梅毒甲苯胺红不加热血清试验保准操作规程
梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）
1.原理
采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液，在白色卡片上进行试验，检测血清或血浆中反应素。可作为梅毒病人的诊断和疗效参考。
2.标本采集
标本采集前病人准备：受检者应空腹。
标本种类：血清
标本要求：采集静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：待测样本在2–8℃不超过48小时，-20℃不超过三个月，-70℃以下长期保存。应避免反复冻融。
4. 标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血标本不能作测定。
6.试剂
试剂名称：梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂盒
试剂生产厂家：上海荣盛生物技术有限公司
包装规格：120人份
试剂组成：
6.4.1 TRUST抗原悬液×1瓶
6.4.2 阳性对照血清1m×1支
6.4.3 阴性对照血清1m×1支
6.5.4 试验专用卡片120人份
6.5.5 专用滴管及针头1套
6.5.6 使用说明书1份
试剂储存条件及有效期：保存于2-8℃，有效期1年。
7.操作步骤
定性试验：
7.1.1 分别吸取50微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。
7.1.2 取待检血清50微升（不需灭活）置于纸卡的另一圆圈中。
7.1.3 用专用滴管及针头垂直分别滴加TRUST试剂1滴于上述血清中。
7.1.4 按每分钟100转摇动8分钟，肉眼观察结果。
定量试验
将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后按上述定性方法进行试验，以呈现明显凝集反
应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。
8.结果判断
阳性反应（+++～++++）：可见中等或较大的红色凝聚物。
弱阳性反应（+～++）：可见较小的红色凝聚物。
阴性反应（－）：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物。
9.临床意义
TRUST阳性为诊断梅毒的筛选试验。
10.参考范围：阴性
11.质量控制：
每次试验均应做阴性和阳性对照，阴性对照不出现凝聚物，阳性对照出现明显凝聚物；同时应以2NCU/ml含量的梅毒抗体质控血清试验，应出现可见凝聚物。
12.操作性能：快速简便、灵敏度高，重复性好。
13.方法局限性：该方法特异性有限，只能用作诊断梅毒的筛选试验。
14.注意事项：
本试验在23~29℃条件下进行。
试剂使用前应充分摇匀。
本试验系非特异性反应，需结合临床进行综合分析，必要时需作梅毒螺旋体抗体特异性试验。
15.参考文献：
中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）433-434页。
梅毒血清学检测策略
1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验： ? 原理：梅毒螺旋体破坏宿主细胞释放以及其螺旋体细胞表面释放的类脂物质，刺激机体产生抗类脂抗体（反应素）。在体外该抗体与心磷脂、卵磷脂和胆固醇组成的抗原反应，形成凝集反应。?方法：VDRL (venereal disease research laboratory test) USR (unheated serum reagin test ) RPR (rapid plasma reagin circle card test) TRUST (tolulized red unheated serum test)特点：非特异性反应， 一、梅毒血清试验 2、梅毒螺旋体抗原血清试验 基于TP特异性抗原，检测TP抗体
TPPA TPPA 物，荧光镜下，TP呈苹果绿色荧光。 阴性 弱阳性 阳性 图18-1 TP抗体酶联免疫法试验 双抗原夹心一步法原理 图18-2 TP抗体酶联免疫法试验 双抗原夹心二步法原理
?电化学发光(ECLIA)免疫检测原理 亲和素 5）TP-RT胶体金法： ?临床：用于梅毒筛查 ?注意： 高敏感性，特异较？
特异性总抗体 特异性IgG 抗体特异性IgM 抗体 5-7周 反应素 抗体变化规律
Comparison of three syphilis serodiagnosis algorithms and clinical 665 RPR-/TPPA+ patients were excluded from positive serodiagnosis due to a missed diagnosis rate of 24.2% (665/2,749). Man-Li Tong, et al. Analysis of three algorithms for syphilis serodiagnosis and implications for clinical management. Clinical Infectious Diseases 2014;58:1115-1124 . The traditional algorithm ?One lab ： ?98%EIA +/PRP+→ ?TP-PA+ ?CDC. Discordant results from reverse sequence syphilis screening--five laboratories ，United States ，2006-2010. MMWR. Morbidity and mortality weekly report ，2011，60(5): 133.
