羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton比色法)
Fenton反应产生的羟基自由基及其清除的分光光度法测定
改变 ＤＮＰＨ 的用量， 结果表明， 当 ＤＮＰＨ 的
用量大于 ０．５ｍＬ 时， 吸光度达到最大且基本稳
定。实验选择 ＤＮＰＨ 浓度为 １．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
２．８ 方法的准确性与精密度
当没有清除剂存在时， 按实验方法， 对于
１．０ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＭＳＯ， ５ 次 测 定 的 吸 光 度 （ Ａ） 为 ：
ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｘ－ ｒａｙ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐｉｎ ｔｒａｐｐｉｎｇ／ＥＰＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ［Ｊ］． Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ ｂｉｏｍｅｄ， ２００４， ３６（９）：１１３４－ １１４３
２．５ ＤＭＳＯ 用量影响 ２
参考文献： ［１］ Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｖ Ｌ． Ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ［Ｊ］． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
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羟自由基清除能力测定原理
羟自由基清除能力测定原理一、引言羟自由基是一种高活性的化学物质，具有很强的清除能力。
羟自由基清除能力测定是一种常用的方法，用于评估化合物对自由基的抗氧化能力。
本文将介绍羟自由基清除能力测定的原理和相关实验方法。
二、羟自由基的产生羟自由基是一种带有羟基（OH）的自由基，具有很强的氧化能力。
羟自由基可以通过多种途径产生，例如光解水、氧化还原反应以及生物代谢过程中的产生等。
在实验室中，常用的产生羟自由基的方法是通过添加氢过氧化物和过氧化氢催化剂来进行。
三、羟自由基清除能力的评估方法1. 直接测定法直接测定法是最常用的羟自由基清除能力评估方法之一。
该方法利用特定的化学试剂（如5,5-二甲基-1-吡咯烷酮）与羟自由基发生反应，生成稳定的产物，通过测定产物的浓度变化来评估清除能力的强弱。
该方法操作简单、结果可靠。
2. 电子自旋共振法电子自旋共振法是一种基于电子自旋共振谱仪的测定方法。
该方法利用特定的探针与羟自由基反应生成稳定的产物，通过测定产物的电子自旋共振信号强度来评估清除能力的大小。
该方法对样品要求较高，需要配备专业的设备。
3. 化学计量法化学计量法是一种通过测定特定试剂的消耗量来评估羟自由基清除能力的方法。
该方法常用的试剂有抗坏血酸、谷胱甘肽等，通过与羟自由基反应生成稳定的产物，进而测定试剂的消耗量来评估清除能力的强弱。
该方法操作简单，适用于大批量样品的测定。
四、影响羟自由基清除能力的因素羟自由基清除能力受多种因素的影响，包括温度、pH值、浓度、反应时间等。
一般来说，较高的温度、适宜的pH值和较长的反应时间有助于提高羟自由基清除能力。
此外，样品的浓度也是影响清除能力的重要因素，适宜的浓度可以使清除能力得到准确的评估。
五、应用领域羟自由基清除能力测定在抗氧化剂的筛选和评估中具有广泛的应用。
抗氧化剂可以通过清除羟自由基来减轻氧化应激引起的损伤，具有重要的保护作用。
因此，羟自由基清除能力测定可以帮助筛选出具有较强抗氧化能力的化合物，并为新药开发和保健品研究提供依据。
羟自由基清除能力测定试剂盒使用说明
2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。
3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如 5 mg/mL。
二、 操作步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 536nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管
对照管
测定管
试剂一（μL）
30
30
30
试剂二（μL）
80
80
80
试剂三（mL）
20
20
20
立即混匀，防止局部颜色过浓
样品（μL）
50
试剂四（μL）
20
20
H2O（μL）
70
50
混匀 37℃，60min，于微量石对
照管和测定管的吸光值分别记为 A 空、A 对和 A 测。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
计算公式： 羟自由基清除率 D% =（A 测-A 对）÷（A 空-A 对）×100%
需自备的仪器和用品： 天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
操作步骤：
一、 样品的制备：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
羟自由基清除能力测定试剂盒使用说明 微量法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 货号：BC1325 规格：100T/96S 产品内容：
标准液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。 试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
