金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定_袁小铃
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2 结果与分析
2. 1 金线莲组培快繁技术的优化 以 MS + 3% 蔗糖 + NAA 0. 5 mg·L － 1 + 20% 香
蕉泥 + 0. 9% 琼脂粉为基础培养基，按 6-BA 终浓 度为 5. 0，4. 5，4. 0，3. 0，2. 5，2. 0 和 1. 0 mg· L － 1 加入不同体积的浓度为 1 mg·mL － 1 的母液。在 上述培养基上分别接种长度为 0. 5 ～ 1. 0 cm 茎段 （ 含节） ，0. 3 ～ 0. 5 茎段 （ 含节） ，0. 3 ～ 0. 5 cm 茎 段 （ 节结处分开） ，结果发现，在 6-BA 终浓度为
组 培 苗 多 糖 D490 值 分 别 为 0. 305， 0. 309， 0. 310 （ 表 1） ，根据标准曲线计算 3 个重复样品多 糖浓度分别为 4. 50，4. 56，4. 57 mg·mL － 1 ，平均 多糖浓度为 4. 54 mg·mL － 1 ，栽培苗中多糖含量分 别为 17. 88% ，18. 21% 和 16. 63% ，平 均 含 量 为 17. 57% ； 微 扦 插 苗 多 糖 D490 值 分 别 为 0. 296， 0. 302，0. 280 （ 表 2 ） ， 计 算 其 多 糖 浓 度 分 别 为
第 56 卷 2015 年第 7 期
983
文献著录格式： 袁小铃，王建栋，王思雨，等． 金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定 ［J］． 浙江农业科学，2015，56 （ 7） ： 983 － 985． DOI： 10. 16178 / j. issn. 0528-9017. 20150710
金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定
金线莲种子发芽率低，根系不发达，再加上各 种病原物的侵袭，生态环境的破坏和人类的过度采 挖，使野生金线莲资源处于濒临枯竭的状态。目前 常用 1 ～ 2 cm 茎段作为外植体的微扦插法获得种苗 用于人工栽培，因为繁殖系数低，并不能有效缓解 金线莲原植物资源匮乏的现状。本文对金线莲组培 快繁技术进行优化，并对多糖含量进行测定，以确 定组培苗能否代替微扦插苗作为种苗用于人工栽 培，以缓解金线莲资源匮乏的现状。
节处断开的茎段； 6-BA / NAA 浓度比为 6∶ 1； 添加 0. 3% 的活性炭不能明显促进愈伤组织和丛生芽的形成，甚至
Hale Waihona Puke Baidu
略微抑制丛生芽的形成。炼苗采用泥炭和河沙的混合物，并用薄膜覆盖。通过超声辅助法提取金线莲多糖，并
用苯酚-硫酸法测定多糖含量可知，组培苗与微扦插苗多糖含量并无明显差异。
关键词： 金线莲； 外植体； 激素配比； 添加物； 多糖含量
收稿日期： 2015-02-11 基金项目： 浙江省自然科学基金 （ LY14H280008） ； 浙江农林大科研发展基金人才启动项目 （ 2014FＲ062） 作者简介： 袁小玲 （ 1994 － ） ，女，浙江吴兴人，本科生，生物制药专业。 通信作者： 王红珍，从事药用植物资源优化与改良研究工作。E-mail： wang. hongzhen@ 163. com。
4. 0，3. 0 mg · L － 1 时 的 培 养 基，即 6-BA / NAA 为 8∶ 1和 6∶ 1 时，可诱导 3 种外植体产生愈伤组织， 0. 3 ～ 0. 5 cm 茎段 （ 节结处断开） 产生愈伤组织数 目最多。与 6-BA / NAA 为 8∶ 1 的培养基相比，在 6BA / NAA 为 6∶ 1 培养基上，3 种外植体产生的愈伤 组织数目较高。因此，选用 6-BA / NAA 为 6∶ 1 为诱 导愈伤组织的激素配比。
