简答植物组织培养
植物组织培养复习题答案
植物组织培养复习题答案植物组织培养是一种生物技术，它涉及将植物的一小部分组织（如叶片、茎尖或根尖）在无菌条件下培养在特定的营养培养基上，以诱导其生长和分化成新的植物体。
以下是植物组织培养复习题的答案：一、选择题1. 植物组织培养的基本原理是什么？A. 植物细胞的全能性B. 植物细胞的分裂性C. 植物细胞的分化性D. 植物细胞的再生性答案：A2. 植物组织培养中常用的培养基是什么？A. MS培养基B. LB培养基C. 酵母提取物培养基D. 血浆培养基答案：A3. 在植物组织培养中，以下哪个因素不是影响培养成功的关键因素？A. 无菌操作B. 培养基成分C. 光照条件D. 培养基的pH值答案：C二、填空题1. 植物组织培养技术主要包括_______、_______和_______三个阶段。
答案：外植体的消毒、诱导分化、生根与移栽2. 植物组织培养中常用的生长调节剂包括_______、_______和_______。
答案：生长素、细胞分裂素、赤霉素三、简答题1. 简述植物组织培养的优点。
答案：植物组织培养具有快速繁殖、遗传稳定性、避免病毒传播、节约空间和成本等优点。
2. 描述植物组织培养的基本步骤。
答案：植物组织培养的基本步骤包括：选择适当的外植体，进行严格的消毒处理，将外植体转移到含有适宜营养成分和激素的培养基中，提供适宜的温度和光照条件，观察并记录生长情况，最后进行生根和移栽。
四、论述题1. 论述植物组织培养在现代农业生产中的应用及其重要性。
答案：植物组织培养在现代农业生产中具有重要作用，它不仅能够快速繁殖优良品种，提高生产效率，还能通过基因工程等手段改良植物品种，增强植物的抗病、抗虫和抗逆性。
此外，植物组织培养技术在植物保护、药用植物生产以及植物资源的保护和利用等方面也发挥着重要作用。
五、实验操作题1. 设计一个简单的植物组织培养实验方案。
答案：实验方案应包括实验目的、实验材料、实验设备、实验步骤、预期结果和注意事项。
植物组织培养作业答案
植物组织培养作业答案(1)什么是植物组织培养?是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。
(2)什么是"外植体"?无菌条件下，离体培养于人工培养基上，用于达到某种培养目的的原始植物材料(3)按照外植体的不同，植物组织培养可以分成几类?1、植株培养2、器官培养（胚，花药，子房，根、茎和叶）3、组织培养（各种组织、愈伤组织）4、原生质体培养5、细胞培养（愈伤组织分离或花粉单细胞或很小的细胞团)(4)植物组织培养有哪些特点?1、植物基础学科研究的良好系统2、生物技术的基础3、经济高效，管理方便，利于自动化4、技术含量好、实验误差小，人工控制能力强5、生长周期短、生长速度快、试验重复性好6、试验材料经济、来源单一7、需要设备复杂、投入资金多、电能消耗大；对人员技术水平要求高，对试验场要求也较高，不能代替田间试验。
(5)你认为植物组织培养技术在当前的农业生产上有什么价值?为什么?1、单倍体育种：通过花药培养，从小孢子获得单倍体植株，染色体加倍后获得正常二倍体植株，这是一条育种的新途径。
2、胚培养、子房培养、胚珠培养：为了克服远缘杂交的不亲和性，可采用胚、子房、胚珠培养和试管受精等手段。
3、突变体的选择和应用：由于植物的单细胞培养成功，可以用这个方法诱发单细胞进行突变，通过筛选所需要的突变体，然后使细胞分化成植株，再通过有性世代使遗传性稳定下来，这是从细胞水平来改造植物的一种途径。
4、体细胞杂交和遗传工程,通过异种原生质体的相互融合（即体细胞杂交）为植物育种工作开阔新的途径，培育新品种。
5、通过组织培养可以做到植物快速繁殖.6、通过组织培养可以进行无病毒植株的培育。
7、用组织培养可以生产的化合物有强心苷、吲哚生物碱、黄连素、辅酶Q10等次生代谢物.8、人工种子的研究9、植物种质资源的保存 .(6)因地制宜建一个组织培养实验室，需要哪些分实验室?各分室的作用是什么?1、准备室的设置及配备：器具的洗涤、干燥、消毒2、配置室：进行药品的配置、保存、分装3、灭菌室：培养基及使用器具的消毒与灭菌4、缓冲间：隔离接种室与外界，防止灭菌室直通接种室，控制污染气流和控制压差的作用，以保证接种室的洁净度。
植物组织培养的概念原理
植物组织培养的概念原理
植物组织培养是通过将植物的组织或细胞分离培养在含有必要营养物质的培养基中，创造适宜的生长条件，促进细胞分裂和组织发生，从而实现对植物的繁殖、生长和遗传改良等方面的研究和应用。