碱性品红褪色光度法检测羟基自由基
碱性品红褪色光度法检测羟基自由基陈泽( 河西学院化学化工学院，甘肃张掖734000 )摘要:利用Fenton反应产生的羟基自由基与碱性品红试剂发生反应后使其吸光度值降低，建立了一种可间接测定羟基自由基的新方法，确定了体系的最佳实验条件。
采用芦丁和槲皮素为羟基自由基清除剂测定了其羟基自由基清除率。
用此新方法测定羟基自由基测定应用于红雪莲、白药子、黄药子、白头翁多种物质的羟基自由基的清除率，表明该方法可作为测定羟基自由基和筛选抗氧化剂的方法之一。
关键词:羟基自由基；碱性品红；测定Measurement of Radical of Hydroxyl by Depigmentation Spectrophotometer of Alkali FuchsinChen Ze(College of Chemistry and Chemical Engineering of Hexi University, Zhangye Gansu73400) Abstract A new method was developed for indirectly determining radical of hydroxyl which is produced in Fenton reaction on the basis of decrease of absorbance after the reaction of hydroxyl and alkaline fuchsin, meanwhile, the optimum experiment condition was also confirmed by this reaction. Elimination rate of radical of hydroxyl was measured on the condition of rutin and quercetin as the scavenger of hydroxyl. This new method was used in determining the elimination of hydroxyl of red saussurea involucrate, the result show that this method can be applied as one of determining hydroxyl and choosing antioxidation. Keywords hydroxyl ; alkaline fuchsin; determination随着自由基生物学与自由医学研究的快速发展，现已证明大多数疾病的发生和发展与与自由基对细胞的损伤关系密切，羟基自由基是生物体内危害最大，活性最强的氧化自由基。
COD深度处理技术——芬顿（Fenton）高级氧化法
COD深度处理技术——芬顿（Fenton）⾼级氧化法芬顿反应塔芬顿法(Fenton),从⼴义上说是利⽤催化剂或光辐射、或电化学作⽤，通过H2O2产⽣羟基⾃由基(·OH)处理有机物的技术。
1. 传统芬顿法芬顿试剂的实质是⼆价铁离⼦(Fe2+)和过氧化氢之间的链反应催化⽣成OH⾃由基，具有较强的氧化能⼒，其氧化电位仅次于氟，⾼达2.80eV。
另外, 羟基⾃由基具有很⾼的电负性或亲电性 ,其电⼦亲和能⼒达 569.3kJ ，具有很强的加成反应特性，因⽽芬顿试剂可⽆选择氧化⽔中的⼤多数有机物，特别适⽤于⽣物难降解或⼀般化学氧化难以凑效的有机废⽔的氧化处理，芬顿试剂在处理有机废⽔时会发⽣反应产⽣铁⽔络合物,主要反应式如下：[Fe(H2O)6]3++H2O→[Fe(H2O)5OH]2++H3O+[Fe(H2O)5OH]2++H2O→[Fe(H2O)4(OH)2]+ H3O+当pH为3～7时,上述络合物变成：2[Fe(H2O)5OH]2+→[Fe(H2O)8(OH)2]4++2H2O[Fe(H2O)8(OH)2]4++H2O→[Fe2(H2O)7(OH)3]3++H3O+[Fe2(H2O)7(OH)3]3++[Fe(H2O)5OH]2+→[Fe3(H2O)7(OH)4]5++5H2O以上反应⽅程式表达了芬顿试剂所具有的絮凝功能。
芬顿试剂所具有的这种絮凝/沉淀功能是芬顿试剂降解CODcr的重要组成部分，可以看出利⽤芬顿试剂处理废⽔所取得的处理效果，并不是单纯的因为羟基⾃由基的作⽤，这种絮凝/沉降功能同样起到了重要的作⽤。
传统芬顿法在⿊暗中就能⼒破坏有机物，具有设备投资省的优点，但其存在两个致命的缺点：⼀是不能充分矿化有机物，初始物质部分转化为某些中间产物，这些中间产或与Fe3+形成络合物，或与·OH的⽣成路线发⽣竞争，并可能对环境造成的更⼤危害；⼆是H2O2的利⽤率不⾼，致使处理成本很⾼。
利⽤Fe(Ⅲ)盐溶液,可溶性铁，铁的氧化矿物(如⾚铁矿,针铁矿等)，⽯墨，铁锰的氧化矿物同样可使H2O2催化分解产⽣·OH，达到降解有机物⽬的，以这类催化剂组成的芬顿体系,成为类芬顿体系，如⽤Fe3+代替Fe2+,由于Fe2+是即时产⽣的，减少了·OH被Fe2+还原的机会，可提⾼·OH的利⽤效率。
分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率
分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率发布时间：2021-07-06T09:34:10.120Z 来源：《教育学》2021年5月总第249期作者：薛云尹俊泉[导读] 生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。
与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。
甘肃省陇南市武都区莲湖小学746000摘要：邻二氮菲在紫外光区有强烈吸收，加入H2O2产生羟基自由基，茶叶提取液会使其中的羟基自由基减少，此时，溶液的吸光度值也随之减小，据此原理可以计算茶叶提取液对羟基自由基的清除率。