5% 苯酚溶液的配制。将苯酚晶体加热融化， 取 5 mL 苯酚溶液加水定容至 100 mL，装入棕色瓶 中避光备用。
葡萄糖溶液的配制。葡萄糖 105 ℃ 恒温干燥 2 h，冷却至室温，配制成浓度为 1 mg·mL － 1 的标 准液，4 ℃ 保 存 备 用。分 别 取 标 准 液 0. 1，0. 2， 0. 3，0. 4，0. 5，0. 6 mL，加蒸馏水至 2. 0 mL，分 别加入 1. 0 mL 5% 苯酚溶液混匀和浓硫酸 5. 0 mL， 摇匀后静置 10 min，紫外分光光度计测定器490 nm 处的吸光度 （ D490 ） 。
量并无明显影响，但略为抑制丛生芽的形成和生
长，可能是活性炭吸附了培养基中的某些营养成
分，导致添加活性炭反而不利于丛生芽的生长发 育。在 MS + 3% 蔗糖 + 3 mg·L － 1 6-BA + 0. 5 mg· L － 1 NAA + 20% 橡胶泥 + 0. 9% 琼脂粉上可形成大
［6 ］ ［7 ］ ［8 ］
984
第 56 卷 2015 年第 7 期
供试品的配制。量取 0. 2 mL 多糖溶液，加水 定容至 2. 0 mL，然后加入 1. 0 mL 5% 苯酚溶液混 匀，加浓硫酸 5. 0 mL，摇匀后室温放置 10 min， 测定 D490 值。 1. 4 分析方法
Grubbs 检测 （ G = | 估计值 － 平均值 | / 标准 方差） 去除与全体观测值偏离较大的数据，当样 品数为 3 时，G 大 于 1. 155 时，去 除 相 应 的 数 值 所得［5］。
1 材料与方法
1. 1 植物材料 花叶开 唇 兰 （ A． Ｒoxburghii） 无 菌 苗 在 16 h
光照 /8 h 黑暗和 25 ℃ 条件下生长至株高 5 ～ 6 cm。
选用不同长度 （ 带节和节处断开） 的茎段为外植 体，接种到不同培养基上进行诱导愈伤组织、丛生 芽、生根培养等。 1. 2 超声波辅助法提取金线莲多糖
在 MS + 3% 蔗 糖 + 6-BA 3 mg · L － 1 + NAA 0. 5 mg·L － 1 + 20% 香蕉泥 + 0. 9% 琼脂粉培养基 （ Ⅰ） 中添加 3% 活性炭，接种 0. 3 ～ 0. 5 cm 节结 处断开的茎段，结果发现，0. 3% 活性炭的加入对 愈伤组织和丛生芽的形成并无明显促进作用 （ 图 1 中 A） ，且抑制丛生芽的形成和生长发育 （ 图 1 中 B） 。结果 表 明，Ⅰ 培 养 基 上 可 产 生 大 量 丛 生 芽 （ 图 1 中 C） ，丛生芽诱导率 （ 不定芽数目 /外植体 数目） 达 30% ～ 40% 。生根培养基为 MS + 3% 蔗 糖 + 0. 5 mg·L － 1 NAA + 20% 香蕉泥 + 0. 9% 琼脂 粉。生根苗于泥炭和河沙料中炼苗，并用塑料薄膜 覆盖，15 d 后人工种植。
17. 53% ，16. 58% ，平均为 17. 19% 。两者多糖含量无 显著差异。
表1
样品 组培苗
组培苗和微扦插苗的多糖含量
取样量 /g 1. 006 2 1. 001 0 1. 100 0
D490 0. 305 0. 309 0. 310
多糖含量 /% 17. 88 18. 21 16. 63
袁小铃，等： 金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定
985
4. 36，4. 45，4. 13 mg· mL － 1 ， 平 均 浓 度 为 4. 31 芽的过程中发挥中一定的作用。
mg · mL － 1 ， 微 扦 插 苗 多 糖 含 量 分 别 为 17. 46% ，
通过优化组培快繁技术，使金线莲的不定芽 /
