植物根系活力的测定
试验一植物根系活力的测定
植物生理学实验指导书指导老师马红亮福建师范大学地理科学学院生态系实验一植物根系活力的测定（α-萘胺氧化法）植物根系的作用，主要有(1)对地上部的支持和固定；(2)物质的贮藏；(3)对水分和盐类的吸收；(4)合成氨基酸、激素等物质。
因此根系的活力是植物生长的重要生理指标之一。
一、实验目的通过实验，掌握用α－萘胺法测定植物根系活力的原理和技术。
二、实验原理植物的根系能氧化吸附在根表面的α─萘胺，生成红色的α—羟基—1—萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色，其反应如下：根对α-萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。
日本人相见、松中等认为α-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的催化作用，该酶的活力愈强，对α—萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。
所以，可根据染色深浅定性地判断根的活力；也可测定溶液中未被氧化的α-萘胺量，计算已被氧化的α-萘胺量确定根系活力的大小。
在酸性环境中对氨基苯磺酸与亚硝酸盐先反应，再和α-萘胺作用生成红色的偶氮染料，可在510nm比色测定α-萘胺含量。
其反应如上。
三、实验仪器药品分光光度计，分析天平，烘箱，三角烧瓶，量筒，移液管，刻度试管Α-萘胺溶液：称10mg α-萘胺，先用2ml左右的95%酒精溶解，然后加水到200ml，成50μg/ml的溶液。
0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0（见附表2）A液：0.2mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O 27. 8g配成1000ml）。
B液：0.2mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O53.65g或Na2HPO4·12H2O71.7g 配成1000ml）。
用时取A液39ml，B液61ml混合，稀释至200ml即成。
1%对氨基苯磺酸：将1g对氨基苯磺酸溶解于100ml 30%的醋酸溶液中。
亚硝酸钠溶液：称10mg亚硝酸钠溶于100ml水中。
四、实验操作步骤定量测定(1) 挖出水稻植株，并用水洗净根系上的泥土，剪下它的根系，再用水洗，待洗净后用滤纸吸去根表面的水分，称根称2g根放在100ml三角烧瓶中。
根系活力的测定
定容至25 定容至 ml
转红色
分光光度计510nm读A值（终点数值） 读 值 终点数值） 分光光度计
A处理： 处理： 处理 B处理： 处理： 处理 4. 计算
始点数值 始点数值
终点数值 － 终点数值 ＝ 自动氧化数值
被氧化的α－ FWhr) = 被氧化的 －萘胺 量（g /g FW (始点浓度－自动氧化浓度－终点浓度）×25ml / 2g 1hr 始点浓度－自动氧化浓度－终点浓度） 始点浓度
加水10ml 加水
加 NaNO2 1ml
放置5min 放置
20～60min内 内
定容至25 定容至 ml
转红色
分光光度计510nm读A值（始点数值） 读 值 始点数值） 分光光度计
3. 取完 取完2ml后，三只三角瓶立即置 ℃氧化 后 三只三角瓶立即置25℃氧化1hr后，同2测定 后 测定 对氨基苯磺酸 1ml 2. 各取 各取2ml溶液至 溶液至25ml容量瓶 溶液至 容量瓶 加水10ml 加水 加 NaNO2 1ml
洗净 加入
α－萘胺 25ml － 磷酸缓冲液 25ml
A处理：各取2g根 处理：各取 根 处理
吸干
三角瓶中
根浸没
静置10min 静置
加入
B处理： 三角瓶 处理： 处理
α－萘胺 25ml － 磷酸缓冲液 25ml
静置10min 静置 对氨基苯磺酸 1ml
2. 各取 各取2ml溶液至 溶液至25ml容量瓶 溶液至 容量瓶
α － 萘胺的标准曲线 1.4 1.2 1 A值 0.8 0.6 0.4 0.2 0 5 10 15 20 25 30 萘胺浓度( ug/ ml) α － 萘胺浓度 ( ug / ml )
根系活力的测定实验报告
根系活力的测定实验报告
《根系活力的测定实验报告》
根系是植物的重要器官之一，它承担着吸收水分和养分的功能，同时也是植物生长的重要支撑。
因此，了解根系活力对于研究植物生长发育具有重要意义。
为了深入了解根系活力的测定方法，我们进行了一项实验。
实验方法：
1. 实验材料：本实验选取了小麦种子作为实验材料。
2. 实验步骤：
a. 将一定数量的小麦种子放入含有适量水的培养皿中，让其在恒温恒湿的条件下进行发芽。
b. 在小麦种子发芽后，选取相同大小的小麦幼苗，将其根系放入适量的生理盐水中浸泡一段时间。
c. 将浸泡后的小麦根系取出，用酒精进行漂白处理，然后将其放入含有适量三氧化二砷的溶液中浸泡。
d. 观察小麦根系的活力情况，并记录下根系的长度、数量和形态等数据。
实验结果：
经过实验测定，我们得到了小麦根系的活力数据。
通过对比实验前后小麦根系的长度、数量和形态等数据，我们可以清晰地了解到小麦根系的生长情况。
在实验中，我们发现浸泡后的小麦根系长度有所增加，数量也有所增加，形态也更加健康。
实验结论：
通过本次实验，我们成功测定了小麦根系的活力情况。
根据实验结果，我们可
以得出结论：浸泡处理可以促进小麦根系的生长，增强其活力。
这为我们进一步研究植物生长发育提供了重要的参考依据。
总结：
根系活力的测定是研究植物生长发育的重要手段之一，通过实验测定，我们可以了解根系的生长情况，为进一步研究提供重要数据支持。
希望本次实验结果能够对相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
根系活力测定
➢ 计算：
• 四氮唑还原强度=四氮唑还原量（g）/根重 （g）.时间（h）
• TTC还原速率=TTC还原量（g）/根重（g）. 时间（h）
• 回归方程单位？及计算单位？
2. Evans blue straining
定性观察： A、B两组分别取6个根段（均匀 一致）放入15ml试管中（标号为EA1、EB1）， 加入6ml 0.125％ Evans blue 染色液，染色 15min，将Evans blue 倾倒回公用烧杯（回 收），随后用纯水洗净根系表面色素，分别选 取2条根在体式显微镜下观察（C1007）