体系最佳实验条件为pH=7.00，缓冲溶液体积用量1.00mL，邻二氮菲浓度3×10-4mol/L，Fe2+浓度5×10-3mol/L，1%H2O2用量1.00mL，茶叶提取液用量20.00mL，按照邻二氮菲-Fe2+-H2O2顺序加入反应4min。
在以上实验条件下，测得羟基自由基的清除率为44.1%。
关键词：分光光度法邻二氮菲羟基自由基茶叶提取液机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程。
对此，学者们有各种解释，如自由基学说、传学说、交联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种。
自由基是一类外层轨道含有未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基(·O2-)、羟基自由基(·OH)、脂自由基(ROO·)等，其中以·OH作用最强。
它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。
·OH还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。
因此，·OH参与的各种研究已成为生物学、生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。
与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。
近年来，国内外文献报道了检测羟自由基的主要方法有：电子自旋共振法、高效液相色谱法、化学发光法、光度法等。
羟自由基测定试剂盒使用说明
羟自由基测定试剂盒使用说明货号：LA1950规格：50管/48样产品内容：试剂一：3%H2O2标准品贮备液0.5mL×1支，4℃保存3个月。
0.03%标准品应用液的配置：3%H2O2标准品贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。
试剂二：底物贮备液1mL×1支，4℃保存3个月。
底物应用液的配制：如果您的样本为抑制羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度低，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。
如果您的样本为产生羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度高，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：299稀释，现用现配。
试剂三：甲液贮备液2mL×1支，4℃保存3个月。
用时用双蒸水稀释至1：9稀释成应用液。
乙液7mL×2支，4℃保存3个月。
试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比列混合，按需配置，剩余的4℃保存。
试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存3个月。
用时加双蒸水稀释至100mL制备应用液，4℃保存。
若有结晶，则放置37℃水浴至全部溶解后再稀释。
试剂五：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。
试剂六：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。
试剂七：分析纯的冰乙酸自备。
显色剂的配制：试剂四应用液：试剂五：试剂六：冰乙酸=8:3:3:2，现用现配。
抑制羟自由基的物质如：血清（浆）、各种组织匀浆液、口服液等产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。
产品简介：Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的OH·量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH·的多少成正比列关系。
操作步骤：以上配制好的应用液，先在37℃水浴中温育3min，一下操作在37℃水浴中进行。
空白管标准管对照管测定管双蒸水（mL）0.40.20.20.03%H2O2标准应用液（mL）0.2底物应用液（mL）0.20.2样本（mL）0.2试剂三应用液（mL）0.40.40.40.4混匀，37℃反应1min（准确以秒表计时），从加完试剂三开始到1min结束，立即加入显色剂终止反应，一次只能做一个管子。
分光光度法测定中药对羟自由基的清除率
!引言
机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程 . 对此学者们有各种解释，如自由基学说、遗传学说、交 联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种［1］. 自由基是一类外层轨道含有 未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基（·O2 - ）、羟基 自由基（·OH）、脂自由基（ROO·）等，其中以·OH 作用最强 . 它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式 与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死 或突变 .·OH 还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的 重要指标 . 因此，·OH 参与的各种研究已成为生物学、生物化学和生物医学等领域中的重要研究课题 . 与此同时，·OH 测定方法的研究也倍受关注 .
