HBI-8000的研究进展
2017年度小常煤矿瓦斯抽采达标能力核定报告
山西长治郊区三元南耀小常煤业有限公司矿井瓦斯抽采达标能力核定报告批准：审核：编写：通风科2016年10山西长治郊区三元南耀小常煤业有限公司矿井瓦斯抽采达标能力核定报告第一章矿井概况及瓦斯赋存情况一、矿井概况山西长治郊区三元南耀小常煤业有限公司（以下称小常煤业）为地方国有企业。
位于长治市郊区侯北庄镇，行政区划属长治市郊区。
根据《煤矿生产能力核定标准》要求，煤矿各主要生产系统及环节其能力应当满足煤矿核定生产能力的需要，以煤矿最薄弱的生产系统能力为最终的核定生产能力。
按照实事求是、保障安全、有效利用的原则，结合标准档次，就近下靠。
根据山西省煤炭工业厅《关于山西长治郊区三元南耀小常煤业有限公司核定生产能力的批复》（晋煤行发〔2013〕1862号）文件，该矿井核定生产能力为210万t/a。
根据山西省煤炭工业厅文件晋煤瓦发〔2012〕1239号文件《关于山西长治郊区三元南耀小常煤业有限公司3号煤层矿井瓦斯涌出量预测的批复》，小常煤业以180万t/a产量开采3号煤层时，矿井最大相对瓦斯涌出量为19.99m³/t，最大绝对瓦斯涌出量为75.74m³/min，批复结论为高瓦斯矿井。
二、矿井开拓及开采矿井为立井开拓。
井田内共有三个井筒：主立井、副立井、回风立井。
主立井，井口坐标X=4011157.81，Y=19681399.57，Z=922.09。
净直径5m，净断面19.625m2，混凝土浇筑，垂深320m。
担负全矿井的提煤、回风任务，井筒内设梯子间。
为矿井一个安全出口。
副立井：X=4011217.10、Y=19681367.97、Z=922.38。
井筒净直径5.5m，净断面23.746m2，混凝土浇筑，垂深342.78m。
担负全矿井矸石提升和升降人员、材料、设备、大件的任务，为矿井的一个进风井，井筒内安设有梯子间，兼做矿井另一个安全出口。
新建回风立井：X=4009673.777、Y=19681291.07、Z=922。
基于红外光谱技术智能识别润滑油的研究进展
基于红外光谱技术智能识别润滑油的研究进展
冯欣;夏延秋
【期刊名称】《润滑油》
【年(卷),期】2024(39)1
【摘要】机器学习作为人工智能发展的核心,在各行业得到快速发展,近年来也成为润滑油领域研究的热点之一,标志着润滑油的研究不再局限于大规模的试验研究,高通量数据、机器学习、优化算法开始应用于润滑油的研究。
文章介绍了基于红外光谱技术在润滑油种类鉴别、润滑剂筛选、润滑性能评估和润滑监测等方面的研究进展,并对未来基于红外光谱技术应用于智能识别润滑油的研究进行了展望。
【总页数】5页(P38-42)
【作者】冯欣;夏延秋
【作者单位】华北电力大学能源动力与机械工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】O657.33;TE626.3
【相关文献】
1.基于可见-近红外光谱技术的润滑油酸值无损检测方法研究
2.基于红外光谱技术的航空润滑油判别分析
3.基于中红外光谱技术的新润滑油与废润滑油鉴别研究
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组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制
中国畜牧兽医 2024,51(3):1259-1266C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e te r i n a r y Me d i c i n e 组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制谭 磊1,彭小烨2,王开心2,黄小久2,张 帆3,禹思宇4(1.长江大学动物科学技术学院,荆州434025;2.湖南农业大学动物医学院,长沙410128;3.长沙环境保护职业技术学院,长沙410004;4.长沙海关技术中心,长沙410004)摘 要:畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁㊂因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共健康也十分重要㊂组蛋白去乙酰化酶(h i s t o n ed e a c e t y l a s e ,H D A C s )属于表观遗传修饰酶,可通过调控组蛋白乙酰化过程影响基因表达,继而参与多种生命活动过程㊂大量研究表明,H D A C s 可通过与病毒蛋白互作或影响细胞相关信号通路来参与多种畜禽病毒感染过程,且H D A C s 抑制剂处理可抑制部分病毒(如伪狂犬病病毒和马立克病毒)复制,提示H D A C s 可作为抗畜禽病毒感染的广谱抗病毒药物靶点㊂因此,深入了解H D A C s 参与畜禽病毒感染的过程对防控畜禽病毒感染具有重要意义㊂作者简要介绍了H D A C s及其抑制剂,重点综述了H D A C s 参与畜禽病毒感染的作用及机制,为深入研究H D A C s 调控畜禽病毒感染提供参考,为开发新型抗病毒药物提供科学指导㊂关键词:组蛋白去乙酰化酶(H D A C s);抑制剂;畜禽病毒感染;作用及机制中图分类号:S 852.65文献标识码:AD o i :10.16431/j.c n k i .1671-7236.2024.03.038 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-08-17基金项目:湖南省自然科学基金-科教联合项目(2021J J 60091)联系方式:谭磊,E -m a i l :l e i t a n @s t u .h u n a u .e d u .c n ㊂通信作者禹思宇,E -m a i l :82346418@q q.c o m R o l e a n dM e c h a n i s mo fH i s t o n eD e a c e t yl a s e i nL i v e s t o c k a n dP o u l t r y Vi r u s I n f e c t i o n T A N L e i 1,P E N G X i a o y e 2,WAN G K a i x i n 2,HU A N G X i a o j i u 2,Z H A N GF a n 3,Y US i yu 4(1.C o l l e g e o f A n i m a lS c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,Y a n g t z eU n i v e r s i t y ,J i n gz h o u 434025,C h i n a ;2.C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,H u n a nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,C h a n gs h a 410128,C h i n a ;3.C h a n g s h aE n v i r o n m e n t a lP r o t e c t i o nV o c a t i o n a lC o l l e g e ,C h a n gs h a 410004,C h i n a ;4.C h a n g s h aC u s t o m sT e c h n o l o g y C e n t e r ,C h a n gs h a 410004,C h i n a )A b s t r a c t :L i v e s t o c k a n d p o u l t r y a r ee a s y t os u f f e rf r o m v i r u si n f e c t i o n d u r i n g t h eb r e e d i n g p r o c e s s ,w h i c hc a u s e s s e r i o u s e c o n o m i c l o s s e s t o t h e b r e e d i n gi n d u s t r i e s .I n a d d i t i o n ,s o m e v i r u s e s b e l o n g t oz o o n o t i c p a t h o g e n s (i n c l u d i n g J a p a n e s ee n c e p h a l i t i sv i r u sa n dF o o t -a n d -m o u t hd i s e a s e v i r u s ),w h i c h p o s e p o t e n t i a l t h r e a t st ot h e p u b l i ch e a l t ho f l i v e s t o c k w o r k e r sa n dc o n s u m e r s .T h e r e f o r e ,t h e p r e v e n t i o n a n d c o n t r o lo fl i v e s t o c k a n d p o u l t r y v i r u s e s n o to n l y ca n r e d u c e e c o n o m i c l o s s e si nt h eb r e e d i n g i n d u s t r y ,b u ta l s oi sv e r y i m p o r t a n tf o rs a f e g u a r d i n g p u b l ic h e a l t h .H i s t o n ede a c e t y l a s e s (H D A C s )b e l o n g t ot h ee p i g e n e t i c m o d if i c a t i o ne n z ym e s ,w h i c h a f f e c t g e n e e x p r e s s i o nb y r e g u l a t i n g t h e h i s t o n e a c e t y l a t i o n p r o c e s s ,s o a s t o p a r t i c i p a t e i n v a r i o u s l i f e a c t i v i t yp r o c e s s e s .N u m e r o u ss t u d i e sh a v es h o w nt h a tH D A C s p a r t i c i pa t e i nv a r i o u sa n i m a l v i r u si n f e c t i o n p r o c e s s e sb y i n t e r ac t i n g w i t h v i r a l p r o t e i n s o ri n f l u e n c i n g c e l l u l a rs i g n a l i n gp a t h w a y s ,a n d H D A Ci n h i b i t o rt r e a t m e n tc a ni n h i b i tt h er e pl i c a t i o no fs o m ev i r u s e s (s u c ha s中国畜牧兽医51卷P s e u d o r a b i e sv i r u sa n d M a r e k sd i s e a s ev i r u s),s u g g e s t i n g t h a t H D A C sc a ns e r v ea sb r o a d-s p e c t r u m a n t i v i r a l d r u g t a r g e t s a g a i n s t a n i m a l v i r u si n f e c t i o n.D e e p e ri n v e s t i g a t i o n o ft h e i n v o l v e m e n t o f H D A C s i nl i v e s t o c ka n d p o u l t r y v i r u s i n f e c t i o ni so f g r e a ts i g n i f i c a n c ef o rt h e p r e v e n t i o na n dc o n t r o lo fl i v e s t o c ka n d p o u l t r y v i r u si n f e c t i o n.T h ea u t h o rb r i e f l y i n t r o d u c e s H D A C s a n d t h e i r i n h i b i t o r s,m a i n l y s u m m a r i z e s t h e r o l e sa n d m e c h a n i s m so fH D A C s i na n i m a l v i r u si n f e c t i o n.T h i sr e v i e w w i l l p r o v i d er e f e r e n c ef o ri n-d e p t hr e s e a r c h o nt h er e g u l a t i o no f H D A C s i nl i v e s t o c k a n d p o u l t r y v i r u si n f e c t i o n,a n d p r o v i d e g u i d a n c ef o r d e v e l o p i n g n o v e l a n t i v i r a l a g e n t s a g a i n s t v i r u s i n f e c t i o n.K e y w o r d s:h i s t o n ed e a c e t y l a s e s(H D A C s);i n h i b i t o r s;l i v e s t o c ka n d p o u l t r y v i r u s i n f e c t i o n;r o l e a n dm e c h a n i s