缓解体力疲劳功能评价与衡量方法

缓解体力疲劳功能

试验项目、试验原则及结果判定

1. 实验项目

1.1 动物实验

1.1.1动物体重

1.1.2 负重游泳实验

1.1.3 力竭实验

1.2人体试食试验

1.2.1 临床症状与体征

1.2.2 跑台试验

2 试验原则

2.1 动物实验所列指标均为必做项目，动物负重游泳和力竭实验前，对实验动物进行运动能力筛选。

2.2 实验前必须对同批受试样品进行违禁药物的检测。

2.3 运动实验与生化指标检测相结合。

2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。2.5 停止给予受试物一天后进行效果观察。

3 结果判定

3.1 动物实验：

负重游泳实验结果阳性，力竭实验结果为阴性（特指无显著不利影响），可判定该受试样品缓解体力疲劳功能的动物实验结果为阳性。

3.2 人体试食试验：

（1）试食前后，受试组自身对照，肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶无不利的显著性改变；

（2）跑台试验：试食组自身对照，试食后运动时间与试食前相比显著性增加，首次试食后运动时间与试食前相比无显著性差异。

满足（1）和（2）可判定该受试样品具有缓解体力疲劳的功能。

缓解体力疲劳功能评价方法

1. 动物实验

1.1 原理

在一定时间内给予一定量的受试样品，通过持续服用，调整特定人群机体状态，使其拥有更好的调节功能，该功能包括应对潜在需求、使机体处于良好状态，具有更长时间作业能力或在相同作业时间内不出现更重的疲劳表现。

1.2 负重游泳实验

1.2.1 仪器与器材

游泳箱（大小约80cm×50cm×60cm），电子天平、铅皮。

1.2.2 实验方法

1.2.2.1 实验动物推荐使用雄性小鼠，6周龄，体重20-24g。

1.2.2.2 剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个阴性对照组，一个空白对照组，一个单次中剂量受试组。其中以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。阴性对照组灌胃给予安慰剂。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

1.2.2.3 实验步骤

末次给受试样品24小时后，将尾根部负荷6%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于40cm，水温30℃±2.0℃，记录小鼠自游泳开始至力竭时间，即小鼠负重游泳时间。力竭判断标准为：小鼠沉入水中超过10秒，且放在平面上无法完成翻正反射。

1.2.3 数据处理及结果判定

游泳时间为计量资料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐

性检验，方差齐，计算F值，F值

（1）受试样品组负重游泳时间明显长于阴性对照组和空白对照组，且差异有显著性；

（2）单次中剂量组与阴性对照组相比，负重游泳时间无显著差异。

同时满足（1）和（2）时，可判定该实验结果阳性。

1.3 力竭实验

1.3.1仪器与器材

全自动生化仪，游泳箱，电子天平、铅皮。

1.3.2 实验方法

1.3.

2.1 实验动物

雄性SD大鼠，体重160-200g。

1.3.

2.2 剂量设计和分组大鼠以人体推荐量的5倍为基本剂量。其余同1.2.2.2。

1.3.

2.3 实验步骤

末次给受试样品24小时后，采用尾部负重3%体重铅皮的大鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm，水温31℃±1.0℃，当大鼠游至连续3次没入水底，每次超过10秒，视为力竭。记录大鼠自游泳开始至力竭时间，大鼠腹主动脉采血全血，置4℃冰箱约3h，血凝固后2000rpm离心15min，取血清备用，测定尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性。

1.3.3 数据处理及结果判定

血液生化数据为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值

和检验进行统计。

（1）受试样品组与阴性对照组和空白对照组相比，血清尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性应无显著性差异；

（2）单次中剂量组与阴性对照组相比，血清尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性应无显著性差异；

同时满足（1）和（2）时，可判定该实验结果阴性（特指无显著不利影响）。

1.4 注意事项

1.4.1 每一游泳箱一次放入动物不宜太多，每只小鼠占用的水面积大多在300平方厘米以上，每平方米水面同时不超过6只大鼠游泳，否则互相挤靠，影响实验结果。

1.4.2 水温对小鼠的游泳时间有明显的影响，因此要求各组水温控制一致，每一批实验动物下水之前都应测量水温，水温以30-31℃为宜，如果过低可能引起实验动物痉挛，影响实验结果。