（CV）、CV - Fe2 + 溶液、CV - Fe3 + 溶液、CV - H202 溶液的 最大吸收波长均在 588 nm 附近且吸光度值基本不变，而
CV - Fe2 + - H202 溶液的最大吸收波长也在 588 nm 附 近，但吸光度值较其它溶液体系下降（图 1），说明体系吸
光度值的下降是 Fenton 试剂产生的羟自由基与结晶紫 作用的结果 . 3 . 1 . 2 酸度的影响 测定 CV - Fe2 + - H202 体系在 pH 4 . 5 ~ 7 . 5 范围内不同酸度溶液的 !A，发现在 pH 为 5 . 5 时体 系 !A 有 最 大 值（ 图 2），故 选 择 体 系 的 酸 度 为
表 # 银杏叶水提取液和舒血宁药片清除羟自由基比较
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茶多酚(TP)检测试剂盒(酒石酸铁微板法)
简介：
茶多酚(Tea Polyphenols，TP)是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等，是一类儿茶素为主体的黄酮化合物，儿茶素占60~80%，具有C6-C3-C6碳骨架结构，是一种重要的天然抗氧化物质，能够清除自由基。
类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。
研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外。
Leagene 茶多酚(TP)检测试剂盒(酒石酸铁微板法)检测原理是以酒石酸铁为底物，利用茶多酚与酒石酸铁反应，生成稳定化合物，以酶标仪测定吸光度，在一定范围内吸光度与颜色深浅的变化成正比，与标准曲线比较，进而计算茶多酚含量。
该试剂盒主要用于测定植物组织、血清等样品中茶多酚含量，尤其适用于测定茶叶中茶多酚含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、蒸馏水
2、研钵
3、离心管或试管
4、水浴锅或电炉
5、200目细胞筛或滤纸
6、离心机
7、96孔板
8、酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1、配制茶多酚标准：取干净离心管或试管和茶多酚标准(1mg/ml)，按下表进行操作，依
编号
名称
TO1201100T Storage
试剂(A):茶多酚标准(1mg/ml)1ml 4℃避光试剂(B):TP Assay buffer 2×500ml 4℃试剂(C):TP 显色液5ml
4℃避光使用说明书
1份
次稀释。
加入物(μl)12345
茶多酚标准(1mg/ml)48121620
TP Assay buffer196192188184180
相当于茶多酚含量(μg/ml)20406080100
2、准备样品：
①植物样品：取植物组织，研磨成粉末。
煮沸TP Assay buffer，将粉末完全加入TP Assay buffer中，沸水浴，用细胞筛或滤纸过滤。
滤渣再继续置于新的煮沸TP Assay buffer中，沸水浴，用200目细胞筛或滤纸过滤，合并两次滤液。
离心，取上清液，即为茶多酚提取液。
4℃避光保存，用于茶多酚的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃避光保存，用于茶多酚的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用TP Assay buffer进行适当匀浆，离心15min，取上清液，即为茶多酚提取液。
4℃避光保存，用于茶多酚的检测。
④高浓度样品：如果样品中含有较浓度的茶多酚，可以使用TP Assay buffer进行恰当的稀释。
3、TP加样：取96孔板，按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加
入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的TP浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
加入物(μl)空白孔标准孔测定孔
TP Assay buffer200150150
系列茶多酚标准(1-5号)－50－
待测样品－－50
TP显色液505050
4、TP测定：以空白调零，以酶标仪测定540nm处标准孔、测定孔的吸光度。
计算：
以系列茶多酚标准浓度(1-5号)(20、40、60、80、100μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。
以测定孔吸光度代入回归方程求得提取液中TP含量。
组织样本TP含量(μg/g)=(C×V T)/(W×V S)
式中：C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)
V T=提取液的总体积(ml)
W=组织样本的重量(g)
V S=测定时所用提取液的体积(ml)
液体样本TP含量(μg/ml)=(C×V T)/V S
式中：C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)
V T=提取液的总体积(ml)
V S=测定时所用提取液的体积(ml)
注意事项：
1、提取茶多酚时，注意提前煮沸TP Assay buffer，以便充分提取。
2、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。
3、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CM0004LB培养基
DC0032Masson三色染色液
DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)
NR0001DEPC处理水(0.1%)
PS0013RIPA裂解液(强)
TC0733乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)
TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。