m中国畜禽养殖业发展迅速,其不仅是中国农村经济发展和实现农民致富的支柱性产业,同时为保障畜禽产品供应和满足消费者对畜禽产品需要做出了重要贡献㊂在养殖过程中,畜禽易受到多种病原感染,其中包括病毒性㊁细菌性和寄生虫性病原,这给畜禽养殖业造成了巨大的经济损失[1-3]㊂畜禽病毒感染引发的疾病存在流行快㊁危害大和难以防控等特征,且部分病毒可感染人,对公共健康也造成巨大的威胁[4]㊂目前对于病毒性疾病的防控主要依赖于疫苗免疫接种及提高饲养管理水平,但病毒在进化过程中存在易突变的特点,导致出现疫苗免疫逃逸现象,影响疫苗的免疫效果[5-6]㊂近年来,研发广谱抗病毒药物防控畜禽病毒逐渐成为热点㊂组蛋白可与D N A结合组成核小体,而核小体是染色体最小组成蛋白,因此,组蛋白修饰可影响染色体结构,从而调控基因表达[7]㊂组蛋白修饰有多种,其中乙酰化是组蛋白修饰的重要方式,组蛋白乙酰化可促进基因转录,而去乙酰化则抑制基因转录[8]㊂组蛋白去乙酰化酶(h i s t o n ed e a c e t y l a s e, H D A C s)不仅可调控组蛋白乙酰化过程,还可参与多种生物过程,如部分H D A C s在多种癌症或肿瘤细胞中高表达,且H D A C s抑制剂具有抑制肿瘤生长或抗癌作用[9-10];类似地,部分H D A C s参与畜禽病毒感染过程,且使用对应的抑制剂可发挥抗病毒感染作用[11]㊂截至目前,已有大量文献报道了H D A C s参与畜禽病毒感染过程及机制,笔者重点综述当前已报道的H D A C s参与畜禽病毒感染机制及其抑制剂调控病毒感染的进展,旨在为筛选广谱抗畜禽病毒感染药物靶点提供参考㊂1H D A C s及其抑制剂组蛋白乙酰化修饰是指在组蛋白N-端尾部特定氨基酸位点乙酰基化,有利于D N A和组蛋白八聚体的解离,继而激活基因转录,其受组蛋白乙酰基转移酶和H D A C s共同调控,是一种动态平衡状态[12]㊂H D A C s可去除已被乙酰化组蛋白上的赖氨酸残基乙酰基,从而抑制基因转录过程㊂根据H D A C s基因序列特征及参与的调控作用,可将其分为4个不同类型,分别为Ⅰ型(H D A C1㊁H D A C2㊁H D A C3和H D A C8)㊁Ⅱ型(H D A C4㊁H D A C5㊁H D A C6㊁H D A C7和H D A C9)㊁Ⅲ型(S i r t1-7)和Ⅳ型(H D A C11)[13]㊂Ⅰ㊁Ⅱ和Ⅳ型均为Z n2+依赖性酶,而Ⅲ型则属于N A D+依赖性酶[13]㊂目前被美国食品药品监督管理局批准作为药物的H D A C s抑制剂存在5种,分别为S A H A㊁F K-288㊁P X D-101㊁H B I-8000和L B H-589,但它们对H D A C s具有广谱抑制性,即特异性较差;但也有一些抑制剂可针对特异亚型H D A C s,如M o c e t i n o s t a t主要针对Ⅰ型H D A C s,而P C I-34051则主要针对H D A C8[14]㊂2H D A C s参与猪病毒感染的研究进展2.1猪伪狂犬病病毒猪伪狂犬病病毒(P s e u d o r a b i e sv i r u s,P R V)属于α疱疹病毒亚科成员,是一种严重威胁中国养猪业发展的重要传染性病原之一[15]㊂P R V感染可引起猪伪狂犬病(p s e u d o r a b i e s,P R),可导致发病仔猪高死亡率和妊娠母猪流产等㊂此外,P R V可感染多种哺乳动物,包括反刍动物㊁犬科动物㊁猫科动物等㊂近年来已证实P R V可感染人,且可导致严重的临床症状,甚至是死亡[16-17]㊂W a l t e r s等[18]研究发现,P R V感染可激活细胞H D A C2磷酸化过程,且使用Ⅰ类H D A C s抑制剂(H D A C iⅦ)可干扰P R V复制效率㊂G u o等[19]首先采用s i R N A干扰技术探究了H D A C1参与P R V 感染作用,发现干扰HD A C1基因可显著抑制稳定06213期谭磊等:组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制表达绿色荧光蛋白的重组P R V(P R V-G F P)感染3D4/21细胞后病毒滴度㊁P R V g B蛋白表达量和表达G F P细胞比例;反之,过表达H D A C1则可提高P R V-G F P在细胞中的复制效率;作者进一步选用H D A C抑制剂(T S A)探究其对P R V感染的影响,发现安全浓度T S A可呈剂量依赖性地抑制P R V-G F P在细胞中的复制效率,同时可抑制野生型P R V 多种复制相关基因(如E P O㊁U S1和I E180基因)的相对转录水平[19]㊂进一步探究抑制剂发挥抗病毒机制发现,T S A可通过引起细胞D N A损伤,从而激活细胞c G A S通路相关先天性免疫系统来发挥抗P R V感染作用[19]㊂X u等[20]发现,H D A C6也参与P R V感染过程,在P R V感染不同细胞系(如V e r o㊁P K15)过程中,宿主蛋白H D A C6相对表达丰度随时间(0~24h)有显著上调趋势㊂H D A C6抑制剂(T u b a c i n)处理可显著降低病毒感染细胞后P R V g E蛋白表达量和子代病毒滴度;类似地,敲除HD A C6基因也可显著抑制P R V复制效率,而过表达H D A C6则促进P R V复制效率㊂进一步研究发现,P R V复制可诱导细胞D N A损伤应答(组蛋白H2A x磷酸化),而多种途径可导致细胞D N A损伤,其中包括A T M㊁A T R和D N A依赖性蛋白激酶㊂A TM通路抑制剂(K u55933)处理可抑制P R V复制,而T u b a c i n处理或敲除HD A C6基因可抑制H2A x磷酸化㊂该研究结果提示,H D A C6通过A T M信号通路促进细胞D N A损伤应答来提高P R V复制效率,同时H D A C6抑制剂是有效的抗P R V感染小分子化合物㊂2.2猪流行性腹泻病毒猪流行性腹泻病毒(P o r c i n ee p i d e m i cd i a r r h e a v i r u s,P E D V)属于冠状病毒科成员,其是导致仔猪腹泻的主要肠道病毒之一[21]㊂P E D V感染可导致仔猪出现腹泻㊁呕吐和脱水等临床症状,同时伴随高死亡率,是影响全世界养猪业健康发展的重要病原之一[22]㊂当前对于P E D V的防控主要依赖于疫苗免疫接种,但P E D V基因组具有高变异率,导致依赖于疫苗免疫对该病的防控效果较差[23]㊂X u等[24]研究发现,P E D V感染可导致I P E C-J2细胞多种亚型HD A C基因转录水平显著下调,其中包括HD A C1㊁HD A C3㊁HD A C4㊁HD A C11和S i r t2基因;且P E D V感染24h后可下调细胞H D A C1蛋白相对表达水平㊂H D A C s抑制剂(M S-275和S A H A)处理可提高P E D V在细胞中的复制效率,敲除HD A C1基因对促进P E D V复制效果更显著;但过表达HD A C1基因则发挥相反的作用,即抑制P E D V复制效率;P E D V感染还可激活细胞先天性免疫系统,即先天性免疫相关基因(如I F I TM1㊁I S G15㊁O A S1基因等)转录水平均显著上调,但H D A C抑制剂处理则抑制该过程[12]㊂进一步研究发现,P E D V N蛋白可抑制细胞H D A C1蛋白表达,且其N L S1区域发挥重要抑制作用;S p1蛋白可与H D A C1互作,且过表达S p1可促进H D A C1蛋白表达,而P E D V N蛋白可通过与S p1蛋白互作而抑制其转录水平[24]㊂以上结果表明, P E D V N蛋白可通过抑制S p1蛋白来干扰H D A C1蛋白表达,从而促进病毒自身复制㊂2.3猪德尔塔冠状病毒与P E D V类似,猪德尔塔冠状病毒(P o r c i n e d e l t a c o r o n a v i r u s,P D C o V)属于冠状病毒科成员,其也是导致仔猪腹泻常见的肠道病毒之一[25]㊂值得注意的是,P D C o V感染导致仔猪腹泻症状较P E D V 轻,且死亡率也更低㊂此外,已有研究证实P D C o V 可感染多种动物,包括禽㊁鼠和人类,提示该病原具有潜在的人兽共患风险[26-27]㊂目前针对P D C o V疫苗产品种类或数量有限,因此研发抗P D C o V感染药物对于该病的防控十分必要㊂L i等[28]研究发现,P D C o V感染可抑制细胞(L L C-P K1和I P I-F X)去乙酰化酶活性,呈剂量依赖性;P D C o V感染可显著抑制细胞HD A C2㊁HD A C8和S i r t1等基因转录水平,但上调HA T1㊁M Y S T2和C R E B B P等基因转录水平,且P D C o V 感染可显著抑制H D A C2蛋白表达水平(呈剂量依赖性)㊂进一步研究发现,过表达H D A C2可抑制P D C o V感染细胞病毒N蛋白表达水平和病毒滴度;而干扰HD A C2基因或H D A C2抑制剂(C A Y)处理则提高P D C o V在细胞中的复制效率㊂随后, L i等[28]分别转染过表达P D C o V N s p5和H D A C2蛋白的质粒入细胞,发现P D C o V N s p5蛋白可有效切割H D A C2蛋白,但N s p5蛋白失去蛋白酶活性后则对H D A C2蛋白没有切割活性;相对应的,若将H D A C2第261位氨基酸突变,则其无法被N s p5蛋白切割㊂且转染缺失第261位氨基酸的H D A C2蛋白无法激活细胞先天性免疫相关基因转录水平,也无法发挥其抗P D C o V感染的特性㊂以上结果表明,P D C o V N s p5蛋白可通过降解H D A C2或抑制H D A C2活性来干扰细胞抗病毒反应,继而促进病毒自身复制㊂1621中国畜牧兽医51卷2.4口蹄疫病毒口蹄疫病毒(F o o t-a n d-m o u t h d i s e a s ev i r u s, F M D V)感染可引起一种烈性传染病 口蹄疫,该病原可感染多种偶蹄动物,如猪㊁牛和羊等,临床症状主要包括患畜蹄部㊁口腔和鼻镜等处出现水疱㊁心肌炎等[29-30]㊂此外,F M D V还可感染人,是一种对公共健康可造成巨大威胁的人兽共患性病原[31]㊂H o u等[32]首次探究H D A C9参与F M D V感染作用及机制,结果发现,与野生型细胞相比,敲除HD A C9基因不影响B H K-21细胞生长特性,但显著提高了F M D V感染引起的细胞病变㊁病毒滴度和病毒编码基因相对转录水平等;且H D A C抑制剂(T S A和S A H A)处理也可提高F M D V V P1蛋白相对表达水平;转录组测序结果发现,H D A C9可能通过T o l l-l i k e㊁MA P K㊁N O D-l i k e㊁p53和N F-κB信号通路影响F M D V感染㊂2.5猪圆环病毒2型猪圆环病毒2型(P o r c i n ec i r c o v i r u st y p e2, P C V2)属于单股㊁有囊膜的正链D N A病毒,其可感染多种哺乳动物,包括犬㊁禽和狐狸等,且可引发相应的疾病[33]㊂P C V2是导致猪圆环病毒相关疾病的重要病原,临床症状主要包括仔猪多系统衰竭㊁肺炎和妊娠母猪繁殖障碍等;此外,P C V2感染可引起患畜免疫抑制,降低免疫力,导致P C V2与其他病原混合感染现象十分常见[34]㊂W a n g等[35]研究发现,P C V2感染虽不影响H D A C6蛋白相对表达水平,但可显著激活H D A C6蛋白去乙酰化酶活性,继而抑制A c-t u b i n蛋白活性(A c-t u b i n蛋白活性可用于监测H D A C6蛋白活性);且仅P C V2C a p蛋白抑制细胞H D A C6蛋白活性,而P C V1C a p㊁R e p和P C V2R e p蛋白对其活性均无影响㊂此外,在小鼠模型中,马尾藻多糖和山豆根多糖均可通过抑制H D A C活性来发挥抗P C V2感染作用[36-37]㊂以上结果提示,H D A C s可能间接参与P C V2感染过程,其是否可直接参与P C V2感染还需要进一步探究㊂2.6猪乙脑病毒及非洲猪瘟病毒研究人员就H D A C s是否参与猪乙脑病毒(J a p a n e s e e n c e p h a l i t i s v i r u s,J E V)和非洲猪瘟病毒(A f r i c a n s w i n e f e v e r v i r u s,A S F V)感染进行了初步探究㊂F r o u c o等[38]研究发现,体外试验中不同H D A C抑制剂干扰A S F V感染效率存在差异,其中N a P B处理可完全抑制A S F V感染,而其他抑制剂(V P A㊁T S A和S A H A)对A S F V感染干扰效果相对较差;进一步研究发现,N a P B处理主要是抑制病毒晚期蛋白合成,并破坏病毒感染引起的组蛋白乙酰化过程,但对病毒无直接杀灭作用㊂A d h y a等[39]发现,J E V感染可导致细胞H D A C s酶活性下降,同时导致H D A C1㊁H D A C2和H D A C3蛋白相对表达量下调(6㊁12和24h),提示H D A C家族可能参与J E V感染过程,但具体作用及机制仍有待进一步探究㊂3H D A C s参与其他病毒感染的研究进展3.1流感病毒甲型流感病毒(I n f l u e n z aAv i r u s,I A V)是一种影响全世界公共健康的重要病原,同时该病原可以感染多种动物,如禽类(鸡㊁鸭和鹅)和猪等[40]㊂I A V感染可引起急性和高度接触性呼吸道疾病,其可通过空气中飞沫和接触等方式传播㊂由于I A V 在进化过程中基因组变异程度高,导致疫苗接种对该病原的防控效果较差[41]㊂H u s a i n等[42]首次报道了H D A C6参与I A V感染的作用及机制,其研究发现,过表达H D A C6可显著降低I A V感染A549细胞后病毒N P蛋白相对表达水平和子代病毒滴度㊂相对应地,敲降HD A C6基因或H D A C6抑制剂(T u b a c i n)处理均能显著提高I A V复制效率;进一步研究发现,T u b a c i n处理促进了子代病毒释放,且抑制H D A C6活性可促进病毒成分向质膜的运输效率㊂以上结果提示, H D A C6是通过抑制I A V成分向质膜运输效率来干扰病毒感染过程㊂C h e n等[43]采用免疫共沉淀研究发现,I A V编码聚合酶酸性蛋白(p o l y m e r a s e a c i d i c p r o t e i n,P A)可与H D A C6蛋白相互作用,且H D A C6蛋白可促进P A降解过程㊂以上研究表明,H D A C6可通过不同途径抑制I A V感染效率,其他亚型H D A C s是否参与I A V感染还需要进一步探究㊂3.2小反刍兽疫病毒小反刍兽疫病毒(P e s t ed