中图分类号： S 567
文献标志码： B
文章编号： 0528-9017（ 2015） 07-0983-03
金 线 莲 也 叫 金 线 兰， 为 兰 科 开 唇 兰 属 （ Anoectochilus ） 花 叶 开 唇 兰 和 金 线 兰 （ A． formosanus Hayata） 的全草。其味甘、性平，具有 凉血祛 风， 除 湿 解 毒、 强 心 利 尿、 固 肾 平 肝 等 功 效，主治肾炎、肺炎、高血压、糖尿病、高血压、 乙型肝炎等症［1 － 2］。在民间有 “药王” 或 “神草” 之称。金线莲含有金线莲苷、黄酮类、多糖、挥发 油、甾体 和 三 萜 类 化 合 物、维 生 素 和 矿 物 元 素 等［1］。其中植 物 多 糖 有 调 节 免 疫 能 力、抗 肿 瘤、 降血糖、抗衰老、保肝等功效［3］。
在 MS + 3% 蔗糖 + 6-BA 3. 0 mg · L － 1 + NAA 0. 5 mg·L － 1 + 20% 香蕉泥 + 0. 9% 琼脂粉中添加
0. 3% 活性炭对愈伤组织诱导、丛生芽的生长和数
［4 ］ ［5 ］
秦文玲． 五倍子多糖的提取及其抗氧化和抑菌特性研究 ［D］． 成都： 成都理工大学，2008. Miller J， Miller J． Statistics and chemometrics for analytical chemistry ［M］． 6th ed． Ontario： Pearson Education Canada
用超声波辅助法提取金线莲多糖［4］，金线莲恒 温干燥粉碎后过 40 目筛，称取适量粉末，按料液比 1∶ 35 加入超纯水，60 ℃ 超声 30 min，4 200 rpm · min － 1 离心 15 min，收集上清。重复提取残渣 3 次， 合并 3 次提取液。上清中加入活性炭进行脱色处 理，抽滤后真空旋转蒸发至 10 mL，加入 40 mL 无 水乙醇，4 ℃ 过夜沉淀多糖，离心收集沉淀后溶于 40 mL 超 纯 水。 测 定 多 糖 含 量， 每 个 样 品 重 复 3 次。 1. 3 苯酚-硫酸法测定金线莲多糖含量
量的丛生芽，丛生芽诱导率 （ 不定芽数目 /外植体
数目） 远高于用茎片和茎段作为外植体诱导不定 芽的诱导率［7 － 9］。说明在节处断开的茎段作为外植
［9 ］
导研究 ［J］． 亚热带植物科学，2011，40 （ 3） ： 41 － 43. 杨清林，管天冰，戴传云． 台湾金线莲丛生芽的诱导与增 殖研究 ［J］． 安徽农业科学，2012，40 （ 17） ： 41 － 43．
袁小铃，王建栋，王思雨，张熠玲，刘洪波，邵清松，梅璟妍，王红珍*
（ 浙江农林大学 林业与生物技术学院，浙江 临安 311300）
摘 要： 金线莲野生资源极度匮乏，以微扦插苗繁殖种苗并不能有效缓解紧缺现状。通过选择最佳外植体、
激素配比及适合添加物，以优化金线莲组培快繁技术。结果表明，金线莲组培快繁最佳外植体为在 0. 3 ～ 0. 5 cm
外植体达到 30 ～ 40，远高于微扦插不定芽 / 外植体 1 ～ 2，极大增强了濒危金线莲资源的繁殖系数，同 时，其重要的活性成分，如多糖含量并无明显差 异，因此利用组培苗代微扦插苗作为种苗，是缓解 金线莲资源紧缺的有效途径。
参考文献：
微扦插苗
1. 000 0 1. 016 5 0. 995 3
0. 296 0. 302 0. 280
17. 46 17. 53 16. 58
［1 ］ ［2 ］
南京中医药大学． 中药大辞典 ［M］． 2 版． 上海： 上海科 学技术出版社，2005. 福建中医药研究所． 福建药物志第 2 册 ［M］． 福州： 福建
3 小结和讨论
［3 ］
科技出版社，1982： 215. 钱青，张志勇． 植物活性多糖的药理作用及应用研究进展 ［J］． 华西医学，2009，24 （ 1） ： 250 － 252.
