三参通脉合剂质量控制的研究

中国医药指南２０１０年ｌ２月弟８卷弟３４期Ｇｕｉｄｅ　ｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０ｌ０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．３４　三参通脉合剂质量控制的研究　车晓平　郑立红　李洋　赵小伟　【摘要】目的建立三参通脉合剂的定性质量控制标准。　结果ＴＬＣ可捡出丹参、延胡索、赤白芍的特征斑点，　【关键词】三参通脉合剂；ＴＬＣ　中图分类号：Ｒ２８２．７１０。３　文献标识码：Ｂ　实验研究ｌ　５ｌ　方法采用薄层色谱法（ＴＬＣ）对处方中的丹参、延胡索、赤白芍进行定性鉴别研究。　阴性无干扰。结论方法可行、重复性好。　文章编号：１６７１－８１９４（２０１０）３４－００５１－０２　

“三参通脉合剂”为北京中医医院心血管科主要制剂，功能为益气　养阴，活血止痛。用于气阴两虚，心脉瘀阻所致胸痹心痛、心悸、气　短、心烦失眠、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心绞痛，属于标本同治，　通过气阴双补，使心气得复，阴血得充，阴阳调和，心脉通畅。因含有　多种不稳定成分，致使质量不易控制，为控制产品内在质量，本文采用　ｌ　２　３　４　ｌ￣２为合剂供试品；３为原儿茶醛　对照品；４为缺丹参的阴性样品　图ｌ三参通脉合剂中丹参的　ＴＬＣ（日光）　薄层色谱法对其进行质量控制研究，　１仪器与试药　１．１仪器　ＡＥＬ－２００电子天平（湘仪岛津）。　１．２试药　ｌ　２　３　４　１－２为合剂供试品；３ｈ延胡索乙素　对照品；４为缺延胡索的阴性样品　图２三参通脉合剂中延胡索的　ＴＬＣ（日光）　进一步完善质量控制方法。　原儿茶醛对照品（批号：１　１０８１０－２００５０６）、延胡索乙素对照品（批　号：１１０７２６－２００６ｌ０）、芍药苷对照品（批号：Ｉｌ０７３６－２００９３４），中国药　品生物制品检定所购置，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。　１．３样品　三参通脉合剂（自制）。　２方法与结果　定性鉴别。　２．１丹参的薄层色谱鉴别　取本品１　５ｍＬ，加水１０ｍＬ，混匀，用醋酸乙酯萃取３次，每次　１　５ｍＬ，合并醋酸乙酯提取液，水浴蒸干，残渣加ｌｍＬ乙醇使溶解，　作为供试品溶液。另称取对照品原儿茶醛５ｍｇ，加乙醇定容至５ｍＬ，　制成对照品溶液。取不含丹参的空白溶液依供试品制备方法制备阴性　对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取各ｌ０ｐＬ上述３种溶液，分别点于　同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿－丙酮－甲酸（１６：２：３）为展开剂，展　开，取出，晾干，喷以５％Ｚ氯化铁乙醇液，放置２４ｈ后检视。供试品　色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对　照在此无干扰。结果见图ｌ。　

１　２　３　４　Ｉ　２　３　４　ｌ～２为合剂供试品；３为延胡索乙素１－２为合剂供试品；３为芍药苷对　

对照品；４为缺延胡索的阴性样品　照品；４为缺赤、白芍的阴性样品　图３三参通脉合剂中延胡索的　图４三参通脉合剂中芍药苷的　ＴＬＣ（荧光）ＴＬＣ（日光）　２ｌ２延胡索的薄层色谱鉴别…　取本品ｌ０ｍＬ，加水ｌ０ｍＬ，混匀，滴加浓氨试液将其调成碱性，　用乙醚萃取３次，每次２０ｍＬ，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣加　ｌｍＬ甲醇使溶解，作为供试品溶液。另称取延胡索乙素对照品５ｍｇ，　加甲醇定容至５ｍＬ，制成对照品溶液。取不含延胡索的空白溶液依供　试品制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取各ｌ０¨Ｌ　上述３种溶液，分别点于同一块１％氢氧化钠溶液制备的硅胶Ｇ薄层板　上，以甲苯－丙酮（９：２）展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘液使斑　点显色清晰。日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位　置上，显相同颜色的斑点。使碘在空气中挥尽，检视于３６５ｎｍ紫外灯　下，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧　光斑点。阴性对照在此无干扰。结果见图２和图３。　２－３芍药苷的薄层色谱鉴别　０　取２０ｍＬ本品，用水饱和的正丁醇萃取３次（每次２０ｍＬ），合并正　丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤３次（每次２０ｍＬ），分取正丁醇液，　

