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多能维持因子OCT4在大肠杆菌中表达和纯化的研究的开题报告

多能维持因子OCT4在大肠杆菌中表达和纯化的研究的开
题报告
一、研究背景：
因子OCT4是一种重要的转录因子，在维持干细胞的自我更新和分化过程中发挥着关键作用。

此外，OCT4也参与了癌症和发育等方面的生物学过程。

因此，OCT4的研究在生物医学领域具有重要的意义。

目前，大多数OCT4的研究是基于哺乳动物细胞体系进行的，但是因为哺乳动物细胞的后续操作比较困难，因此建立大肠杆菌表达和纯化OCT4的体系显得非常必要。

二、研究目的：
本研究旨在构建一种能够高效表达和纯化OCT4的大肠杆菌体系，以满足对OCT4的相关研究需求。

三、研究内容：
（1）基因构建：设计合成OCT4基因，并构建相关质粒，将OCT4基因插入质粒中进行表达和纯化。

（2）大肠杆菌表达系统：将构建好的质粒转化至大肠杆菌中，通过筛选高表达菌落，建立OCT4表达的大肠杆菌体系。

（3）纯化和鉴定OCT4：采用大肠杆菌表达的OCT4进行纯化，通过SDS-PAGE 和Western blot等方式对表达的蛋白进行鉴定。

四、研究意义：
建立高效表达和纯化OCT4的大肠杆菌体系将有助于对OCT4的结构和功能进行深入的研究。

并且，由于大肠杆菌的操作相对容易，建立该体系也将方便OCT4的大规模制备，为后续生物学研究和应用提供了可能。

小鼠胚胎早期发育过程中OCT4作用的研究进展

小鼠胚胎早期发育过程中OCT4作用的研究进展引言小鼠胚胎早期发育是一个复杂的过程，其中涉及到许多基因的调控和表达。

其中一个关键基因是OCT4，是一种转录因子，对于胚胎干细胞的自我更新和分化具有重要作用。

在过去的几十年里，科学家们对OCT4在小鼠胚胎早期发育中的作用展开了大量研究，取得了一系列重要的进展。

本文将综述这些研究成果，探讨OCT4在小鼠胚胎早期发育过程中的作用及其潜在机制。

OCT4的功能和表达调控OCT4是一个关键的转录因子，它在胚胎干细胞中的作用被广泛研究。

OCT4对于维持胚胎干细胞的干性、自我更新和多能性具有重要作用。

在小鼠早期胚胎发育中，OCT4的表达模式也备受关注。

研究显示，OCT4在小鼠受精卵后期的囊胚阶段开始表达，并且在早期内细胞（ICM）中高度表达。

随着胚胎发育的进展，OCT4的表达范围逐渐限制在胚胎内细胞中，而在外细胞中逐渐减少。

这种表达模式的调控与胚胎干细胞的定向分化密切相关。

OCT4调控基因表达的机制OCT4通过调控多个基因的表达来维持胚胎干细胞的干性和多能性。

在早期的研究中发现，OCT4可以与其他转录因子（如SOX2、NANOG等）形成复合物，共同调控多个靶基因的表达。

近期的研究进展显示，OCT4还可以通过与表观遗传修饰因子相互作用，影响染色质结构和可及性，从而调控基因的表达。

OCT4还可以通过miRNA的调控网络影响胚胎干细胞的功能。