图 1 金线莲组培快繁体系优化
2. 2 多糖含量测定 分别 吸 取 1 mg · mL － 1 的 标 准 液 0. 1，0. 2，
0. 3，0. 4，0. 5，0. 6 mL，加蒸馏水至 2. 0 mL，然 后加入 1. 0 mL 5% 苯酚溶液混匀，迅速滴加浓硫酸 5. 0 mL，摇匀后静置 10 min［6］，测定 D490 值。以标 准液浓度为横坐标，D490 值为纵坐标，所得标准曲 线为 y = 26. 81x + 0. 003 5； Ｒ2 = 0. 998 5。
Inc，2010． . 田广文，陈德育，李学俊，等． 猪苓多糖苯酚-硫酸法测定 条件的优选 ［J］． 中国农学通报，2007，23 （ 7） ： 75 － 78. 冯亦平，张利平，王岩花，等． 金线莲外植体的筛选及不 定芽诱导的研究 ［J］． 种子，2009，28 （ 10） ： 19 － 22. 王雅英，林小华，洪璇． 金线莲外植体筛选及愈伤组织诱
2. 1 金线莲组培快繁技术的优化 以 MS + 3% 蔗糖 + NAA 0. 5 mg·L － 1 + 20% 香
蕉泥 + 0. 9% 琼脂粉为基础培养基，按 6-BA 终浓 度为 5. 0，4. 5，4. 0，3. 0，2. 5，2. 0 和 1. 0 mg· L － 1 加入不同体积的浓度为 1 mg·mL － 1 的母液。在 上述培养基上分别接种长度为 0. 5 ～ 1. 0 cm 茎段 （ 含节） ，0. 3 ～ 0. 5 茎段 （ 含节） ，0. 3 ～ 0. 5 cm 茎 段 （ 节结处分开） ，结果发现，在 6-BA 终浓度为
组 培 苗 多 糖 D490 值 分 别 为 0. 305， 0. 309， 0. 310 （ 表 1） ，根据标准曲线计算 3 个重复样品多 糖浓度分别为 4. 50，4. 56，4. 57 mg·mL － 1 ，平均 多糖浓度为 4. 54 mg·mL － 1 ，栽培苗中多糖含量分 别为 17. 88% ，18. 21% 和 16. 63% ，平 均 含 量 为 17. 57% ； 微 扦 插 苗 多 糖 D490 值 分 别 为 0. 296， 0. 302，0. 280 （ 表 2 ） ， 计 算 其 多 糖 浓 度 分 别 为
第 56 卷 2015 年第 7 期
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文献著录格式： 袁小铃，王建栋，王思雨，等． 金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定 ［J］． 浙江农业科学，2015，56 （ 7） ： 983 － 985． DOI： 10. 16178 / j. issn. 0528-9017. 20150710
金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定
金线莲种子发芽率低，根系不发达，再加上各 种病原物的侵袭，生态环境的破坏和人类的过度采 挖，使野生金线莲资源处于濒临枯竭的状态。目前 常用 1 ～ 2 cm 茎段作为外植体的微扦插法获得种苗 用于人工栽培，因为繁殖系数低，并不能有效缓解 金线莲原植物资源匮乏的现状。本文对金线莲组培 快繁技术进行优化，并对多糖含量进行测定，以确 定组培苗能否代替微扦插苗作为种苗用于人工栽 培，以缓解金线莲资源匮乏的现状。
节处断开的茎段； 6-BA / NAA 浓度比为 6∶ 1； 添加 0. 3% 的活性炭不能明显促进愈伤组织和丛生芽的形成，甚至
Hale Waihona Puke Baidu
略微抑制丛生芽的形成。炼苗采用泥炭和河沙的混合物，并用薄膜覆盖。通过超声辅助法提取金线莲多糖，并
用苯酚-硫酸法测定多糖含量可知，组培苗与微扦插苗多糖含量并无明显差异。
关键词： 金线莲； 外植体； 激素配比； 添加物； 多糖含量
收稿日期： 2015-02-11 基金项目： 浙江省自然科学基金 （ LY14H280008） ； 浙江农林大科研发展基金人才启动项目 （ 2014FＲ062） 作者简介： 袁小玲 （ 1994 － ） ，女，浙江吴兴人，本科生，生物制药专业。 通信作者： 王红珍，从事药用植物资源优化与改良研究工作。E-mail： wang. hongzhen@ 163. com。