植物组织培养的原理主要包括以下几个方面：
1. 营养培养基：培养基中含有适量的无机盐、有机物质、维生素和植物生长调节剂等，可以提供植物生长所需的各种养分。
2. 组织分离：通过适当的分离和处理方法，将植物的组织或细胞分离出来，去除杂质和干扰因素。
3. 培养条件调控：通过控制培养基的pH值、温度、光照、湿度等条件来创造适宜的生长环境，促进植物细胞的分裂和组织发生。
4. 生长调节剂：通过添加适量的植物生长调节剂，如激素和生长抑制剂，来调控植物细胞的分裂和发育过程，促进植物组织的增殖和再生。
5. 技术手段：植物组织培养可以通过离体培养、微繁殖、愈伤组织诱导、细胞融合等技术手段实现不同的目的，如繁殖植物、筛选优良品种、实现基因转化等。
综上所述，植物组织培养是一种通过创造适宜的生长条件，利用培养基提供的营养物质和生长调节剂，使植物细胞分裂和组织发生的技术手段，可以应用于植物繁殖、生长和遗传改良等方面的研究和应用。
植物组织培养的技术原理
汇报人： 2023-12-21
目录
• 植物组织培养概述 • 植物组织培养技术原理 • 植物组织培养基本操作技术 • 植物组织培养常见问题及解决
方法 • 植物组织培养技术应用案例分
析
01
植物组织培养概述
定义与特点
定义
植物组织培养是一种通过离体培养植 物组织或细胞，诱导产生完整植株的 技术。
解决方法
严格操作规范：在无菌条件下进行操作 ，确保实验器材和环境的清洁。
褐化问题及解决方法
解决方法
降低氧化酶活性：通过调节培养 条件，如降低温度、增加光照强 度等，降低酚类物质的氧化酶活 性。
使用抗氧化剂：在培养基中添加 抗氧化剂，如维生素C、柠檬酸等 ，以减少酚类物质的氧化。
褐化原因：植物组织培养过程中 ，由于细胞内的酚类物质氧化导 致培养材料变褐。
THANKS
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应用领域与前景
应用领域
植物组织培养技术广泛应用于快速繁殖优良品种、脱病毒种苗生产、濒危植物保护、次生代谢产物生 产、基因工程育种等领域。
前景
随着科技的不断进步和人们对环境保护、食品安全等方面的关注，植物组织培养技术将在农业生产、 生物医药、生态修复等领域发挥更加重要的作用，为人类创造更加美好的未来。
按照称量、溶解、调节pH值 等步骤制备培养基。
培养基灭菌
使用高压蒸汽灭菌等方法对培 养基进行灭菌处理。
04
植物组织培养常见问题及解决 方法
污染问题及解决方法
污染原因：植物组织培养过程中的污染 通常是由于微生物入侵或交叉污染引起 的。
选用抗污染品种：选择对污染具有抗性 的品种进行组织培养。
定期检查：定期对培养基、接种工具等 进行检查，发现污染及时处理。
植物组织培养知识点归纳
植物组织培养知识点归纳一、植物组织培养的概念植物组织培养就是在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。
这就像是给植物细胞来了一场单独的“特训”，让它们在脱离母体的情况下也能茁壮成长呢。
二、植物组织培养的原理这背后的原理是植物细胞的全能性哦。
简单来说，就是每个植物细胞都像是一个潜在的小魔法师，都具备发育成完整植株的能力。
不过呢，在正常情况下，这种能力被抑制了，而我们通过组织培养的手段，就可以把这种能力释放出来。
三、植物组织培养的基本过程1. 外植体的选择与消毒外植体就是我们从植物体上取下来用于培养的部分，可以是叶片、茎段、根尖等。
就像我们挑选参加比赛的选手一样，要选健康、有活力的。
选好之后，还要对它进行消毒，把上面的病菌都除掉，不然就会影响后面的培养啦。
2. 初代培养把消毒后的外植体接种到初代培养基上。
初代培养基里有各种营养成分，像氮、磷、钾这些大量元素，还有铁、锰、锌等微量元素，以及一些植物生长调节剂，就像是给外植体准备的营养大餐。
在这个阶段，外植体会开始分化，可能会长出愈伤组织。
愈伤组织就像是一团白白嫩嫩的小肉球，是一团未分化的薄壁细胞。
3. 继代培养当愈伤组织长到一定大小后，我们要把它转移到新的培养基上，也就是继代培养基。
这个过程就像是给植物宝宝换个更大更好的“房子”，让它有更多的空间和营养继续生长。
在继代培养中，愈伤组织可能会继续分化，形成芽或者根。
4. 生根培养当我们看到有芽长出来后，就可以把它转移到生根培养基上了。
生根培养基里的植物生长调节剂的种类和浓度会有所调整，目的就是让小芽长出健康的根系。
