茚三酮呈色反应实验报告
实验二 蛋白质与氨基酸的显色反应
实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应【实验目的】1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
（一）双缩脲反应【实验原理】•尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
•一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
【实验器材及试剂】器材：试管、酒精灯、试管夹、试管架试剂：（1）尿素（2）10%氢氧化钠溶液（3）1%硫酸铜溶液（4）2％卵清蛋白溶液【实验步骤】•取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
•向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。
（二）茚三酮反应【实验原理】•除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
•该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
•茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。
•反应机理如下：【实验器材及试剂】器材：试管、酒精灯、试管夹、试管架试剂：(1)蛋白质溶液：2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液(3)0.1％茚三酮水溶液(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液【实验步骤】•(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
茚三酮与氨基显色
茚三酮与氨基显色以茚三酮与氨基显色为标题，我们来探讨一下茚三酮和氨基显色的相关性。
茚三酮是一种有机化合物，具有特殊的结构和性质，而氨基显色则是一种常用的实验方法，用于检测和测定有机化合物中的氨基含量。
让我们来了解一下茚三酮。
茚三酮的化学式为C11H8O，是一种具有芳香性质的有机化合物。
它的分子结构中包含了一个茚环和一个酮基团。
茚三酮在化学实验中常用作试剂或中间体，具有一定的重要性。
茚三酮与氨基显色之间的关系则是通过氨基显色实验来检测茚三酮中的氨基含量。
氨基显色法是一种常见的化学分析方法，通过与某些试剂反应，可以使含有氨基的化合物在显色剂的作用下产生颜色变化，从而进行定性或定量分析。
在茚三酮中，由于其分子结构中含有酮基团，可以通过氨基显色法来检测其中的氨基含量。
通常使用的显色剂有二氨基溴酚、二氨基苯酚等。
当茚三酮与这些显色剂反应时，会发生氨基与显色剂之间的化学反应，从而产生颜色变化。
在实验中，首先将茚三酮与适当的试剂反应，待反应完成后观察产生的颜色变化。
根据颜色的深浅、明暗程度，可以推测茚三酮中的氨基含量。
颜色越深、越明显，表示茚三酮中的氨基含量越高；颜色越浅、越不明显，则表示茚三酮中的氨基含量越低或不存在。
需要注意的是，茚三酮与氨基显色的反应并不是绝对的，它受到许多因素的影响，如反应条件、显色剂浓度、反应时间等。
因此，在实际应用中需要控制这些因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。
茚三酮与氨基显色的相关性在化学实验和分析中有着广泛的应用。
通过氨基显色法，可以对茚三酮及其衍生物进行定性和定量分析，从而了解其化学性质和含量。
这对于研究和应用茚三酮具有重要的意义。
茚三酮与氨基显色之间存在着一定的关系，通过氨基显色法可以检测茚三酮中的氨基含量。
这种方法在化学实验和分析中具有重要应用，可以帮助我们了解茚三酮的性质和含量。
但需要注意的是，实验条件和方法的选择对结果的影响很大，需要谨慎操作和综合分析。
希望通过本文的介绍，能够增加对茚三酮与氨基显色之间关系的了解。
蛋白质定性方法茚三酮反应
蛋白质定性方法茚三酮反应
蛋白质定性方法茚三酮反应
1.范围
本方法采用茚三酮试剂与蛋白质中a-氨基酸反应生成蓝紫色化合物最大吸收值
的波长为570nm
本方法适用于各类蛋白质测定范围0.5 g 50 g 蛋白质
2.原理
