茚三酮 显色剂
茚三酮鉴定氨基酸概述
茚三酮鉴定氨基酸概述1.茚三酮简介茚三酮(Ninhydrine),又称水合茚三酮,水合茚满三酮,为白色或浅黄色结晶性粉末。
茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。
当与这些游离胺反应时，能够产生深蓝色或者紫色的物质，叫做Ruhemann紫。
茚三酮常用来检测指纹，这是由于指纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基，其上的一级胺被茚三酮检测。
在室温条件下，它是一种白色的固体物质，溶于乙醇和丙酮。
茚三酮可以看作是是二氢茚-1，2，3-三酮的水合物。
1901 年,茚三酮被成功研制出来以后主要用于生物医学领域,1954年,瑞典科学家Oden 和Hofsten 将其应用于潜在汗液手印的显现。
茚三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应, 生成蓝紫色的手印纹线。
茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。
除去脯氨酸之外的大多数氨基酸，水解之后可与茚三酮反应。
水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。
因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。
其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。
在分析化学反应的薄层色谱（TLC）中，它可以用于检测所有的胺类，氨基甲酸酯类，在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
2.实际运用2.1指纹鉴别汗液手印中的汗液成分绝大多数是水(约99%以上),其余是少量的无机物和有机物,有机物中包括了人体所含有的各种氨基酸。
茚三酮与手印汗液中的氨基酸发生显色反应而现出手印。
二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2的羧基碳。
在考古研究中，这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析，以帮助重现古代生物的食物结构。
用一种标记底物处理的土壤，随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺，可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。
这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌（也叫做硝化细菌）利用土壤中的尿素作为碳源。
法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。
手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面，也即含有氨基酸的指纹，经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。
氨基酸检测试剂盒(茚三酮比色法)
氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：氨基酸(Amino acid ，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。
动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans 紫)，其吸收峰在波长570nm 处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。
该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AA Lysis buffer=的比例加入AA Lysis buffer 匀浆或研磨，用去离子水稀释至，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer 进行适当匀浆，离心5min ，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存备用，用于氨基酸的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer 进行恰当的稀释。
2、 配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AAAssaybuffer ，按茚三酮显色液：AAAssaybuffer=的比例混合，即为茚三酮工作液。
4℃避光密闭保存，2周有效。
3、 配制维生素C 工作液: 取出1支维生素C ，准确溶解于10ml 去离子水，混匀。
4℃预冷备用。
-20℃保存1周有效。
注意：该试剂盒提供的维生素C 及其配制的工作液为过编号 名称TC2153 100T Storage试剂(A): 氨基酸标准(50μg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): AALysisbuffer 250ml RT 试剂(C): 茚三酮显色液 120ml RT 避光 试剂(D):AAAssaybuffer 10.5ml RT 试剂(E): 维生素C 2支RT 使用说明书1份量。
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)
加入物(ml)
1
2
3
4
5
6ห้องสมุดไป่ตู้
脯氨酸标准(100μg/ml)
0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
蒸馏水
0.09 0.08 0.07 0.06 0.05 0.04
脯氨酸含量(μg)
1
2
3
4
5
6
4、 PRO 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注 意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进 行测定，样品的检测最好能设置平行管。
积。 4、 所测样本的浓度过高，应用 PRO Lysis buffer 稀释样品后重新测定。
有效期：6 个月有效。
相关：
编号 DF0135 NR0001 PS0013 TO1013
名称 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)
加入物(ml)
空白管 标准管
蒸馏水
0.1
—
系列脯氨酸标准(1-6 号管)
—
0.1
脯氨酸提取液
—
—
PRO Assay buffer
1.5
