生殖道标本细菌学检验标准操作规程
细菌室标本操作流程
细菌室标本操作流程
细菌室是进行细菌培养和鉴定的重要实验室，操作流程的规范
性和严谨性对于实验结果的准确性至关重要。
下面将详细介绍细菌
室标本操作的流程。
1. 样本接收：首先，接收来自临床的标本，如血液、尿液、脑
脊液等，标本应该在规定时间内送到细菌室，并在接收时进行标记，包括标本来源、送检医生、送检时间等信息。
2. 样本处理：接收到标本后，需要进行处理，包括标本的分装、保存和处理。
不同类型的标本需要采取不同的处理方法，确保标本
的完整性和质量。
3. 样本培养：将处理好的标本进行培养，通常采用琼脂培养基，根据标本的性质选择不同的培养基。
培养条件包括温度、湿度、氧
气含量等，需要根据不同的细菌种类进行调整。
4. 细菌鉴定：培养出的细菌需要进行鉴定，包括形态学特征、
生理生化特性、抗生素敏感性等。
通常采用显微镜观察细菌形态，
进行生化试验和抗生素敏感性试验。
5. 结果记录：对鉴定结果进行记录，包括细菌种类、数量、鉴
定方法、结果等信息。
确保结果的准确性和可追溯性。
6. 报告发放：将鉴定结果整理成报告，发送给临床医生，帮助其进行治疗方案的制定。
7. 清洁消毒：操作结束后，对实验室进行清洁消毒，确保实验室的卫生和安全。
细菌室标本操作流程需要严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
同时，操作人员需要具备专业知识和技能，保证操作的规范性和安全性。
只有这样，才能为临床诊断和治疗提供可靠的实验结果。
临床标本的细菌学检查-精品文档
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌
检 验 方
Uricult 操作步骤
Uricult 菌落比密图
临床标本的细菌学检查
第一节 血液及骨髓标本
一 血液标本
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血 症的基本方法。
如从患者血液中检出细菌，一般应视为病 原菌。
常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球 菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、 肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈 瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。
(2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查 2. 分离培养 3. 报告方式 培养48小时，仍无菌生长者报告“培养 2天无细菌生长”。查见细菌报告细菌，报告菌名和 药敏结果。
第三节 呼吸系统标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰 带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球 菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病 菌，提示有上呼吸道感染。
脑脊液无论涂片或培养必须于 采集后立即送检不宜将其置于 冰箱保存，否则影响检出率。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌
学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1. 涂片检查 (1) 一般细菌涂片检查： 例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜
炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形 态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌
学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察
2. 涂片检查 其一依据100×镜下观察白细胞和
上皮细胞数目多少来评定(如表)；其二是初步判 定是否有病原存在。
