦａｒｍＰｒｏｄｕｃｔｓＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ
Ｎｏ．１２Ｄｅｃ．
富集，再将洗脱液浓缩定容，用气相色谱一质谱仪测定，通过目标组分的质谱图和保留时间与目标组分的标准将物质的质谱图和保留时间对照进行定性，内标法定量。样品加标回收率为８７％～１１０％，相对标准偏差为０．９５％～２．３５％，检出限为０．２３ｎｇ／ｍＬ。结果表明，利用ＤＢ — ＩＮＮＯＷＡＸ型毛细管色谱柱分离目标物效果好，采用硅藻土萃取柱富集净化
ｓｔｕｄｙｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｔｅｉｎｌｉｑｕｏｒｂｙｄｉｔｏａｍｉ￣ｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎｅｎｉｒｃｈｍｅｎｔａｎｄｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅｅｌｕｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ０ｆＭｅｔＩｌＹｌＣａｒｂａｍａｔｅａｎｄＥｔｈｙｌＣａｒｂａｍａｔｅｉｎＷｈｉｔｅＬｉｑｕｏｒｂｖＧＣ— ＭＳ
２．ＨｏｈｈｏｔＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｈｏｈｈｏｔ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ０１００７０，Ｃｈｉｎａ）
ｃｏｎｓｔａｎｔｖｏｌｕｍｅ，ｗｉｔｈｇｓａｃｈｒｏｍａｔｏｒａｇｐｈｙ－ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｆｏｔｈｅｔａｒｇｅｔａｎａｌｙｔｅｓ，ｔｈｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｄｔｈｅｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｔｈｅｔａｒｇｅｔａｎａｌｙｔｅｓｓｔａｎｄａｒｄｍａｔｅｒｉａｌｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｄｔｈｅｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅｓｆｏｌｉｇｈｔｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ，ｉｎｔｅｒｎｌａｓｔａｎｄａｒｄｍｅｔｈｏｄｑｕａｎｉｔｔａｔｉｖｅ．ＴｈｅｒａｔｅｏｆｒｅｃｏｖｅｒｙｉＳ８７％～ｌ１０％．ａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎｏｆ０．９５％一２．３５％．ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｉｓＯ．２３ｎｇ／ｍＬ．ｒｈｅｅｘｐｅｉｒｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｈａｔｔｕｌａｒｙｃｈｏｍａｒｔｏｒａｇｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎｏｒｆｈｅｔ
ＢＡＯ２ｈｕａｌ，ＮＡＲＥＮＧａｏ－ｗａ２。ＭＡＪｕｎ－ｈｕａ２
（１．ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＢｕｓｉｎｅｓｓＶｏｃａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｈｏｈｈｏｔ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａ０１００７０，Ｃｈｉｎａ；
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｍｅｔｈｏｄｏｒｆｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｉｔｏｎｏｆｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｔｅｉｎｌｉｑｕｏｒｉｓｄｉｓｃｕｓｓｅｄ，ｔｏ