羟自由基清除率测定
抗氧化——精选推荐
抗氧化5 汉⿇叶多糖抗氧化活性测定⽅法5.1 羟基⾃由基的清除能⼒测定羟基⾃由基清除能⼒的测定⽅法采⽤颜军等⽅法并略有改动。
基本操作步骤为：先配置10 mg/mL 的样品溶液，在10 mL 的⽐⾊管中加⼊不同体积的被测溶液后，加⼊5 mol/L 的过氧化氢2 mL ，5 mmol/L FeSO 4 2mL 后，迅速加⼊5 mmol/L ⽔杨酸-⼄醇溶液2 mL 后⽤去离⼦⽔定容到10 mL ，放⼊37°C 的⽔浴锅中反应45 min 后，在波长510 nm 处，⽤紫外分光光度计测量各待测液的吸光度。
因为样品本⾝也具有⼀定的吸光度，如果忽略就会造成误差，所以⽤4 mL 去离⼦⽔代替FeSO 4和⽔杨酸-⼄醇溶液。
同时以2 mL 去离⼦⽔代替待测样品溶液，测定在没有抗氧化剂的条件下，⽔杨酸络合物的吸光度。
使⽤Vc 作为阳性对照按上述⽅法测定羟基⾃由基的清除率。
羟基⾃由基清除率公式为式(5-1)：100×+=0210A A A A -(%)清除率式(5-1) 式(5-1)中，A 0为空⽩对照液的吸光度，A 1为加⼊样品后的吸光度，A 2为不加过氧化氢的样品溶液的本底吸光度。
HLPs 、HLP-A 和HLP-B 对羟基⾃由基的清除能⼒测定结果如图3-20所⽰。
由图3-20可知，汉⿇叶多糖对羟基⾃由基具有较强的清除能⼒，且随着汉⿇叶多糖浓度的增加，其清除能⼒也逐渐增加，当多糖浓度达到1 mg/mL 时，HLPs 、HLP-A 和HLP-B 均达到最⼤值，分别为89.92%、81.51%和92.84%；HLPs 、HLP-A 和HLP-B 的IC 50值分别为0.449、0.563和0.331mg/mL ，说明HLP-B 的清除效果最好，清除能⼒强弱⽐较得：HLP-B>HLPs>HLP-A 。
图5-1 HLPs,HLP-A 和HLP-B 对羟基⾃由基的清除率5.2 DPPH ⾃由基清除能⼒测定DPPH ⾃由基清除能⼒测定⽅法采⽤Yao 等⽅法并略有改动。
羟自由基清除能力测定原理
羟自由基清除能力测定原理一、引言羟自由基是一种高活性的化学物质，具有很强的清除能力。
羟自由基清除能力测定是一种常用的方法，用于评估化合物对自由基的抗氧化能力。
本文将介绍羟自由基清除能力测定的原理和相关实验方法。
二、羟自由基的产生羟自由基是一种带有羟基（OH）的自由基，具有很强的氧化能力。
羟自由基可以通过多种途径产生，例如光解水、氧化还原反应以及生物代谢过程中的产生等。
在实验室中，常用的产生羟自由基的方法是通过添加氢过氧化物和过氧化氢催化剂来进行。
三、羟自由基清除能力的评估方法1. 直接测定法直接测定法是最常用的羟自由基清除能力评估方法之一。
该方法利用特定的化学试剂（如5,5-二甲基-1-吡咯烷酮）与羟自由基发生反应，生成稳定的产物，通过测定产物的浓度变化来评估清除能力的强弱。
该方法操作简单、结果可靠。
2. 电子自旋共振法电子自旋共振法是一种基于电子自旋共振谱仪的测定方法。
该方法利用特定的探针与羟自由基反应生成稳定的产物，通过测定产物的电子自旋共振信号强度来评估清除能力的大小。
该方法对样品要求较高，需要配备专业的设备。
3. 化学计量法化学计量法是一种通过测定特定试剂的消耗量来评估羟自由基清除能力的方法。
该方法常用的试剂有抗坏血酸、谷胱甘肽等，通过与羟自由基反应生成稳定的产物，进而测定试剂的消耗量来评估清除能力的强弱。
该方法操作简单，适用于大批量样品的测定。
四、影响羟自由基清除能力的因素羟自由基清除能力受多种因素的影响，包括温度、pH值、浓度、反应时间等。
一般来说，较高的温度、适宜的pH值和较长的反应时间有助于提高羟自由基清除能力。
此外，样品的浓度也是影响清除能力的重要因素，适宜的浓度可以使清除能力得到准确的评估。
五、应用领域羟自由基清除能力测定在抗氧化剂的筛选和评估中具有广泛的应用。
抗氧化剂可以通过清除羟自由基来减轻氧化应激引起的损伤，具有重要的保护作用。
因此，羟自由基清除能力测定可以帮助筛选出具有较强抗氧化能力的化合物，并为新药开发和保健品研究提供依据。
银耳、木耳多糖清除羟自由基的比较实验
银耳、木耳多糖清除羟自由基的比较实验张磊;徐皓;孟超;殷晓蕾;黄超;李明明;宫晓婷【摘要】目的研究银耳多糖羟自由基的清除作用.方法采用酶解法提取银耳多糖粗品,蒽酮-硫酸比色法测定银耳多糖的含量,并稀释成三个浓度梯度,与过氧化氢-亚铁离子-水杨酸反应体系中的羟自由基进行反应以测定羟基清除率,以黑木耳为对照.结果银耳多糖清除羟自由基的效果随着浓度增加而增强:在浓度为0.5 mg/mL、1.5 mg/mL、3 mg/mL时其清除率分别为10.36％、18.04％、35.74％.结论银耳多糖与木耳多糖对羟自由基均有清除作用.3 mg/mL的银耳多糖对羟自由基清除率最高为35.74％,木耳多糖在同等浓度范围内为52％,银耳多糖的清除率小于同浓度下黑木耳多糖对自由基的清除率.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2019(040)007【总页数】4页(P493-496)【关键词】多糖;羟自由基;清除率【作者】张磊;徐皓;孟超;殷晓蕾;黄超;李明明;宫晓婷【作者单位】生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016;生命科学学院,山东第一医科大学(山东省医学科学院),山东泰安 271016【正文语种】中文【中图分类】Q-331银耳(Tremella)又名白木耳、雪耳，属于隔担子菌亚门银耳科。
银耳在我国具有悠久的食用和药用历史，含有碳水化合物、蛋白质、维生素和多种氨基酸等。
目前研究最多的是银耳多糖。
银耳多糖(Tremella polysaccharides，TP)是重要的生物活性物质，可以通过激活免疫细胞来提高机体的免疫功能,使吞噬细胞吞噬能力提升，增加淋巴细胞活性从而提高其功能[1-3]，抗肿瘤[4]、预防肠道疾病[5-7]等功效。
分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率