痰标本镜下分类
分级 A B C
白细胞（个） >25 >25 <10
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
细菌标本采集规范
临床微生物学标本采取和处理的规范化要求正确的采取、处理与运送用于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键.标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不当将严重影响检验结果,给临床以误导，延误对患者的正确治疗。
为此，我们提出初步的参考意见，并希望在实践中不断完善。
一、血液细菌培养标本的采集和处理临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者,需做血液细菌培养以明确病原。
1．采集方法:静脉采血，以无菌操作方法抽取血液后,直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固.如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中,再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。
2。
采血时间以及血培养份数:在患者发热期间越早越好,最好在抗菌治疗前，用药前24小时内采集2～3次血液标本,可使细菌检出率高达99％.对间歇性寒战或发热的患者,应在寒战或体温高峰到来之前0。
5～1小时采血，亦可在寒战或发热后1小时采集血液标本。
特殊感染患者采血培养时应遵循以下原则：（1）可疑急性发热性菌血症、败血症患者：应在使用抗菌药物之前，在24小时内从不同部位采集2~3份血液标本培养.(2)可疑细菌性心内膜炎患者、感染性心内膜炎患者：在1～2小时内采集3份血标本培养,如果24小时后阴性,再采集两份血标本培养。
(3）不明原因发热患者：先采集2～3份血标本，抽血间隔60 min，24~36小时后体温升高之前，再采集2份血标本进行培养。
因为1次血培养不足以说明问题,可能会遗漏阳性结果。
（4）可疑菌血症但血培养持续阴性时;应改变血培养方法,以获得罕见或苛养的微生物。
（5）在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎,需马上做抗菌治疗;或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者,应立即从两臂分别取2份标本.3。
采血部位:采血部位通常为肘静脉。
疑为亚急性心内膜炎的患者，以肘动脉或股动脉采血为宜。
疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓。
生殖道标本
(二)临床意义
1．解脲脲原体为条件致病菌，故应结合临床 考虑诊断和治疗。 2．NGU(非淋球菌性尿道炎)并非都由沙眼衣原 体和支原体所引起，还有其他微生物可引起， 因此应结合临床考虑诊断及治疗。 3.支原体所致的STD（性传播疾病）呈上升趋 势，应引起重视。也引起女性不孕、习惯性 流产不育等危害。
4．PCR检测沙眼衣原体DNA敏感性、特异性达100％ 和93％，可用于早期诊断; 5．分离培养 可用鸡胚培养、细胞培养和 6．抗体检测 ①检测补体结合抗体，效价达l：64有诊断意义； ②微量免疫荧光试验可测抗体，滴度1：512有意义。
(三)临床意义
1．本病性交传染，间接传染少见。多见 于女性，男女比1：2，但男性病人症 状重。病变多在外生殖器，也可播散 到其他部位的皮肤和粘膜。 2．软下疳发生1～2周后，有10％～30％ 患者出现一侧腹股沟淋巴结炎和淋巴 结周围炎称横痃。
四、性病淋巴肉芽肿的检查
(一)微生物检验
性病淋巴肉芽肿的病原体是性病淋巴肉芽肿衣原体。 实验室的金标准是分离培养加PCR。 1.取淋巴结脓液或宫颈和直肠拭子或活检材料为标本： 2.标本直接涂片作Giemsa染色检查衣原体及其包涵体； 荧光抗体(DFA)染色检测细胞内衣原体包涵体 3．抗原检测 ①用荧光抗体(DFA)染色检测抗原 ②酶免疫检测(EIA)衣原体可溶抗原
细菌培养的意义
培养阳性≠感染 排除污染 排除定植 任何结果都必须结合临床症状及其它相 关检查进行综合分析
细菌培养的意义
培养阴性≠排除感染