影响反应的准确性。
8. 二种反应最好定容：25ml容量瓶。 9. 参考{植物生理生化实验 58.84057/4062 袁晓华}；
{植物生理学实验指导 58.843057/2244 山东科技出 版}；{植物生理学实验指导 58.843057/1243 华东 师大} 10. TTC法测定的为过氧化氢酶活性 11. 萘胺 Y=90X+0.76 r=0.999 12. TTF可以用乙酸乙酯研磨法或甲醇、乙醇、二甲基亚 砜浸提法（5h）
果酸得到加强。而被丙二酸、碘乙酸所严重抑制。
5. TTC又名红氮四唑，标准氧化还原电位为-80mv。 6.三苯基甲腙（TTF triphenyl formazan）红色 7. TTC是用HCl配制的，当它溶于水中，PH为3~5，因此要
加入等体积的0.1M pH7.5的磷酸缓冲液（该实验用的为 /15）。这样反应液的pH为6.8左右。如不用，TTC反应 液过酸，会杀死根。另外TTC加磷酸缓冲液后要避光，最 好临时配制使用，在暗处保存时间要短。否则见光会变红，
B），加入40ppm -萘胺法和磷酸缓冲液的等量混合
植物根系活力的测定方法 ( TTC 法)
实验 5 植物根系活力的测定（ TTC 法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（ TTF ），生成的三苯甲（ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（ Na 2 S 2 O 4 ，分析纯），粉末。
3. 1 ％ TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0 g ，溶于少量水中，定容到 100 mL 。
用时稀释至需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（ 1/15 mol/L ， pH7.0 ）。
5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL ，边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL 。
6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72 g ，溶于水中，定容至 100 mL 即成。
（三）仪器设备小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管： 0.5 mL 1 支、 10 mL 1 支、 5 mL 3 支，刻度试管 6 支，分光光度计，分析天平（感量 0.1 mg ），电子顶载天平（感量 0.1 g ），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤1. 定性测定（ 1 ）配制反应液把 1 ％ TTC 溶液、 0.4 mol ／ L 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。
ttc法测定根系活力实验报告
ttc法测定根系活力实验报告实验目的：本实验旨在通过使用TTC法测定根系活力，探究不同处理对植物根系活力的影响，从而了解植物根系的生理状态和适应能力。
实验材料和方法：材料：1. 小麦种子2. TTC（三唑化合物）3. 无菌蒸馏水4. 无菌培养皿5. 无菌培养基方法：1. 将小麦种子用无菌蒸馏水浸泡一夜，使其吸水膨胀。
2. 将无菌培养皿分为两组，每组放置10颗小麦种子。
3. 在一组培养皿中加入无菌蒸馏水作为对照组，另一组培养皿中加入含有TTC 的无菌培养基。
4. 将培养皿放置在恒温箱中，温度设定为适宜小麦生长的温度。
5. 观察培养皿中小麦种子的发芽情况，并记录下发芽数。
6. 在培养结束后，取出小麦种子，用无菌蒸馏水洗净表面的TTC。
7. 将小麦种子放入95%乙醇中煮沸5分钟，使其脱色。
8. 取出小麦种子，用无菌蒸馏水冲洗干净，然后用滤纸吸干水分。
9. 将小麦种子放入无菌培养皿中，加入无菌蒸馏水，使其吸水膨胀。
10. 用显微镜观察小麦种子根系的颜色变化，并记录下来。
实验结果：通过实验观察，发现加入TTC的培养皿中的小麦种子发芽数量明显较少，而对照组的发芽数量较多。
在观察小麦种子根系颜色时，发现加入TTC的培养皿中的小麦种子根系呈现红色，而对照组的小麦种子根系呈现白色。
实验分析：TTC法通过检测细胞内的还原酶活性来间接反映细胞的活力。
在本实验中，加入TTC的培养皿中的小麦种子根系发芽数量较少，根系呈现红色，说明这些小麦种子的根系活力较低。
而对照组中的小麦种子根系发芽数量较多，根系呈现白色，说明这些小麦种子的根系活力较高。
根系活力的差异可能是由于TTC对细胞内酶的影响。
TTC在细胞内被还原为可溶性产物，产生红色的沉淀物。
这种还原反应需要细胞内的还原酶参与，而还原酶的活性与细胞的代谢活力密切相关。
因此，加入TTC的培养皿中小麦种子的根系活力较低，表明这些小麦种子的代谢活力较弱。
结论：通过TTC法测定根系活力的实验，我们得出了加入TTC的培养皿中小麦种子的根系活力较低，而对照组的小麦种子根系活力较高的结论。
根系活力的测定
根系活力的测定（TTC法）植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的生长和营养状况及产量水本。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂（一）材料：水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 分析天平（感量）；3. 电子顶载天平（感量0.1g）；4. 温箱；5. 研钵；6. 三角瓶50ml；7. 漏斗；8. 量筒100ml；9. 吸量管10ml；10. 刻度试管10ml；11. 试管架；12. 容量瓶10ml；13. 药勺；14. 石英砂适量；15. 烧杯10ml、1000ml。
（三）试剂：1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4），分析纯，粉末。
％TTC溶液准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。
定容到100ml。
用时稀释至各需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。