分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率发布时间：2021-07-06T09:34:10.120Z 来源：《教育学》2021年5月总第249期作者：薛云尹俊泉[导读] 生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。
与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。
甘肃省陇南市武都区莲湖小学746000摘要：邻二氮菲在紫外光区有强烈吸收，加入H2O2产生羟基自由基，茶叶提取液会使其中的羟基自由基减少，此时，溶液的吸光度值也随之减小，据此原理可以计算茶叶提取液对羟基自由基的清除率。
体系最佳实验条件为pH=7.00，缓冲溶液体积用量1.00mL，邻二氮菲浓度3×10-4mol/L，Fe2+浓度5×10-3mol/L，1%H2O2用量1.00mL，茶叶提取液用量20.00mL，按照邻二氮菲-Fe2+-H2O2顺序加入反应4min。
在以上实验条件下，测得羟基自由基的清除率为44.1%。
关键词：分光光度法邻二氮菲羟基自由基茶叶提取液机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程。
对此，学者们有各种解释，如自由基学说、传学说、交联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种。
自由基是一类外层轨道含有未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基(·O2-)、羟基自由基(·OH)、脂自由基(ROO·)等，其中以·OH作用最强。
它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。
·OH还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。
因此，·OH参与的各种研究已成为生物学、生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。
与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。
近年来，国内外文献报道了检测羟自由基的主要方法有：电子自旋共振法、高效液相色谱法、化学发光法、光度法等。
抗氧化活性实验方法
抗氧化活性实验方法（体外实验）之巴公井开创作1、清除DPPH自由基能力的测定称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH 溶液。
分别取2mL分歧浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。
取上清液于517nm处测吸光值。
用Vc作为阳性对照。
样品对DPPH自由基的清除率用以下公式计算：DPPH()121100%A AA-=-⨯清除率A0—2mL无水乙醇+ 2mL DPPH溶液的吸光值；A1—2mL样品溶液+ 2mL DPPH溶液的吸光值；A2—2mL样品溶液+ 2mL无水乙醇的吸光值。
2、总还原能力的测定在10mL离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液2.5mL和分歧浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃ FeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。
Vc作为阳性对照。
3、对Fe2+离子螯合能力的测定分别取1mL分歧浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。
EDTA为阳性对照。
样品对Fe2+的螯合率计算公式如下：Fe 2+()1201100%A A A -=-⨯螯合率 A 0—1mL 蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值； A 1—样品溶液反应后的吸光值；A 2FeCl 2溶液后的吸光值。
4、超氧自由基（O 2-）清除率的测定采取邻苯三酚自氧化法测定。
取50mmol/L Tris-HCl 缓冲液（pH8.2）4.5mL ，置25℃水浴中保温20min ，分别加入1mL 样品溶液和0.4mL 25mmol/L 邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min ，加入1mL 8mmol/L HCl 终止反应，于299nm 处测定吸光度（A x ），空白对照组以相同体积蒸馏水代替样品。
分光光度法测定中药对羟自由基的清除率
!引言
机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程 . 对此学者们有各种解释，如自由基学说、遗传学说、交 联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种［1］. 自由基是一类外层轨道含有 未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基（·O2 - ）、羟基 自由基（·OH）、脂自由基（ROO·）等，其中以·OH 作用最强 . 它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式 与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死 或突变 .·OH 还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的 重要指标 . 因此，·OH 参与的各种研究已成为生物学、生物化学和生物医学等领域中的重要研究课题 . 与此同时，·OH 测定方法的研究也倍受关注 .