4. 0，3. 0 mg · L － 1 时 的 培 养 基，即 6-BA / NAA 为 8∶ 1和 6∶ 1 时，可诱导 3 种外植体产生愈伤组织， 0. 3 ～ 0. 5 cm 茎段 （ 节结处断开） 产生愈伤组织数 目最多。与 6-BA / NAA 为 8∶ 1 的培养基相比，在 6BA / NAA 为 6∶ 1 培养基上，3 种外植体产生的愈伤 组织数目较高。因此，选用 6-BA / NAA 为 6∶ 1 为诱 导愈伤组织的激素配比。
5% 苯酚溶液的配制。将苯酚晶体加热融化， 取 5 mL 苯酚溶液加水定容至 100 mL，装入棕色瓶 中避光备用。
葡萄糖溶液的配制。葡萄糖 105 ℃ 恒温干燥 2 h，冷却至室温，配制成浓度为 1 mg·mL － 1 的标 准液，4 ℃ 保 存 备 用。分 别 取 标 准 液 0. 1，0. 2， 0. 3，0. 4，0. 5，0. 6 mL，加蒸馏水至 2. 0 mL，分 别加入 1. 0 mL 5% 苯酚溶液混匀和浓硫酸 5. 0 mL， 摇匀后静置 10 min，紫外分光光度计测定器490 nm 处的吸光度 （ D490 ） 。
量并无明显影响，但略为抑制丛生芽的形成和生
长，可能是活性炭吸附了培养基中的某些营养成
分，导致添加活性炭反而不利于丛生芽的生长发 育。在 MS + 3% 蔗糖 + 3 mg·L － 1 6-BA + 0. 5 mg· L － 1 NAA + 20% 橡胶泥 + 0. 9% 琼脂粉上可形成大
［6 ］ ［7 ］ ［8 ］
984
第 56 卷 2015 年第 7 期
供试品的配制。量取 0. 2 mL 多糖溶液，加水 定容至 2. 0 mL，然后加入 1. 0 mL 5% 苯酚溶液混 匀，加浓硫酸 5. 0 mL，摇匀后室温放置 10 min， 测定 D490 值。 1. 4 分析方法
Grubbs 检测 （ G = | 估计值 － 平均值 | / 标准 方差） 去除与全体观测值偏离较大的数据，当样 品数为 3 时，G 大 于 1. 155 时，去 除 相 应 的 数 值 所得［5］。
1 材料与方法
1. 1 植物材料 花叶开 唇 兰 （ A． Ｒoxburghii） 无 菌 苗 在 16 h
光照 /8 h 黑暗和 25 ℃ 条件下生长至株高 5 ～ 6 cm。
选用不同长度 （ 带节和节处断开） 的茎段为外植 体，接种到不同培养基上进行诱导愈伤组织、丛生 芽、生根培养等。 1. 2 超声波辅助法提取金线莲多糖
在 MS + 3% 蔗 糖 + 6-BA 3 mg · L － 1 + NAA 0. 5 mg·L － 1 + 20% 香蕉泥 + 0. 9% 琼脂粉培养基 （ Ⅰ） 中添加 3% 活性炭，接种 0. 3 ～ 0. 5 cm 节结 处断开的茎段，结果发现，0. 3% 活性炭的加入对 愈伤组织和丛生芽的形成并无明显促进作用 （ 图 1 中 A） ，且抑制丛生芽的形成和生长发育 （ 图 1 中 B） 。结果 表 明，Ⅰ 培 养 基 上 可 产 生 大 量 丛 生 芽 （ 图 1 中 C） ，丛生芽诱导率 （ 不定芽数目 /外植体 数目） 达 30% ～ 40% 。生根培养基为 MS + 3% 蔗 糖 + 0. 5 mg·L － 1 NAA + 20% 香蕉泥 + 0. 9% 琼脂 粉。生根苗于泥炭和河沙料中炼苗，并用塑料薄膜 覆盖，15 d 后人工种植。
17. 53% ，16. 58% ，平均为 17. 19% 。两者多糖含量无 显著差异。
表1
样品 组培苗
组培苗和微扦插苗的多糖含量
取样量 /g 1. 006 2 1. 001 0 1. 100 0
D490 0. 305 0. 309 0. 310
多糖含量 /% 17. 88 18. 21 16. 63
袁小铃，等： 金线莲组培快繁体系优化及多糖含量测定
985
4. 36，4. 45，4. 13 mg· mL － 1 ， 平 均 浓 度 为 4. 31 芽的过程中发挥中一定的作用。
mg · mL － 1 ， 微 扦 插 苗 多 糖 含 量 分 别 为 17. 46% ，
通过优化组培快繁技术，使金线莲的不定芽 /
中图分类号： S 567
文献标志码： B
文章编号： 0528-9017（ 2015） 07-0983-03
