蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验

（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定
1.实验原理
当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液 与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合 后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。 Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性 还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。 因此，利用该反应，可证明样液中含可溶 性还原糖。
5、方法步骤： （１）可溶性还原糖糖的鉴定 （水浴加热）
操作方法 注意问题 解释 因苹果多酚氧化酶含量高，组 织液很易被氧化成褐色，将产 生的颜色掩盖。 1. 制备组织样液。 苹果或梨组织液必须临时 （去皮、切块、研磨、过滤）制备
2. 取1支试管，向试管内注 入2mL组织样液。 3. 向试管内注入1mL新制 的斐林试剂，振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、 斐林试剂很不稳定，甲乙液分 乙液分别配制，使用前才 别加入时可能与组织样液发生 将甲、乙液等量混匀成斐 反应无Cu ( OH ) 2生成。 林试剂； 甲乙液 等量混合，现配先用， 切勿将甲液、乙液分别加 切不可分开滴加，或者久置后 入苹果组织样液中进行检 才用。 测。 最好用试管夹夹住试管上 部，使试管底部不触及烧 杯底部，试管口不朝向实 验者。 防止试管内的溶液冲出试管， 造成烫伤；甲、乙液混合保存 时生成Cu ( OH ) 2在70~90℃ 下分解成黑色CuO和水；
试剂配制 A液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）
双缩脲试剂
B液（0.01g/mL的硫酸铜溶液）
2、实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 3、实验选材（1、材料应富含相关物质，使现象更加 明显；2、材料本身应无色，以免对结果产生干扰） （1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色 为白色的植物组织，如苹果、梨，也可用白萝卜替代。（因为 组织的颜色较浅，易于观察。） （2）做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花 生种子为最好，实验前一般要浸泡3～4小时。 （3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆(可用 豆浆替代）或鸡蛋清。
（3）镜检鉴定
在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的 最薄处（最好只有1-2层细胞），移至视野 的中心→换用高倍镜观察，调焦至最清晰。 可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒，这就是 脂肪滴（油滴）。若发现观察物外围也有许 多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来。
脂肪检测实验的实验结果
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③刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作， 自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意 要整个臂部用力，而不要腕部用力。）如此连 续动作，切下一些薄片。
（2）染色
用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的 中央→滴苏丹Ⅲ溶液2-3滴于花生子叶薄片上→21min后，吸去染液→滴50%的酒精洗去浮色→吸去 多余酒精→再滴1-2滴蒸馏水→盖上盖玻片，制成 临时装片。
4. 试管放在盛有50-65℃温 水的大烧杯中，加热约2分 钟，观察到溶液颜色：浅蓝 色 → 棕色 → 砖红色（沉 淀）
.实验步骤 （1）制备组织样液（教师制备） （2）鉴定样液
先在试管中加入 2mL组织样液
注意观察整 个实验过程 中，溶液颜 色的变 化！！！
水浴煮沸 2分钟
再加入 2mL刚 配制的 斐林试 剂
用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴 上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。 低倍镜下找到花生子叶薄片的最 薄处，可看到细胞中有染成橘 黄色或红色圆形小颗粒。
实验步骤
（1）切片制作
①去掉花生种皮 ②用左手的三个手指夹住花生的一片 子叶，使花生子叶高于手指之上（为 什么？）。右手持刀片，将子叶削去 一层，形成平面。
4、实验试剂
斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和 乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、 苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、
双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液 B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、 体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。
烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指 挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子 叶含有脂肪。
（２）脂肪的鉴定
操 作 方 法 花生种子浸泡、去皮、切下一些 子叶薄片，将薄片放在载玻片 的水滴中，用吸水纸吸去装片 中的水。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏 丹Ⅳ染液，染色1分钟。 用吸水纸吸去薄片周围染液，用 50%酒精洗去浮色，再用吸水 纸吸去酒精。
（需要显微镜）
解 释
注 意 问 题
干种子要浸泡3~4小 因为浸泡时间短，不易切片， 时，新花生的浸 浸泡时间过长，组织较软， 泡时间可缩短。 切下的薄片不易成形。切 片要尽可能薄些，便于观 察。 染色时间不宜过长。 苏丹Ⅲ中含有酒精，染色时 间久了，把脂肪全部溶解 了，观察不到脂肪粒 酒精用于洗去浮色，不洗去 浮色，会影响对橘黄色脂 肪滴的观察。同时，酒精 是脂溶性溶剂，可将花生 细胞中的脂肪颗粒溶解成 油滴。 滴上清水可防止盖盖玻片时 产生气泡。 装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙 醇中。
R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O
试剂配制 甲液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液） 斐林试剂 乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液）
甲液乙液等量混合，现用现配， 切不可分开滴加，或者久置后 才用。
（二）生物组织中蛋白质的鉴定
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实验原理
在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲 （H2NOC-NH-CONH2）能与Cu 2+作用， 形成紫色的络合物，这个反应叫做双 缩脲反应。 由于蛋白质分子中含有很多与双缩 脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可 与双缩脲试剂发生颜色反应。
生物组织中还原糖、 脂肪、蛋白质的检测
1、实验原理：
（1）斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化 为：由蓝色变成砖红色(沉淀)。斐林试剂只 能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能 鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是 还原糖。 （2）苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色， 苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。 （3）蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应（肽 键）。