e s p e t i t sr u m i n a n t s v i r u s,P P R V)是一种对绵羊和山羊养殖业健康发展造成巨大威胁的R N A病毒㊂潘春荣等[44]探究了P R R V感染对不同亚型HD A C基因转录水平的影响,发现该病毒感染可显著提高HD A C2基因转录水平,但对其他HD A C基因无显著影响㊂其后选用不同抑制剂处理发现,仅S A H A㊁T M P269和MG C D0103处理可显著抑制P R R V N蛋白相对表达水平和子代病毒滴度㊂26213期谭 磊等:组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制3.3 马立克病毒马立克病毒(M a r e k sd i s e a s ev i r u s ,M D V )感染可导致禽马立克病,其临床症状包括内脏淋巴瘤和神经损伤等㊂L i a o 等[45]通过间接免疫荧光试验和免疫共沉淀试验发现,细胞H D A C 1和H D A C 2蛋白的N -端结构域与M D V 编码M e q 蛋白相互作用参与病毒感染过程;进一步研究发现,过表达M e q 蛋白可通过蛋白酶依赖途径降解细胞外源性H D A C 1和H D A C 2蛋白表达水平㊂另一项研究发现,M D V U S 3蛋白可激活H D A C 1和H D A C 2蛋白磷酸化过程,但不同基因型M D V U S 3蛋白激活途径存在差异,如M D V -1U S 3可靶向H D A C 1蛋白第406位氨基酸,而M D V -2则靶向第406㊁410和415位氨基酸[46]㊂3种基因型M D V U S 3蛋白均可与H D A C 1和H D A C 2蛋白相互作用,且使用Ⅰ型H D A C 抑制剂可显著抑制M D V 在细胞中的增殖效率[46]㊂如表1所示,H D A C s 参与多种畜禽病毒感染过程,但其参与病毒感染的作用及潜在机制存在差异㊂表1 H D A C s 参与畜禽病毒感染作用及抑制剂对病毒感染作用统计结果T a b l e 1 S t a t i s t i c a l r e s u l t s o fH D A C s p a r t i c i p a t i o n i n l i v e s t o c ka n d p o u l t r y v i r u s i n f e c t i o na n d i n h i b i t o r e f f e c t s o nv i r u s i n f e c t i o n 病毒V i r u s e s 种类S p e c i e s H D A C s 作用F u n c t i o no fH D A C sH D A C s 抑制剂作用F u n c t i o no f H D A C s i n h i b i t o r模型M o d e l 参考文献R e f e r e n c e sP R VH D A C 1H D A C 1通过诱导细胞D N A 损伤,激活细胞c G A S 通路相关先天性免疫系统来干扰病毒复制抑制病毒复制(T S A )3D 4/21细胞G u o 等[19]H D A C 6H D A C 6通过A TM 信号通路激活细胞D N A 损伤反应来提高P R V 复制效率抑制病毒复制(T u b a c i n)P K 15和V e r o 细胞X u 等[20]P E D VH D A C 1P E D V N 蛋白可通过抑制S p 1蛋白来干扰H D A C 1蛋白表达,从而促进病毒自身复制促进病毒复制(M S -275和S A HA )I P E C -J 2细胞X u 等[24]P D C o V H D A C 2P D C o V N s p 蛋白可通过降解H DA C 2或抑制H D A C 2活性来干扰细胞抗病毒反应促进病毒复制(C A Y )L L C -P K 1细胞L i 等[28]F M D V H D A C 9敲除HD A C 9基因可促进F M D V 复制-B H K -21细胞H o u 等[32]P C V 2H D A C 6P C V 2C a p 蛋白抑制细胞H DA C 6蛋白活性-P K 15细胞W a n g 等[35]J E VH D A C 1㊁H D A C 2㊁H D A C 3J E V 感染可下调H D A C 1㊁H D A C 2和H D A C 3蛋白相对表达水平-R AW 264.7细胞F r a n c o 等[38]A S F V -N a PB 处理抑制A S F V 晚期蛋白合成,从而发挥抗病毒复制作用抑制病毒复制(N a P B )V e r o 细胞A d h ya 等[39]I A V H D A C 6H D A 6蛋白可降解I A V P A 蛋白,同时抑制子代病毒复制,从而发挥抗病毒作用促进病毒复制和子代病毒释放(T u b a c i n)A 549细胞H u s a i n 等[42]㊁C h e n 等[43]P P R VH D A C 2P R R V 感染激活HD A C 2基因转录水平抑制病毒复制(S A HA ㊁TM P 269和MG C D 0103)V e r o 细胞潘春荣等[44]M D VH D A C 1㊁H D A C 2M D V 编码M e q 蛋白和US 3蛋白均可与H D A C 1和H D A C 2蛋白相互作用;其中M e q 蛋白可降解H D A C 1/2蛋白,而U S 3蛋白可导致H D A C 1/2磷酸化抑制M D V 复制(N a B 和T C H -100)C E F 细胞L i a o 等[45]㊁L i a o 等[46]4 小 结近年来,H D A C s 参与多种畜禽病毒感染研究及部分H D A C s 抑制剂抗病毒作用受到广泛关注㊂总体而言,部分病毒(如P R V ㊁M D V 和P R R V )感染可激活特定HD A C 基因转录水平,过表达HD A C 基因则促进病毒复制,H D A C s 特异性抑制剂处理3621中国畜牧兽医51卷则可抑制病毒复制效率,提示H D A C s特异性抑制剂可作为颉颃以上病毒感染的药物[19-20,44-46]㊂值得注意是,大部分研究仅在体外试验中探究了H D A C s抑制剂的抗病毒效果,未来还需进一步在体内试验中确定其抗病毒活性㊂此外,研究人员还可构建特定亚型HD A C基因敲除动物模型,探究其对动物模型生长性能的影响,继而探究其是否具有抗病毒作用,如针对P R V,可构建敲除HD A C2或HD A C6基因的小鼠或猪模型㊂此外,部分病毒(如P E D V和P D C o V)感染可抑制细胞特定HD A C基因转录水平,敲除㊁敲降或H D A C s抑制剂处理则可提高病毒(如P E D V㊁P D C o V㊁F M D V和I A V)的复制效率[24,28,32,42-43]㊂基于此,可考虑构建HD A C基因敲除细胞系,旨在提高以上病毒在细胞的复制效率,为相应的减毒活疫苗或灭活疫苗研发提供良好的细胞载体㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1]程晋龙,赵烨,张国中.危害畜禽养殖业的主要冠状病毒[J].中国兽医杂志,2020,56(9):56-59.C H E N G J L,Z HA O Y,Z HA N G G Z.T h e m a i nC o r o n a v i r u st h a t h a r m s t h el i v e s t o c k a n d p o u l t r yb r e e d i n g i n d u s t r y[J].C h i n e s eJ o u r n a l o f V e t e r i n a r yM e d i c i n e,2020,56(9):56-59.(i nC h i n e s e) [2]赵乾明,齐萌,徐泽立,等.规模舍饲羊场羊消化道及环境寄生虫情况调查[J].中国畜牧兽医,2023,50(5):2156-2165.Z HA O Q M,Q I M,X U Z L,e t a l.I n v e s t i g a t i o no fi n t e s t i n a l p a r a s i t e s o c c u r r e n c e i n s h e e p a n de n v i r 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碧云天生物技术脂质氧化(MDA)检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号脂质氧化(MDA)检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0131S 脂质氧化(MDA)检测试剂盒 100次 S0131M脂质氧化(MDA)检测试剂盒500次产品简介：碧云天的脂质氧化(MDA)检测试剂盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation) 水平检测的试剂盒。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物。
动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA 。
此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，相应的反应原理图如下：MDA TBA MDA-TBA AdductMDA-TBA 加合物在535nm 处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。
另外，MDA-TBA 加合物也可以在535nm 被激发产生最大发射波长553nm ，据此也可以进行荧光检测。
特点：本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂，可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA ，使检测更加准确。
酶固定化技术的最新研究进展
西安工程大学学报J o u r n a l o f X i a n P o l y t e c h n i c U n i v e r s i t y第38卷第1期(总185期)2024年2月V o l .38,N o .1(S u m.N o .185)引文格式:潘虹,陆天炆,王晓军,等.酶固定化技术的最新研究进展[J ].西安工程大学学报,2024,38(1):83-91.P A N H o n g ,L U T i a n w e n ,WA N G X i a o j u n ,e t a l .R e c e n t a d v a n c e s i n e n z y m e i mm o b i l i z a t i o n t e c h n o l o g y [J ].J o u r n a l o f X i a n P o l y t e c h n i c U n i v e r s i t y,2024,38(1):83-91. 收稿日期:2023-08-06 修回日期:2023-10-21基金项目:陕西省自然科学基础研究计划项目(2021J Q -672㊁2022J Q -117);陕西省教育厅专项科研计划项目(22J K 0399) 通信作者:潘虹(1988 ),女,讲师,博士,研究方向为固定化酶和多孔水凝胶㊂E -m a i l :441595837@q q.c o m 酶固定化技术的最新研究进展潘 虹,陆天炆,王晓军,洪一楠(西安工程大学环境与化学工程学院,陕西西安710048)摘要 酶作为一种催化性能好且安全可靠的生物催化剂,在食品㊁医药及环境治理等诸多领域得到了广泛应用,但因受限于游离酶较差的环境稳定性而难以实现进一步的工业化应用㊂酶固定化技术有助于提高游离酶对敏感环境的耐受性和操作过程中的稳定性,大大缩减了应用成本㊂回顾了近五年内固定化技术的发展及现状,总结了吸附法㊁结合法等传统固定化方法,共固定化酶法等新型固定化方法,以及天然材料载体㊁复合材料载体和纳米载体等不同固定化载体在各个领域的研究进展㊂相比于游离酶,固定化酶体系在稳定性和重复使用性等方面得到了显著提升,但同时也存在一些不足,如固定后的活性回收率降低㊁载体合成途径繁琐且成本较高以及固定化酶作用机理尚不完善等㊂结合这些不足之处提出了酶固定化技术在未来的发展方向㊂关键词 酶固定化;固定化载体;固定化方法;纳米载体;共固定开放科学(资源服务)标识码(O S I D )中图分类号:Q 814.2 文献标志码:AD O I :10.13338/j .i s s n .1674-649x .2024.01.011R e c e n t a d v a n c e s i n e n z y m e i m m o b i l i z a t i o n t e c h n o l o g yP A N H o n g ,L U T i a n w e n ,WA N G X i a o ju n ,H O N G Y i n a n (S c h o o l o f E n v i r o n m e n t a l a n d C h e m i c a l E n g i n e e r i n g ,X i a n P o l y t e c h n i c U n i v e r s i t y,X i a n 710048,C h i n a )A b s t r a c t A s a n e f f i c i e n t a n d s a f e b i o c a t a l y s t ,e n z y m e s h a v e b e e n w i d e l y u s e d i n m a n yf i e l d s s u c h a s f o o d ,m e d i c i n e a n d e n v i r o n m e n t a lg o v e r n a n c e ,b u t i t i s d i f f i c u l t t o r e a l i z e f u r th e ri n d u s t r i a l a p-p l i c a t i o n d u e t o t h e p o o r e n v i r o n m e n t a l s t a b i l i t y o f f r e e e n z y m e s .E n z y m e i mm o b i l i z a t i o n t e c h -n o l o g y h e