高中生物选修一___复习与回顾 2

（2）干热灭菌：玻璃器皿、金属用具
（3）高压蒸气灭菌：培养基、无菌水
三、微生物培养技术
1、步骤： （1）配制培养基 （2）灭菌：高压蒸气灭菌
（3）倒平板：把培养基分装培养皿
（4）接种：分散菌种、形成菌落
方法：平板划线法、稀释涂布平板法
2、应用： (1)土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 [1]选择培养基：氮源--尿素 [2]步骤：土壤溶液→稀释→ 接种→菌落计数
如图所示的接种方法 为 平板划线法 ，在此接种过程中 接种环在火焰上灼烧 5 次。
一、培养基：
1、概念：微生物生长的营养物质
2、成分：水、无机盐、碳源、氮源
3、种类：液体培养基、固体培养基（琼脂） 4、选择培养基：
青霉素培养基：杀细菌、留真菌
二、无菌技术
1、消毒：温和方法杀死表面部分有害微生物 巴氏消毒、煮沸、药剂、（如：75%酒精）、 紫外线 2、灭菌：强烈方法杀死一切微生物、孢子和芽孢 （1）灼烧灭菌：接种环、试管口
2、作用：分解污渍（蛋白质、脂肪、淀粉、纤维素）
3、酶制剂：用特殊化学物质包裹酶，使之耐酸碱、耐高 温、忍受表面活性剂
三、固定化酶
1、原理：把酶固定在不溶水的载体上，易于催 化回收、重复使用 2、高果糖浆生产：
（1）原理：葡萄糖→果糖（葡萄糖异构酶）
（2）固定化酶：酶固定在载体上、装入反应柱
（3）生产过程：上端注入葡萄糖，柱内酶催化， 下端生产果糖浆
1.选取的水稻花药应为①期，此时细胞核由中央移向细 胞一侧，花药培养成功率最高． 2.通过花药培养产生单倍体植株一般有两种途径：一种 是花粉通过②阶段发育为植株，另一种是在诱导培养基上先 形成③再将其诱导分化成植株． 3.试管苗形成过程中，必须从培养基中获得无机盐或矿 质元素和小分子有机物质等营养物质．要促进花粉细胞分裂 和生长，培养基中应有④和⑤两类激素
例：几个有关萃取的问题：
（1）萃取剂可分为 水溶性
和 水不溶性
两种。
(2)萃取的效率主要取决于 萃取剂的性质和使用量 。后 受 原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等
条件的影响。
(3)萃取过程中，第一步需 将胡萝卜进行粉碎和干燥 ， 以提高萃取效率。因为 有机溶剂都是易燃物 ，所以应避免 明火加热，而采用水浴加热的方法。通过加热处理，β-胡萝 卜素溶解在萃取液中；再经 过滤 得到萃取液；经过 蒸馏 后，
（3）配海藻酸钠溶液：0.7g海藻酸钠10ml水
（4）海液与酵母细胞混合成A液（吸入注射器）
（5）固定化酵母细胞：把A液滴入CaCl2形成凝胶珠
（6）冲洗凝胶珠（蒸馏水）
（7）酒精发酵：凝胶珠+葡萄糖液→酒精（25度）
专题5
DNA和蛋白质技术
DNA的粗提取与鉴定
一、实验原理 1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细 胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。 2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度 的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14 mol／L 的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使 溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶 于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少 的DNA。 4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺 可以作为鉴定DNA的试剂。
小分子肽、氨基酸、甘油、脂肪酸 3、流程：
豆腐长毛→加盐腌制→瓶装卤汤→密封腌制 4、盐与酒精：抑制微生物生长
实例：就腐乳制作回答下列问题： 1．腐乳制作有多种微生物参与，其中起主要 作用的是①。 2．豆腐发酵主要利用了微生物产生的②，通 过发酵，豆腐中营养物质的种类③，且更易于消化和 吸收。 3．在腐乳制作过程中，抑制微生物的物质有 盐、④ 、⑤等。 4．含水量为⑥左右的豆腐适于制作腐乳，若 你完成了腐乳制作，可以从⑦等方面评价乳腐的质量。
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4· 7H2O
1.4 g 2.1 g 0.2 g
葡萄糖
尿素 琼脂
10 g
1 g 15 g
将上述物质溶解后，用蒸馏 水定容到100 mL
（4）转为固体培养基时，常 稀释涂布平板法或平板划线法 的方法接种. （5）下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿，②玻棒、试管、锥 形瓶和吸管，③实验操作者的双手。其中需 要灭菌的是： ①和② ；需要消毒的是： ③ （6）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个 菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能 ①②③ 有 （填序号） ①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 （7）实验结束后，使用过的培养基应该进行 灭菌 处理后，才能倒掉。