这些新的研究成果为我们深入理解OCT4的作用机制提供了新的思路。

OCT4在转基因技术中的应用随着对OCT4功能的深入研究，人们发现OCT4在胚胎干细胞和再生医学领域具有广阔的应用前景。

利用OCT4转基因技术可以实现胚胎干细胞的高效自我更新和多能性维持，并且为再生医学提供了丰富的细胞来源。

OCT4还可以通过调控其下游的基因网络，促进器官再生和损伤修复。

OCT4在转基因技术中的应用潜力巨大，将为再生医学领域带来革命性的进展。

结论OCT4在小鼠胚胎早期发育过程中发挥着重要作用。

Oct-4及生殖细胞核因子在精原干细胞体外分化前后的表达

８２０）３０２
（石河子大学医学院组织学与胚胎学教研室，石河子
摘要目的：检测Ｏｃ４和生殖细胞核因子（ＣＮ）ｔ一ＧＦ在小鼠精原干细胞（Ｓｓ诱导分化前后的表达。方法：ＳＣ）体外分离培养小鼠ＳＣ，Ｓｓ用干细胞因子（Ｃ）ＳＦ诱导其向精母细胞方向分化，通过间接免疫荧光显色和Ｒ－Ｃ检测Ｏｃ４和ＧＴＰＲ，ｔ－ＣＮＦ在
４～６周ＢＢＣ小鼠，自新疆医科大学实验动ＡＬ／购物中心。
１２主要试剂．
生后发育的第８天开始出现，位于精原细胞，定而第
１天后的精原细胞却表现为阴性，７此时的ＧＮＣＦ定位于部分粗线期精母细胞和圆形精子细胞，示ＧＣ提ＮＦ在精子发生的启动中可能起到一个 “ 开关样 ” 用＿。作】］
表明，成体动物的精原干细胞有Ｏｔ在ｃ－因表达。４基Ｏｔｃ一为干细胞标志物，维持细胞全能性的转录４作是
观察ＧＮＣＦ和Ｏｔｃ４在小鼠ＳＣ诱导分化前后的一Ｓｓ
表达。
１材料和方法１１实验动物．
ｄｉ１．９９ｊｉｓ．０１１３．０２０．０ｏ：０３６／．ｓｎ１０ —６３２１．５０６
（ｕｒｓｉｉｔｉｃｎｔ，ＦＴ）记的山羊抗兔ｆｏｅｃｎｓｈｙａｌｅｏｏｅＩＣ标ＩＧ（ａｋｏ）ＴＩｏ试剂（ｎｉｏｅｇＪｃｓｎ；ＲｚｌＩｖｔｇｎ公司）Ｒｒ；Ｔ—

干细胞中两个关键细胞因子Oct4和Sox2

与０ｔｃ４和Ｓｘｏ２相互作用并集中在Ｎａｏｎｇ和Ｏｔｃ４启动子部位以及大部分被Ｏｃ４和Ｓｘｔｏ２占据的基因组区
域，维持Ｅ在Ｓ细胞多能性和保持基因组完整性方面发挥着重要功能。因此，Ｏｃ４Ｓｘ对ｔ、ｏ２这两个关键性细
ｐａｈｙｉｅｏｆｔｔｗａｓｏｎｈｅｍｏｓｃｉｅｒｓａｃｒａｎｃｌｓｓｇｎｌｔａｄｕｔｏｗｈｉｈｉｖｏｖｓｉｈｅｍｏｄａｔａｔｖｅｅｒｈａｅｓｉｅｌｉａｒｎｓｃｉｎ，ｃｎｌｅｎｔｕｌ— ｔｏｆｖａｉｄｌｆｃｉｉｉｓｓｈａｅｌｐｒｌｆｒｔｏｄｆｅｅｉｔｏａｏｐｏｉｎｄｃｌｓｎｃｒｉａｉ．Ｃｕ — ｉｎｏｒｅｉｅａｔｖｔｅｕｃｓｃｌｏｉｅａｉｎ，ｉｆｒｎｔａｉｎ，ｐｔｓｓａｅｌｙｈｏｎｚｔｏｎｒｒｎｔｓｕｄｅａｅｓｗｎｔａＡＰＫｉｎｌｎｇｐｔｗａａｅｍｐｒａｅｅｔｉｓｈｖｈｏｈｔＭｓｇａｉａｈｙｐｌｙｄｉｏｔｎｔｒｇｕｌｔｎｇｒｅｒｎｇｈａｉｏｌｓｄｕｉｕｍａｒｎｏ
分化方面具有关键作用。它通过与靶基因调控区结合，选择性地抑制分化基因或者激活多能性基因的表达
而达到调控目的。干细胞共激活复合物（Ｃ）０ｃ４和Ｓｘ在ＮａｏＳＣ是ｔｏ２ｎｇ基因协同激活时所需要的，它直接