根系就像是植物的脚，有了脚，植物才能稳稳地站在土壤里（这里是培养基里啦）。
5. 移栽驯化当植物在培养基里长出了完整的根系和茎叶后，就可以把它从无菌的环境中移栽到普通的土壤里了。
不过，这个过程可不能太突然，要先让植物适应一下外界的环境，就像我们从空调房突然走到炎热的户外，也需要一点时间适应呢。
植物组织培养技术考试复习题解析
植物组织培养技术考试复习题一、填空题1、组织培养的理论依据是：植物细胞的全能性。
2、根据培养的外植体材料不同，可将植物组织培养分为以下几种类型：愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞培养、原生质体培养、遗传转化。
3、植物组织培养实验室一般划分为洗涤室、培养基配置室、缓冲室、无菌接种室、培养室、观察室、驯化室等分室，其中植物组织培养实验室对无菌条件要求最严格的区域是无菌接种室。
4、培养基成分主要包水分、无机盐类、有机营养成、植物生长调节物质、天然物质、pH 、凝固剂。
5、目前应用最广泛的组培基本培养基是MS培养基。
6、培养基最常用的碳源是糖类物质，使用浓度在1%-5%常用3 %。
7、培养基中加入活性炭的目的：减少外植体的褐变8、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值高则有利于根的形成:其比值低则有利于芽的形成。
9、一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象称为"J兑分化_"10、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行（高压蒸汽）灭菌,而要进行过滤方法灭菌。
11、确定花粉发育时期最简捷有效的方法是压片镜检法。
12、液体培养基和固体培养基最主要的区别是：固体培养基中添加了琼脂粉，而液体培养基一般不添加。
13、细胞悬浮培养的方法有分批培养和连续培养。
14、外植体灭菌常用的消毒剂是酒精，使用浓度一般为70—75%。
15、具有防止褐变作用的维生素是抗坏血酸（维生素c）。
16、常用防止褐变的试剂有有机酸、硫代硫酸钠。
17、组培中按照污染的对象分，常见的污染类型有细菌性污染_、真菌性污染。
18、在使用超净工作台进行无菌操作前，应先将借种器械放进超净工作台，并打开紫外线灯和风机组工作进行消毒20分钟左右。
19、配制培养基调节pH值时常用氢氧化钠溶液和稀盐酸溶液。
20、某溶液在使用前已配制成100倍的母液，在使用时，若需要配制1/2 L的培养基，则需要吸取母液的量是5ml。
《植物组织培养技术》 知识清单
《植物组织培养技术》知识清单一、什么是植物组织培养技术植物组织培养技术，简单来说，就是在无菌的条件下，将植物的离体器官、组织、细胞或原生质体等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整植株的技术。
这一技术的出现，为植物的快速繁殖、品种改良、脱毒培养等方面提供了强有力的手段。
二、植物组织培养技术的原理植物细胞具有全能性，这是植物组织培养技术的核心原理。
所谓全能性，是指每个植物细胞都包含着该物种的全部遗传信息，在一定条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
就好像一颗小小的种子，包含了长成参天大树的所有“密码”，只要给予合适的环境和营养，它就能逐步生长、分化，最终成为一棵完整的植物。
而植物组织培养就是人为地创造出适宜的条件，激发细胞的全能性，让它们按照我们期望的方式生长和发育。
三、植物组织培养技术的基本步骤1、外植体的选择与消毒外植体是指用于培养的植物离体部分，比如茎尖、叶片、茎段、花器官等。
选择健康、无病虫害的外植体至关重要。
在选取后，需要对其进行严格的消毒处理，以去除表面的微生物，常用的消毒剂有酒精、升汞等。
2、培养基的制备培养基就像是植物细胞的“营养餐”，为它们的生长和分化提供必要的营养物质和生长调节物质。
常见的成分包括大量元素、微量元素、有机成分、植物激素等。
不同的植物和培养目的，需要的培养基配方也有所不同。
3、接种在无菌操作台上，将消毒后的外植体小心地接种到培养基上，这个过程要确保无菌，避免污染。
4、培养接种后的培养容器要放置在适宜的环境中进行培养，通常包括温度、光照、湿度等条件的控制。
根据培养的目的和植物的特点，培养方式可以分为固体培养和液体培养。
5、继代培养当外植体在培养基上生长一段时间后，需要将其转移到新的培养基上进行继代培养，以促进细胞的分裂和生长。