四种梅毒螺旋体检测方法的应用分析
四种梅毒螺旋体检测方法的应用分析 周君霞，巫翠云，何林 （海口市人民医院，海南海口５７０２０８） ［摘要】应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、梅毒螺旋体血球凝集试验（ＴＰＨＡ）、甲苯胺红不加热血清试验（ＴＲＵＳＴ）分别检测血清中的梅毒螺旋体抗体，荧光定量ＰＣＲ（ＦＱ—ＰＣＲ）法检测局部分泌物或渗出物中梅毒ＤＮＡ。 结果：ＴＲＵＳＴ、ＴＰ－ＥＬＩＳＡ、ＴＰＨＡ、ＦＱ—ＰＣＲ法灵敏度分别为８４．３％、９６．１％、９４．１％、９７．１％，特异性分别为９３．５％、９８％、１００％、１００％。ＴＲＵＳＴ在一、三期梅毒的阳性率最低（６６．７％和５０％）；ＦＱ—ＰＣＲ在一期梅毒阳性率最高。提示ＴＰ－ＥＬＩＳＡ可作为输血和手术前检测的一种理想筛查方法；ＴＰＨＡ可作为梅毒确诊方法；ＴＲＵＳＴ可应用于梅毒治疗疗效监测；早期梅毒的诊断首选ＦＱ－ＰＣＲ。 【关键词】梅毒螺旋体；梅毒螺旋体血凝试验；甲苯胺红不加热血清试验；荧光定量ＰＥＲ ［中图分类号］Ｒ７５９．１【文献标识码】Ｂ［文章编号】１００２－２６６Ｘ（２００８）０１－０１２２－０２‘ 梅毒是由苍白密螺旋体引起的性传播疾病，流行非常广泛。本研究应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、梅毒螺旋体血球凝集试验（ＴＰＩ－ＩＡ）、甲苯胺红不加热血清试验（ＴＲＵＳＴ）、荧光定量ＰＣＲ技术（ＦＱ—ＰＣＲ）等４种检测方法对１０２例各期梅毒患者的标本进行检测，并对检测结果及各种方法的优缺点进行分析比较，为选择合适的梅毒检测方法提供参考。 １材料与方法 １．１标本来源１０２例标本来自２００６年１０月一２００７年１０月按２０００年中国卫生部防疫司颁布的性病诊断标准确诊的我院梅毒患者，其中一期３６例、二期５８例、三期８例；对照组１００例为来自我院皮肤科和泌尿外科非梅毒患者。 １．２检测方法分别对各期梅毒患者及对照组血清进行ＴＰ－ＥＬＩＳＡ、ＴＰＨＡ、ＴＲＵＳＴ检测；用消毒棉签取所有被检者局部分泌物、渗出液或局部淋巴结抽出液作ＦＱ—ＰＣＲ检测。ＰＣＲ试剂由中山达安基因股份有限公司提供，ＥＬＩＳＡ、ＴＲＵＳＴ试剂由厦门英科新创科技有限公司提供，ＴＰＨＡ试剂为英国Ｏｍｅｇａ诊断试剂。ＭｕｈｉｓｋａｎＭＫ３酶标仪为热电（上海）仪器有限公司生产。ＰＥ５７００扩增仪为美国ＡＢＩ公司生产。 １．３统计学方法计数资料比较用采用，检验，以Ｐ≤Ｏ．０５为有统计学差异。 ２结果 ４种检测方法对梅毒患者标本检测的敏感度和特异性比较见表ｌ。４种检测方法对１００例对照组标本检测结果：ＴＲＵＳＴ阳性６例，特异性为９３．５％；１２２ＴＰ－ＥＬＩＳＡ阳性２例，特异性为９８％；ＴＰＨＡ和ＦＱ－ＰＣＲ法未见假阳性，特异性１００％。‘ 表１４种检测方法的敏感度和特异性比较（％） 注：与其他方法比较，。Ｐ＜０．０５ ３讨论 目前临床对梅毒螺旋体感染的诊断方法越来越多，但临床应用不一。人体感染梅毒螺旋体后，血液产生两种抗体，一种是非梅毒螺旋体特异性抗体，是梅毒螺旋体在破坏组织时释放的抗原性物质（心磷脂）刺激机体产生的有抗体性质的反应素（抗心磷脂抗体），如ＲＰＲ、ＴＲＵＳＴ、ＶＤＲＬ、ＵＳＲ等，另一种是梅毒螺旋体特异性抗体，包括ＩｇＭ和ＩｇＧ，如ＴＰＨＡ、ＥＬＩＳＡ等，ＦＱ—ＰＣＲ法则属于分子生物学技术，可直接检测梅毒螺旋体的核酸。 本研究用４种方法对１０２例梅毒患者和对照组标本进行检测，结果显示ＴＲＵＳＴ的灵敏度和特异性均低于其他３种方法，这是因为人体感染梅毒４一ｌｏ周血清中才可产生一定数量的抗体，而非特异性抗体比特异性抗体晚１周出现，并且在疾病的非活动期和治疗后容易消失。而且ＴＲＵＳＴ易出现生物学假阳性，可见于多种疾病，如结核、红斑狼疮、类风湿性关节炎、猩红热等，常导致过激治疗，健康老年人中也可出现假阳性结果…，本次结果也显示假阳性率偏高。但此方法所得的抗体的效价与病情的变化 万方数据
医院检验科检验技术操作规程89220
医院检验科检验技术操作规程 目录 第一节全自动血液细胞分析仪操作规程 第二节尿液分析仪使用规程 第三节自动凝血仪操作规程 第四节半自动生化分析仪操作规程 第五节血常规检验操作规程 第六节尿常规检验操作规程 第七节肝功能检验操作规程 第八节肾功能检验操作规程 第九节血脂检验操作规程 第十节血液葡萄糖测定技术操作规程第十一节凝血四项检验操作规程 第十二节AB0 血型正、反血型鉴定技术操作规程
第一节全自动血液细胞分析仪操作规程 1、样品分析前准备 1.1开机前的检查、准备在开启分析仪电源之前，操作者须按以下要求进行检查: 1.1.1检查稀释液、清洗液、溶血素是否充足，有无过期; 试剂管路是否弯折，连接是否可靠。 1.1.2电源线是否正确连接。 1.1.3废液桶是否清空。 1.1.4UPS 电是否足够，打印纸安装是否正确，是否足够。 1.1.5确保键盘正确连接到键盘接口上。 1.2.开机 1.2.1打开分析仪后面的电源开关,电源指示灯亮，屏幕上显示“Initializing…”. 1.2.2分析仪进行初始化，整个初始化过程持续约4～7 分钟。 1.2.3初始化过程结束后，系统自动进入“计数”界面。 1.3动物类型选择 1.3.1按［菜单］键，移动光标，选择“动物”，按［确认］进入“动物”界面。 1.3.2操作者根据测量的动物类型，选择需要分析的动物类型。 2.1.1按［菜单］键，选择“计数”，进入“计数”界面。再按［模