l p s t o i m p r o v e t h e t o l e r a n c e o f f r e e e n z y m e s t o s e n s i t i v e e n v i r o n m e n t s a n d t h e s t a b i l i t yd u r i n g o pe r a t i o n ,a n d g r e a t l y r e d u c e s t h e a p p l i c a t i o n c o s t .T h i s p a p e r r e v i e w s t h e d e v e l o pm e n t a n d c u r r e n t s i t u a t i o n o f i mm o b i l i z a t i o n t e c h n o l o g yi n t h e p a s t f i v e y e a r s ,a n d s u mm a r i z e s t h e r e -s e a r c h p r o g r e s s o f d i f f e r e n t i mm o b i l i z a t i o n m e t h o d s(i n c l u d i n g t r a d i t i o n a l i mm o b i l i z a t i o n m e t h-o d s s u c h a s a d s o r p t i o n m e t h o d a n d b i n d i n g m e t h o d a n d n e w i mm o b i l i z a t i o n m e t h o d s s u c h a s c o-i mm o b i l i z a t i o n e n z y m e m e t h o d)a n d i mm o b i l i z a t i o n c a r r i e r s(i n c l u d i n g n a t u r a l m a t e r i a l c a r r i e r s, c o m p o s i t e c a r r i e r s a n d n a n o c a r r i e r s)i n v a r i o u s f i e l d s.I n g e n e r a l,c o m p a r e d w i t h f r e e e n z y m e s, t h e i mm o b i l i z e d e n z y m e s y s t e m h a s b e e n s i g n i f i c a n t l y i m p r o v e d i n t e r m s o f s t a b i l i t y a n d r e u s-a b i l i t y.H o w e v e r,t h e r e a r e s o m e s h o r t c o m i n g s,s u c h a s l o w e r r e c o v e r y r a t e a f t e r i mm o b i l i z a-t i o n,c u m b e r s o m e a n d c o s t l y c a r r i e r s y n t h e s i s p a t h w a y,a n d i m p e r f e c t m e c h a n i s m o f i mm o b i l i z a-t i o n e n z y m e.F i n a l l y,t h e d e v e l o p m e n t d i r e c t i o n o f t h e t e c h n o l o g y i n t h e f u t u r e w a s p u t f o r w a r d b a s e d o n t h e s e s h o r t c o m i n g s.K e y w o r d s e n z y m e i mm o b i l i z a t i o n;i mm o b i l i z a t i o n c a r r i e r s;i mm o b i l i z a t i o n m e t h o d;n a n o c a r r i-e r s;c o-i mm o b i l i z a t i o n0引言生物酶是一类具有催化效率高㊁专一性强的生物催化剂[1],其本质是一种蛋白质㊂因此,生物酶通常需在常温常压等温和条件下才能表现出其高催化性能,当离开特定环境就会出现酶活性和稳定性迅速降低的缺点[2]㊂活性炭可以吸附蔗糖酶进行蔗糖水解,且保持了蔗糖酶较好的催化活性[3]㊂由此,固定化酶的思想被首次提出㊂随后,研究人员开始通过一系列酶固定化技术来改善游离酶存在的缺点㊂酶固定化技术就是指将游离酶通过一定的技术手段固定在某些不溶性载体上,进而使其在敏感环境下仍然表现出较高的稳定性和酶活性[4]㊂经固定化后的酶,可以借助载体的保护作用或者与载体之间相互作用,保护了酶蛋白的空间构象[5],进而提高了对p H㊁温度㊁重金属离子等影响因素的耐受性㊂同时,固定化酶可以通过简单的离心过滤等手段从反应体系中分离出来,促进漆酶的回收和重复使用[6]㊂目前,固定化酶技术已经在食品加工[7]㊁生物传感器[8]㊁纺织印染废水处理[9-10]㊁生物漂白[11]等诸多领域得到广泛的应用,其固定化技术也表现出愈发成熟的发展㊂本文综述了近五年酶固定化技术的发展,重点表现在固定化方法和固定化载体上,以及酶固定化技术在多个领域的应用㊂1酶固定化方法酶固定化方法可分为传统固定化方法和新型固定化方法㊂表1列出来近五年的一些酶固定化技术所用的方法㊂表1固定化酶所用固定化方法T a b.1I mm o b i l i z a t i o n m e t h o d s u s e d i n d i f f e r e n t i mm o b i l i z a t i o n t e c h n i q u e s固定化方法固定化对象载体材料参考文献传统固定化方法吸附法漆酶/α-淀粉酶生物炭/复合晶凝胶[12-13]共价结合法脂肪酶M I L-53(F e)/球形S i O2[14-15]化学交联法漆酶/葡萄糖淀粉酶磁性纳米粒/纳米S i O2[16-19]包埋法漆酶海藻酸铜微球[20]新型固定化方法吸附-交联法脂肪酶/β-葡糖糖苷酶大孔树脂/纳米S i O2[21-22]吸附-包埋法多种酶/纤维素酶多孔淀粉-阿拉伯胶微囊体/仿生S i O2[23-24]交联-包埋法漆酶聚集体介孔S i O2[25]脂肪酶/磷脂酶聚乙烯亚胺[26]共固定法葡萄糖淀粉酶/葡萄糖氧化酶S i O2[27]葡萄糖氧化酶/辣根过氧化物酶磁性聚乙二醇微凝胶颗粒[28]1.1传统固定化方法1.1.1吸附法吸附法即物理吸附,物理吸附是一种简单易行的方法,通过氢键㊁疏水作用和范德华力等相互作用48西安工程大学学报第38卷使酶吸附到不溶于水的载体表面,该方法操作步骤简洁且不需要额外添加化学试剂,但其固定效果较差且容易受外界条件影响[29]㊂WA N G等采用吸附法将漆酶固定在碱改性生物炭(A-M B)上实现对孔雀石绿(MG)的吸附降解,结果表明,A-M B对MG 表现出最大吸附量757.58m g/g,固定化漆酶A/l a c @A-M B对MG的去除率可达97.70%,10次循环后仍然表现出超过75%的去除率[12]㊂A C E T等以沸石颗粒(P P A)为原料,通过简单方法制备了C u2+-A P P a C包埋型复合晶凝胶(C u2+-A P P a C)用于α-淀粉酶吸附固定,结果表明,α-淀粉酶最大吸附量可达858.7m g/g,同时相较于游离酶,其操作稳定性和存储稳定性也表现出明显的优势[13]㊂1.1.2结合法结合法是利用酶的侧链基团与载体表面的基团发生反应形成共价键,利用共价键将酶固定在载体上[30]㊂G H A S E M I等将M I L-53(F e)通过表面官能化对2种脂肪酶进行共价固定,结果显示脂肪酶固定化体系虽然没有实现对酶的高负载,但仍然表现出更广泛的温度和p H值稳定性,同时实现了酶的可重复使用能力和稳定性的显著改善[14]㊂此外,共价结合法由于化学键的形成,容易使酶的蛋白质构象发生改变,从而降低酶活性[31]㊂F A N等采用戊二醛多点共价结合法和吸附-交联法,以球形二氧化硅为载体,固定化皱纹假丝酵母脂肪酶(C R L),结果表明,多点共价处理后脂肪酶二级结构发生变化,使酶的残余活力下降[15]㊂但相比之下,共价结合法制备的酶体系具有更好的重复使用性和稳定性,使其在酸化油脂催化水解中更有潜力㊂1.1.3化学交联法交联法是通过一些双功能试剂将酶和载体进行连接[31],主要用到的交联剂有戊二醛㊁1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(E D C)㊁二醛淀粉和二醛纤维素[30,32-33]等㊂C H E N等以戊二醛作为交联剂制备了一种具有超顺磁性的固定化漆酶F e3O4@S i O2-N H2-L a c,该固定化体系表现出了良好的稳定性,对有机溶剂㊁金属离子有显著的耐受性和良好的循环使用性,同时在对酚类化合物的去除降解方面也表现出巨大的潜力[16]㊂Q I U等以二醛淀粉为交联剂,采用共价固定法将漆酶在离子液体改性的磁性纳米载体上进行固定,较于其他固定化漆酶,在处理含酚废水中表现出更大优势[17]㊂然而常见的交联剂在固定化过程往往会表现出一定的负面影响[34],为此研究人员着手发掘绿色安全的新型交联剂来避免这种负面影响㊂例如,O U Y A N G等提出了一种新的绿色高效固定化酶的方法 京尼平苷酶解物作为交联剂固定化漆酶[18]㊂与直接使用京尼平或戊二醛作为交联剂,该方法绿色㊁安全,可应用于需要严格控制毒性的食品和医药行业㊂D A N I E L L I等研究了一种双功能交联剂2,5-二甲酰基呋喃(D F F)将葡糖淀粉酶固定在氨基官能化甲基丙烯酸树脂上[19]㊂使用海洋细菌费氏弧菌进行了生态毒性测定,相比于戊二醛,D F F表现出更低的生物毒性㊂1.1.4包埋法包埋法是将酶固定在聚合物材料的网格结构或微囊结构等多空隙载体中[35]㊂这种方法可以提供更好的保护和稳定性,限制了酶的扩散㊂但同时也存在孔隙的扩散阻碍,使得该方法的循环使用效率下降㊂例如,L A T I F等采用包埋法将漆酶固定化在海藻酸铜微球上进行双酚A的降解[20]㊂相比于游离酶,固定化漆酶表现出更高的p H㊁温度稳定性及储存稳定性,但在循环使用5次后剩余酶活降到了21.5%㊂1.2新型固定化方法1.2.1传统固定化方法的改进传统的单一固定化方法进行酶固定往往存在各自的缺点,因此出现了将单一方法进行两两结合来固定化酶的改进方法㊂常见的包括吸附-交联法[21-22]㊁吸附-包埋法[23-24]㊁交联-包埋法[25]等㊂例如,F A T H A L I等以介孔二氧化硅为载体,采用交联-包埋相结合的固定化方法制备了包埋交联漆酶聚集体(E-C L E A)[25]㊂相对于游离漆酶,条件优化后的固定化漆酶显示出较好的热稳定性和p H稳定性㊂此外E-C L E A存储21d仍然具有较高的相对活性,在重复使用20次后,其活性保持率可达初始活性的79%㊂对污染废水中苯酚的去除率可达73%[25]㊂1.2.2共固定化酶法共固定化酶是指将多种酶同时固定化在同一载体上的一种方法㊂A R A N A-P EÑA等实现了将5种酶进行逐层固定化的策略,使得整个固定化酶体系的活性明显增强[26]㊂与单一酶的固定化相比,共固定化酶法通常具有更大的优势㊂在保证了固定化后酶稳定性提高的同时,不同酶在共固定后,由于处于58第1期潘虹,等:酶固定化技术的最新研究进展同一载体上,酶之间可以发挥协同作用,且反应底物可以连续在酶之间传递,从而简化了反应步骤㊂G A O等制备了一种化学酶级联反应体系(G A&G O x@A u-S i O2),实现葡萄糖淀粉酶(G A)和葡萄糖氧化酶(G O x)共固定化[27]㊂借助于双酶和载体之间的级联效应,实现了从可溶性淀粉中高效提取葡萄糖酸㊂在保证了固定化双酶稳定性的同时,A u的加入可以使中间产物H2O2快速脱除,显著提高固定化体系的重复利用率㊂类似地,L I U等制备了一种具有可逆热响应释放的双酶固定化体系共固定G O x和辣根过氧化物酶(H R P),在葡萄糖浓度检测过程中表现出优于单酶检测试剂盒的良好性能[28]㊂此外,有学者研究发现,对于如漆酶这种绿色催化剂,较低的氧化还原电位大大限制了其在各个领域中的应用㊂但发现在固定化体系中引入具有高氧化还原电位的介体可以弥补漆酶的这一不足[36]㊂L O U等基于MO F s膜实现了漆酶和介体A B T S的共固定化,结果显示,固定化漆酶的底物亲和力要高于游离漆酶[37]㊂2酶固定化载体用于酶固定化的载体主要包括天然载体㊁人工合成载体和纳米载体,见表2㊂在选择固定化载体时要充分考虑具体的应用领域和需求等㊂表2固定化酶所用载体材料T a b.2 C a r r i e r s f o r i mm o b i l i z e d e n z y m e材料类别载体材料固定化对象固定化方法参考文献天然材料羧甲基纤维素漆酶包埋法[38]琼脂糖脂肪酶吸附法[39]磁性壳聚糖葡萄糖氧化酶共价结合法[40]藻酸盐脱氢酶/蛋白酶吸附法/包埋法[41-42]壳聚糖-黏土复合微球漆酶+介体包埋法[43]海藻酸钠-壳聚糖中性蛋白酶包埋法[44]人工合成材料改性二氧化硅乳酸脱氢酶/碳酸酐酶/甲酸脱氢酶化学交联法/共价结合法[45-47]二氧化钛漆酶吸附法[48]硅酸盐漆酶/葡萄糖氧化酶吸附-共价结合法/吸附法[49-50]氧化铝漆酶共价结合法[51]聚酰胺-胺树枝状大分子脂肪酶化学交联法[52]聚乙烯醇水凝胶-硅胶烯还原酶包埋法[53]二氧化硅-壳聚糖漆酶共价结合法[54]纳米材料磁性纳米粒子漆酶共价结合法[55]金属有机框架MO F s漆酶化学交联法[56]介孔Z I F-8过氧化物酶化学交联法[57]中空微球漆酶吸附法[58]共价有机框架C O F葡萄糖氧化酶+F e3O4吸附法[59]金属酚醛网络M P N酒精脱氢酶吸附法[60]磁性纳米颗粒漆酶+介体A B T S吸附法[61]2.1天然载体材料天然载体最大的优点就是来源广泛㊁低成本和低生物毒性㊂常用的天然载体有纤维素[38]㊁琼脂糖[39]㊁壳聚糖[40]和藻酸盐[41-42]等㊂同时,将天然载体杂化后用于酶固定化可以表现出更优良的固定化能力㊂M E H A N D I A[43]等利用天然载体制备了壳聚糖-黏土复合微球(C C B-L),采用包埋法对漆酶和介体进行共固定㊂微球在洗涤和储存期间均未观察到酶泄漏㊂同时固定化漆酶-介体体系通过填充床反应器系统(P