OCT4基因蛋白异构体的鉴定及其在应激反应中的功能的开题报告

OCT4基因蛋白异构体的鉴定及其在应激反应中的功能的开题报告概述：OCT4 (octamer-binding transcription factor 4) 是一种转录因子，广泛存在于哺乳动物体内，被认为是重要的干细胞和肿瘤干细胞标志物。

OCT4蛋白由若干种异构体组成，目前已知的异构体至少有三种，包括OCT4A, OCT4B 和 OCT4B1。

OCT4的不同异构体在其结构、功能和表达模式等方面存在差异。

本研究旨在鉴定 OCT4 基因蛋白异构体，并研究其在应激反应中的功能。

研究目的：1. 鉴定 OCT4 基因蛋白异构体；2. 比较 OCT4 基因蛋白异构体的结构、功能和表达模式；3. 探究 OCT4 基因蛋白异构体在应激反应中的功能。

研究方法：1. 蛋白质质谱检测法：通过蛋白质质谱检测技术，鉴定 OCT4 基因蛋白异构体；2. 克隆和表达法：利用PCR技术，构建OCT4异构体基因，然后将其转化到表达载体中，完成异构体的表达；3. 函数分析法：通过细胞生物学实验探究OCT4异构体在应激反应中的生物学活性；4. 免疫印迹法：检测OCT4异构体在不同组织中的表达水平；5. 荧光定量PCR技术：用于检测OCT4基因在不同组织中的表达水平。

预期结果：1. 鉴定OCT4基因蛋白异构体；2. 比较OCT4基因蛋白异构体的结构、功能和表达模式；3. 探究OCT4基因蛋白异构体在应激反应中的作用机制；4. 结合实验结果，阐述OCT4基因蛋白异构体与干细胞、肿瘤干细胞等方面的关系。

研究意义：OCT4基因蛋白在细胞命运决定中发挥着重要作用，不同的异构体在其结构、功能和表达模式等方面存在差异，研究其在应激反应中的功能既可以加深人们对OCT4基因的认识，又可以为深入研究干细胞和肿瘤干细胞提供重要的理论基础。

本研究预计将为充分发挥基因在干细胞、肿瘤等方面的应用提供理论依据，并为治疗干细胞相关疾病提供参考。

大肠癌肿瘤组织中干细胞关键转录因子Oct4的表达及意义

大肠癌肿瘤组织中干细胞关键转录因子Oct4的表达及意义卢浩;叶建新;赵桂斌【期刊名称】《黑龙江医学》【年(卷),期】2009(033)001【摘要】目的探讨大肠癌中干细胞关键转录因子Oct4的表达情况及意义, 并探讨Oct4的表达同大肠细胞癌分型和分期的关系.方法分别采用免疫组织化学对27例和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)下对10例大肠癌组织病理标本进行Oct4表达的检测.结果绝大多数(25/27)的大肠癌细胞癌标本中有4.5%～5.5%的Oct4阳性细胞, RT-PCR显示9例大肠癌组织在相应位置均出现目的基因Oct4的条带, 正常大肠组织和癌旁组织并没有出现条带.Oct4表达的阳性率及强度与大肠癌分期和分型无明显相关.结论大肠癌组织中有少量表达全能干细胞标志物的细胞, 是否为大肠癌干细胞有待进一步研究.【总页数】3页(P13-15)【作者】卢浩;叶建新;赵桂斌【作者单位】福建医科大学附属第一医院,福建,福州,350000;福建医科大学附属第一医院,福建,福州,350000;福建福安市闽东二医院,福建,福安,355000【正文语种】中文【中图分类】R735.34【相关文献】1.干细胞转录因子Oct4和CD133蛋白在肝外胆管癌组织中的表达及临床意义 [J], 谷化平;黄勇;尚培中2.干细胞转录因子SOX2、OCT4在不同分化程度胃癌组织中的表达及其临床意义[J], 徐毅;丁伟基;李文鹏;陈跃达;魏斌;谢永进;罗琪;黄正接3.干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及其意义 [J], 程玉;赵醒;次云哲;严鹏;纪海茹4.干细胞转录因子Sox2和Oct4在肺癌患者中的表达及临床意义 [J], 项保利;李琳琳;曹亮;陈丽萍5.胰腺癌组织中干细胞转录因子Sox2及Oct4的表达及意义 [J], 韩呈武; 杨强; 宋秦伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Oct4在不同时期牛睾丸组织中的表达