1.5
茚三酮显色液
1.5
1.5
混匀，沸水浴，溶液呈红色。
测定管 — — 0.1 1.5 1.5
5、PRO 测定：迅速冷却加入 PRO 萃取液，振摇 30s，静置片刻，取上清液转移至新的离 心管或试管，离心，取上清液备用。以空白调零，分光光度计(1cm 光径比色杯)检测标准 管 520nm 处吸光度；以 PRO 萃取液调零，分光光度计(1cm 光径比色杯)检测测定管 520nm 处吸光度。
茚三酮法测氨基酸
茚三酮法测氨基酸 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT茚三酮显色法测定氨基酸的含量一．原理：凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
二．仪器：721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥容量瓶移液枪烧杯试管架试管水浴锅。
三．药品：（1）标准氨基酸溶液：配制成L 溶液（2），2mol/L 醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。
用pH 检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取170mg 茚三酮和30mg 还原茚三酮，用20mL 乙二醇甲醚溶解（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含～50μg 氨基酸。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入活性炭，轻轻搅拌。
加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取茚三酮，用沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将维生素C 用25mL 温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取L 的标准氨基酸溶液0，，，，，于试管中，用水补足至1mL。
茚三酮显色原理
茚三酮显色原理
茚三酮（Indaneone）显色原理是通过茚三酮与亚硝酸钠（NaNO2）和一定条件下的氢酸反应，生成显色的偶氮染料。
该反应的显色原理主要如下：
首先，在盛有茚三酮的试管中，加入适量的亚硝酸钠溶液。
亚硝酸钠是一种常用的弱氧化剂，可以与茚三酮发生氧化反应。
随后，在试管内加入稀盐酸（HCl）溶液，调节反应环境酸性。
氢酸的加入可以加速反应的进行，并且使得反应中间体更容易形成和稳定。
在适宜的温度和反应时间下，亚硝酸钠与茚三酮反应，产生一个中间体。
这个中间体是不稳定的，可能通过裂解或另外的反应进一步分解。
然而，在酸性条件下，这个中间体可能会与另一个茚三酮分子发生偶氮偶合反应，形成一个稳定的偶氮染料。
该偶氮染料通常呈红色或橙色，可以通过目视或分光光度计等方式进行检测。
这个颜色的出现是茚三酮与亚硝酸钠反应得到的标志，可以用于检测亚硝酸盐的含量。
亚硝酸盐常见于食品中，其含量过高可能对人体造成危害，因此茚三酮显色原理在食品安全领域有着广泛的应用。
常用显色剂配制
常用显色剂配制一、通用显色剂1．碘，检查一般有机物。
碘蒸气对很多化合物显黄棕色。
在一个密封的玻璃缸内予先放进碘片，并使缸内空气被碘蒸气饱和状态，将薄层或纸层放进缸内数分钟即可呈色。
有时在缸内放一盛水的小杯，减少缸内的湿度，可以提升呈色的灵敏度。
2．硫酸：通用。
浓硫酸：水（1：10），或10%硫酸的乙醇溶液。
3．四唑兰试剂：还原性物质在室温或微加热时显紫色。
溶液i：0.5%四唑兰甲醇溶液溶液ii：6n氢氧化钠溶液临用前溶液i和溶液ii等量混合。
4．铁氰化钾—三氯化铁试剂：还原性物质显蓝色，再喷2n盐酸溶液，则蓝色更深。
二、生物碱显色剂1．改良碘化铋钾试剂：生物碱和某些含氮化合物显橙红色。
挑7.3克碘化铋钾，冰醋酸10毫升，搅拌60毫升。
2．碘—碘化钾试剂：生物碱显棕褐色。
碘1克和碘化钾10克溶50毫升水中，冷却，加冰乙醇2毫升，用水黧到100毫升。
3．硅钨酸试剂（沉淀试剂）5克硅钨酸溶100毫升水中，提盐酸至ph2左右。
4．苦味酸试剂（沉淀试剂）1克苦味酸溶100毫升水中。
5．鞣质试剂（沉淀试剂）1克鞣酸提乙醇1毫升熔化后，再搅拌至10毫升。
6．王水浓盐酸：硝酸（1：3）三、苷类显色剂1．糖的检出试剂（1）苯胺—邻苯二甲酸试剂：擦后105~110℃烤10分钟，糖显出红棕色（检测还原成糖）[注]苯胺—邻苯二甲酸试剂的制备：苯胺0.93克，邻苯二甲酸1.66克，溶于水饱和正丁醇100ml中。
（2）α—萘酚—硫酸试剂：擦后100℃烤3—6分钟，多数糖呈圆形蓝色，鼠李糖呈圆形橙色。
[注]试剂制备：15%α—萘酚乙醇溶液21ml，浓硫酸13ml，乙醇87ml及水8ml混合后使用。
（3）fehing试剂：本品分甲液与乙液，应用领域时挑等量混合，检查还原成糖。
甲液：结晶硫酸铜6.23克，加水至100毫升。
乙液：酒石酸钾钠34.6克及氢氧化钠10克，搅拌至100毫升。
（4）百里酚硫酚剂：喷后120℃烤15—20分钟，多数糖在灰白色背景上显暗红色，继续加热则变成浅紫色。
氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液
氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液茚三酮根很多种氨基酸都显示紫色没办法分离鉴定呀茚三酮使氨基酸显色原理α氨基酸与茚三酮在弱酸性溶液中共热，反应后经失水脱羧生成氨基茚三酮，再与水合茚三酮反应生成紫红色，最终为蓝色物质。
脯氨酸等仲胺氨基酸与茚三酮反应生成黄色物质。
该反应可广泛用于各种氨基酸的定性或定量测定。
阿尔法氨基酸与水合茚三酮一起加热，经氧化脱氨变成相应的阿尔法酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮被还原成还原成还原型茚三酮。
在弱酸性溶液中，氨、还原型茚三酮，和另一分子水合茚三酮反应，缩合成蓝紫色物质。
注意事项（1）被分离物质在该溶剂系统中Rf在0.05～0.8之间，各组分之Rf值相差最好能大于0.05，以免斑点重叠。
（2）溶剂系统中任一组分与被分离物之间不能起化学反应。
（3）被分离物质在溶剂系统中的分配较恒定，不随温度而变化，且易迅速达到平衡，这样所得斑点较圆整。
本实验采用八种混合氨基酸为样品，用酸性和碱性两种溶剂进行双向层析，以茚三酮为显色剂，可获得分离清晰的层析图谱，如图3.2所示。
注意事项（1）烘箱加热温度不可过高，且不可有氨的干扰，否则图谱背景会泛红。
（2）第一相溶剂最好在使用前再按比例混合，否则会引起酯化，影响层析效果。
（3）整个实验操作应戴手套进行。
思考题1．酸性与碱性溶剂系统对氨基酸极性基团的解离各有何影响？2．为什么展层时要用两种溶剂系统？性质：又称比移值。