式］键，将当前模式设置为“全血”模式。 2.1.2确认状态指示区的计数状态为“就绪”，工作模式为“全血”。 2.1.3将准备好的全血样本放到采样针下，使采样针可以吸到样本且针头与容器底保持一定距离。 2.1.4按计数键，启动样本分析过程。此时，状态指示区的计数状态为“运行”。 2.1.5采样针自动吸取13ul 的样本后蜂鸣器响，在采样针抬起后，移开样本。 2.1.6分析完成后，按［F4］键进入“样本信息编辑”界面。按［F9］键进入汉字状态。在汉字状态下，按［F8］键在全拼和五笔输入法之间进行切换，输入样本信息，输入完成后，点击“确认”，保存输入的内容并返回到“计数”界面。 2.1.7按［打印］键打印样本分析报告。 2.1.8按照此操作过程进行其余样本的分析。 2.2预稀释样本分析 2.2.1按［菜单］键，选择“计数”，进入“计数”界面。再按［模式］键，将当前模式设置为“预稀释”模式。按［稀释］键，屏幕弹出“加稀释液” 对话框，取一个干净的样本杯放在采样针下，按计数键，微倾斜样本杯一定角度让分析仪自动排出的 1.6ml 稀释液沿管壁流入样本杯中，避免产生气泡或溅出。 2.2.2加完稀释液后，按［确认］键，“加稀释液”对话框关闭，分析仪自动清洗采样针。
梅毒血清学试验四种方法的比较
梅毒血清学试验四种方法的比较 发表时间：2012-10-25T14:28:14.670Z 来源：《医药前沿》2012年第19期供稿作者：唐玉秀[导读] 比较4种常用的梅毒血清学试验方法，观察各种方法的优缺点，为实验室和临床提供参考。唐玉秀（广西全州县人民医院检验科广西全州541500） 【摘要】目的比较4种常用的梅毒血清学试验方法，观察各种方法的优缺点，为实验室和临床提供参考。方法梅毒酶联免疫吸咐试验（TP-ELISA）,梅毒血浆反应素环状卡片试验（RPR），胶体金快速检测试验（SYP），梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）。结果RPR 和SYP两种方法对梅毒检出率明显低于TP-ELISA和TPPA法。结论 SYP法，ELISA法是实验室初筛梅毒的最佳方法，如果要确诊梅毒要用TPPA法，疗效观察用RPR法。 【关键词】梅毒TP-ELISA RPR SYP TPPA 梅毒是由梅毒螺旋体（苍白螺旋体）感染引起的一种慢性全身性传播疾病。该病病程长，危害大，临床表现复杂，呈多样性，几乎可以累及全身各个器官，早期主要侵犯皮肤，黏膜；晚期可累及心血管及中枢神经系统等器管[1-3]。近年来，梅毒的发病率呈增加趋势，因此对梅毒的早期诊断和及时治疗成为关键问题，防止梅毒的蔓延是重中之重。实验室如何更好的选用哪种检测方法，避免漏诊，误诊，错诊而产生的医疗隐患等。目前用于梅毒血清学检验的方法较多，通过各种方法的比较，从而选择更合适的试验方法，对梅毒的诊断和治疗方面提供更好的科学依据。 1 选择的对象，试剂和仪器，检测的方法 1.1选择的对象选用2011年1月至2011年12月期间住院和门诊检测梅毒项目的患者。大约12400份标本，其中有125例确诊病人，大多数病例无临床症状。 1.2使用的试剂和仪器 （1）试剂：SYP使用艾康生物技术（杭州）有限公司提供的试剂盒。ELISA和RPR由上海科华生物有限公司提供的试剂盒。TPPA是使用日本富士公司试剂盒。 （2）仪器深圳雷杜RT-3100洗板机，上海新波SYM-810酶标仪，XK96-8型梅毒旋转振荡器。 1.3方法严格按照说明书进行操作，先用SYP，TP-ELISA法初筛，检出阳性和弱阳性标本后再用RPR滴渡法和TPPA检测法。 2 结果 SYP和ELISA法初筛结果表1 由SYP和ELISA法筛检阳性标本中，再进行RPR和TPPA检测。先做RPR原倍，阳性者，再做生理盐水稀释滴度1:2,1:4,1:8,1:16 阳性符合率见表2 从表2可得知TPPA为确诊试验，SYP和ELISA法为初筛试验，RPR为疗效观察试验。 3 讨论 由于梅毒感染后，抗心磷酯抗体出现晚于特异性螺旋体抗体，而且梅毒晚期又可能转阴，故RPR，SYP不适宜一期梅毒早期和三期梅毒诊断，对潜伏期和神经梅毒也不敏感。[4]而且SYP，RPR不易于自动化，结果的判断也存在主观性，已不是很适合梅毒的筛检法，但RPR滴度法可作为临床疗效观察的指标。 梅毒酶联免疫吸咐试验（TP-ELISA）是一种基于基因工程的特异性检测技术，灵敏度和特异性均较高，特异性抗体在梅毒的潜伏期即产生，对梅毒的早期辅助诊断较好。TP-ELISA法，操作简单，成本较低，适合医院大批量检测。但存在的缺点是该方法检测的是梅毒IgG 和IgM的混合抗体，IgG抗体治愈后相当长的时间仍然存较高的阳性率，甚至终身阳性，因此TP-ELISA阳性只说明正在感染或者曾经感染过，不能判断梅毒疾病活度与否，所以不能作为疗效监测手段[5]。当然，ELISA法本身也存在不足，这与检测的标本，操作人员的操作有关（如放置时间过长，显色未避光等）导致假阳性。 TPPA的灵敏度和特异性比前三种方法都高，是临床常用的梅毒确诊试验，也可以进行效价测定。但是成本高，操作复杂，耗时较长，不太适合大批量标本的检测。适合用于前三种方法测定阳性后的确诊试验。由于该法检测同样是梅毒IgM的IgG的混合抗体[6]，存在与TP-ELISA相类似的不足。 综上所述四种梅毒学血清方法比较，TP-ELISA法的特异性和灵敏度明显高于SYP，但不能取代SYP法，但两种方法可以互补，结合两种方法更能更好的检测梅毒。对于TP-ELISA和SYP法阳性者，应用TPPA法作确诊试验，RPR作滴度检测，才能更好的为临床提供诊治意见。 参考文献 [1]郭兑山，宁平，方德强,等，梅毒螺旋体抗体IgG ELISA和RPR试验的比较[J].中国输血杂志，2005，14（2）：88. [2]龚向东，叶顺章，张国成等，2000年全国性病流行病学分析[J].中国性病艾滋病防治，2001,7(3):131. [3]刘鹏，梅毒螺旋体的检测技术与应用现状[J].实用医药杂志，2005，22（10）：939-941 [4]黄永梅，ELISA,TPPA和TRUST,RPR梅毒检测方法的比较[J].国际医药卫生导报，2006，12（8）：88-89. [5]王培华，输血技术学[M].北京；北京人民出版社，1998，102-105. [6]何旭东，李龙，ELISA法检测梅毒特异性抗体[J].中国输血杂志，2001，14（增刊）：33.