①毛霉 ⑤香辛料 ②蛋白酶等酶类 ⑥70％ ③增多 ④酒 ⑦色泽、口味、块形等
四、泡菜制作
1、乳酸菌：原核、分裂生殖、异养厌氧（严格） 2、原理：C6H12O6→2C3H6O3+2ATP 3、流程：菜叶、盐水、装坛、密闭 4、测定亚硝酸盐：NO2-+对氨基苯磺酸→玫瑰红
专题2：微生物的培养与应用
提取方法：
1、水蒸气蒸馏法：水蒸气+芳香油→混合物→油层和水层 玫瑰精油：玫瑰花+清水→乳浊液 NaCl：促进乳化液分层；无水Na2SO4：除水 2、萃取法：芳香油+有机溶剂→溶液→芳香油（去溶剂） 胡萝卜素：橙黄色、易溶石油醚
水浴加热→萃取液→蒸发溶剂→胡萝卜素
3、压榨法：浸泡、漂洗、压榨、过滤、静置 橘皮精油：石灰水浸泡、NaHCO3、Na2SO4 促进油水分离
二、PCR技术
1、反应体系：
（1）模板、原料、酶、ATP、缓冲液
（2）耐高温的DNA聚合酶（Taq酶） （3）引物：一小段DNA或RNA 2、过程： （1）变性：95℃DNA解旋
（2）复性：55℃引物与模板配对
（3）延伸：72℃合成子链
例：PCR技术(多聚酶链式反应) 在DNA半保留复制的前提下， 利用热变性原理，在试管中进行DNA的人工复制。很短的时 间内，将DNA大量扩增，使实验室所需要的遗传物质不再受 限于活的生物体。 (1)PCR每次循环可分为 变性 、 复性 、 延伸 三个步骤。 (2)当温度降低时，引物与模板 3’ 端结合，在DNA聚合酶 的作用下，引物沿模板延伸，最终合成两DNA分子，此过程 中原料是四种脱氧核苷酸 ，遵循的原则是碱基互补配对原则 。 (3)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶外以至 少还需要三个条件，即：液体环境、适宜的 温度 、 酸碱度， 前者由PCR仪自动调控，后者则靠 缓冲液 维持。 (4)DNA的复制需要引物，其主要原因 是 DNA聚合酶只能从3’端延伸DNA链 。
专题3
植物的组织培养技术
一、菊花组织的培养
1、原理：植物细胞的全能性 2、步骤：（1）制备MS固体培养基（灭菌） 无机盐、维生素、蔗糖、激素 （2）外植体消毒（未开花新生侧枝）
（3）接种、培养、移栽
脱分化--愈伤组织--再分化--从芽--诱导生根
PH5.8、温度18-22、每日光照12h
二、月季花药培养
溢出
（5）甲装置中，A液体是 萄葡汁 _____ ，NaHCO3溶液的作用 是 吸收酵母菌酒精发酵产生的CO2 ；
若用乙装置，在发酵过程中，必须进行的操作 是 每隔12小时左右（一定的时间）将瓶盖拧松一次 。与乙装置相 ，又能减少被 比，甲装置的优点是 既能及时吸收（发酵产生的）CO2 。
杂菌污染的机会
（2）土壤中分解纤维素的微生物的分离 [1]选择培养基：碳源--纤维素 [2]原理：纤维素→ 纤维二糖→ 葡萄糖 C1酶、CX酶 葡萄糖苷酶 纤维素+刚果红→红色物→纤分解→透明圈
实例：分解尿素的细菌的分离与计数
（1）右表所示的培养基不能用于植物组织培养 的理由是 缺少植物激素 。 （2）培养基中加入尿素的目的是筛选 目的菌 。 （3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来 尿素 葡萄糖 自培养基中的 和 ，实验需要振荡 培养，原因是 为目的菌提供氧气 。
三、血红蛋白的提取和分离
1、提取：
（1）红细胞的洗涤：生理盐水--除杂蛋白 （2）血红蛋白的释放：蒸馏水--40%甲苯 （3）分离血红蛋白溶液：离心分层 第3层红色透明液体 （4）透析：磷酸缓冲液除杂（离子小分子） 维持血红蛋白正常特性
2、分离：（1）凝胶色谱法
原理：根据分子量大小分离蛋白质 不同蛋白质通过多孔凝胶通道时： →大分子路程短、流动快→先收集 →小分子路程长、流动慢→后收集 （2）电技术实践》 回顾与反思
专题一
一、果酒制作
传统发酵技术的应用
1、酵母菌：真菌、出芽生殖、异养、兼性厌氧、20度
2、原理：C6H12O6→2C2H5OH+2CO2 3、流程：选果→冲洗→榨汁→发酵→酒精 4、检验：酸性条件酒精遇重铬酸钾呈灰绿色
二、果醋制作
1、醋酸菌：原核、分裂生殖、异养需氧、30度 2、原理：（1）C6H12O6+2O2→2CH3COOH+2CO2+H2O （2）C6H12O6→2C2H5OH+2CO2 C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O 3、流程：选果榨汁→酒精发酵→醋酸发酵
四、固定化细胞 1、概念： 固定化酶和固定化细胞是利用理化方 法，把酶或细胞固定在一定空间内发 挥作用的技术。 2、方法： （1）包埋法：包埋在多孔载体里 （2）化学结合法：结合到载体上 （3）物理吸附法：吸附到载体表面
3、固定化酵母细胞
（1）酵母细胞活化：1g干酵母10ml水
（2）配制CaCl2溶液：0.05M
置相当于多孔板的结构可由 尼龙网和尼龙纱 替代。
(3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因 是 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序．降低分离效果 。