北京中医医院制剂室（１　０００１　０）　５２　Ｉ实验研究　中国医药指南２０１０年１２月笨８誊第３４期Ｇｕｉｄｅ　ｏｆＣｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．３４　水浴蒸千，残渣加５ｍＬ　８０％甲醇使溶解，嚣已处理好的中性氧化铝柱　（１００￣２００目，５ｇ，内径１０ｒａｍ）上，用４ＯｒａＬ　ｓＯ％甲醇洗脱，收集洗　脱液，水浴蒸干，残渣加１ｍＬ乙醇使溶解，怍为供试品溶液。另称取　芍药苷对照品５ｍｇ，加乙醇定容至５ｍＬ，制成对照品溶液。取不含白　芍、赤芍的空白溶液依供试品制备方法制备阴性对照溶液。照薄层　色谱法试验，吸取各ｌＯ　ｕ　Ｌ上述３种溶液，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板　上，以氯仿－甲醇－醋酸乙酯－甲酸（２０：５：２．５：０．１）为展开剂，展　开，取出，晾干，喷以５％香草醛硫酸溶液，热风吹使斑点显色清晰。　供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同蓝紫色的斑　点。阴性对照在此无干扰　结果见图４。　３讨论　（上接４２页）　学会制定的系统性红斑狼疮分类诊断标准，患者有不同程度的关节疼　痛和乏力表现，但排除有凝血功能障碍、皮肤细菌感染患者以及妊娠　和哺乳期妇女。　１．２研究方法　１．２．１研究设计　采用自身对照，即比较治疗前后患者各观察指标的变化，说明环　磷酰胺冲击疗法对系统性红斑狼疮的治疗效果。　１．２．２治疗方法　用环磷酰胺冲击治疗，每２周１次，剂量８一ｌ２ｍｇ／ｋｇ，加人１００ｍＬ　生理盐水作静脉滴注，每次静滴时间在１ｈ以上，连用２ｄ，总剂量控制　在ｌ　５０ｍｇ／ｋｇ以内；之后改为３个月冲击１次以维持疗效。同时每日Ｉ：１服　强的松，剂量ｌｍｇ／ｋｇ，使用８Ｎ后每周将剂量减少１０％至隔日Ｉｍｇ／ｋｇ，　维持治疗一段时间后将剂量减至隔Ｅｔ　０．４ｍｇ／ｋｇ。　ｌ－３观察指标　ｌＩ３．１总的临床疗效。　１－３．２实验室指标变化　主要是抗核抗体滴度、抗ｄｓ—ＤＮＡ抗体滴度和补体ｃ冰平。　１．４统计分析　用ＳＰＳＳ１３．０统计软件进行数据整理和分析，分析方法用两组比较　的ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结果　２．１Ｉ临床疗效　疗效判定依据国际通用的系统性红斑狼疮病情活动指数ＳＬＥＤＡＩ・　２Ｋ评分，如果评分在４分以内，则评定为显效；如果评分在４～ｌ２分，　则评定为有效；如果治疗前后评分无明显变化，则评定为无效　。经　连续３次免疫吸附治疗后，４８例患者中显效】５例，有效３ｌ例，无效２　例，治疗总有效率９５．８％。　２．２实验室指标变化　吸附前平均抗核抗体滴度为４１２．６ｐｇ／Ｌ，吸附后降为１２３．４　１ｕｇ／Ｌ，吸　附前后比较差异有统计学意义（Ｊｐ＜Ｏ．０５），其ｏ０２４例患者在经第１次　吸附后抗体滴度下降超过５０％，６Ｎ患者在第２次吸附后抗体滴度下降　超过５０％，１８例患者在经过２次吸附治疗后抗体滴度恢复至正常水平；　吸附前平均抗ｄｓ・ＤＮＡ抗体滴度为３１０．４１Ｕ／Ｌ，吸附后降为５２．５ＩＵ／Ｌ，与　治疗前比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；而补体Ｃ冰平吸附前后比　较差异并无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见表ｌ。　３讨论　临床上对系统性红斑狼疮的治疗主要是药物治疗，包括糖皮质激　“三参通脉合剂”为北京中医医院院内制剂，因含有多种不稳定　成分，致使质量不易控制。本文完善了三参通脉合剂的定性质量标　准，以君药丹参，臣药赤自芍、延胡索中的主要成分原儿茶醛、芍药　苷、延胡索乙素作为定性鉴别质量控制指标，结果良好，对本品的薄　层色谱鉴别均作了阴性对照试验，阴性无干扰，结果表明此法简单、灵　敏度高、重现性好、专属性强，可作为本品定性鉴别的依据。　参考文献　【ｌ１刘芬，付超美，周绚，等．温心活血颗粒的质量标准研究【Ｊ１．四川省　卫生管理干部学院学报，２００８，２７（２）：８２．　ｆ２】章常华，曾宗浪，施宏斌，等．痛经灵颗粒质量标准的研究【Ｊ】．亚太　传统医药，２００８，４（４）：３５．　