实验室常用梅毒检测方法的评价
?６２２? 河南职工医学院学报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｆｏｒＳｔａｆｆａｎｄＷｏｒｋｅｒｓＶ０１．２０Ｎｏ．６Ｄｅｃ．２００８实验室常用梅毒检测方法的评价 孟德娣，房功思 （安徽医学高等专科学校医学技术系，安徽合肥２３０６０１） ［关键词］梅毒；ＲＰＲ；ＴＰＨＡ；ＴＲＵＳＴ；ＥＬＩＳＡ；订Ａ—ＡＢＳ；ＰＣＲ ［中图分类号］Ｒ３７７＋．１［文献标识码］Ａ［文章编号］１００８—９２７６（２００８）０６—０６２２－０３ 梅毒是一种经典的通过性和母婴传播的疾病，其传染性强，感染后可以引起全身各组织、器官的损害，危害较大。近年来，梅毒的发病率呈上升趋势。在梅毒诊断中，由于抗体效价或方法特异性等原因使诊断结果常出现偏差，因此，高效的梅毒实验室诊断已成为大势所趋，对控制梅毒蔓延意义重大。临床实验室合理、有效地选用检测方法，避免错诊、误诊、漏诊是非常必要的。 目前梅毒的检测多采用血清学试验，本文仅对我国实验室常用的梅毒螺旋体检测方法回顾、总结如下。 １快速血浆反应素试验（ＲＰＲ） 快速血浆反应素试验，是一种常用的梅毒血清学筛选试验，检查的是人体内的反应素。该试验原理是用未经处理的活性炭颗粒（直径３—５ａｍ）吸附ＶＤＲＬ抗原…（０．０３％心拟脂、０．２１％卵磷脂、０．９％胆固醇，用无水乙醇配制）。此颗粒如与待检血清中反应素结合，便形成黑色凝集块，可肉眼观察结果，也可将标本倍比稀释（１：２、１：４—１：３２）进行半定量试验，对疗效和判断是否再感染有一定价值。该试验操作简便、快速，可用肉眼判断结果，不需特殊器材，易于推广，可广泛应用于普查、筛选。但是反应素试验特异性不强。梅毒螺旋体破坏组织可使机体产生反应素，而其他破坏机体的过程也可产生反应素，所以患者ＲＰＲ试验阳性，不一定感染梅毒螺旋体。人体某些生理或病理状态，如怀孕、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺结核、肺炎、亚急性细菌性心内膜炎、类风湿性关节炎、ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）、风湿性心脏病、干燥综合征、慢性肾炎和海洛因成瘾等，ＲＰＲ都可以呈假阳性；同时，由于梅毒感染者下疳出现最初几天内血清反应素抗体效价较低，ＲＰＲ试验可能呈阴性结果口】。因此，ＲＰＲ一般只作为初筛手段，不能单独据其结果诊断梅毒感染，而应对患者进行全面检查，密切随访，并采用其他试验进行确定。 ２甲苯胺红不加热试验（ＴＲＵＳＴ） ＴＲＵＳＴ试验同样是检测梅毒患者血清中存在着的反应素。ＴＲＵＳＴ试验采用ＶＤＲＬ抗原重悬于特制的甲苯胺红溶液中，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的粉红色凝块。ＴＲＵＳＴ法成本低廉、快速、直观，作为梅毒的初筛试验，ＴＲＵＳＴ试验在一般的中小型及基层医院被广泛使用。但ＴＲＵＳＴ法为人工操作、判读，易受到室温及技术操作等因素影响，结果的判断方面主观性较强，易出现漏判和错判，同时存在与ＲＰＲ同样的特异性低、敏感度不高的缺点，尤其对早期和治疗期梅毒可呈阴性反应，且其结果不易保存、查阅，故只作为一项梅毒感染的筛选试验ｐ１。 ３梅毒螺旋体血凝试验（ＴＰＨＡ） ＴＰＨＡ试验是一种检测梅毒螺旋体特异性抗体的特异的、灵敏的被动血凝试验。试验血球为用梅毒螺旋体特异性抗原包被经过醛化和鞣化的鸡红细胞，对照血球为未用上述抗原包被的经过醛化和鞣化的鸡红细胞，如果是阳性标本，当和致敏的鸡红细胞混合后，抗体和抗原的结合会引起致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标本，则血细胞在孔底形成致密的沉淀。ＴＰＨＡ检测目标物为梅毒特异性抗体，是目前公认的梅毒诊断试验，主要用于筛检阳性标本的确诊Ｈ１。但ＴＰＨＡ试剂价格较高，操作较繁琐费时，不利临床快速诊断，同时因该特异性抗体存在时间过长，患者即便经过正规抗梅毒治疗，仍可出现阳性结果，甚至可终生检出阳性．故该法对梅毒治疗效果无判定价值¨－。 收稿日期：２００８—０６—１０ 作者简介：孟德娣（１９７９一）．女，安徽省合肥市人．学士，助教．现从事临床检验技术教学和科研工作。万方数据
实验1 细胞凝集反应
实验1 细胞凝集反应 （赵海泉主编基础生物学实验指导细胞生物学分册中国农业大学出版社2008.8.） 一、实验目的与原理 1．目的 学习植物凝集素的提取方法，观察红细胞凝集现象。 2．原理 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为细胞间的联系和识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素（1ectin）是一类含糖并能与糖专一结合的蛋白质（少数例外），它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 二、实验用品 1．材料 土豆块茎，兔血。 2．试剂 0.9 % NaCl溶液，PBS缓冲液（称取7.2 g NaCl、1.48 g Na2HPO4、0.43 g KH2PO4。加蒸馏水定容至1 000 mI，pH 7.2）。 3．器材 离心机，显微镜，天平，注射器，6号针头，载玻片，容量瓶，滴管，离心管等。 三、实验内容与操作 （一）提取凝集素 称取土豆去皮块茎20 g，加100 ml PBS缓液，浸泡2 h，将浸出的粗提液过滤，即为可溶性土豆凝集素提取液。 （二）制备2%的红细胞悬液 以无菌方法抽取兔静脉血液（加抗凝剂）2 mI。加8 mL 0.9 % NaCl溶液，