1.4.3 铅皮缠绕松紧应适宜。

1.4.4 观察者应在整个实验过程中使每只实验动物四肢保持运动。如果实验动物漂浮在水面四肢不动，可用木棒在其附近搅动。同时适时清除水中杂质，以避免影响实验结果。

1.4.5 不同批的实验动物因饲养环境、季节等原因的变化体质上会出现差异。因此受试样品组和对照组应采用同一批动物同时进行实验。

1.4.6负重游泳实验、力竭实验前对实验动物进行能力筛选。

1.5 结果判定

负重游泳实验结果阳性，力竭实验结果为阴性，可判定该受试样品缓解体力疲劳功能的动物实验结果为阳性。

2 人体试食试验

2.1 受试者的选择标准

2.1.1 纳入受试者标准：

2.1.1.1需要较长时间持续中等强度作业或易于疲劳的自愿受试者人群。

2.1.2 排除受试者标准：

2.1.2.1 年龄在20岁以下或45岁以上男性，年龄在20岁以下或55岁以上女性及妊娠或哺乳期妇女，过敏体质及对本样品过敏者。

2.1.2.2已知患有心血管、肺脏（如哮喘等）和（或）代谢疾病（如糖尿病等），精神病患者；心血管、肺脏和（或）代谢疾病的症状或体征。

2.1.2.3经常用药、嗜酒吸烟或戒烟不足6个月，血浆胆固醇≥200mg/dl，4周内参加过其它实验。

2.1.2.4 正在服用其它营养补充剂、治疗药物或接受其它治疗者。

2.1.2.5 未按规定服用样品，无法判断功效，或资料不全等影响功效或安全性判断者。

2.2 试验设计及分组要求：

采用自身对照设计。受试者不少于50例。

2.3 受试样品的剂量和使用方法：

受试者在试食观察期间，按推荐服用方法、服用量服用受试产品，连续给予受试样品30天，必要时可延长至45天。

2.4 观察指标

2.4.1 安全性指标

2.4.1.1 一般状况包括精神、睡眠、饮食、大小便等

2.4.1.2 试食前后进行血、尿、便常规检查（肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶）

2.4.1.3 肝、肾功能检查

2.4.1.4心电图

2.4.2 功效性指标

2.4.2.1 一般情况

详细询问病史，了解受试者饮食情况、活动量。观察主要症状：头痛、眩晕、心悸、耳鸣、失眠、烦躁、腰膝酸软等。

2.4.2.3 跑台试验

（1）试食前测试

在跑步机上0坡度，以8km/小时速度进行跑步运动，对心率进行实时监测。从55%最大心率开始计时，连续运动60分钟以上，且心率达到69%最大心率时为止，为试食前运动时间，并于运动后采血。其中最大心率=220 - 年龄。

（2）试食中测试

第二次试食2小时后，在跑步机上0坡度，以8km/小时速度进行跑步运动，对心率进行实时监测。从55%最大心率开始计时，连续运动60分钟以上，且心率达到69%最大心率时为止，为首次试食运动时间。其中最大心率=220 - 年龄。（2）试食后测试

试食结束24小时，在跑步机上0坡度，以8km/小时速度进行跑步运动，对心率进行实时监测。从55%最大心率开始计时，连续运动60分钟以上，且心率达到69%最大心率时为止，为试食后运动时间，并于运动后采血。其中最大心率=220 - 年龄。

2.5 注意事项

2.5.1跑台试验中三次测试为测试当日同一时间，以避免时间周期对运动时长产生的影响；

2.5.2跑台试验中试食前测试60分钟以内即超过69%最大心率者不可纳入受试者人群；

2.5.3跑台试验中试食后测试前，先对受试者进行安全性观察和一般性观察，若受试者不符合测试条件，该受试者不进行试食后测试。

2.6 数据处理和结果判定

测得数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV>50%）的资料应用秩和检验。

结果判定

（1）试食前后，受试组自身对照，肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶无不利的显著性改变；

（2）跑台试验：试食组自身对照，试食后运动时间与试食前相比显著性增加，首次试食后运动时间与试食前相比无显著性差异。

满足（1）和（2）可判定该受试样品具有缓解体力疲劳的功能。

2.7适用范围

本适用于需要进行较长时间中等强度体力工作的人群（×√）

易于疲劳的人群，旨在提高体力作业耐受时间，其作用的实现需要持续服用一周以上

本品不适用于急性缺氧环境及有速度要求的重体力人群，避免特殊作业所致疲劳。（如不限定，需提供相关试验支持）。