Oct4在不同时期牛睾丸组织中的表达黄伟玲，宋锐，陶勇，张运海，曹鸿国*，章孝荣*（安徽农业大学动物科技学院，安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室，安徽合肥230036）摘要：为探明不同时期牛睾丸组织中干细胞的表达特点，以2.5月龄、4月龄牛胎儿和出生后1年牛、2年牛睾丸为试验材料，通过HE染色和免疫组化法染色，探讨了不同时期牛睾丸的组织学特征及Oct4在睾丸组织中的表达。

结果显示，早期胎儿阶段的牛睾丸组织细胞呈现团状，睾丸组织中细胞随着年龄增长逐步分化形成管状，在2.5月龄和4月龄胎牛睾丸组织中，Oct4阳性细胞广泛分布于睾丸组织生精小管细胞团和睾丸间质中；在出生后1年牛睾丸组织中，阳性细胞主要分布于牛睾丸组织生精小管基底膜，在睾丸间质中数量较少或没有；在出生后2年牛睾丸组织中，仅在睾丸组织生精小管基底膜的少量细胞呈现Oct4阳性。

试验证实了随着牛年龄的增长，牛睾丸组织中Oct4阳性细胞逐渐减少或消失。

关键词：Oct4；牛；睾丸组织中图分类号：S814.1文献标识码：文章编号：0529-5130（2011）01-0036-03睾丸组织是生殖系统的重要组成部分，Guan 等［1］和Valenzuela等［2］先后从睾丸组织中分离出具有胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES细胞）特性的多能性细胞，为干细胞的分离培养和应用奠定了基础。

Oct4又称Oct3或Pou5f1，是由Pou5f1基因编码产生的，是POU（Pit-Oct-Unc）结构域的转录因子家族中的一员［3］，Oct4作为干细胞的主导基因广泛表达于各种类型的干细胞，本次试验采用免疫组织化学方法探讨Oct4阳性细胞在不同时期牛睾丸组织中的分布及表达，为从牛睾丸中分离培养多能性干细胞奠定基础。

1材料与方法1.1试验材料PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒和显色用浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Oct4兔多克隆抗体购自Abcam公司。