茚三酮是使氨基酸和多肽显色的重要试剂当茚三酮在弱酸性条件下和-氨基酸反应时氨基酸被氧化分解生成醛放出N H3 和C02 水合茚三酮则变成还原型茚三酮然后还原型茚三酮与N H3 及另一分子茚三酮进一步缩合生成蓝紫色化合物最大吸收值
的波长为570nm此反应为一切a-氨基酸所共有反应灵敏因而本法是氨基酸定量
测定应用最广泛的方法之一脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色化合物最大吸收值的波长在44Onm 多肽和蛋白质虽然具有茚三酮反应但肽链越大灵敏度也越来越差故不宜作定量测定之用在多肽合成中常用来检验有无自由氨基的肽类存在
3 .试剂
茚三酮无水乙醇95%乙醇甘氨酸
4.试样制备
4.1 蛋白质溶液箱保存备用
4.2 1mg mL-1的茚三酮乙醇溶液,0.1g 茚三酮溶于100mL 95%乙醇新鲜配置
4.3 5mg mL-1的甘氨酸溶液
5.参考文献
1.陈曾燮刘兢罗丹编.生物化学实验.合肥中国科学技术大学出版社1994.1-6
2.李建武等合编.生物化学实验原理和方法.北京北京大学出版社1994.150-174
3.宁正祥编.食品成分分析手册.北京中国轻工业出版社1998.62-80。
蛋白质的颜色反应以茚三酮
蛋白质的颜色反应以茚三酮wei
总之，以茚三酮为代表的蛋 白质颜色反应是一种重要的 生化实验方法之一
它具有专一性高、灵敏度高、 操作简便和稳定性好等优点 而被广泛应用于生物化学和 生物工程领域中
蛋白质的颜色反应以茚三酮wei
注意事项
操作过程中要注意安全：避免直接接触皮肤或吸入 气体 对于含有还原性物质的样品：如半胱氨酸等，可能 会干扰颜色反应的结果。因此，在进行实验前需要 先进行适当的处理
不同类型的蛋白质可能对茚三酮颜色反应的灵敏度 有所差异：因此在实验过程中需要结合具体情况进 行判断和分析
化反应，用于检测和鉴定蛋白质的
存在。其中，以茚三酮为代表的反
应在生物化学和生物工程领域被广
泛应用
蛋白质的颜色反应以茚三酮wei
什么是茚三酮？
茚三酮是一种有机化 合物，化学式为 C9H6O6。它具有淡黄 色或淡紫色的特点， 在酸性环境中可以与 蛋白质中的氨基发生 反应，生成蓝紫色物 质
蛋白质的颜色反应以茚三酮wei
蛋白质的颜色反应以茚三酮wei
茚三酮颜色反应的原理
当茚三酮与蛋白质中的氨基发生 反应时，首先会形成一种可溶性 的中间产物。这个中间产物进一 步脱水、缩合，最终生成一种蓝 紫色的物质。这个颜色变化可以 通过肉眼观察或分光光度计进行 定量分析
蛋白质的颜色反Βιβλιοθήκη 以茚三酮wei茚三酮颜色反应的应用
蛋白质检测：通过观察颜色变化，可以判断样品中是否存在蛋白质。这种方法常用于 生物样品、食品、药品等的检测 蛋白质定量：通过分光光度计测定蓝紫色物质的吸光度，可以计算出样品中蛋白质的 浓度 蛋白质纯度分析：通过比较不同组分在颜色反应中的颜色变化，可以判断蛋白质的纯 度 蛋白质结构研究：通过观察不同氨基酸残基与茚三酮反应的差异，可以推断蛋白质的 结构信息 其他应用：除了以上几种常见的应用外，茚三酮还可以用于蛋白质一级结构的测定、 多肽合成过程的监控等
氨基酸含量测定和标准曲线制作(茚三酮法)
茚三酮比色法测定游离氨基酸含量原理：茚三酮与氨基酸的反应分两步进行，首先是氨基酸被氧化，产生二氧化碳､氨和醛，而水合茚三酮被还原成还原性茚三酮；第二步是所生成的还原性茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成成为蓝紫色化合物，该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比｡磷酸缓冲液（pH.8.04）：称磷酸二氢钾4.5350 g，定容500 ml。
称NAH2PO4·12H2O11.9380 g分别溶解定容500 ml。
取磷酸二氢钾10 ml与磷酸氢二钠190ml混合即为pH8.04的缓冲液2％茚三酮溶液：称取水合茚三酮 2 g，加水溶解后定容至 100 mL。
储成于棕色瓶中，避光保存。
0.25%抗坏血酸溶液：称取抗坏血酸 0.1 g，加水溶解后定容至 100 mL，现配现用，或者密封，冻存于-20 o C。
茚三酮反应液：取50 ml 2% 茚三酮，加入5 ml 0.25%的Vc，使用蒸馏水稀释到100 ml，密封储存在棕色瓶中。
亮氨酸标准液:称取 100 mg 亮氨酸（纯度不低于 99%）溶于 100 mL 水中，作为母液，此时亮氨酸的浓度为1 mg/mL。