6、生根与炼苗当培养的芽或愈伤组织生长到一定阶段，需要诱导生根，形成完整的植株。
生根后的植株要经过炼苗，逐渐适应外界环境，然后才能移栽到土壤中。
植物组织培养的概念及培养的技术条件
植物组织培养的概念及培养的技术条件
植物组织培养是指在无菌条件下，通过分离和培养植物细胞、组织或器官，使其在培养基中进行生长和分化的一种技术手段。
植物组织培养的主要技术条件包括：
1. 无菌条件：采用无菌操作器具和培养基、培养室等设备，确保细胞、组织或器官不受外部微生物的污染。
2. 培养基：植物组织培养需要使用合适的培养基，培养基中含有必需的营养物质、激素和维生素等，以满足细胞、组织或器官的生长和分化需求。
3. 光照条件：光照条件对于植物的生长和分化非常重要，通常需要提供适当的光照强度和光照周期。
4. 温度条件：植物组织培养需要在适宜的温度下进行，一般为20-25摄氏度。
5. 湿度条件：保持适宜的湿度可以促进组织的生长和分化，通常需要在培养基上覆盖一层无毒无菌的凝胶，例如琼脂或洋菜粉。
6.pH值：培养基的pH值对于组织的生长和分化也有一定影响，通常在5.5-6.5之间。
总之，植物组织培养的技术条件主要包括无菌条件、合适的培
养基、适宜的光照、温度和湿度等。
这些条件的合理控制可以促进植物细胞、组织或器官的生长和分化，实现组织培养的成功。
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（一）、某培养基的配方是MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA2.5 mg/L＋IBA 1.0 mg/L+ 2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。
MS母液的浓度分别是：大量元素50倍，微量元素100倍，铁盐20倍，有机物100倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.5mg/ml，IBA母液浓度0.2mg/ml。
要配制800ml该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤） 1.BA=0.8*1.5/1=1.2ml 2.NAA=0.8*2.5/0.5=4ml3.IBA=0.8*1/0.2=4ml4.蔗糖=800*2.5%=20g5.琼脂粉=800*0.7%=5.6g（二）、如何减轻试管苗玻璃化现象？如何防止外植体的真菌污染？1. （1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。
或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。
（2）适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。
或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。
（3）增加自然光照。
因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。
（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜（5）在培养基中添加其他物质。
如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。
2.在接种前要求无菌室内做到用空气循环过滤装置使空气过滤灭菌或通过紫外线照射灭菌外，再利用超净工作台接种前，应开机15min以达到空气的充分过滤灭菌。
而且接种时严格操作，如在接种前去掉橡皮筋，打开棉塞时动作要轻及去掉瓶塞后瓶子应拿成斜角，最好瓶口放在酒精火焰的前方等等（三）、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？选材：较幼嫩的材料，器官的生理状态和发肓年龄，外植体的大小为0.5－1.0cm消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗2~3次+2%~10%NaClO （0.1%HgCl2）12min+无菌水冲洗3次。
（第三章5页）接种：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外植体送入瓶中。