（CV）、CV - Fe2 + 溶液、CV - Fe3 + 溶液、CV - H202 溶液的 最大吸收波长均在 588 nm 附近且吸光度值基本不变，而
CV - Fe2 + - H202 溶液的最大吸收波长也在 588 nm 附 近，但吸光度值较其它溶液体系下降（图 1），说明体系吸
光度值的下降是 Fenton 试剂产生的羟自由基与结晶紫 作用的结果 . 3 . 1 . 2 酸度的影响 测定 CV - Fe2 + - H202 体系在 pH 4 . 5 ~ 7 . 5 范围内不同酸度溶液的 !A，发现在 pH 为 5 . 5 时体 系 !A 有 最 大 值（ 图 2），故 选 择 体 系 的 酸 度 为
表 # 银杏叶水提取液和舒血宁药片清除羟自由基比较
羟自由基清除率测定方法
羟自由基清除率测定方法
1. 哎呀呀，你知道吗？有一种羟自由基清除率测定方法叫比色法呢！就好像我们通过眼睛看颜色的变化来判断一样，是不是很神奇？比如在做实验的时候，加入特定的试剂后，颜色一下子就变了，那就能知道羟自由基清除的情况啦！
2. 嘿，还有一种电子自旋共振法呢！这就好像是给羟自由基装上一个追踪器，能清楚地看到它们的动向和变化。
想象一下，在实验室里，我们能这么精准地捕捉到羟自由基的信号，是不是超厉害呀！就像警察抓小偷一样把它们都“逮住”呢！
3. 哇塞，化学发光法也是羟自由基清除率测定的好方法呀！这不就像夜晚的萤火虫一闪一闪地告诉我们它在哪里嘛！比如说当有物质能清除羟自由基时，那光芒就会减弱，多直观呀！
4. 哟呵！荧光分析法也很不错呢！它就像是一道光，照亮羟自由基的“踪迹”。
我们通过观察荧光的变化来了解羟自由基的清除效率，感觉自己就像个侦探一样在寻找线索呢！比如说在某个样品中加入特定试剂后，荧光发生了改变，那就是关键信息呀！
5. 哈哈，脉冲辐解法也能用来测羟自由基清除率哦！这就如同闪电划过，清楚地显示出羟自由基的状态呢。
就像闪电带来的瞬间光明一样，让我们能看清整个过程。
在实验中看到那些数据的变化，可有意思啦！
6. 哇哦！分光光度法也能担此大任呀！这就像用一个神奇的“眼睛”去观测羟自由基的世界。
我们按照步骤一步步操作，就能得到想要的结果啦。
比如说在特定波长下测量吸光度的变化，就知道羟自由基的清除情况如何啦！
我觉得这些羟自由基清除率测定方法都各有千秋，都为我们研究和了解羟自由基提供了有力的手段呀！。
几种常见食用菌清除羟基自由基能力的研究_马晓华
研究报 告
表 1 结果表明 , 食用菌粗多糖有显著的清除羟自 由基的能力 , 相当于每 100 m L 含 0.4 g 干品所得粗 多糖 的 清 除 羟 自 由 基 能 力 分 别 为 15.55 % 和 14.63 %。 但未经提取粗多糖的干菌浸提液本身的羟 自由基清除率远大于粗多糖溶液 。 说明在热水浸提 液中多糖具有一定的清除羟自由基能力 , 但由于粗多 糖溶液组成的复杂性 , 许多被沉淀下来的诸如蛋白质 等物质可能同样具有清除羟自由基能力 。 2.4 不同提取物清除羟基自由基能力的比较(图 3)
各取 8 g 由 1.2.2 制备的双孢蘑菇 、香菇和平菇 干菌粉 , 再将每种食用菌的 8 g 干菌粉等分为 4 份 , 2 g/ 份 , 各自分别加 20 m L 的双蒸水 、75 %乙醇 、无水 乙醇 、乙酸乙酯 , 充分搅拌 , 通风橱中各自密闭放置浸 提 14 h 后 , 过滤 , 各自取滤液即为不同提取溶剂的浸 提液 。 将浸提液放真空干燥箱中用真空泵抽取 12 h 后 , 在通风橱中自然挥发 5 d 至完全干燥得浸膏 。 分 别测定浸膏对羟自由基的清除能力 , 方法同 1.2.2 中 测定干菌粉对羟自由基清除能力的方法 。