B R S),对纺织废水的脱色率可达78%,C O D㊁B O D以及毒性水平均下降㊂类似地, B A I等将海藻酸钠和壳聚糖交联形成复合凝胶球,采用包埋法固定中性蛋白酶[44]㊂固定化酶在较宽的p H(5~8)和温度(30~80ħ)范围表现出高于游离酶的相对活性,循环使用性和存储稳定性也保持在良好水平㊂68西安工程大学学报第38卷2.2人工合成载体材料2.2.1无机材料无机材料来源广泛㊁合成简单㊁机械强度高,可以直接用于酶的固定㊂常见的无机材料有二氧化硅[45]㊁二氧化钛[48]㊁硅酸盐[49-50]和氧化铝[51]等㊂为了提高固定化效率,常常会先对无机材料进行表面改性再用于固定化㊂Z H A I等使用聚乙烯亚胺(P E I)和多巴胺的共沉积对二氧化硅微球进行改性,用于C O2酶促转化甲酸盐㊂优化后P D A/P E I-S i O2载体使得甲酸盐合成的初始反应速率从13.4倍增加至27.2倍㊂再通过固定化碳酸酐酶(C A)后,甲酸盐的合成速率增加到48.6倍[46]㊂随后,L I U等同样对S i O2微球进行P E I的表面改性后用来固定化甲酸脱氢酶,同样实现了C O2酶促转化甲酸盐的高效合成[47]㊂2.2.2高分子材料人工合成的高分子材料具有良好的结构刚性和其他优良的力学性能㊂如聚酰胺㊁聚乙烯醇等具有良好的固定化能力㊂Z H A O等采用3种胺类试剂将聚酰胺-胺树枝状大分子(P AMAM)接枝到F e3O4纳米粒子上,利用戊二醛作为交联剂得到了不同代数的F e3O4@S i O2/P AMAM磁性纳米载体[52]㊂固定化酶表现出相对游离酶更高的活性,而且改善了其在更宽的p H和温度范围内的耐受性㊂A L A GÖZ等先用聚乙烯醇水凝胶包裹烯还原酶(E R),再固定到氨基官能化的硅胶上㊂包埋后的E R比游离E R的热稳定性高34.4倍㊂在重复使用10次后,固定后的E R仍保持其初始活性的85%[53]㊂2.2.3复合材料针对有机㊁无机材料在实际应用中存在的不足,不少文献报道了将2类材料通过物理或化学手段进行复合得到新型复合材料,可以得到性能更优的固定化载体㊂例如,G I R E L L I等将二氧化硅和壳聚糖杂化得到复合材料,相比单材料拥有更好的机械强度㊁热稳定性及生物相容性㊂存储30d后仍具有大于70%的相对活性㊂对漆酶进行固定化后,固定化率达到92%,在较宽的温度和p H范围内固定化后漆酶表现出的稳定性也要高于游离漆酶,重复循环利用15次剩余活性仍在61%以上[54]㊂2.3纳米材料载体纳米材料凭借其小尺寸㊁高表面积和易改性等特点,成为了酶固定化载体研究的焦点㊂各种改性后的纳米材料也在酶固定化领域得到蓬勃发展㊂2.3.1磁性纳米载体磁性纳米载体是一种可以通过外部磁场实现固定化酶快速分离的良好材料㊂凭借这种磁学性质和低生物毒性[16],其在固定化载体的选择上表现突出㊂F e3O4是被广泛使用的一种磁性材料㊂但由于纯F e3O4自身的表面惰性和高团聚,往往需要对其进行表面改性后再应用于固定化㊂R A N等制备了一种壳核结构的磁性纳米载体F e3O4@M o S2@P E I 用于漆酶固定㊂在二硫化钼(M o S2)和聚乙烯亚胺(P E I)的修饰下,磁性载体拥有较大的比表面积并减弱了自身团聚效应,对漆酶的负载量可达120m g/g,酶活回收率可达90%,同时对于水中持久性致癌有机污染物也表现出了良好的降解效率[55]㊂2.3.2介孔纳米载体介孔材料作为一种多孔材料,凭借多孔结构和大的比表面积,也是酶固定化的理想载体㊂金属有机框架(MO F s)[56]凭借着可调控的孔径和较大的比表面积在酶固定化方面得到广泛应用㊂L I等采用水热法合成氨基官能化的MO F材料制备固定化漆酶,在最优条件下实现了95%的刚果红去除率,6次循环后降解率仍达到84.63%[56]㊂L U等以酵母为生物模板,将Z I F-8自组装到酵母上得到杂合Y@ Z I F-8,再用交联剂固定过氧化物酶得到Y@Z I F-8 @t-C A T㊂固定化酶的温度㊁p H耐受性得到提高,更值得一提的是固定化酶在存储45d后活性仍保持在99%以上[57]㊂除此以外,T A N G等还制备了具有中空结构的共价有机骨架微球(H-C O F-OM e)[58]㊂这种孔缺陷的中空结构有助于加快反应物的扩散,从而改善催化反应过程,对四环素具有优秀的降解效果㊂2.3.3金属纳米载体金属纳米材料由于引入了金属离子,可以提高载体的理化性质,在酶固定化过程中表现出重要作用㊂F U等将F e3+/F e2+固定到纳米花形的共价有机框架(C O F)中实现了固定化酶的磁分离[59]㊂L I 等研究了以磁性F e3O4为核,将单宁酸(T A)与不同类型金属离子(C u㊁F e㊁Z n㊁M n㊁A u)配位获得了用于固定化的金属酚醛网络(M P N)涂层[60]㊂不同金属离子的不同极化能力对M P N涂层的亲水性和疏水性造成影响,从而给酶的固定化效率㊁催化活性78第1期潘虹,等:酶固定化技术的最新研究进展和稳定性带来影响㊂对于漆酶而言,引入C u2+对漆酶的活性中心具有正向的促进作用,可以大大提高固定化漆酶的催化活性和底物亲和力[61]㊂3结论与展望生物酶作为一种极具潜力的生物催化剂,通过固定化技术使其在污染物的降解㊁食品加工㊁生物传感器等诸多领域得到了广泛应用㊂酶固定化技术促使酶在较宽的p H值和温度范围下表现出更优良的催化活性,大大提高了生物酶在敏感环境下的稳定性,实现了生物酶的可分离性及循环使用性㊂但目前看来,酶固定化技术依然存在一些不足㊂1)酶在固定化后,由于载体的存在使得底物扩散受阻,无法与酶充分接触,导致酶活性降低㊂可以通过基因工程技术从酶本身出发,利用定点突变或基因重组改变酶结构来提高酶活㊂同时,通过掺杂合适的单一过渡金属离子或多金属离子协同作用激发酶活也值得深入研究㊂2)目前固定化酶技术在污染物降解等领域的实际应用已经颇为成熟,但对于更深层次的作用机制还停留在较为浅薄的层面㊂在未来,随着生物信息技术的不断发展,将固定化酶技术与计算机模拟技术交叉,利用计算机软件模拟分析更深层次的机制原理,可以更好地掌握酶固定化技术㊂3)酶固定化技术仍处在实验室研究阶段,在实现更大规模的工业化应用仍然存在较大的挑战㊂同时,考虑到有些固定化载体制备的时间成本和资金成本,载体若仅用于一次固定化后就无法回收再利用就会造成过度浪费㊂如何实现固定化酶失活后固定化载体与酶的高效分离,从而实现载体的循环使用是一个新的挑战㊂因此,酶固定化技术仍然处在不断发展进步的阶段,需要更多的科研者来完善研究㊂参考文献(R e f e r e n c e s)[1]刘茹,焦成瑾,杨玲娟,等.酶固定化研究进展[J].食品安全质量检测学报,2021,12(5):1861-1869.L I U R,J I A O C J,Y A N G L J,e t a l.A d v a n c e s o f e n-z y m e i mm o b i l i z a t i o n[J].J o u r n a l o f F o o d S a f e t y&Q u a l i t 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e d l a c c a s e u n d e r m u l t i-m e t h-o d s[J].A d v a n c e d P o w d e r T e c h n o l o g y,2022,33(11):103821.88西安工程大学学报第38卷[13] A C E TÖ,I N A N A N T,A C E T BÖ,e t a l.α-a m y l a s ei mm o b i l i z e d c o m p o s i t e c r y o g e l s:S o m e s t u d i e s o n k i-n e t i c a n d a d s o r p t i o n f a c t o r s[J].A p p l i e d B i o c h e m i s t r ya n d B i o t e c h n o l o g y,2021,193(8):2483-2496.[14] G HA S E M I S,Y O U S E F I M,N I K S E R E S H T A,e t a l.C o v a l e n t b i n d i n g a n d i n s i t u i mm o b i l i z a t i o n o f l i p a s e so n a f l e x i b l e n a n o p o r o u s m a t e r i a l[J].P r o c e s s B i o-c h e m i s t r y,2021,102:92-101.[15] F A N X L,Z HA N G P B,F A N M M,e t a l.E f f e c t o fg l u t a r a l d e h y d e m u l t i p o i n t c o v a l e n t t r e a t m e n t s o n i m-m o b i l i z e d l i p a s e f o r h y d r o l y s i s o f a c i d i f i e d o i l[J].A p-p l i e d B i o c h e m i s t r y a n d B i o t e c h n o l o g y,2023,195(11):6942-6958.[16] C H E N Z H,Y A O J,M A B,e t a l.A r o b u s t b i o c a t a l y s tb a s e d o n l ac c a s e i m m o b i l i z ed s u pe r p a r a m a g n e t i c F e3O4@S i O2-N H2n a n o p a r t i c l e s a n d i t s a p p l i c a t i o n f o r d e g r a-d a t i o n o f c h l o r o p he n o l s[J].C h e m o s p h e r e,2022,291:132727.[17] Q I U X,WA N G Y,X U E Y,e t a l.L a c c a s e i mm o b i l i z e do n m a g n e t i c n a n o p a r t i c l e s m o d i f i e d b y a m i n o-f u n c-t i o n a l i z e d i o n i c l i q u i d v i a d i a l d e h y d e s t a r c h f o r p h e-n o l i c c o m p o u n d s b i o d e g r a d a t i o n[J].C h e m i c a l E n g i-n e e r i n g J o u r n a l,2020,391:123564.[18] O U Y A N G J,P U S J,WA N G J Z,e t a l.E n z y m a t i c h y-d r o l y s a te ofg e n i p o s i d e d i r e c t l y a c t s a s c r o s s-l i n k i n ga g e n t f o r e n z y m e i mm ob i l i z a t i o n[J].P r oc e s s B i o-c h e m i s t r y,2020,99:187-195.[19] D A N I E L L I C,V A N L A N G E N L,B O E S D,e t a l.2,5-F u r a n d i c a r b o x a l d e h y d e a s a b i o-b a s e d c r o s s l i n k i n g a-g e n t r e p l a c i n g g l u t a r a l d e h y d e f o r c o v a l e n t e n z y m ei mm o b i l i z a t i o n[J].R S C A d v a n c e s,2022,12(55):35676-35684.[20] L A T I F A,MA Q B O O L A,S U N K,e t a l.I mm o b i l i z a-t i o n o f t r a m e t e s v e r s i c o l o r l a c c a s e o n C u-a l g i n a t eb e a d s f o r b i oc a t a l y t i cde g r a d a t i o n of b i s p h e n o l A i nw a t e r:O p t i m i z e d i mm o b i l i z a t i o n,d e g r a d a t i o n a n dt o x i c i t y a s s e s s m e n t[J].J o u r n a l o f E n v i r o n m e n t a lC h e m i c a l E n g i n e e r i n g,2022,10(1):107089.[21] N U R A L I Y A H A,P E R D A N I M S,P U T R I D N,e t a l.E f f e c t o f a d d i t i o n a l a m i n o g r o u p t o i m p r o v e t h e p e r f o r m-a n c e o f i m m ob i l i z e d l i p a s e f r o m a s p e r g i l l u s N i g e r b y a d-s o r p t i o n-c r o s s l i n k i n g m e t h o d[J].F r o n t i e r s i n E n e r g yR e s e a r c h,2021,9:616945.