茚三酮标准曲线制作溶液中氨基酸的浓度如果低于20 μg/ml，茚三酮显色反应将不能发生，故先配制不同浓度的氨基酸标准液，取十支试管，标号为1，2，3……10，按照下表配制1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1000 μg/ml亮氨酸超纯水 ml 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9 8.9 8.8 8.7 8.6 8.5 亮氨酸 终浓度μg/ml 405060708090100110120130140150使用螺旋盖（内垫）试管分别取上述浓度的氨基酸标准液1ml，空白对照使用1ml 超纯水替代氨基酸标准液，然后向各个试管中加入0.5 ml 的茚三酮反应液和0.5 ml 的磷酸缓冲液，盖好盖子悬紧，置于沸水浴中煮沸15 min，分别加入3 ml 的超纯水，斡旋混匀，测定吸光度，绘制标准曲线取一支中等程度显色的试管进行紫外和可见波段的全波长扫描，结果如下图所示3004005006007008000.00.10.20.30.40.50.60.7吸光度波长（nm ）403 nm565 nm选择565 nm 作为其最大吸收波长，测定各管的吸光度，弃去吸光度大于1的值 茚三酮终浓度（μg/mL） 565 nm 的吸光度 20 0.037 25 0.114 30 0.226 35 0.347 40 0.412 45 0.538 500.62155 0.692 60 0.754 65 0.834 700.968使用origin 8.5 绘制散点图并进行线性拟合，结果如下图所示0.00.20.40.60.81.0O D 565氨基酸浓度（μg/mL ）注意事项：1. 茚三酮比色受测定环境中的pH 影响很大，故每次测定前需要将样品溶液的pH 值调整到中性（pH7左右），2. 茚三酮不光可以与氨基酸反应，与蛋白质同样可以反应，因此需要在测定前去除溶液中的蛋白质，因此正确做法是：向样品溶液中加入等体积等0.6 mol/L 三氯乙酸，斡旋震荡，静置10 min 后，3000 rpm 离心10 min，取上清调整pH 值至中性pH7左右，再进行测定，3. 稀释倍数的确定：因为标准曲线的测定范围为20-70 μg/mL，即20-70 mg/L，所以在不清楚你所要检测样品中氨基酸的浓度时，最好取部分样品稀释10倍和100倍，分别检测原液、十倍稀释液和100倍稀释液的OD565，发现哪个水平下OD565落在标准曲线的范围内，从而判断需要对样品稀释多少倍4. 标准曲线测定时最好选择密封性较好的试管（螺旋盖硅胶内垫），同时需要检查气密性，防止水浴蒸发导致计量误差或者使用10 mL 具塞比色管，以方便在水浴之后可以准确补水。
【最新精选】茚三酮比色法测定赖氨酸含量
茚三酮比色法测定赖氨酸含量一. 目的了解赖氨酸总含量的测定方法。
掌握用比色法测定谷物类样品中赖氨酸含量。
二. 原理蛋白质中的赖氨酸残基上具有一个游离的e-NH2，它与茚三酮起颜色反应呈蓝紫色，在波长570nm处其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸残基的含量成线性关系。
亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，它仅有的一个氨基（a-NH2）相当于蛋白质中赖氨酸残基上的e-NH2，因而可以用亮氨酸标准液制作标准曲线来测定蛋白质中赖氨酸的含量。
但计算浓度时必须乘上两种氨基酸的分子量之比（赖氨酸与亮氨酸分子量之比为1.11:1）。
式中W：样品质量C ：样品中游离氨基酸的量，各种作物种子中游离氨基酸的含量大约是：玉米：0.01%，高粱：0.04%，水稻：0.01%，小麦：0.05%X ：从标准曲线查得的赖氨酸的质量三. 实验材料及设备1. 材料玉米粉2. 仪器分光光度计分析天平恒温水浴3. 器材刻度试管：25mL×11移液管：1mL×1 2mL×2 20mL×1烧杯：250mL×2 50mL×1滴管：2洗耳球：2滤纸：f11cm研钵、漏斗、洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1四. 试剂的配制1. 柠檬酸缓冲液（0.2mol/L，pH5.6）(参见附录二)2. 茚三酮试剂称3g茚三酮溶于100mL 95%乙醇中，溶解后加入160mg二氯化锡，搅拌溶解后加入100mL柠檬酸缓冲液中，搅匀备用。
3. 亮氨酸标准液（50mg/mL）准确称取5mg亮氨酸，用蒸馏水稀释定容到100mL，则得浓度为50mg/mL的标准液。
五. 操作步骤1. 样品液的制备(1) 取材：称取烘干、粉碎（过80目筛）的玉米粉0.3g（油料种子须经脱脂处理）。