是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。
定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。
在一定的色谱条件下，特定化合物的R f值是一个常数，因此有可能根据化合物的R f值鉴定化合物请问薄层层析时，Rf值在什么范围时，分离效果比较准我帮你查了相关书籍结合我的实验经验，薄层层析采用硅胶G-CMC板，通用展开系统：无水乙醇-苯（1：4）；苯-氯仿（1：3）；丙酮-甲醇（1：1）。
先用无水乙醇-苯（1：4）展开，Rf值如果>0.8，改用苯-氯仿（1：3），若Rf值如薄层层析时为甚麼Rf值要在0.2~0.8之间Rf值的大小与样品的结构、性质、溶剂系统等有关薄层层析时Rf值要在0.2~0.8之间主演是考虑的经济性，在效果比较好的情况下保持展开剂的用量少蛋白质的性质实验From： Update：2006-12-01【目的和要求】1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。
茚三酮鉴定氨基酸概述
茚三酮鉴定氨基酸概述1.茚三酮简介茚三酮(Ninhydrine),又称水合茚三酮,水合茚满三酮,为白色或浅黄色结晶性粉末。
茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。
当与这些游离胺反应时，能够产生深蓝色或者紫色的物质，叫做Ruhemann紫。
茚三酮常用来检测指纹，这是由于指纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基，其上的一级胺被茚三酮检测。
在室温条件下，它是一种白色的固体物质，溶于乙醇和丙酮。
茚三酮可以看作是是二氢茚-1，2，3-三酮的水合物。
1901 年,茚三酮被成功研制出来以后主要用于生物医学领域,1954年,瑞典科学家Oden 和Hofsten 将其应用于潜在汗液手印的显现。
茚三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应, 生成蓝紫色的手印纹线。
茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。
除去脯氨酸之外的大多数氨基酸，水解之后可与茚三酮反应。
水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。
因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。
其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。
在分析化学反应的薄层色谱（TLC）中，它可以用于检测所有的胺类，氨基甲酸酯类，在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
2.实际运用2.1指纹鉴别汗液手印中的汗液成分绝大多数是水(约99%以上),其余是少量的无机物和有机物,有机物中包括了人体所含有的各种氨基酸。
茚三酮与手印汗液中的氨基酸发生显色反应而现出手印。
二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2的羧基碳。
在考古研究中，这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析，以帮助重现古代生物的食物结构。
用一种标记底物处理的土壤，随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺，可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。
这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌（也叫做硝化细菌）利用土壤中的尿素作为碳源。
法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。
手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面，也即含有氨基酸的指纹，经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。
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茚三酮
中文名称：苯并戊三酮，茚三酮
英文名称：Ninhydrin
分子量：160.13
CAS RN：485-47-2
熔点：251℃
密度: 0.86
性状：本试剂近似为白色结晶,或浅黄色结晶粉末,微溶于乙醚及三氯甲烷,100℃以上变为红色。
特性反应：跟酶类或者多肽在加热状况下发生显紫色反应。
作用
茚三酮是一个有机化合物，被广泛用于检测氨、一级和二级胺，尤其是氨基酸。
氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时，氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
此化合物最大吸收峰在570nm波长处。
由于此吸收峰的大小与氨基酸释放的氨量成正比，因此可作为氨基酸的定量分析方法法医学上这个反应被用于鉴定指纹。
茚三酮反应（Kaiser鉴定）也可用来在固相接肽时检验脱保护基是否已经完成，鉴定和比色法分离氨基酸以及鉴定铵离子（呈紫色）。
茚三酮与氨基酸反应生成蓝紫色化合物，但pro，羟-pro反应时呈黄色。
茚三酮用于脯氨酸含量的测定
当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸的含量的高低。
在520nm 的波长下比色，从标准曲线（用脯氨酸标准溶液制得）上查出(或用回归方程计算)脯氨酸的含量。
①茚三酮
检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。
溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。
方法：喷后于110oC加热。
结果：呈红紫色斑点。
茚三酮对一级二级的胺显色肯定没问题的，三级胺有些可以，酰胺应该也没问题的，配制：1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸；显色的时候板子浸湿，用纸擦一下多余液滴，再用电热枪（电吹风太弱了）吹出斑点，显色因为氨基酸的不同而显示不同的紫色黄色等等，你想检测伯胺的话，肯定没有问题的！
配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸
茚三酮不是太好溶解，需要多搅拌才行。
加醋酸只是给显色提供一个微酸性的环境。
配置好的茚三酮显色剂装在棕色瓶中避光保存，是可以多次使用的。