各种细菌的显微镜检查方法
显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
目的要求 显微镜油镜使用的原理 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本 知识
使用油镜观察细菌的几种基本形态
用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的运动
显微镜油镜使用的原理
普通光学显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS ）生物显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS ）相差显微镜
2. 打开主开关。
11. 调节孔径光栏。
3. 移动电压调整旋，使亮度适 12. 依次用低、中、高倍镜观察。
中。
13. 油镜观察：与普通光学显微
4. 把标本固定在再物台上。
镜方法一致。
5. 放松粗调锁挡。
14. 观察完毕，复原：先将电压
6. 用低倍物镜，旋转粗调和微 调节旋钮复原，关闭主开关，切
控制钮来进行对焦。
断电源，放开粗调锁挡。油镜的
7. 调节双目镜筒间距和视度差。 处理与普通光学显微镜方法一致。
8. 再适当调节照明度。
15. 放入保存箱中。
9. 使焦点正确地对准标本。
欧林巴斯（ OLYMPUS ）相差显微镜 Ⅰ
相差显微镜的装置
相差显微镜的工作原理
1. 环状光圈
相差显微镜具有一个特殊的由环 2. 相差物镜（具有环状相板）
细菌三种形态的染色标本。
培养12—18h的枯草杆菌（B.subtilis)
盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。
实验程序Ⅰ（显微镜的使用）
主要是油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。
2.调节光亮度
3.低倍镜观察：粗调、细调
4.
依次再进行中倍、高倍观察
5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光
微生物实验 显微镜的使用和保护及细菌标本片观察
【目的要求】
1.掌握光学显微镜油镜的使用和保护。 2.熟悉油镜下细菌的基本形态、特殊结构及排列特征。
病原生物学与免疫学教研室
【实验用品】
1.普通光学显微镜、香柏油、擦镜纸；
2.细菌标本片(9张)
1）链球菌
2）肺炎链球菌(荚膜)
3）伤寒沙门菌(周鞭毛)
4）变形杆菌(周鞭毛)
5）绿脓杆菌(丛鞭毛1-3根)
6）克雷伯菌(荚膜)
7）破伤风梭菌(芽胞)
8）霍乱弧菌(革兰染色）
9）霍乱弧菌（单鞭毛，鞭微镜油镜的使用与保护 1.油镜的识别 （1）透镜直径最小； （2）下缘有黑白两个环； （3）镜头上有oil标志； （4）镜头上有100×的标记。
一般在使用显微镜油镜时，目镜放大倍数为10×，物镜放大倍 数为100×，则油镜放大倍数为10×100=1000倍。
2.油镜使用的原理 由于油镜的透镜小，通过玻片的光线，因介质密度不同（从 玻片至空气，再进入油镜），而不能进入透镜，因而显微镜视 野较暗，不能看清楚物象。在油镜与玻片之间加入与玻片折射 率相同的香柏油，则克服了光线的第二次折射，而使更多的光 线进入油镜，视野明亮而可以看清楚物象。
3.显微镜的使用和保护 （1）观察过程中，双目观察，并且将光圈调节至合适位置。一 般左眼观察物象，右眼绘图。 （2）使用完毕后，将油镜移开，取一、二片擦镜纸滴加二甲苯 擦拭油镜，再用干净的擦镜纸将剩余的香柏油和二甲苯擦净。避 免香柏油干后粘在镜头上，而影响以后的使用。相同方法将观察 的标本片擦干净。 （3）使用完毕后，断开电源，扣上镜罩。 （4）在使用过程中出现显微镜不能正常工作的情况，及时向带 教老师或实验准备老师报告。不要随意自己处理，防止处理不当 而影响显微镜的使用。
微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察讲课文档
（二）、 革兰氏染色的工作原理
• 革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。有芽 孢的杆菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌 都呈革兰氏阳性反应；弧菌，螺旋体和大多数致病 性的无芽孢杆菌都呈现阴性反应。
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• 根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结构 差异来达到染色的目的的。
• 先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色 ；
• 然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复合物 ，从而增强了染料与细菌的结合力。
• 然后再用乙醇脱色处理
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经典法，四步法 （p.30-32）
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• 由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、 壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘不
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显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目 镜放大倍数