[22] N A S E E R S,O U Y A N G J,C H E N X,e t a l.I mm o b i-l i z a t i o n o fβ-g l u c o s i d a s e b y s e l f-c a t a l y s i s a n d c o m-p a r e d t o c r o s s l i n k i n g w i t h g l u t a r a l d e h y d e[J].I n t e r-n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o l o g i c a l M a c r o m o l e c u l e s,2020,154:1490-1495.[23] Z HA N G Z W,Z HA O F,M E N G Y L,e t a l.M i c r o e n-c a p s u l a t i o n o f t h e e n z y m e b r e a k e r b yd o u b l e-l a ye re m b e d d i n g m e t h o d[J].S P E J o u r n a l,2023,28(2):908-916.[24] L OM B A R D I V,T R A N D E M,B A C K M,e t a l.F a c i l ec e l l u l a s e i mm o b i l i s a t i o n o n b i o i n s p i r ed s i l i c a[J].N a n o m a t e r i a l s,2022,12(4):626.[25] F A T H A L I Z,R E Z A E I S,A L I F A R A M A R Z I M,e t a l.C a t a l y t i c p h e n o l r e m o v a l u s i n g e n t r a p p e d c r o s s-l i n k e dl a c c a s e a g g r e g a t e s[J].I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o l o g i c a lM a c r o m o l e c u l e s,2019,122:359-366.[26] A R A N A-P E N A S,R I O S N S,M E N D E Z-S A N C H E ZC,e t a l.C o i mm o b i l i z a t i o n o f d i f f e r e n t l i p a s e s:S i m p l el a y e r b y l a y e r e n z y m e s p a t i a l o r d e r i n g[J].I n t e r n a-t i o n a l J o u r n a l o f B i o l o g i c a l M a c r o m o l e c u l e s,2020,145:856-864.[27] G A O J,WA N G Z F,G U O R R,e t a l.E f f i c i e n t c a s-c ade c o n v e r s i o n of s t a r c h t og l u c o n i c a c i d b y a ch e-m o e n z y m a t i c s y s t e m w i t h c o-i mm o b i l i z e d A u n a n o p-a r t i c l e s a n d e n z y m e s[J].C a t a l y s i s S c i e n c e&T e c h-n o l o g y,2023,13(4):991-999.[28] L I U Z Y,Z HA N G Z,HU A N G C Q,e t a l.I R780-d o pe d c o b a l tf e r r i t e n a n o p a r t i c l e s@p o l y(e t h y l e n eg l y c o l)m i c r o g e l s a s d u a l-e n z y m e i mm o b i l i z e d m i c r o-s y s t e m s:P r e p a r a t i o n s,p h o t o t h e r m a l-r e s p o n s i v e d u a l-e n z y m e r e l e a s e,a n d h i g h l y ef f i c i e n t r e c y c l i n g[J].J o u r n a l o f C o l l o i d a n d I n t e r f a c e S c i e n c e,2023,644:81-94.[29] L I A N G S,WU X L,X I O N G J,e t a l.M e t a l-o r g a n i cf r a m e w o r k s a s n o v e l m a t r i c e s f o r e f f i c i e n t e n z y m ei mm o b i l i z a t i o n:A n u p d a t e r e v i e w[J].C o o r d i n a t i o nC h e m i s t r y R e v i e w s,2020,406:213149.[30]杨月珠,李章良,吕源财,等.漆酶的固定化技术及固定化漆酶载体材料研究进展[J].净水技术,2022,41(9):8-17.Y A N G Y Z,L I Z L,LÜY C,e t a l.R e s e a r c h p r o g r e s s o f l a c c a s e i mm o b i l i z a t i o n t e c h n o l o g y a n d i mm o b i l i z e dl a c c a s e c a r r i e r m a t e r i a l s[J].W a t e r P u r i f i c a t i o n T e c h-n o l o g y,2022,41(9):8-17.(i n C h i n e s e) 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a l.T h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e c r o s s-l i n k e r o nc h i t o s a n-c o a t ed m a g ne t i c n a n o p a r t i c l e s a n d t h e p r o p-e r t i e s of i mm o b i l i z e d p a p a i n[J].M o l e c u l a r B i o t e c h-n o l o g y,2023,65(11):1809-1823.[35]冉帆凡,李露.S B A-15固定化酶的研究进展[J].食品研究与开发,2022,43(20):206-212.R A N F F,L I L.I mm o b i l i z e d e n z y m e o n S B A-15[J].F o o d R e s e a r c h a n d D e v e l o p m e n t,2022,43(20):206-212.(i n C h i n e s e)[36] L I U R T,WA N G S L,HA N M Y,e t a l.C o-i mm o b i-l i z a t i o n o f e l e c t r o n m e d i a t o r a n d l a c c a s e o n t o d i a l d e-h y d e s t a r c h c r o s s-l i n k e d m a g n e t i c c h i t o s a n n a n o m a-t e r i a l s f o r o r g a n i c p o l l u t a n t s'r e m o v a l[J].B i o p r o c e s sa n d B i o s y s t e m s E n g i n e e r i n g,2022,45(12):1955-1966.[37] L O U X X,Z H I F K,S U N X Y,e t a l.C o n s t r u c t i o n o fc o-i mm o b i l i z ed l a c c a se a n d m e d i a t o r b a s e d o n MO F sm e m b r a n e f o r e n h a n c i n g o r g a n i c p o l l u t a n t s r e m o v a l[J].C h e m i c a l E n g i n e e r i n g J o u r n a l,2023,451:138080.[38] Z HA O Z,R E N D J,Z HU A N G M J,e t a l.D e g r a d a t i o no f2,4-D C P b y t h e i mm o b i l i z e d l a c c a s e o n t h e c a r r i e ro f s o d i u m a l g i n a t e-s o d i u m c a r b o x y m e t h y l c e l l u l o s e[J].B i o p r o c e s s a n d B i o s y s t e m s E n g i n e e r i n g,2022,45(10):1739-1751.[39] S IÓD M I A K T,D U L E B A J,H A R A L D S S O N G G,e t a l.T h e s t u d i e s o f s e p h a r o s e-i m m o b i l i z e d l i p a s e s:C o m b i n i n gt e c h n i q u e s f o r t h e e n h a n c e m e n t o f a c t i v i t y a n d t h e r m a ls t a b i l i t y[J].C a t a l y s t s,2023,13(5):887. [40]Y E O N K M,Y O U J,A D H I K A R I M D,e t a l.E n-z y m e-i mm o b i l i z e d c h i t o s a n n a n o p a r t i c l e s a s e n v i r o n-m e n t a l l y f r i e n d l y a n d h i g h l y e f f e c t i v e a n t i m i c r o b i a l a-g e n t s[J].B i o m a c r o m o l e c u l e s,2019,20(7):2477-2485.[41] K U R A Y A M A F,M O H A MM E D B A H A D U R N,F U-R U S A W A T,e t a l.F a c i l e p r e p a r a t i o n o f a m i n o s i l a n e-a l-g i n a t e h y b r i d b e a d s f o r e n z y m e i m m o b i l i z a t i o n:K i n e t i c sa n d e q u i l ib r i u m s t u d i e s[J].I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f B i o-l o g i c a l M a c r o m o l e c u l e s,2020,150:1203-1212. [42] N I N A V A N E S S A W D,L A U R E T T E B L A N D I N E MK,J O N G N E.I n c l u s i o n o f p a r t l y p u r i f i e d p r o t e a s ef r o m A b r u s p r e c a t o r i u s L i n n i n C a-a lg i n a t e g e l b e a d s[J].H e l i y o n,2022,8(11):e11791.[43]M E HA N D I A S,A HMA D S,S HA R MA S C,e t a l.D e c o l o r i z a t i o n a n d d e t o x i f i c a t i o n o f t e x t i l e e f f l u e n t b yi mm o b i l i z e d l a c c a s e-A C S i n t o c h i t o s a n-c l a y c o m p o s-i t e b e a d s u s i n g a p a c k e d b e d r e a c t o r s y s t e m:A n e c o-f r i e n d l y a p p r o a c h[J].J o u r n a l o f W a t e r P r o c e s s E ng i-n e e r i n g,2022,47:102662.[44] B A I Y,WU W.T h e n e u t r a l p r o t e a s e i mm o b i l i z a t i o n:P h y s i c a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f s o d i u m a l g i n a t e-c h i t o s a ng e l b e a d s[J].A p p l i e d B i o c h e m i s t r y a n d B i o t e c h n o l o-g y,2022,194(5):2269-2283.