物质活性的实验中检测其清除超氧阴离子自由基能 力的实验较多 , 研究表明 , 平菇多糖 、黑木耳多糖等具 有清除超氧自由基的作用[ 9～ 11] 。 羟自由基(·OH)是 最活泼的自由基 , 也是毒性最大的自由基 。它可以与 活细胞中任何分子发生反应造成损害 , 且反应速度极 快 , 被破坏的分子遍及糖类 、氨基酸 、磷脂 、核苷和有 机酸等[ 7] 。但几乎未见有人对食用菌清除羟自由基 能力进行研究 。 本文利用水杨酸法检测并比较研究 了几种常见食用菌鲜品及干品 的热水浸提液 、干菌 粉 、粗多糖 、冷水浸提液 、75 %乙醇浸提液 、无水乙醇 浸提液及乙酸乙酯浸提液的清除羟基自由基能力 , 初 步分析了几种食用菌清除羟基自由基物质的来源 。
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抗氧化活性的测定(参考)——测定活性物质对羟自由基的清除率
（羟自由基清除试验）
采用Fenton 试剂：过氧化氢/亚铁盐。
原理：H 2O 2与亚铁离子反应生成·OH,·OH 自由基一般存活时间比较短，具有较高的反应活性。
当在反应体系中添加水杨酸，便能快速的捕捉·OH 而产生紫色化合物（2,3-二羟基苯甲酸），该有色化合物在510nm 处有较大吸收峰，测其吸光度可表示羟自由基（•OH ）的多少，吸光度与羟自由基（•OH ）的量成正比。
反应体系中若加入羟自由基（•OH ）清除剂后，被氧化的水杨酸减少，则体系颜色变浅甚至消失，吸光度变小。
操作：
样品处理：蔬菜水果切分，榨汁（切分后可放在2%的盐酸或草酸溶液中护色）。
将蔬菜汁或果汁放入50ml 离心管中（如有颜色加适量活性炭或白陶土），在3000~ 4000rpm 下离心10min~ 20min 后（若样品蛋白含量较高，需加适量乙酸锌，亚铁氰化钾）快速过滤，滤液备用。
取25ml 比色管2支（样品管、空白管），分别加入5ml 1mmol/L 硫酸亚铁溶液、5ml 3mmol/L H2O2溶液，样品管中加入1ml 样品溶液，空白管中加入1ml 蒸馏水，混合均匀后用3mmol/L 水杨酸溶液定容至刻度，在37℃(0.1±℃)的恒温水中反应15min 后，用分光光度计在510nm 的波长下测定各管的吸光度。
以3mmol/L 水杨酸溶液调零。
其对•OH 自由基的清除率SA （%），可根据下式进行计算：式中：
A0—不加样品的吸光度； A1—加入样品的吸光度
###【以往经验，不一定全适用】：若样品不进行脱色处理，则操作如下：在3支25ml 的比色管中（样品管、空白管、样品本底管）依次加入5ml1mmol/L 硫酸亚铁溶液，空白管和样品管中各加入5ml3mmol/L H 2O 2溶液，本底管中H 2O 2溶液用蒸馏水代替。
本底管和样品管分别加入1ml 样品溶液，空白管中加入1ml 蒸馏水，混合均匀后用3mmol/L 水杨酸溶液定容至刻度。
在37℃(0.1±℃)的恒温水中反应15min 100A0A1-A0= SA(%)⨯清除率
后用分光光度计在510nm的波长下测定吸光度。
空白管为A0，样品管为A1，本底管为A2。
其对·OH自由基的清除率SA（%），可根据下式进行计算：
清除率SA(%) =｛[(A0—(A1- A2) ]/A0｝×100[10]
式中：A0—不加样品的吸光度
A1—加入样品的吸光度
A2—本底的吸光度。