2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨
析物体（两端）两点之间距离的能 力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间的 最短距离。
：可见光的波长（平均0.55m)
n: 物镜和被检标本间介质的折射
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应甩去细胞上 的残水，以免染色液被稀释。
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（7）复染：用番红液染1—2min,水洗。
（8）镜检：干燥后（室温下晾干），置油镜观察（先在低倍镜 ，然后在油镜下观察菌体细胞的形态）。革兰氏阴性菌呈红 色，革兰氏阳性菌呈紫色。
（1）涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一
显微镜的使用及细菌形态结构的观察报告
显微镜的使用及细菌形态结构的观察报告一、引言显微镜是一种用来观察微小物体的仪器，它可以放大物体的细节，使我们能够看到肉眼无法观察到的细节。
在生物学中，显微镜被广泛应用于研究细胞和微生物等微小生物体的结构和功能。
本报告将介绍显微镜的使用方法以及如何观察细菌形态结构。
二、材料和方法1. 显微镜：本次实验使用的是光学显微镜。
2. 细菌样本：从实验室中获取了多种不同类型的细菌样本。
3. 玻片和盖玻片：用于制作样品载玻片。
4. 意式染色剂：用于染色处理，增强对细菌形态结构的观察。
三、显微镜使用方法1. 调整光源：打开显微镜后，在透明底座上放置一个白色纸片，调整光源位置和亮度，使得纸片上呈现均匀明亮的白色。
2. 调整目镜：将目镜对准眼睛，调节焦距，使得目视舒适且清晰。
3. 调整物镜：选择合适的物镜，将其转至位置，并调节焦距，使得样品清晰可见。
4. 调整聚光镜：根据需要调整聚光镜的大小和位置，以增强样品的亮度和对比度。
四、细菌形态结构观察方法1. 制作载玻片：在干净的玻片上挤出一滴细菌悬液，在另一个玻片上盖上一张盖玻片，轻轻压紧。
2. 意式染色处理：将制作好的载玻片浸泡在意式染色剂中，静置5-10分钟。
3. 洗涤处理：用蒸馏水洗涤载玻片数次，直到洗涤后水不再有颜色。
4. 干燥处理：将载玻片放置在通风处晾干。
五、结果与讨论1. 观察细胞形态结构：通过显微镜观察，可以看到不同类型的细菌具有不同的形态结构。
如球菌呈圆形或半球形，链状菌呈长条状等等。
通过染色处理后观察可以更加清晰地看到这些形态特征。
2. 观察细胞大小：通过显微镜观察，可以测量细菌的大小。
不同类型的细菌大小也不同，如球菌直径一般在0.5-1微米之间，链状菌长度则在数十到数百微米之间。
3. 观察细胞结构：通过显微镜观察，可以看到一些特殊的结构，如某些细菌具有鞭毛、纤毛或胞外多聚物等附属结构。
这些结构对于细菌的运动和生长有着重要的作用。
六、实验注意事项1. 实验过程中要注意卫生和安全。
普通光学显微镜的使用及其细菌的形态观察
电子显微镜
①以电子射线为 电子光源
②种类
透射电镜
扫描电镜
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4.普通光学显微镜的构造及原理
机械 部分 光学 部分
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普通光学 显微镜
镜座、镜臂、镜筒、 物镜转换器、载物台 、推动器、调节器等 光源、物镜、目镜、 聚光器及虹彩光圈等
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为光学部分
央→换高倍或移开低倍，滴油→换油镜→侧视，
油浸镜头→调光、调焦，找目标→教师评分→
清洁→还镜→填使用登记表→教师检查→ 显
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微镜放回镜箱。
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光线 加油后
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5.实训方法
旋动调光旋钮 打开虹彩光圈 调节聚光器
找目标 移中央
结果记录 教师评分 擦镜纸擦拭
镜头3～4次 载玻片清洁
取 镜
调 光
夹 片
低 高倍 记 清 倍 或 镜 油镜 录 洁
还 镜
教师 检查
右手握臂 菌面朝上放 先加油 学生填使用表 左手托座 直角对齐 后换镜 教师检查签名 目标置中央 镜身水平 油浸镜 放回镜箱
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载物台
目镜
物镜
调焦螺旋 推进器
调光螺旋
2012-6-17 光源
聚光器和 7 电源开关 虹彩光圈
放大倍数： 10× 15 ×
目镜 物镜转换器
放大倍数： 4×:低倍 10×:低倍 40×:高倍 100×:油镜
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物镜
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显微镜 放大倍数
目镜 ＝ 放大倍数 放大倍数： 10× 15 ×
×
物镜 放大倍数
链球菌属及其检验「微生物检验」
链球菌属及其检验「微生物检验」链球菌属(Streptococcus)细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。