表Ｉ　４８１％患者免疫吸附治疗前后实验室指标变化比较（　士Ｓ）　

素以及免疫抑制剂　。环磷酰胺即是临床上常用的细胞毒性免疫抑制　剂，常用于对风湿免疫性疾病的治疗，但口服后会对人体正常细胞的　生长和发育带来影响，这种药理和毒理的双向功能引起了不同领域研　究人员的兴趣。近年来，环磷酰胺静脉冲击治疗在临床的广泛应用即　是其中之一，本义也对此作丁研究，也再次证明了环磷酰胺冲击治疗　的作用。　本文４８例系统性红斑狼疮患者经冲击治疗后，治疗总有效率达到　Ｔ９５．８％，抗核抗体滴度和抗ｄｓ・ＤＮＡ抗体滴度均明显下降，补体Ｃ，在　吸附后即有所上升，可能与体内免疫复合物被清除、固定补体减少有　关，也是与环磷酰胺的药理作用分不开的。作为烷基化抗细胞代谢药　物，环磷酰胺在体外并无活性，但是进入人体后会在肝微粒体酶系的　作用下氧化生成醛磷酰胺，井进一步在细胞内分解成磷酰胺氮芥，完　成与ＤＮＡ￣９烷化过程，细胞分裂ｓ期是其主要作用周期，并且能减少　￥细胞分泌抗体，对Ｔ细胞介导的非特异性炎性反应也有较强的抑制　作用，可以减少肾小球内免疫复合物的沉积，起到直接或间接的抗炎　作用‘　。　总之，环磷酰胺冲击治疗系统红斑狼疮效果显著，值得在临床推　广应用。　参考文献　【ｌ】汤颖，娄探奇，陈珠江等．应用ＤＮＡ２８０免疫吸附器治疗３０例系统　性红斑狼疮患者的临床观察【Ｊ】．中国血液净化杂志，２００５，４（１２）：　６４９．６５１．　【２】刘鸿林，牡志勋．抗核抗体和抗双链ＤＮＡ检测在系统性红斑狼疮　诊断中的意义【Ｊ】．中国医药导报，２００８，５（１）：１６３．　ｆ３】李冶玖，齐兆生，刘玉法等．ＤＮＡ免疫吸附剂血液灌流治疗系统　性红斑狼疮临床应用研究【Ｊ１．巾同生物医学工程学报，２００７，２４　（５）：４２２－４２３　【４】Ｇａｕｂｉｔｚ　Ｍ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ　ＫＭ．１ｍｍｕｎｏａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｌｕｐｕｓ　ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＴｈｅｒＡｐｈｅｒ　Ｄｉａｌ，２００３，７（２）：１８３－１８８．　【５】赵淑珍．ＤＮＡ免疫吸附治疗狼疮性肾炎的临床观察【Ｊ】．中国血　液净化，２００９，８（１０）：５４ｌ－５４３．