[45] A L A GÖZ D,T O P R A K A,V A R A N N E,e t a l.E f f e c-t i v e i mm o b i l i z a t i o n o f l a c t a t e d e h y d r o g e n a s e o n t om e s o p o r o u s s i l i c a[J].B i o t e c h n o l o g y a n d A p p l i e d B i o-c h e m i s t r y,2022,69(6):2550-2560.[46] Z HA I T T,WA N G C H,G U F J,e t a l.D o p a m i n e/p o l y e t h y l e n i m i n e-m o d i f i e d s i l i c a f o r e n z y m e i mm o b i-l i z a t i o n a n d s t r e n g t h e n i n g o f e n z y m a t i cC O2c o n v e r s i o n[J].A C S S u s t a i n a b l e C h e m i s t r y&E n g i n e e r i n g,2020,8(40):15250-15257.[47] L I U G H,C H E N H X,Z HA O H,e t a l.A c c e l e r a t i n ge l e c t r o e n z y m a t i c C O2r e d u c t i o n b y i mm o b i l i z i n gf o r-m a t e d e h y d r o g e n a s e o n p o l y e t h y l e n i m i n e-m o d i f i e dm e s o p o r o u s s i l i c a[J].A C S S u s t a i n a b l e C h e m i s t r y&E n g i n e e r i n g,2022,10(1):633-644.[48] I S A N A P O N G J,L OHAW E T K,K UMN O R K A E WP.O p t i m i z a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f i mm o b i l i z e dl a c c a s e o n t i t a n i u m d i o x i d e n a n o s t r u c t u r e a n d i t s a p-p l i c a t i o n i n r e m o v a l o f R e m a z o l B r i l l i a n t B l u e R[J].B i o c a t a l y s i s a n d A g r i c u l t u r a l B i o t e c h n o l o g y,2021,37:102186.[49] WA N G Z B,R E N D J,C H E N G Y H,e t a l.I mm o b i-l i z a t i o n o f l a c c a s e o n c h i t o s a n f u n c t i o n a l i z e d h a l l o y s-i t e n a n o t u b e s f o r d e g r a d a t i o n o f B i s p h e n o l A i n a q u e-o u s s o l u t i o n:D e g r a d a t i o n m e c h a n i s m a n d m i n e r a l i z a-t i o n p a t h w a y[J].H e l i y o n,2022,8(7):e09919.[50]Y A O H Q,X I A O R Q,T I A N Y,e t a l.S w i t c h a b l eb i o e l ec t r o c a t a l y s i s o f g l u c o s e o x id a se i mm o b i l i z e d i n-t o m u l t i l a y e r s w i t h l a m e l l a r n a n o p a r t i c l e s o f a m i n o-09西安工程大学学报第38卷。
以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究
以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究郭杰标;郭锐;刘艳华【摘要】目的在Friguent方法基础上建立更加稳定可靠的基于抗原/抗体竞争结合原理的单抗亲和力常数(Kd)检测方法.方法以抗体对抗原进行竞争结合,通过双抗体夹心法检测在一定抗体浓度竞争下抗原的结合率计算Kd值.结果用改良方法在两次不同条件下检测抗IL-8单抗的Kd值分别为:2.61×10-12mol/L和2.39×10-12mol/L,而使用Friguent方法在两次不同条件检测抗IL-8单抗的Kd值分别为:5.57×10-10mol/L和1.41×10-10mol/L.结论相对于Friguent方法,本研究计算出的Kd值更能反映抗原/抗体结合的真实情况,而且在不同实验条件下检测结果重现性强.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2006(026)007【总页数】3页(P1057-1059)【关键词】单克隆抗体;抗原;亲和力常数;酶联免疫吸附检测【作者】郭杰标;郭锐;刘艳华【作者单位】中德生物工程有限公司,江西,南昌,330029;韶关职业病防治院,广东,韶关,512026;韶关学院医学院,广东,韶关,512026【正文语种】中文【中图分类】医药卫生【文献来源】https:///academic-journal-cn_journal-southern-medical-university_thesis/0201244611613.html南方医科大学学报(J S o uth M ed U ni v)· 1 0 57 ．以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究郭杰标 1 ，郭锐 2 ，刘艳华 3 ( 1 中德生物工程有限公司，江西南昌 3 3 0 0 2 9 ；2 韶关职业病防治院，广东韶关 51 2 0 2 6 ： 3 韶关学院医学院，广东韶关 5 1 2 0 2 6)摘要：目的在 F r ig u e n t 方法基础上建立更加稳定可靠的基于抗原／抗体竞争结合原理的单抗亲和力常数 ( K d) 检测方法。
细胞凋亡-DNA Ladder抽提试剂盒
细胞凋亡－DNA Ladder抽提试剂盒产品简介：碧云天生产的细胞凋亡－DNA Ladder抽提试剂盒，是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。
可以非常有效地抽提最小片断为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。
DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。
通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
10M 醋酸铵和TE也可以室温保存。
注意事项：需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 样品收集a) 对于组织样品：切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。
或直接冰浴上匀浆。
b) 对于贴壁细胞：胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
c) 对于悬浮细胞：1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
2. DNA ladder抽提a) 每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。
b) 对于上述收集好的样品，每5毫克组织或者106个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，V ortex混匀，充分裂解组织或细胞。
c) 50℃水浴消化过夜(通常12-20小时皆可)。
d) 加入500微升Tris平衡苯酚。
e) V ortex剧烈混匀，使有机相和水相充分混合，以达到抽提效果。
4℃，12,000g离心5分钟。
f) 缓慢吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次(同步骤e)。
g) 缓慢吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次(同步骤e)。
h) 慢慢吸出约300微升上清液，加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。
聚乙二醇8000对棉铃虫微粒体蛋白沉淀作用的研究
聚乙二醇8000对棉铃虫微粒体蛋白沉淀作用的研究郑明奇;张文吉;邱星辉;冷欣夫【期刊名称】《农药学学报》【年(卷),期】2005(7)1【摘要】为建立棉铃虫Helicoverpa armigera微粒体P450的分离纯化方案,比较了不同浓度下聚乙二醇8000(PEG8000)对棉铃虫幼虫中肠和脂肪体微粒体蛋白的沉淀作用.结果表明,终浓度为8.0×104 mg/L的PEG8000可以使中肠和脂肪体微粒体蛋白的78%沉淀下来,其中包含的细胞色素P450分别占中肠和脂肪体P450总量的28%和34%.SDS-PAGE显示,中肠微粒体经8.0×104 mg/L的PEG8000沉淀后,被沉淀蛋白的分子质量主要集中在14.1 ～ 40 kD和66 ～97 kD范围内.【总页数】4页(P81-84)【关键词】棉铃虫;细胞色素P450;聚乙二醇沉淀【作者】郑明奇;张文吉;邱星辉;冷欣夫【作者单位】中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室;中国农业大学应用化学系【正文语种】中文【中图分类】Q559.9【相关文献】1.四种去垢剂对棉铃虫微粒体细胞色素P450的增溶与变性作用 [J], 郑明奇;张文吉;邱星辉;冷欣夫;何凤琴;李梅2.树豆酮酸A对人肝微粒体中5种常见细胞色素P450酶的体外抑制作用研究 [J], 陈瑞;周维;张丽;朱高峰;黄静;汤磊3.体外培育牛黄及其主要成分对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶作用的体外研究[J], 祖越;李喜平;冯承阳;李为;雷凯;张程亮;任秀华;刘东4.棉铃虫微粒体多功能氧化酶系组分含量及酶活性在不同生长发育阶段的变化规律研究 [J], 邱立红;张文吉;李晓薇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
八氢番茄红素脱氢酶抑制剂类除草剂的研究进展
八氢番茄红素脱氢酶抑制剂类除草剂的研究进展孙林静１ 王 辉２ 张融雪１ 苏京平１ 王胜军１ 佟 卉１ 刘燕清１陈志材２ 李晓莹２ 孙 癑１（１．天津市农作物研究所，天津３００３８４；２．南开大学，天津３０００７３）［摘 要］ 植物类胡萝卜素在光合作用、激素合成和维生素合成方面有着重要作用。
八氢番茄红素脱氢酶（Ｐｈｙｔｏｅｎｅｄｅｓａｔｕ ｒａｓｅ，ＰＤＳ）是类胡萝卜素生物合成途径的重要限速酶，仅在植物中存在。
ＰＤＳ失活能阻断类胡萝卜素生物合成，使得叶片白化，最终导致植物死亡。
以ＰＤＳ为靶标，研究开发了多种高效除草剂。
这类除草剂属于非竞争性抑制ＰＤＳ，并且对动物是安全的。
一些植物因为ＰＤＳ基因突变而产生了对ＰＤＳ抑制剂类除草剂的抗性，就ＰＤＳ的生物学功能、ＰＤＳ抑制剂类除草剂和相关抗性植物研究进展进行总结。
［关键词］ 八氢番茄红素脱氢酶；ＰＤＳ抑制剂类除草剂ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｆＰｈｙｔｏｅｎｅＤｅｓａｔｕｒａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＨｅｒｂｉｃｉｄｅｓＳｕｎＬｉｎｊｉｎｇ１ ＷａｎｇＨｕｉ２ ＺｈａｎｇＲｏｎｇｘｕｅ１ ＳｕＪｉｎｇｐｉｎｇ１ ＷａｎｇＳｈｅｎｇｊｕｎ１ＴｏｎｇＨｕｉ１ ＬｉｕＹａｎｑｉｎｇ１ ＣｈｅｎＺｈｉｃａｉ２ ＬｉＸｉａｏｙｉｎｇ２ ＳｕｎＹｕｅ１（１．ＴｉａｎＪｉｎＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３８４，Ｃｈｉｎａ；２．ＮａｎｋａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７３，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｐｌａｎｔｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｈｏｒｍｏｎｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｖｉｔａｍｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｐｈｙｔｏｅｎｅｄｅｓａｔｕｒａｓｅ（ＰＤＳ）ｉｓａｎｋｅｙｒａｔｅ－ｌｉｍｉｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅｉｎｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐａｔｈｗａｙｏｆｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ，ｗｈｉｃｈｅｘ ｉｓｔｓｏｎｌｙｉｎｐｌａｎｔｓ．ＴｈｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＰＤＳｂｌｏｃｋｓｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ，ｗｈｉｃｈｃａｕｓｅｓｌｅａｆｂｌｅａｃｈｉｎｇａｎｄｕｌｔｉｍａｔｅｌｙｌｅａｄｓｔｏｐｌａｎｔｄｅａｔｈ．ＴａｋｉｎｇＰＤＳａｓｔｈｅｔａｒｇｅｔ，ａｖａｒｉｅｔｙｏｆｈｉｇｈｌｙｅｆｆｅｃｔｉｖｅｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓｗｅｒｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．ＴｈｅｓｅｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓｉｎｈｉｂｉｔＰＤＳｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙａｎｄａｒｅｓａｆｅｆｏｒａｎｉｍａｌｓ．ＳｏｍｅｐｌａｎｔｓｄｅｖｅｌｏｐｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＰＤＳｉｎ ｈｉｂｉｔｏｒｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓｄｕｅｔｏＰＤＳｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｓ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＰＤＳ，ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆＰＤＳｉｎｈｉｂｉｔｏｒｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓａｎｄｒｅｌａｔｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｈｙｔｏｅｎｅｄｅｓａｔｕｒａｓｅ；ｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｓｅａｒｃｈ基金项目：国家重点研发计划（２０１７ＹＦＤ０１００５０５）；转基因重大专项（２０１６ＺＸ０８００１００４－００２）第一作者简介：孙林静（１９７１－），女，黑龙江佳木斯人，天津市农作物研究所杂交粳稻研究中心副研究员，研究方向：水稻育种。