广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多数不致病，致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。
下面是yjbys店铺为大家带来的关于链球菌属细菌的知识，欢迎阅读。
⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察本次实验主要介绍了显微镜油镜的使用以及细菌形态的观察。
显微镜是生物科学中最基本最必要的仪器，也被称为生命科学研究的窗口。
而观察细菌形态则是微生物学重要的研究内容之一，对于深入了解微生物的特性和分类十分关键。
一、显微镜油镜的使用1、准备工作在使用显微镜前，需要对仪器做一些准备工作，具体如下：（1）检查显微镜是否清洁干净。
使用棉花棒和无水酒精擦拭镜头和接口。
（2）插入镜片，拧紧螺丝。
注意，平光镜的凹面朝上。
（3）透镜的高度应调整至最高点，油镜周围涂上润滑油。
（4）在准备好玻片后，使用无菌针将样本划到玻片上。
2、操作步骤（1）将玻片插入载置物台。
调整光源，使其在镜片下方成圆形状。
（2）使用低倍放大的物镜，在载置物台下调整样本位置，然后转动焦点，调整到最清晰的位置。
（3）切换到高倍物镜。
在不移动载置物台的情况下，调整焦距直至视野内的细胞详细可见。
（4）将油镜轻轻接触载置物台上的镜片，调节光源以得到最佳观察效果。
（5）旋转调节管，使细胞从上到下等比例进入视野，观察细菌的形态、大小、数量等。
二、细菌形态的观察1、细菌分类根据细菌的细胞形态、大小、结构和移动方式等特征，可以将细菌分为不同的分类。
细菌形态既包含单细胞长条状物、圆球体等基本形态，又包括复杂的细胞、菌株组成的群体等。
常见的细菌形态有以下几种：（1）球菌（cocci）：球形或椭圆形的细胞。
（2）杆菌（bacilli）：棒状或柱状的细胞。
在实验过程中，使用显微镜观察样本，发现细菌形态上虽然存在一定的差异，但一般表现为以下情况：（1）球菌或细圆菌：呈球形，直径一般在0.5-2μm之间。
（3）螺旋菌：呈螺旋形，长度几乎无限制，直径0.5-1μm左右。
然而，即使细菌大小、形态有所不同，它们的细微结构也存在着明显的相似性，这种结构相似性在分类学上具有相当的意义。
细菌形态的观察是微生物学中非常重要的基础工作，通过观察细菌的形态、大小、数量等，能够更好地了解微生物的生长繁殖规律，对于深入研究微生物的特性、分类以及对环境的影响等方面具有非常重要的价值。
细菌形态与结构的检查法[技巧]
![细菌形态与结构的检查法[技巧]](https://img.taocdn.com/s3/m/fa965d68a36925c52cc58bd63186bceb19e8ed6e.png)
细菌形态与结构的检查法细菌形态与结构的检查法[适用对象] 中医学（骨伤方向）、针灸推拿学专业[实验学时] 3学时一、实验目的1、学会显微镜油镜的使用和保护方法。
2、认识细菌的基本形态和特殊结构(荚膜、鞭毛、芽胞)。
3、掌握革兰氏染色方法。
4、了解细菌的动力。
二、实验原理1、显微镜油镜的使用原理: 观察细菌必须用放大1 000倍左右的油镜。
油镜的透镜极小，工作焦距最短,光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射人镜筒的光线极少，视野暗、物象不清晰。
如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物像。
2、革兰染色法的原理：主要是革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁有差异，另外革兰阳性菌的等电点比革兰阴性菌低，与碱性染料的亲和力强。
三、仪器设备1、显微镜2、细菌标本片：(1)葡萄球菌(革兰染色)(2)大肠杆菌(革兰染色(3)霍乱弧菌(革兰染色)(4)伤寒杆菌(鞭毛染色)(5)肺炎球菌(荚膜染色(6)破伤风杆菌(芽胞染色)萄球菌、绿脓杆菌的琼脂斜面18～24小时培养物。
4、染色液有结晶紫、碘液、95％酒精、稀释石炭酸复红。
四、相关知识点细菌是一类体积微小的单细胞原核细胞型微生物，活的菌体小而透明，当把细菌悬浮于水滴内，用普通光学显微镜观察时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易是别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及某些细胞结构。
因此，为了研究细菌的形态特征和鉴别不同类群的细菌，细菌的染色及形态构的观察是位生物学实验中十分重要的基本技术。
五、实验步骤显微镜油镜的使用显微镜使用方法①将显微镜平稳的安放在试验台适宜处②用低倍镜对光，调节反光镜，天然光源用平面反光镜，人工光源或光线较弱使用凹面反光镜。
检查染色标本要用强光，应将聚光器升到最高，光圈完全开大；若检查未染色的活体标本则用弱光，聚光器适当下降，光圈适当缩小。
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各种细菌的显微镜检查方法
常用的细菌的显微镜检查方法有以下几种：
1. 直接涂片法（直接镜检法）：将待检样品直接涂于玻片上，用染色剂染色后在显微镜下观察。
2. 阳性抽滤法：将待检样品与细菌特异性抗体结合，再通过滤膜抽出细菌，并用抗体标记荧光染料显色，然后在荧光显微镜下观察。
3. 厚滴片法：将待检样品与染色剂混合滴于玻片上，使细菌沉积在玻片上，然后用染色剂染色并在显微镜下观察。
4. 葡萄糖酸盐液滴片法：将待检样品滴入含有葡萄糖酸盐液的滴片中，使细菌生长并产生气泡，然后在显微镜下观察气泡内的细菌。
5. 培养法：将待检样品接种于适宜培养基上，通过细菌的生长和形态特点来进行检查和鉴定，如革兰氏染色、肌红蛋白酶试验、糖发酵试验等。
这些方法都可以通过显微镜观察细菌的形态、大小、结构以及染色反应等特征来进行细菌的检查和鉴定。