以2 000 r/min离心5 min，去掉上清液，再加0.9 % NaCl溶液至10 ml，反复洗涤5次。最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。（三）凝集反应 用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各1滴，置载玻片上，充分混匀，静置20 min后于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。 四、注意事项 1．若沉淀压积的红细胞暂时不用，应将其4℃保存。下次使用前，先洗涤再用生理盐水配成2%红细胞悬液。 2．以PBS液加2%血细胞液作对照实验。 五、作业与思考题 1记录血细胞凝集情况。 2实验课程感想或感受。 教学内容： 1实验室安全教育。 2教学方法改革。创新小导师制 3实验报告写作要求 4本次实验内容讲解。 知识点： 实验动物知识。 采血操作。 凝集素。 显微镜。 记录方法。
检验仪器操作规程
沈阳博奥电梯有限公司 B O A O E L E VA T O R C O.,L T D. 沈阳博奥电梯有限公司 检验仪器操作规程 BADT/WI-YQ 编制： 审核： 批准： 2016年12月31日发布 2017年1月1日实施
检验仪器操作规程目录 1、A830L万用表操作规程 2 2、ZC25-3兆欧表操作规程 4 3、DT9256C钳型电流表操作规程 6 4、ZC 接地电阻测试仪操作规程7 5、声级计操作规程9 6、DZJ激光垂准仪操作规程13 7、游标卡尺操作规程18 8、塞尺操作规程19 9、限速器测试仪操作规程20
作业工艺指导书 共31 页第 2 页 第 1 版第0次修订 标题检验仪器操作规程 实施日期：2017年1月1日 数字万用表操作规程 操作规程： 一、操作前注意事项： 1、将ON/OFF开关置于ON位置，检查9V电池。如果电池电压不足，“” 将显示在显示器上。这时应更换电池后方能使用该仪表。 2、测试笔插孔旁边的“”符号表示输入电压不应超过说明书规定的数 值，这是为了保护内部线路免受损伤。 3、测试前应将功能开关置于你所需要的量程位置。 4、切勿在功能开关置于位置时测量电压或电流。 5、切勿测量高于地电位1000V的直流电压或700Vd的交流电压，以确保 人身安全。 6、在测量高电压时，注意不要接触被测电路或未使用的仪表端子。 二、直流电压测量 1、将黑色表笔插入COM插孔，红色表笔插入V/Ω/F插孔。 2、将功能开关置于所需的V量程位置，并将测试笔连接到待测电源 或负载上，红色表笔所接端的极性将和电压值同时显示在显示器上。 三、交流电压测量 1、将黑色表笔插入COM插孔，红色表笔插入V/Ω/F插孔。 2、将功能开关置于所需的V～量程位置，并将测试笔连接到待测电源或 负载上，从显示器上读取测量结果。
梅毒实验室测试题
梅毒实验室测试题 一、单选题 1、梅毒螺旋体镜检可采用的染色方法： A 革兰染色 B 美兰染色 C 镀银染色 D 伊红染色 2、非梅毒螺旋体抗体检测可采用的方法： A TPPA B ELISA C RPR D FTA-ABS 3、TPPA只能检测到： A IgA B IgG C IgG+IgM+IgA等混合抗体 D IgM 4、梅毒螺旋体镜检一般不采用下列标本： A 皮肤溃疡组织液 B 羊水 C 血液 D 脑脊液 5、RPR检测不能采用下列标本：
A 血清 B 血浆 C 全血 D 脑脊液 6、ELISA检测不能采用下列标本： A 血清 B 血浆 C 全血 D 脑脊液 7、梅毒螺旋体病原学检测方法不包括： A 暗视野显微镜检查 B 镀银染色 C 培养基培养 D 核酸检测 8、RPR/TRUST检测用水平旋转仪的转速是： A （100±2）转/分B（100±10）转/分 C （120±2）转/分 D （120±10）转/分 9、RPR/TRUST检测用水平旋转仪的旋转直径是： A 25±2mm B 18±2mm C 20±2mm D 30±2mm 10、RPR/TRUST试验在水平旋转仪上旋转反应时间
A 5分钟 B 8分钟 C 10分钟 D 12分钟 11、TRUST试验时每个反应孔滴加的抗原量是： A 50μl B 30μl C 25μl D 17μl 12、前带现象主要出现在下列哪一种方法中： A ELISA B RPR C TPPA D FTA-ABS 13、RPR 试验时每个反应孔滴加的抗原量是： A 50μl B 30μl C 25μl D 17μl 14、下列哪项方法不是检测非梅毒螺旋体抗体： A RPR B ELISA C VDRL D TRUST 15、TPPA试验结果判读孔的血清稀释倍数是：
梅毒的检测方法
梅毒是艾滋病出现以前最令人生畏的一种性传播疾病，梅毒是一种慢性传染病，梅毒初起时为全身感染，病程缓慢，在发展中向人体各器官组织入侵，梅毒也可潜伏多年甚至终身没有临床表现。梅毒从传染来源可分为后天梅毒（获得性）和先天梅毒。梅毒早期确诊很关键，下面我们介绍一下梅毒的检测方法： 梅毒的检测方法1、暗视野显微镜检 暗视野显微镜检查是一种检查梅毒螺旋体的方法。暗视野，顾名思义即是显微镜下没有明亮的光线，它便于检查苍白的螺旋体。这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。 早期皮肤粘膜损害（一期、二期霉疮）可查到苍白螺旋体。一期梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡的分泌物和渗出液中存在，肿大的淋巴结穿刺也可检出。二期梅毒苍白螺旋体可在全身血液和组织中检出，但以皮肤检出率最高。早期先天性梅毒，可以通过皮肤或粘膜损害处刮片发现梅毒苍白螺旋体。最近，通过羊膜穿刺术获得孕妇的羊水，以其作暗视野显微镜观察，对先天性梅毒有诊断价值。 梅毒的检测方法2、梅毒血清学检测 梅毒血清学检查对于诊断二期、三期梅毒，以及判定梅毒的发展和痊愈，判断药物的疗效都有十分重要的意义。梅毒血清学检查包括非梅毒螺旋体血清学试验和梅毒螺旋体血清学试验。前者常用于临床筛选及判定治疗的效果，抽血后1小时即可出结果，这样梅毒检测费用也低廉。后者主要是用于判定试验，但是它不能判定治疗效果，一旦患有梅毒，这一试验将终身阳性。 (1)非梅毒螺旋体血清试验：这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。常用的有三种： ①性病研究实验室玻片试验（VDRL）； ②血清不加热的反应素玻片试验（USR）； ③快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）。 可用作临床筛选，并可作定量，用于疗效观察。 (2)梅毒螺旋体血清试验： ①荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）； ②梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）；