标本采集部位和方法 是否在使用抗生素时留取的标本？ 标本运送时间和方法是否正确 标本接种、培养基及培养方法的选择是否正确 是否可能是厌氧菌或其它难培养的细菌感染
生殖道标本的采集及运送
生殖道标本的采集及运送6.10.1采集指征1）症状指征：①皮肤粘膜损害：原发损害可有斑疹，丘疹，结节，水疱，囊肿，糜烂，溃疡等。
继发损害由原发损害演变而来，有萎缩或斑痕等，患者可出现疼痛或瘙痒症状。
②全身症状：多数无全身症状。
偶有发热，乏力，食欲不振。
③男性生殖系统表现。
A.尿痛：指在排尿或排尿后膀胱区或尿道疼痛。
B.尿频，尿急：由尿道病变刺激所致。
C.尿液分泌物增多：性状为粘液性或脓性。
E.会阴部疼痛或阴囊疼痛。
F.性功能障碍。
G.泌尿生殖器畸形或缺损。
④女性生殖系统表现A．阴道分泌物增多及性状异常。
B．尿道口瘙痒及脓性分泌物流出。
C．下腹疼痛。
D．月经失调。
E．阴道出血。
F．外阴瘙痒。
G．外阴或阴道疼痛。
H．性功能障碍。
2）疾病指征：非特异性外阴炎，前庭大腺眼，前庭大腺囊肿，外阴阴部念珠菌病，细菌性阴道病，2.6.10.2采集方法1）尿道分泌物（1）男性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，采取从尿道口溢出的脓性分泌物或用无菌男性拭子插入尿道内2-4cm轻轻旋转后取出分泌物。
如无脓液溢出，可从阴茎的腹面向龟头方向摩擦，促使分泌物溢出。
（2）女性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，然后从阴道内诊压迫尿道，或从尿道的后面向前摩擦，使分泌物溢出。
无肉眼可见的脓液，可用灭菌拭子轻轻深入前尿道内，旋转拭子，采集标本。
2）巴氏腺、尿道旁腺:清洗或局部消毒，然后压迫腺体，使分泌物溢出。
3）阴道分泌物：用窥器扩张阴道，先用拭子清除阴道表面分泌物，弃拭子，用灭菌女性拭子采取阴道口内4cm内侧壁或后穹窿处分泌物培养或涂片镜检。
如未成年幼女疑患性传播疾病时，不应使用扩阴器，应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。
4）宫颈分泌物：用窥器扩张阴道，先用无菌拭子清除阴道和宫颈局部分泌物，弃拭子；轻压宫颈使宫颈内分泌物流出，用女性拭子插入宫颈管1-2cm采取分泌物，转动并停留10-30s,让拭子充分吸附分泌物，或用去针头的注射器吸取分泌物，置入灭菌试管内送检。
生殖道标本病原菌检验
淋病奈瑟菌
• • • • • • 革兰氏阴性双球菌、形似咖啡豆成对排列 中性粒细胞内（慢性淋病：胞外） 无芽孢、无鞭毛、有菌毛、专性需氧 氧化酶：+；触酶：+ 营养要求高、产自溶酶、对环境抵抗力弱 巧克力平板至于5%-10%CO2可促进生长 （初次分离必备）
念珠菌属
• • • • • 革兰阳性、出芽繁殖、假菌丝 需养，SDA平板灰白色或奶油色菌落 芽管形成实验 糖同化或发酵试验 厚壁孢子形成试验（白色念珠菌）
• 包涵体：姬萨姆：深紫色；碘液染色：深 褐色（+） • 沙眼、包涵体结膜炎、泌尿生殖道感染、 性病淋巴肉芽肿
人乳头瘤病毒
• • • • • • 结构：双链环状DNA+病毒衣壳 组织宿主特异性：人皮肤、粘膜上皮细胞 核内嗜酸性包涵体 无法组织培养 核酸分析、原位杂交、DNA印记、PCR 尖锐湿疣、宫颈内瘤样变
单纯疱疹病毒（2）
• • • • • 结构：包膜+双股线装DNA 多物种多种细胞内增 核内：嗜酸性包涵体 培养、血清学、分子生物学…… 生殖器疱疹、流产、早产、死胎、畸形……
阴道毛滴虫
• • • • 梨形，白细胞的2-3倍、四根前鞭毛 直接镜检、染色镜检 培养法 胶乳凝剂快速法
非病原菌
• 外生殖器标本：肠杆菌、葡萄球菌、肠球 菌等
• 内生殖道脓肿：肠杆菌、葡萄球菌、肠球 菌及厌氧菌考虑为致病菌 • 产妇：B群链球菌：新生儿败血症、脑膜炎 • 产单核李斯特菌：先兆流产
操作流程
• 第一天：接种培养 • 接种合适平板置于5%-10%CO2温箱培养1824H • 怀疑淋病、软下疳需选择巧克力平板
第二天：观察菌落
• 阴性：续培 • 阳性：涂片镜检 • 1：杜克嗜血杆菌：细小、无色透明似水滴 状，鉴定药敏 • 2：淋病奈瑟菌：较小、光滑、凸起、无色 透明或灰白色，OXI（+）鉴定药敏 • 无可疑菌落，续培
尿细菌学检查的要求
尿细菌学检查的要求
尿细菌学检查是诊断尿路感染的重要依据，也是指导临床合理用药的关键手段。