HB-Ⅰa冻干脂质体粒径及其分布的研究
HB-Ⅰa冻干脂质体粒径及其分布的研究
苏树强;华泽钊;丁志华;胡水根;韩林
【期刊名称】《中国医药工业杂志》
【年(卷),期】2004(35)3
【摘要】研究了降温速率、保护剂种类与浓度、复溶溶液对HB-Ⅰa冻干脂质体粒径的影响。
由逆相蒸发法制得的HB-Ⅰa脂质体大多为大单室和多室脂质体,粒径主要分布在1～10mm之间。
约20K/min的降温速率对HB-Ⅰa脂质体冻干较为有利;蔗糖的保护效果较优,甘露醇次之,PVP和甘氨酸相对较差,蔗糖和甘氨酸组成的二元保护剂保护效果较蔗糖更好;缓冲溶液较纯水或蔗糖溶液的复溶效果好。
【总页数】4页(P154-157)
【关键词】糖蛋白;脂质体;冷冻干燥;海洋药物
【作者】苏树强;华泽钊;丁志华;胡水根;韩林
【作者单位】上海理工大学低温医学与食品工程研究所;海军411医院药学专科中心
【正文语种】中文
【中图分类】R944.9;R977.6
【相关文献】
1.冻干保护剂和复水溶液对HB-Ⅰa脂质体包封率的影响 [J], 苏树强;华泽钊;丁志华;胡水根;韩林
2.芦丁脂质体冻干的制备和性能研究 [J], 郑颖;李恩博;朱俊飞;余秀娟
3.制备HB-Ⅰa脂质体的工艺处方研究 [J], 刘娟;胡水根;汪国华;柯乾坤;蔡定国
4.冻干保护剂对HB有效组分脂质体包封率和粒径的影响 [J], 刘娟;胡水根;卞俊;汪国华;柯乾坤
5.冷却方式对冻干脂质体药物的粒径和包封率影响的实验研究 [J], 刘占杰;肖洪海;苏树强;华泽钊
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西达本胺（HBI-8000，Chidamide）研究进展西达本胺(HBI-8000，Chidamide)是一种全新合成的拟申报一类抗肿瘤新药。
化学名称为N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯酰基]氨甲基]苯甲酰胺，离体与整体多种试验模型证实其具有抑制肿瘤作用。
它是一种具有口服生物利用度的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂。
其作用机理为抑制组蛋白去乙酰化酶, 纠正肿瘤细胞基因表达的异常, 进而抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞分化和凋亡。
毒理学试验表明该药的毒性较低, 提示该化合物为有独特作用特点的、毒副反应小的潜在新药。
临床前研究表明, 该药在体内和体外实验中具有显著抗肿瘤作用, 安全性好。
经国家食品药品监督管理局批准, 作为化学药品一类新药进入Ⅰ期临床研究。
西达本胺的临床前有效性和药代动力学特性预示，其临床特性可能优于目前市售或开发中的其他HDAC抑制剂。
西达本胺的优势包括具有口服生物利用度、安全特性、临床初显抗肿瘤活性，因此其安全性和有效性可能均优于其他同类药物。
初步疗效观察表明, 西达本胺对多种实体肿瘤有效。
对其它类型的T 细胞淋巴瘤（NHL）也有效。
并且对B细胞NHL也有一定疗效。
西达本胺对晚期颌下腺腺样囊性癌、软组织肉瘤、乳腺癌、子宫内膜癌和肺癌等也有一定疗效。
总体安全性好, 剂量限制性毒性为消化道反应, 在为数不多的病例中见到了较好的疗效。
西达本胺目前已在中国多家临床研究基地开展针对T 细胞淋巴瘤的Ⅱ/Ⅲ期联合临床研究，显示了良好的疗效和安全性，并即将在中国开展针对肺癌、乳腺癌和前列腺癌的临床研究。
一、药理类型：抗肿瘤药（表观遗传调控剂）。
表观遗传研究的分子基础主要涉及到两个方面：一个是针对DNA 的甲基化修饰，另一个是针对染色质组蛋白的乙酰化修饰。
染色质的组蛋白乙酰化和去乙酰化是调节基因表达的关键环节之一，而两类酶决定着组蛋白的乙酰化程度，即组蛋白乙酰基转移酶（Histone acetyltransferases，HAT）和组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylases，HDAC）。
HAT将乙酰辅酶A的乙酰基部分，转移到染色质核心组蛋白氨基末端上特定赖氨酸（Lys）残基的氨基基团上，从而使氨基上的正电荷被消除，这时DNA分子本身所带有的负电荷有利于DNA 构象的展开，使染色质结构变得松弛。
这种松弛的结构促进了转录因子及其辅助因子与DNA分子的接触，因此组蛋白的乙酰化可以激活特定基因的转录过程。
而HDAC则移去组蛋白Lys残基上的乙酰基，恢复组蛋白的正电性，带正电荷的Lys残基与DNA分子的电性相反，增加了DNA与组蛋白之间的吸引力，染色质结构变得紧密，使转录因子及其辅助因子不易接近转录调控元件，从而抑制基因的转录表达。
HDAC还对非组蛋白蛋白质的乙酰化－去乙酰化过程有着重要影响，包括转录因子、信号传导蛋白、DNA修复酶等等，而这些靶蛋白在基因表达的调控方面起着决定性作用。
总之，通过对组蛋白及非组蛋白乙酰化过程的影响，HDAC在表观遗传调控方面具有极为重要的作用，而这一调控机制的异常，则与肿瘤的发生和发展密切相关，而针对以HDAC这一类影响表观遗传的重要分子靶标开展的小分子药物研发，已经成为国际肿瘤靶向治疗领域的热点之一。
本品为组蛋白去乙酰化酶（Histone Deacetylase，HDAC）亚型选择性抑制剂。
西达本胺通过对与肿瘤表观遗传异常密切相关的I类组蛋白去乙酰化酶HDAC2和3亚型的高度选择性抑制作用，调控患者异常的表观遗传机制，使肿瘤细胞及免疫细胞与增殖、凋亡和分化过程相关的基因表达发生显著变化，从而抑制或杀伤肿瘤细胞；同时，还可能影响免疫细胞与免疫防御和监视功能相关的基因表达，发挥整体抗肿瘤作用。
二、药物介绍1、适应症：皮肤T淋巴细胞瘤（CTCL），外周T细胞淋巴瘤（PTCL），非何杰金氏淋巴瘤（NHL）。
2、剂型规格：本品为白色5mg口服片剂3、用法与用量：口服，综合耐受性和初步疗效试验结果，推荐未来临床试验的服药剂量及间隔为：50mg每周2次或30mg每周3次，一个治疗周期为6周，患者连续服药4周，停药休息2周。
每次服药在早餐后30分钟内以温开水送服。
4、贮藏：密封，在阴凉干燥处保存。
5、包装：固体药用高密度聚乙烯瓶密封包装，50片/瓶。
6、有效期：36个月。
三、药效介绍1、不良反应：根据临床试验的观察，目前认为本品的多数不良反应可以耐受。
患者在服用西达本胺时可能发生的不良反应按照频率由高到低为：消化系统：恶心、呕吐、腹泻、口干、厌食、腹痛、胃肠胀气等；造血系统：白细胞、中性粒细胞、血小板、血红蛋白减少；神经系统：眩晕、失眠、头痛；心血管系统：心悸、胸闷、胸痛；呼吸系统：咳嗽、咳血；泌尿系统：尿常规异常、血尿；其它：发热、乏力；通常这些不良反应均为轻至中度，不影响继续用药，停药后可以恢复。
必要时可进行对症治疗。
2、禁忌：对本品及其成分过敏者禁用。
3、注意事项：因目前还未有相关临床研究提示其安全性，有下列情况者禁用或慎用：妊娠、哺乳期女性；具有临床意义的QT间期延长病史以及室性心动过速（VT），心室颤动（VF）的病人；心脏传导阻滞、心肌梗塞发作（MI）1年内、充血性心力衰竭（CHF）、有症状需药物治疗的冠心病病人；接受器官移植的病人；正在进行其它药物临床试验的病人；有活动性出血或新发生的血栓性疾病以及正在服用抗凝药物的出血倾向病史者；活动性感染者；主要脏器外科手术后未满6周；有症状的肿瘤脑转移病人；精神障碍者/无法获得知情同意者。
4、孕妇及哺乳期妇女用药：目前尚无孕妇及哺乳期妇女使用本品的经验，尚不知孕妇使用西达本胺是否引起胎儿损害或西达本胺是否影响生育能力，但出于安全考虑，除非可能给患者带来的益处大于潜在的危险，不推荐将西达本胺应用于妊娠妇女。
育龄妇女在使用西达本胺的过程中及治疗后的12个月，应采取有效的避孕措施。
尚不清楚西达本胺是否分泌入乳汁，为安全起见，除非可能给患者带来的益处大于潜在的危险，不推荐将西达本胺应用于哺乳期妇女。
5、儿童用药：西达本胺应用于儿童的有效性和安全性尚未确定。
6、老年用药：西达本胺的临床试验者的平均年龄为48岁（18岁~79岁），未发现安全性和药代动力学参数与年龄有明显关系。
应用于老年患者时不需调整剂量。
7、药物相互作用：目前尚无西达本胺与其他药物相互作用的研究资料，西达本胺与化疗药物合用的相互研究也尚未开展。
8、药物过量：目前尚无西达本胺服用过量的临床试验。
如临床上发生此情况，建议与通常处理服用药物过量者的经验相似，采取常规治疗，包括通过洗胃等方式清除消化道内尚未吸收的药物，同时对患者进行临床监护，必要时采取其它对症治疗。
目前未对西达本胺是否可通过透析清除进行研究。
四、基础研究实验及结论：对Lovo细胞系和HT-29细胞系分别用Chidamide处理，结果如下图所示：图A为Chidamide分子结构图图B 为Lovo细胞系和HT-29细胞系分别用Chidamide处理后H3乙酰化程度的western图，通过与β-actin对照，可知H3乙酰化程度随时间增加，因此，可知Chidamide有效的促进了H-3乙酰化程度。
图C 为Lovo细胞系和HT-29细胞系经过不同浓度的Chidamide处理后细胞抑制率图，由图可知，细胞抑制率均随时间增加，且随着Chidamide浓度的增加，细胞抑制率也在增加，32μM和72小时细胞抑制率最大。
下列组图为两种细胞系经Chidamide处理后流式、电镜及western图图A为两种细胞经Chidamide处理后流式图，由图可知，细胞周期均阻滞在G0/G1期，且随Chidamide浓度的增加，凋亡峰越明显，细胞被阻滞的数目越多。
图B 为两种细胞经Chidamide处理后细胞凋亡率图，由图可知，随Chidamide浓度的增加，细胞凋亡率也在增加。
图C 为两种细胞经8µM的Chidamide处理后透射电镜图，可知两种细胞均出现明显的凋亡特征。
图D 为两种细胞经Chidamide处理后Caspase-3和PARP（为一种DNA损伤修复蛋白，116kDa 为其前体，85kDa为激活物形式，DNA损伤程度越高，PARP表达量越大）表达western图。
由图可知，Caspase-3和PARP表达量均随Chidamide浓度的增加而增加。
由以上数据，我们可以得知，Chidamide是一种有效的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，它能有效的抑制肿瘤细胞的增殖，同时促进肿瘤细胞的凋亡，为其抗肿瘤临床研究提供数据基础。
五、I期临床试验及其结果已完成的I期临床试验研究的主要目的是观察药物的耐受性和安全性，确定人体最大耐受剂量，为确定后期临床推荐剂量提供依据；次要目的是观察药物可能的疗效，为后期临床适应症的选择提供参考；同时开展伴随的人体药代动力学和药效学研究，为临床耐受性和疗效结果的合理解释提供依据。
此研究总共入组31例晚期复发或难治性多种实体瘤和恶性淋巴瘤病人。
病人均为入组前已接受手术切除或放化疗失败者，实体瘤均伴有远处转移，淋巴瘤均为临床IV期。
病人分别口服西达本胺5mg/次、10mg/次、17.5mg/次、25mg/次、32.5mg/次、50.0mg/次每周服药两次、连续服药4周、停药2周为一个周期。
还有部分病人每周服药3次，剂量分别为32.5mg和50mg。
（如表1所示）每周2次组有9例患者因肿瘤获得PR（病情缓解）或SD（病情无进展）, 分别接受2 ~ 6个周期治疗。
在延长治疗中有3例出现I度心悸和气短, 未见其他有临床意义的不良反应。
（如表2所示）50 mg每周3次组的前2例患者分别出现III度腹泻和呕吐,考虑为DLT（剂量限制毒性）;将给药剂量降低到32. 5 mg /次, 每周3次, 7例受试者未见定义为DLT的不良反应。
考虑每周3次, 50 m g /次的给药方案为M TD。
（如表3所示）在初步疗效方面，入组的31例病人中，对25例基线有可测量病灶并可评价疗效的患者进行了初步的疗效评价，其中出现PR反应者为5例，SD反应者11例。
5例PR病人中有4例为NHL（非霍奇金氏淋巴瘤）病人，占入组8例淋巴瘤病人的50%，其中又有4例为T细胞NHL，占入组的5例T细胞淋巴瘤病人的80%。
1例皮肤T细胞型淋巴瘤IVa期病人用药达5个周期，缓解期超过133天，另一例IVb期T细胞NHL病人，总计用药4个疗程，缓解期达126天。
其余两例为弥漫大B细胞性非霍奇金淋巴瘤（Diffuse Large B-cell lymphoma，DLBCL）者治疗后获得SD；（如表4所示）可知西达本胺的最大耐受剂量为32.5mg（每周给药3次），或可能为50mg（每周给药2次），每周总剂量≤100mg；伏林司他Vorinostat，第一个FDA批准的泛HDAC抑制剂，在复发转移的CTCL中有效率30％，正在PTCL中进行临床试验【21捌。