红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验
红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验 流感病毒表面的血凝素（HA）蛋白，含有识别和结合宿主细胞表面受体的结构，能使一些特定的红细胞发生凝集现象。当红细胞和病毒按适当的比例混合后，由于病毒的作用使红细胞发生凝集，此为凝集现象。含有特异的抗流感病毒HA蛋白的抗血清，能抑制红细胞凝集现象的出现，即抗体与病毒结合后，可以使血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，此为红细胞凝集抑制（HAI）。 微量红细胞凝集抑制试验是目前最常用的一种鉴定流感病毒型/亚型及分析流感病毒HA抗原性变异的试验方法，也可以用于对一般人群抗体水平的检测和疫苗效果的评价等方面。 用于HAI试验的标准参照血清必须及时更新，用于鉴定流感病毒型/亚型应包括当年的国际疫苗株或国内流行代表株的抗血清，可以用羊、鸡、雪貂、兔等实验动物的抗血清；用于抗原分析的抗血清建议包括同一型别和亚型不同毒株免疫的标准参考抗血清，由于用雪貂制备的抗流感病毒血清特异性高，易将不同毒株间抗原性差异显示出来，因此常用免疫雪貂的抗血清进行抗原分析。HAI试验中所用的血清必须经特殊处理以去除非特异性抑制素及非特异性凝集素。 （一）生物安全要求 所有有关试验操作都应在相应生物安全级别的实验室中进行，必须遵守生物安全规定，严格执行标准操作规程和废弃物管理规定，做好个人防护要求。季节性流感病毒病毒或经完全灭活的高致病性禽流感病毒操作可以在BSL-2实验室里进行，高致病性禽流感病毒的操作
在BSL-3级实验室中进行。 （二）实验所用试剂 1．标准参考抗原：以国际疫苗株和国内流行株作为标准参考抗原，新分离的毒株作为待测抗原。 2.标准参考抗血清：以国际疫苗株和国内流行株制备的抗血清作 为标准参考血清。血清要经RDE处理。 （三）其他试剂/材料/仪器 1. 红细胞悬液 2. PH7.4的PBS缓冲液 3. RDE（日本生研） 4. 水浴箱（37℃，56℃） 5. 台式离心机 6. 多道可调加样器、单道可调加样器 7. 离心管 8. 96孔微量血凝板（使用豚鼠和人红细胞进行实验须用“U”底 板，使用火鸡红细胞进行实验用“V”底板） 9. 200μL、1000μLTIP头、水槽 表1. 流感病毒红细胞凝集试验各项条件比较 红细胞火鸡豚鼠人“O”型血 终浓度0.5 0.5 0.5 孔底部形状V型U型U型 孵育时间25-30min 45-60min 45-60min 红细胞沉积形状细胞沉积成点状，倾细胞沉积细胞沉积成
临床检验操作规程(SOP)编写要求讲解
临床检验操作规程编写要求 1 范围 本标准规定了设计、制定和使用临床检验操作规程的基本要求。 本标准适用于各级各类医疗卫生单位编写临床检验操作规程,也适用于临床检验产品厂商编写产品使用方法说明。 2 总则 2.1 操作规程是检测系统的组成部分,是临床检验的技术档案。是保证检验结果准确可靠的必须内容。 2.2 操作规程应是指导检验人员正确操作的依据。但操作规程不能用来弥补检验方法设计上的缺陷。 2.3 操作规程必须含有质量管理内容,包括进行检验的说明,明确质量控制和纠正作用系统等。这些书面文件是临床检验操作规程的必须组成部分。 2.4 操作规程由主任或主管技术人员负责编写,编写内容含义必须明确(无疑义、完整。要确保每个检验人员能理解,并严格按操作规程的精确说明进行操作。 3 操作规程的内容要求 每个检验项目都必须具有明确而完整的操作规程资料以及精确的叙述。应具备下列内容: 3.1 实验原理和/或检验目的(概述;可包括临床应用和/或实用性。 3.2 使用的标本种类和收集方法、病人准备要求、标本容器的要求、拒收标本的规定、标本处理方法、标本储存规定、标本外送规定等。
3.3 使用的试剂、校准品、控制品、培养基以及其他所需物品。所有材料都须写明厂商名、产品号、包装量、配制要求、使用和储存要求等。 3.4 使用的仪器厂商名、型号,本项目仪器使用具体要求和校准程序。 3.5 每步操作步骤,直至报告结果。 3.6 控制品使用水平和频率,允许限的纠正措施。 3.7 计算方法。 3.8 参考值范围。 3.9 操作性能的概要。如:精密度、病人结果可报告范围、方法学比较等。 3.10 对超出可报告范围的结果的处理。 3.11 对检验结果为病危报警值的处理。 3.12 方法局限性(如干扰物和/或注意事项。 3.13 参考文献。 3.14 其他必须内容。 4 规程式样和内容 根据实验室的大小和功能,操作规程的格式也应有不同。在小型(单一实验室中,有一本包括所有内容的操作规程即可。在大型综合的、多部门的实验室,应有不同专业和内容的操作规程,分放于各个专业室组。整套汇集的操作规程存放于科室负责人或相应场所。4.1 操作规程手册的式样应按实验室要求和结构来确定。但都须包 括质量管理内容,以及汇集有关检验项目操作规程。每个规程须包括第3章中叙述的内容。规程手册可设计成活页本形式,便于补充和修改。
3种梅毒血清学诊断试验的临床应用价值