(2) 提取：将称取的样品放入试管，准确加入20mL蒸馏水，摇匀。
读取样品悬液的总体积mL，置于80℃恒温水浴中提取20min。
（可间歇摇动）(3) 定容：冷却后，用蒸馏水将试管中悬液定容至（2）中悬液总体积刻度mL,，即最终样品液总定容体积仍为20mL，摇匀。
茚三酮法测氨基酸
茚三酮法测氨基酸 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT茚三酮显色法测定氨基酸的含量一．原理：凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
二．仪器：721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥容量瓶移液枪烧杯试管架试管水浴锅。
三．药品：（1）标准氨基酸溶液：配制成L 溶液（2），2mol/L 醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。
用pH 检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取170mg 茚三酮和30mg 还原茚三酮，用20mL 乙二醇甲醚溶解（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含～50μg 氨基酸。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入活性炭，轻轻搅拌。
加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取茚三酮，用沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将维生素C 用25mL 温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取L 的标准氨基酸溶液0，，，，，于试管中，用水补足至1mL。
茚三酮比色法测定牛肉中游离氨基酸的试验研究
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材料和方法
"$ & 仪器与试剂 由上海精密科学仪器有限公司提 )"(D 型分光光度计， ./K-(X 型精密酸度计，由上海雷磁精密科学仪器有限 供； 公司提供； 甘氨酸标准试剂， 购于美国 K1>0: 公司； 甘氨酸
加热时间 - (78
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茚三酮呈色反应实验报告
篇一：实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应
实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应
一、实验目的
1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理2、
掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法
二、实验内容
对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反
应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等颜色及沉淀反应
进行定性确定。
三、实验操作
（一）双缩脲反应
1、实验原理
当尿素加热到180℃左右时，两个分子的尿素缩合可放
出一个分子氨后形成双缩脲，双缩脲在碱性溶液中与铜离子
2 18
结合生成复杂的红色配合物，此呈色反应称为双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有多个肽键，其结构与双缩脲相似，故
能呈此反应，而形成紫红色或蓝紫色的配合物。此反应常用
作蛋白质的定性或定量的测定。
2、试剂
(1)尿素
(2)10%naoh溶液
(3)1%cuso4溶液
(4)蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，3层
纱布过滤，滤液冷藏备用。
3、操作
（1）取少许结晶尿素放在干燥试管，微火加热，则尿
素开始熔化，并形成双缩脲，释放的氨可用湿润的红色石蕊
试纸鉴定。待熔融的尿素开始硬化，试管内有白色固体出现，
停止加热，让试管缓慢冷却。然后加10%naoh溶液1ml和