5. 1mol/L硫酸用量筒取比重的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。
6. 0.4mol/L琥珀酸称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。
三、实验步骤（1）TTC标准曲线的制作取％TTC溶液放入10ml量瓶中，加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。
再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。
然后分别取此液、、、、置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
ttc法根系活力标准曲线
ttc法根系活力标准曲线
ttc法（氯化三苯基四氮唑法）是一种测定植物根系活力的方法。
标准曲线是实验中用于计算根系活力的基础，它通过测定不同浓度的ttc 溶液与植物根系的还原反应，得出一个标准曲线，从而推算出植物根系的活力。
以下是ttc法根系活力标准曲线的一个示例：
1. 配制不同浓度的ttc溶液，如0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%等。
2. 取植物根系样品，分别放入不同浓度的TTC溶液中，保持在适当的温度和光照条件下。
3. 经过一定时间后（如1小时），取出根系样品，用滤纸吸干表面水分。
4. 测定根系样品在485nm波长下的吸光度，记录下各浓度点的吸光度值。
5. 将吸光度值与ttc浓度绘制在坐标轴上，得到标准曲线。
总结，通过绘制标准曲线，可以找出植物根系活力与ttc浓度之间的关系，从而更准确地计算植物根系的活力。
在实际操作中，可以根据实验需要适当调整ttc溶液的浓度范围和实验时间。
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植物根系活力的测定
实验5植物根系活力的测定（TTC法）
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。
本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式：
生成的三苯甲（TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂
1.乙酸乙酯（分析纯）。
2.次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。
3.1％TTC溶液：准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100mL用时稀释至需要的浓度。
4.磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7.0）。
5.1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边加入盛
有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL
6.0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL即成。
（三）仪器设备
小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5mL1支、10mL1支、5mL3支，
刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1mg），电子顶载天平
（感量0.1g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤
1.定性测定
（1）配制反应液把1％TTC溶液、0.4mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液
按1:5:4比例混合。
（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
2.定量测定
（1）TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2mL放入大试管中，加9.8mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则立即产生红色的TTF此
溶液浓度为每毫升含有TTF80μg分别取此溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL置10mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含
TTF20μg、40μg、80μg、120μg、160μg的系列标准溶液，以乙酸乙
酯作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
（2）称取根尖样品0.5g，放入小烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷
酸缓冲液（pH7.0）各5mL，使根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温
1～2h，此后立即加入1mol/L硫酸2mL，以停止反应。
（与此同时做一空
白实验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。
（3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3～4mL，充分研磨，以提出TTF把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把
残渣洗涤2～3次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10mL，用
分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准
曲线，即可求出TTC还原量。
四、结果计算
根系活力
=
式中：C——四氮唑还原量，μg[mgTTF/（g·h）]
W——根重，g
h——时间，h
[思考题]
为什么要测定根系活力植物的根与地上部分有何关系。