在进行尿细菌学检查时，需要注意以下几个方面：1、清洗外生殖器：在进行尿细菌学检查前，应清洗外生殖器，以避免污染尿液。
清洗时，可以用温水或肥皂水清洗，但不要使用消毒剂，以免影响检查结果。
2、留取中段尿：在留取尿液标本时，应先排出一些尿液，以排出尿道口的细菌。
然后，留取中段尿，即取尿标本时不要使用初段尿液，尽量使用中段尿液进行检查。
这样可以避免尿道口和尿道内细菌的污染，提高检查结果的准确性。
3、避免污染：在留取尿液标本的过程中，应避免尿液被污染。
不要将尿液留在马桶或便池中，以免受到周围环境的污染。
同时，在留取尿液标本的容器中，应避免接触皮肤或使用已经被污染的容器。
4、及时送检：在留取尿液标本后，应尽快将其送往实验室进行检查。
如果尿液长时间放置在容器中，可能会导致细菌繁殖，影响检查结果的准确性。
5、特殊情况的处理：对于一些特殊情况，如使用抗菌药、尿道插管、留置尿管等，可能会影响尿细菌学检查的结果。
此时，应根据具体情况进行处理，如在使用抗菌药前留取尿液标本、尽量减少插管和留置尿管的时间等。
总之，在进行尿细菌学检查时，应严格遵守相关要求，以确保检查结果的准确性和可靠性。
同时，对于特殊情况的处理，也应根据具体情况进行适当调整。
如有疑虑或异常结果，应及时咨询医生或专业人士的建议。
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生殖道标本细菌学检验标准操作规程
1.目的
规范生殖道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围
生殖道标本培养或涂片检查。
3.标本
3.1 标本类型生殖道标本。
3.2 标本采集
3.2.1 女性由临床医师用无菌棉拭子采集阴道、宫颈分泌物。
怀疑盆腔炎厌氧菌感染时，由医师用注射器从阴道后穹窿穿刺抽取标本，立即床边接种于厌氧菌平板。
3.2.2 男性翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，清水冲洗，采集尿道口分泌物。
采集前列腺液时，先冲洗尿道和膀胱，用手指从肛门内按摩前列腺，使前列腺液溢出。
3.2.3 梅毒螺旋体标本从外生殖器的硬下疳处蘸取渗出液，置于载玻片上，加盖玻片后立即送检。
3.3 标本拒收标准
3.3.1 化验申请单与标本不符。
3.3.2 标本不是用无菌容器留取。
4. 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5. 细菌鉴定和药敏质控
参见《质量管理程序》
6. 检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
涂片检查
6.1.1 革兰染色镜检观察阴道分泌物中有无细菌，以及细菌形态和染色性，尤其注意观察有无白细胞内外的革兰阴性双球菌（淋病奈瑟菌），以及有无覆盖大量革兰阴性菌的上皮细胞，（线索细胞，提示可能有阴道加特纳菌感染）。
6.1.2 梅毒螺旋体图涂片检查直接暗视野检查，观察有无纤细、发亮、前后旋转的密螺旋体，或冯泰纳染色，观察有无棕黑色的密螺旋体。
6.2 分离培养
6.2.1 一般细菌培养接种于血琼脂平板和麦康凯平板，置于5%-10%CO2环境中，35°C培养18-24小时。
6.2.2 淋病奈瑟菌培养接种于GC琼脂平板，置于5%-10%CO2环境中，35°C培养18-24小时，观察有无较小、灰白色、露滴状菌落形成，进一步生化鉴定。
6.2.3 阴道加特纳菌培养接种于5%羊血琼脂平板，5%-10%CO2环境中环境培养48小时，观察有无形成针尖大小（0.3-0.5）、圆形、光滑、不透明、不溶血（在人血或兔血琼脂平板上可出现β溶血）的菌落。
结核分枝杆菌培养参见《分支杆菌属检验标准操作规程》。
7. 结果报告
报告菌名和抗菌药物药敏结果试验结果。
注意事项
取阴道分泌物之前避免性生活、阴道冲洗和用药。
临床意义
正常的内生殖道是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细菌寄生，如尿道口的常见有葡萄球菌、类白喉棒状杆菌和非结核分枝杆菌，阴道常见有乳杆菌、双歧杆菌、消化球菌等。
查见病原菌提示有细菌感染，如急、
慢性前列腺炎，睾丸炎、精囊炎、附睾炎、阴道炎，急慢性淋病等。
常见病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、变形杆菌等。