1%cuso42~3滴，混匀后观察颜色的变化。
（2）另取一试管，加蛋白质溶液1ml、10%naoh溶液2ml
及1%cuso42~3滴，振荡后将出现的紫红色与双缩脲反应所
产生的颜色相对比。
（二）茚三酮反应
1、实验原理
除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮作用生成黄色物质外，所
3 18
有α-氨基酸与茚三酮发生反应生成紫红色物质，最终形成
蓝紫色化合物。1︰1500000浓度的氨基酸水溶液即能发生反
应而显色。反应的适宜ph为5~7。此反应目前广泛地应用于
氨基酸定量测定。
2、试剂
蛋白质溶液（同前）；0.5%甘氨酸；0.5%茚三酮水溶液
3、操作
取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液各1ml，
再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴加热2~3
分钟，观察颜色变化。
（三）蛋白黄色反应
1、实验原理
蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸、色氨
酸、苯丙氨酸等，这类蛋白质可被浓硝酸硝化生成黄色的硝
基苯的衍生物。该物质在酸性环境中呈黄色，在碱性环境中
转变
为橙黄色的硝醌酸钠。绝大多数蛋白质都含有芳香族氨
基酸，因此都有黄色反应。皮肤、毛发、指甲等遇浓hno3
变黄即发生此类黄色反应结果。
2、试剂
(1)蛋白质溶液（同前）；(2)头发；(3)指甲屑；(4)0.5%
苯酚溶液；(5)0.3%酪氨酸溶液；(6)10%naoh溶液；(7)浓硝
4 18
酸（ρ=1.42克/毫升）
3、操作
取5支试管编号后分别按下表-1所示加入试剂，观察各
管出现的现象，若有反应慢者可放置微火（或水浴中）加热，
待各管均先后出现黄色后，于室温逐滴加入10%naoh溶液直
至碱性，观察颜色变化。
表1试验编号
注意：向蛋白质溶液中加浓硝酸时，所出现的白色沉淀
是强酸使蛋白质发生变性所致。
（四）乙醛酸反应
1、实验原理
含有吲哚基的色氨酸在浓硫酸存在下与乙醛酸
（chocooh）缩合，形成与靛蓝相似的物质。此反应机理尚
不清楚，可能是由一分子乙醛酸与两分子色氨酸脱水缩合而
成的。含有色氨酸的蛋白质也有此反应。
2、试剂
(1)蛋白质溶液（同前）。
(2)0.03%色氨酸溶液。
(3)冰醋酸（一般含有乙醛酸杂质，故可用冰醋酸代替
乙醛酸）。(4)浓硫酸（分析纯）。
3、操作：
取2支试管，分别加入蛋白质溶液及色氨酸各2滴，再
5 18
加浓冰醋酸约1~2毫升，混匀，倾斜试管慢慢地沿管各加浓
硫酸1毫升，使之两相重叠，静置5分钟后则两相界面处出
现紫红色环，若效果不明显可在水浴加热。
（五）偶氮反应
1、实验原理
偶氮化合物与酚核或咪唑环结合产生有色物质，酪氨酸
和组氨酸与之反应则应产物分别为橙红色和樱红色。含有酪
氨酸和组氨酸的蛋白质也有此反应。应当指出，组胺、酪胺、
肾上腺素和胆色素分子也能发生此反应而显色。
2、试剂：
(1)蛋白质溶液（同前）；(2)0.3%组氨酸溶液；(3)0.3%
酪氨酸溶液；(4)20%naoh溶液；(5)重氮试剂
溶液A：5克亚硝酸钠溶于1000毫升水中。
溶液b：溶解5克ɑ-氨基苯磺酸于1000毫升水中，溶解
后再加入5毫升浓硫酸。A、b液分别存在密闭瓶中，用时以
等体积混合。
3、操作：
取3支试管分别加入0.3%组氨酸、酪氨酸、蛋白质溶液，
各4~5滴，再分别加重氮试剂A、b各10滴，振摇，混匀，
取后向3支试管分别加入20%naoh溶液2~3滴，观察各
试管中有色物质的生成，若水浴加热效果更明显。
（六）、醋酸铅反应
6 18
1、实验原理
多数蛋白质分子中常有含硫的氨基酸，如半胱氨酸和胱
氨酸，含硫蛋白质在强碱作用下
可分解产生硫化钠。硫化钠与醋酸铅反应生成黑色的硫
化铅沉淀，若加入浓盐酸则有硫化氢气体产生。
2、试剂
(1)未稀释的鸡蛋清。(2)10%的naoh溶液
(3)1.5%pb(Ac)2溶液（醋酸铅溶液）(4)浓盐酸
(5)醋酸铅试纸(将滤纸条浸入醋酸铅溶液中，湿透后取
出，100℃烘干即可)
3、操作：
向试管中先加入1.5%pb(Ac)2溶液约1毫升，再慢慢滴
加10%的naoh溶液，边加边振摇，直到产生的沉淀溶解为止。
此时再向试管内加蛋白质溶液5~6滴，混匀。置酒精灯上加
热1分钟，溶液变黑，小心加入浓盐酸约2毫升，黑色褪去，
嗅其味，将湿润醋酸铅试纸置于管口，观察其颜色的变化。