3种梅毒血清学诊断试验的临床应用价值 目的比较3种梅毒血清学检测方法在临床中的应用价值。方法采用梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA），梅毒甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST），梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验（TPPA）3种方法检测231例血清标本。结果TPPA、ELISA、TRUST敏感性分别为96.30%、98.52%、82.96%，特异性分别为96.88%、92.71%、82.29%。结论ELISA可作为输血和手术前检测的一种理想筛查方法，TRUST法适用于判定病情及疗效观察，有助于判断梅毒复发及再感染，TPPA法有极高的敏感性和特异性，可作为梅毒血清抗体检测的确证方法。 标签：梅毒；血清学诊断；梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验；甲苯胺红不加热血清反应素试验；梅毒螺旋体颗粒凝集试验 梅毒（syphilis）是苍白螺旋体（Treponema pallidum）（又名梅毒螺旋体）感染人体所引起的一种系统性、慢性性传播疾病，临床表现呈多样性，可累及多组织和器官，导致组织破坏、功能失常，甚至危及生命，可长期处于潜伏状态，严重影响患者的身心健康，因此，早发现，早诊断和早治疗具有非常重要的临床意义[1]。实验室可以通过检测血液中的非特异性抗体和特异性抗体，判断是否感染梅毒螺旋体，血清学检测是实验室诊断梅毒的重要依据之一，所以选择好的检测方法有利于梅毒早期的诊断和及时治疗。本文采用TP-ELISA、TRUST 和TPPA 3种检测方法进行检测，对结果进行了比较，现报告如下。 1资料与方法 1.1一般资料本组资料选择2012年5月～2014年3月本院门诊及住院确诊的梅毒患者135例，男78例，女57例；梅毒潜伏期或既往感染者48例，现症者87例。另选择96例非梅毒患者，均为本院住院患者，其中自身免疫性疾病患者43例，妊娠孕妇27例，健康对照26例。 1.2试剂与主要仪器ELISA试剂由厦门新创科技公司提供，TRUST试剂由上海荣盛生物技术公司提供，TPPA试剂由日本富士株式会社提供，上述试剂均在有效期内使用。主要仪器为酶标仪、洗板机、离心机、微量振荡器、加样器和恒温水浴箱等。 1.3方法采用TP-ELISA、TRUST和T PPA对258例标本进行检测，3种方法均严格按照试剂盒说明书步骤操作。 1.4统计学方法数据采用SPSS16.0软件包进行统计分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 2结果
梅毒几种检测方法的比较(一)
梅毒几种检测方法的比较(一) 【摘要】安全的血源，是输血安全的保证。大多数采供血机构采用的非特异性的甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)或快速血浆反应素试验(RPR)法，检测灵敏度低、特异性差，对输血安全影响很大。为选择合适的梅毒检测方法，本文探讨各种检测方法的原理及优劣，从而总结出适合用于献血者梅毒筛查的方法。 【关键词】梅毒;检测;血站筛查 非特异性的甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)或快速血浆反应素试验(RPR)法，是目前血站筛查梅毒的常用方法。传染期的梅毒献血者，试验结果可能为阴性，献血者献血后造成梅毒传播；检测易出现生物学假阳性，部分假阳性的献血者被淘汰。因此梅毒的检测方法对输血安全非常重要。梅毒螺旋体侵入机体可产生两种抗体：特异性抗体与非特异性抗体。目前用于梅毒检验的方法就是检测这两种抗体。 1梅毒螺旋体非特异性血清学试验 1.1快速血浆反应素试验(RPR):抗原以胆固醇晶粒为载体，包被上心磷脂和卵磷脂，构成VDRL 抗原颗粒。再把抗原颗粒结合到活性炭上，当抗原与血清中反应素以一定的比例相互作用时，出现凝集，凝集颗粒呈黑色。 1.2甲苯胺红不加热血清试验(TRUST):抗原以胆固醇晶粒为载体，包被上心磷脂和卵磷脂，构成VDRL抗原颗粒。再把抗原颗粒结合到甲基胺红上，当抗原与血清中反应素以一定的比例相互作用时，出现凝集，凝集颗粒呈红色。 2梅毒螺旋体特异性血清学试验 2.1荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS):首先将梅毒螺旋体Nichols株抗原直接涂在载玻片上，然后将密螺旋体无毒株Reiter株制成吸收剂加至待测血清标本中，吸收掉血清中的非特异性抗体。再将吸收后的血清加到玻片的抗原膜上，再加荧光素标记的抗人IgG，最后在荧光显微镜下观察结果。 2.2梅毒螺旋体血细胞凝集试验(TPHA):将梅毒螺旋体Nichols株经超声破碎后，得到可溶性抗原成分，致敏红细胞。用无毒株Reiter株制成吸收剂与血清反应，吸收掉血清中的非特异性抗体。特异性的抗体(血清通常用作1∶80以上稀释)就可使致敏的红细胞发生凝集作用。 2.3梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）:用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏的红细胞，明胶颗粒为洋红色，致敏颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。 2.4梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)：在体外表达得到了梅毒螺旋体的相应特异基因工程抗原，采用基因工程梅毒螺旋体抗原以双抗原夹心法检测梅毒抗体。 2.5梅毒胶体金层析法（TP-CG）：根据双抗原夹心免疫层析原理，在硝酸纤维素膜上包被TP 重组抗原，在玻璃纤维上吸附胶体金标记TP重组抗原，样品中的TP抗体首选与金标抗原结合形成复合物，顺膜渗透至包被反应区，与包被TP抗原结合，形成由胶体金抗原-TP抗体-抗原组成的紫红色反应带。 2.6梅毒蛋白印迹（TP-WB）首先将将梅毒螺旋体Nichols株菌体细胞用SDS破碎，再使用聚丙烯酰胺凝胶电泳将将梅毒螺旋体各种抗原成分分开形成不同区带，经电转印可将这些条带转移至硝酸纤维素膜上作为抗原，最后采用酶标技术检测病人血清中的相应特异抗体。
成品检验作业指导书.