金 线 莲 也 叫 金 线 兰， 为 兰 科 开 唇 兰 属 （ Anoectochilus ） 花 叶 开 唇 兰 和 金 线 兰 （ A． formosanus Hayata） 的全草。其味甘、性平，具有 凉血祛 风， 除 湿 解 毒、 强 心 利 尿、 固 肾 平 肝 等 功 效，主治肾炎、肺炎、高血压、糖尿病、高血压、 乙型肝炎等症［1 － 2］。在民间有 “药王” 或 “神草” 之称。金线莲含有金线莲苷、黄酮类、多糖、挥发 油、甾体 和 三 萜 类 化 合 物、维 生 素 和 矿 物 元 素 等［1］。其中植 物 多 糖 有 调 节 免 疫 能 力、抗 肿 瘤、 降血糖、抗衰老、保肝等功效［3］。
在 MS + 3% 蔗糖 + 6-BA 3. 0 mg · L － 1 + NAA 0. 5 mg·L － 1 + 20% 香蕉泥 + 0. 9% 琼脂粉中添加
0. 3% 活性炭对愈伤组织诱导、丛生芽的生长和数
［4 ］ ［5 ］
秦文玲． 五倍子多糖的提取及其抗氧化和抑菌特性研究 ［D］． 成都： 成都理工大学，2008. Miller J， Miller J． Statistics and chemometrics for analytical chemistry ［M］． 6th ed． Ontario： Pearson Education Canada
用超声波辅助法提取金线莲多糖［4］，金线莲恒 温干燥粉碎后过 40 目筛，称取适量粉末，按料液比 1∶ 35 加入超纯水，60 ℃ 超声 30 min，4 200 rpm · min － 1 离心 15 min，收集上清。重复提取残渣 3 次， 合并 3 次提取液。上清中加入活性炭进行脱色处 理，抽滤后真空旋转蒸发至 10 mL，加入 40 mL 无 水乙醇，4 ℃ 过夜沉淀多糖，离心收集沉淀后溶于 40 mL 超 纯 水。 测 定 多 糖 含 量， 每 个 样 品 重 复 3 次。 1. 3 苯酚-硫酸法测定金线莲多糖含量
量的丛生芽，丛生芽诱导率 （ 不定芽数目 /外植体
数目） 远高于用茎片和茎段作为外植体诱导不定 芽的诱导率［7 － 9］。说明在节处断开的茎段作为外植
［9 ］
导研究 ［J］． 亚热带植物科学，2011，40 （ 3） ： 41 － 43. 杨清林，管天冰，戴传云． 台湾金线莲丛生芽的诱导与增 殖研究 ［J］． 安徽农业科学，2012，40 （ 17） ： 41 － 43．
袁小铃，王建栋，王思雨，张熠玲，刘洪波，邵清松，梅璟妍，王红珍*
（ 浙江农林大学 林业与生物技术学院，浙江 临安 311300）
摘 要： 金线莲野生资源极度匮乏，以微扦插苗繁殖种苗并不能有效缓解紧缺现状。通过选择最佳外植体、
激素配比及适合添加物，以优化金线莲组培快繁技术。结果表明，金线莲组培快繁最佳外植体为在 0. 3 ～ 0. 5 cm
外植体达到 30 ～ 40，远高于微扦插不定芽 / 外植体 1 ～ 2，极大增强了濒危金线莲资源的繁殖系数，同 时，其重要的活性成分，如多糖含量并无明显差 异，因此利用组培苗代微扦插苗作为种苗，是缓解 金线莲资源紧缺的有效途径。
参考文献：
微扦插苗
1. 000 0 1. 016 5 0. 995 3
0. 296 0. 302 0. 280
17. 46 17. 53 16. 58
［1 ］ ［2 ］
南京中医药大学． 中药大辞典 ［M］． 2 版． 上海： 上海科 学技术出版社，2005. 福建中医药研究所． 福建药物志第 2 册 ［M］． 福州： 福建
3 小结和讨论
［3 ］
科技出版社，1982： 215. 钱青，张志勇． 植物活性多糖的药理作用及应用研究进展 ［J］． 华西医学，2009，24 （ 1） ： 250 － 252.
图 1 金线莲组培快繁体系优化
2. 2 多糖含量测定 分别 吸 取 1 mg · mL － 1 的 标 准 液 0. 1，0. 2，
0. 3，0. 4，0. 5，0. 6 mL，加蒸馏水至 2. 0 mL，然 后加入 1. 0 mL 5% 苯酚溶液混匀，迅速滴加浓硫酸 5. 0 mL，摇匀后静置 10 min［6］，测定 D490 值。以标 准液浓度为横坐标，D490 值为纵坐标，所得标准曲 线为 y = 26. 81x + 0. 003 5； Ｒ2 = 0. 998 5。
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