一．植物组织培养成功的关键是什么？1.无毒无菌的环境2.生长素或生长素类似物3.通常用固体培养基(琼脂)4.先进行植物组织或器官的脱分化5.长出根来后要保证根呼吸所需氧气二．植物外植体的表面消毒剂种类1、漂白粉（1%~10%的滤液）2、次氯酸钠溶液（0.5%~10%）3、氯化汞（0.1%~1%）4、酒精（70%~75%）5、过氧化氢（3%~10%）6、新洁尔灭等。
三．植物组织培养技术的常见难题及防治方法。
1污染问题：分为细菌和真菌1）外植体的灭菌要彻底. 要获得完全无菌的接种材料2）严格遵守无菌操作规程3）加入抗生素4）无菌培养5）控制外植体的接种数量6）一旦发现已经有了污染的苗头，最好马上转接到新的培养基上2 外植体和愈伤组织的褐化问题①选择适宜的外植体及最佳培养基②对于易褐变的材料注意改善培养条件，并进行连续转接，勤换新鲜培养基。
③在培养基中加入抗氧化剂，如抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白等。
④在培养基中加入吸附剂，如：活性炭。
3 玻璃化的问题（1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。
或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。
（2）适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。
或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。
（3）增加自然光照。
因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。
（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜（5）在培养基中添加其他物质。
如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。
四．活性炭、蔗糖在组织培养中的作用。
1.促进芽的增殖、茎和苗的生长。
在茎尖培养和茎段培养时，为防止褐变和有害物质的积累，常在培养基中加入适量活性炭。
2.用于生根培养基。
活性炭最广泛的应用是用于培养物的生根。
一般认为活性炭创造的黑暗环境有利于根的诱导和根系的生长。
3.用于胚培养，促进成苗。
活性炭抗褐化效果比柠檬酸、聚乙烯吡咯烷酮效果都好。
4.用于花药培养。
花药培养的主要目的是诱导花粉发育成单倍体，可以快速地获得纯系，缩短育种周期。
五．病毒在植物体内的运转方式。
从细胞到细胞的短距离运转，经过细胞间的胞间连丝向邻近细胞中扩散，速度很慢。
烟草普通花叶病毒运转速度为6-13μm/h。
长距离运转，通过寄主植物韧皮部的输导组织随着营养输送进行转移,速度很快。
一旦病毒进入韧皮部，运转速度突然增快。
例如：水稻条纹叶枯病毒运转速度为25cm/h。
六．花药和花粉培养与单倍体的关系。
培养花粉粒的单倍体植株，并使单倍体加倍，作为育种材料的来源。
花粉植株经染色体加倍而来的二倍体，在遗传上是纯合的，其自交后代不再分离，缩短育种周期。
七．悬浮培养的材料必须达到的要求。
一般条件下，以幼胚诱导的愈伤组织为最佳（质量好，分化能力强）。
用颗粒细小，疏松易碎，外观湿润，鲜艳的白色或黄色的愈伤组织，比较疏松易碎，经过几次筛选，继代全稳定后，可以用于诱导悬浮细胞系。
八．植物组织培养技术的主要用途。
植物组织培养技术是近代生物科学发展起来的一门新技术，是生物技术(即生物工程）的主要组成部分，是在超净的组培室中进行快繁脱毒即工厂化的裁培室中进行规模生产。
自从问世以来，对农业、林业、蔬菜、果树、花卉以及药用植物新品种培育，品种脱毒，提纯复壮，快速无性繁殖，扩大种苗生产均产生了划时代影响。
1）在植物育种中的应用2）在植物脱毒和离体快繁中的应用3）在次生代谢产物生产中的应用4）在植物种质资源保存和交换中的应用5）在遗传、生理、生化、病理等研究中的应用九．原生质体的融合方式和纯化步骤融合方式：自发融合：在溶解细胞壁过程中，有些原生质体能彼此融合形成同核体。
诱导融合：用物理或化学的方法来诱导原生质体的融合。
步骤：两个或多个原生质体的质膜彼此靠近，局部区域质膜紧密粘连，彼此融合，融合完成，形成球形的异核体或同核体。
纯化：●沉淀物重新悬浮于清洗培养基中，在50g离心3-5min后再悬浮，如此反复洗涤2-3次。