1、目的 经过对成品的检验，确保只有合格的产品才能出货。 2、适用范围 适用于本公司承制的成品检验。 3、检测方式 a.目测 b.精度为1mm的直尺 c.比较
4、骑马订说明书成品检验作业书指导书 4.1成品检验内容质量要求 4.2检验规范 1.检查外观有无残缺，破损，如有立即剔除并用白纸在问题处标识。 2.检查页码，根据书的厚薄每次取5-10本，均匀推开切口边页码色标标识，如发现色标呈规律性排布 即无多页、少页、空白页、错页现象。（对照样品）如果色标有无规律现象即为异常必须翻开仔细检查，并立即即剔除并在问题处用白纸法标识。
5、无线胶装说明书成品检验作业指导书 5.1成品检验内容及质量要求 5.2检验程序规范 1.检查外观有无残缺，破损，如有立即剔除并用白纸片在问题处标识。 2.检查页码，取4本，均匀推开，切口边页码色标标识，如发现色标呈规律性排布即无多页、少页、空白 页、错页现象（对照样品）。如果色标有无规律现象，即为异常必须翻开仔细检查，并立即剔除并在问题处用白纸片标识。
6、单张多折说明书成品检验作业指导书 6.1成品检验内容及质量要求 6.2检验程序规范 1.检查外观有无残缺，破损，如有立即剔除并用白纸片在问题处标识。 2.检验有无白页，取折页时皮筋所扎好的一扎，均匀推开，检查折位边，印刷时有粗线挑，或文字是否规律性排布，如果是即无白页，如果有不规律排布现象，即为异常，必须抽出翻开仔细检查，核实为白页，立即剔除，作废品处理。（另一边同按以上程序从复检验） 3.手折要洁净手，不能有汗渍，手印留在产品上。
7、单张说明书成品检验作业指导书 7.1成品检验内容及质量要求 7.2检查程序规范 1.检查外观有无残缺、破损、发现立即剔除作废品。 2.取一手均100pcs推开，均匀翻动检查有无漏印，及明显污迹。 3.齐好已检品与执出废品分置放好。
红细胞凝集试验
红细胞凝集试验 血球凝集(HA)试验: 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验 血球凝集抑制(HI)试验:病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝 集抑制(HI)试验 阿氏液（Alsever）：即红细胞保养液 指红细胞凝集的现象。由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的红细胞凝集。 （1）由病毒而引起的凝集：G．H．Hirst（1941）发现流感病毒能使鸡的红细胞发生凝集，其后又发现其它各种病毒也能引起同样的红细胞凝集反应。即红细胞表面存在着对各种病毒的受体，病毒与受体结合，以红细胞为桥梁的结果而引起凝集。利用此反应可以进行病毒的定性和定量。另外，如果存在抗病毒的抗体时，则由病毒引起的凝集作用将被抑制，所以可用于抗病毒抗体的检出。 （2）由抗体引起的凝集：（a）如果存在对红细胞表面决定基的抗体，则红细胞亦将凝集。可用于测定对抗红细胞的抗体的效价或鉴定人的血型。（b）在红细胞表面，如果人为地使之吸附或结合特定的抗原物质，则与该抗原相对应的抗体将引起红细胞凝集（被动凝集反应或间接凝集反应，psssive he-magglntination）。 血凝及血凝抑制试验 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 [目的要求] 掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。 [材料与试剂] 1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50 uL定量移液器，滴头，微型振荡器。 2. 生理盐水，0.5%鸡红细胞悬液，新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。 [实验内容及操作方法] （一）血球凝集(HA)试验 1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 uL生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50 uL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50 uL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 uL；第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 uL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
产品无菌检验操作规程
产品无菌检验操作规程 产品无菌检验操作规程 编制日期 审核日期 批准日期 版号生效日期 公司
1 目的 通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。 2 适用范畴 适用于灭菌后医疗器械产品（列举）的无菌检验。 3 检验依据 本厂产品注册标准（编号） EN1174-1996 医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估 《中国药典》（2005年版） GB14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法 GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准 4 仪器、设备 百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪（器）、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。 5 无菌检验室的环境要求 5.1 无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。 5.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对比室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。 5.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。 5.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。 6 无菌检验前的预备 6.1 器具灭菌、消毒 6.1.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采纳可靠方法灭菌。可经电热干燥箱160℃以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（依照灭菌成效验证决定灭菌参数）。所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。 6.1.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采纳消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。 6.1.3 标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时刻和使用有效期。 6.2 人员、物料进入无菌检验室