人源脐带、脐血和羊水中Oct4基因的表达

ＢｌｏｎｏｄａｄＡｍｎｏｉｕｄｆｏＨｕａｉｔｃＦｌｉｒｍｍｎ
ＬＩＧＺｈｎＹｅ，Ｙｕｍｉ，ＹＡＯｅｐｉｇＮａ — ＵＳｈ — ｎＸｕ — ｎ，ＬＩａ。ＵＱｉｎ，
ＷＡＮＧｎＹｉ，ＣＡＯｉｚｏｎｇＳｕ— ｈ，ＳＨＥＮＵｈｇＬｉ— ｏｎ
人源脐带、血和羊水中Ｏｔ因的表达脐ｃ４基
凌占业，余树民，学萍茜。姚，刘，王印，曹随忠，沈留红
（．１四川农业大学动物医学院，动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川雅安６５１；２０４
第２卷９
第４期
四川农业大学学报
ＪｕｎｌｆＳｃｕｎＡｇｉｕｔｒｌｉｅｓｔｏｒａｉｈａｒｃｌｕａｏＵｎｖｒｉｙ
Ｖｏ．９Ｎｏ４１２．
Ｄｅ．２１ｅ０１
２１年１０１２月
ｄｉ０３６／．ｓｎ１０～６０２１．４０７ｏ：１．９９ｊｉｓ．００２５．０１０．１
ｖｌａｅｐｕｒｐｅｙｏｎｄｆｅｅｔａｅｔｔｓｏｔｍｅｌ．ＴｏｉｅｔｇｔｘｐｅｓｏｆｔｅｇｎｅａｕｔｌｉｏｔｎｃｒｕｉｆｒｎｉｔｄｓａｕｆｓｅｃｌｓｎｖｓｉａｅｅｒｓｉｎｏｈｅＯｃ４ｉｔｎｕｍｂｉｉａｏｄ，ｕｌｃ１ｃｒｍｂｉｉａｏｄｂｌｏｎｄａｎｏｉｌｄｆｏｈｕａｌｃ１ｃｒｏｄａｍｉｔｃｆｕｉｒｍｍｎ．ｗｅａｌｓｄ２ａｎａｙｅＯｓｍ— ｐｉｓｆｏｍｍｅｆｐｅａｙｓａｕｌ－ｅｍｅｉｅｙｂｙｓｍｉｑｎｔｔｔｖｅｒｅｔａｃｉ — ｅｒｗｏｎｏｒｇｎｎｃｔｇｅｏｒｆｌｔｒｄｌｖｒｅ－ｕａｉａｉｅｒｖｅｓｒｎｓｒｐ

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10/11/2020
4
Protein formation
• mRNA travels to the cytoplasm where it meets the ribosome (rRNA) • Ribosome reads the code in the mRNA (codon) and form the amino
it is the DNA that has the command and control. • DNA is fixed code for a given human. (WORM characteristics)
10/11/2020
5
Life’s processes
• DNA is “program” that controls functions, operations and structure of a cell and in turn that of our life processes.
input codons and produces amino acids as output. • Amino acids polymerize and form polypeptide chains called
proteins • Proteins fold and form the basic structures such as skin and hair. • Even though brain controls major human functions at the cell level
in printed words, simply listing the first letter of each base would require over 1.5 million pages of text! • If laid end-to-end, the DNA strand measures about 2 – 3 meters. • DNA is a single large molecule at the nucleus of cell • It is coiled a double helix • Each strand of the DNA molecule is made of A, C, G and T: example: AAAGTTCTTAATTA that will be matched on the other strand by the matching base: TTTCAAGAATTAAT • These string of alphabets contain all the codes needed for the human functions • Ref text: Bioinformatics: Databases, tools and algorithms, by. O. Bosu and S.K. Thukral
10/11/• Sequence of base pairs are grouped to make sense: genes • When a gene inside needs to be activated, the DNA
molecule at the cell nucleus uncoils and unfurls to the right extent to expose that gene • From the exposed ends of the DNA a RNA is formed. • mRNA or messenger RNA is formed that carries with it the “print” of the open DNA section • RNA and DNA differ in one respect: RNA does not contain T or thymine but it has uracil (U). RNA is short-lived • Once mRNA is formed open sections of the DNA close off.
10/11/2020
2
Human cell
• Base pair of DNA: CG, AT
– C – cytosine, G – guanine, A – adenine , T - thymine
• Each human cell contains approximately 3 billion base pairs. • The DNA of a single cell contains so much information that if it were represented
Data-intensive Computing: Case Study Area 1: Bioinformatics
B. Ramamurthy
10/11/2020
1
Human Genetics
• Genomics • Human Genome project • Proteomics • Diseasome • Tree of life project • Phylogenetics
• Life processes are in fact dependent of the program in a DNA and the hundreds of millions of ribosomes.
acids. • Twenty amino acids are prevalent in human cells. Ex: codon GCU
GCC GCA correspond to alanine • In effect ribosome is a process control computer that takes in as