●为了纯化出有活力的原生质体，将沉淀悬浮于少量清洗培养基，置于含有蔗糖溶液（21%）的上部，在100g下离心5-10min后，在蔗糖溶液和原生质体悬浮培养基的界面上会出现一个纯净的原生质体带，将此带吸收后，再反复洗涤2次，最后用原生质体培养基洗一次。
10、植物离体保存的主要步骤一、常温保存：在常温（20±5）℃下，通过改变培养基中某些培养物质的浓度，改变培养的环境条件，可达到保存目的。
在保存材料上覆盖一层矿物油如石蜡、硅酮油或液态石油。
降低培养环境的氧分压。
二、常低温和低温保存：常低温（15-0℃）和低温（0- -50 ℃）保存，还可辅以改变培养基成分和培养条件，以减缓材料的生长速度减缓继代时间，故又称为最小生长法。
根据植物对温度的耐受力确定其抑制生长的保存温度。
在低温保存时还可以结合低压来取得更好的效果主要通过降低培养物周围的大气压，也可以通过在正常的气压下加入惰性气体而降低氧分压。
低气压和低氧压都可抑制植物的生长，但不会导致培养物表现型上的差异。
三、超低温保存：快速冷冻法：适用于培养物细胞体能小，胞质浓、含水量低、液泡化程度低的材料。
将植物材料从0℃或其他预处理温度直接投入液氮罐中，降温速度为1000℃/min以上。
这种快速降温可使细胞内的水在迅速越过-140℃这一冰晶形成的危险温度期后，细胞内的水形成“玻璃化”状态，不会对细胞产生破坏作用。
慢速冷冻法：适用于含有大液泡的成熟细胞，这种细胞含水量高，在慢速降温过程中，可以使细胞内的水有充足的时间不断地渗到细胞外结冰而避免在细胞内结冰。
将植物材料以0.1—10℃/min的降温速度从0℃降到-100℃左右，而后立即浸入液氮罐中或以同样的速度连续降温至-196℃。
脱水干燥法：将培养材料的含水量降到一定程度，在进入液氮罐中，这样可使植物免遭冻死。
无菌气流中干燥、硅胶干燥、21—29℃烘箱内真空干燥法等方法将含水量降到27-40%。
玻璃化法：用高浓度的复合玻璃化保护剂使样品脱水减轻机械损伤和溶液效应，应用价值高。
包埋脱水法：将样品用高浓度的蔗糖进行预处理，包埋到海藻酸胶中，避免了二甲亚砜和甘油的毒性。
11、防止外植体的真菌污染在接种前要求无菌室内做到用空气循环过滤装置使空气过滤灭菌或通过紫外线照射灭菌外，再利用超净工作台接种前，应开机15min以达到空气的充分过滤灭菌。
而且接种时严格操作，如在接种前去掉橡皮筋，打开棉塞时动作要轻及去掉瓶塞后瓶子应拿成斜角，最好瓶口放在酒精火焰的前方等等。
12、培养基的配制基本方法（1）首先在烧杯内放一定量的蒸馏水，以免加入药液时溅出。
（2）再按母液顺序，根据不同母液的不同倍数取规定的量。
（3）加完后一并倒入已溶化的琼脂中，再放入蔗糖，定容至所需体积，继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，根据培养基配方及培养基体积加入所需要的生长调节物质。
（4）当培养基配制好后应立即进行PH值的调整。
最好用酸度计。
如无条件也可用精密PH 试纸，pH值可用1mol·L-1KOH（或NaOH）溶液和2mol ·L-1HCI调整。
（5）配制好的培养基要趁热分装，分装时可采用烧杯漏斗直接分注。
一般以占试管或三角瓶等培养容器的1/4—1/3为宜。
（6）由于未经灭菌处理的培养基既可能带有各种杂菌，同时又是各种杂菌良好的生长繁殖场所，因此培养基分装后应立即置于灭菌锅内进行灭菌（7）高压灭菌后的培养基凝固后，宜将培养基放倒培养室中预培养2—3天若没有杂菌污染才可放心使用。
13、植物脱毒程序、途径和鉴定方法。
程序：利用植物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的病毒，生产健康的繁殖材料。
途径：植物茎尖培养脱毒法提高脱毒效果：热处理脱毒法和茎尖脱毒法相结合。
化学处理脱毒法和茎尖脱毒法相结合。
鉴定方法：1 直接鉴定法直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状2 生物鉴定法（敏感植物鉴定法）有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，把这种植物称为病毒敏感植物或指示植物。
3 抗血清鉴定法当动物被病毒感染或人工注射异体蛋白质时，一种特异性丙种球蛋白称为免疫球蛋白体在特殊细胞内形成，进入血液存在于血清和体液内。
这种含有特异性“抗体”的血清称为“抗血清”。