实验四蛋白质的沉淀反应
一、目的
1．熟悉蛋白质的沉淀反应。
2．进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、原理
多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些
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试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。
三、实验器材
1．试管1.5cm×15cm（×7）。2．吸管5.0ml(×2)、
2.0ml(×2)、1.0ml(×1)。3．吸滤瓶500ml(×1)。4．布氏
漏斗。
四、实验试剂
1．蛋白质试液：见实验二十三卵清蛋白液。2．硫酸铵
晶体：如果晶体太大，最好研碎。
3．饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100ml加硫酸铵至饱和。4．95%
乙醇。
5．结晶氯化钠。
6．1%醋酸铅：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。7．5%
鞣酸溶液：5g鞣酸溶于水并稀释至100ml。8．1%硫酸铜溶
液：见实验二十三。9．饱和苦味酸溶液。
10．1%醋酸溶液：冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。
五、操作
A、蛋白质盐析作用
向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀
析出，这种作用称为盐析。
操作方法：
1．取蛋白质溶液5ml，加入等量饱和硫酸铵溶液（此时
硫酸铵的浓度为50%饱和），微微摇动试管，使溶液混合静置
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数分钟，球蛋白即析出（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵）。
2．将上述混合液过滤，滤液中加硫酸铵粉末，至不再溶解，
析出的即为清蛋白。再加水稀释，观察沉淀是否溶解。
注意
（1）应该先加蛋白质溶液，然后加饱和硫酸铵溶液。
（2）固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋
白质沉淀混淆。
b、乙醇沉淀蛋白质
乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体的水化层而使其沉淀
析出。
操作方法
取蛋白质溶液1ml，加晶体nacl少许（加速沉淀并使沉
淀完全），待溶解后再加入95%乙醇2ml混匀。观察有无沉淀
析出。
c、重金属盐析沉淀蛋白质
蛋白质与重金属离子（如cu、Ag、hg等）结合成不溶
性盐类而沉淀。
2+
+
2+
操作方法
取试管2支各加蛋白质溶液2ml，一管内滴加1%醋酸铅
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溶液，另一管内加1%cuso4
溶液，至有沉淀生成。
D、生物碱试剂沉淀蛋白质
植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为生
物碱（或植物碱）。能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物
质称为生物碱试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。生物碱试
剂能和蛋白质结合生成沉淀，可能因蛋白质和生物碱含有相
似的含氮基团之故。
操作方法
取试管2支各加2ml蛋白质溶液及1%醋酸溶液4~5滴，
向一管中加5%鞣酸溶液数滴，另一管内加苦味酸溶液数滴，
观察结果。
篇二：生物化学实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应
实验一蛋白质和氨基酸的呈色反应
一、目的要求
验证蛋白质特性；学习和掌握蛋白质呈色反应的原理和
方法；学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、实验原理
蛋白质中的某些化学键或氨基酸残基中的某些化学基
团可以与某些特殊试剂形成特定的有色物质。这些反应称为
蛋白质的呈色反应。
各种蛋白质的氨基酸残基不完全相同。因此，呈色反应