多倍体与八倍体半夏中草酸钙晶体含量的测定_潘平_李伟平_鲁光耀_吕迪_蒋福升_丁
植物生理学实验指导

植物生理学实验指导目录植物材料的采集、处理与保存..................................... 实验一拟南芥种植和形态观察................................... 实验二植物细胞的活体染色和死活的鉴定......................... 实验三植物原生质体的分离和融合............................... 实验四植物叶面积测定原理、方法和步骤......................... 实验五植物细胞渗透势的测定(质壁分离法)..................... 实验六植物组织水势的测定(小液流法)......................... 实验七植物根系活力的测定(TTC法)............................ 实验八根系总吸收面积和活跃吸收面积的测定..................... 实验九离体叶绿体的制备以及完整度的测定....................... 实验十叶绿体色素的提取、分离和理化性质....................... 实验十一植物叶片光合速率的测定(改良半叶法)................. 实验十二氧电极法测定植物组织的光合与呼吸速率................. 实验十三小篮子法(广口瓶法)测定植物的呼吸速率. (37)实验十四谷物淀粉含量的测定(旋光法)......................... 实验十五类似生长素对种子萌发的影响........................... 实验十六赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成........ 错误!未指定书签。
实验十七植物种子生活力快速测定............................... 实验十八植物光周期现象的观察................................. 实验十九植物抗逆性的测定(电导仪法)....... 错误!未指定书签。
沙苑子提取液对不同体系中草酸钙晶体生长影响的研究_王萍

收稿日期:2009-09-21。
收修改稿日期:2010-03-12。
国家自然科学基金(No.20671001,20871001),安徽省教育厅重大项目(No.ZD2007004-1),高校博士点基金(No.20070357002)及安徽省功能无机材料化学重点实验室基金资助。
*通讯联系人。
E -mail :s_yuhua@ 第一作者:王萍,女,43岁,在职硕士研究生,讲师;研究方向:生物无机化学。
沙苑子提取液对不同体系中草酸钙晶体生长影响的研究王萍1,2沈玉华*,1谢安建1(1安徽大学化学化工学院,合肥230039)(2安徽省中医学院药学院,合肥230031)摘要:通过与水、氯化钠、正常人尿液体系的比较,重点研究了结石患者尿液体系中加入中药沙苑子提取液对草酸钙晶体生长的的影响,利用SEM ,FTIR 和XRD 等测试手段对所得晶体进行表征。
结果发现:在结石患者尿液体系中形成的草酸钙晶体为一水草酸钙(COM)晶体,而在这4种体系中加入沙苑子提取液后,只形成二水草酸钙(COD)晶体,表明沙苑子提取液能抑制COM 晶体生长,并且随着沙苑子提取液浓度增大,抑制作用增强。
沙苑子抑制草酸钙晶体生长的可能机理进行了探讨。
关键词:草酸钙;泌尿系统结石;沙苑子;抑制中图分类号:O614.23+1;R282.7文献标识码:A文章编号:1001-4861(2010)06-1089-06Effect of Extract of Semen Astragali Complanali on CalciumOxalate Crystal Growth in Different SystemsWANG Ping 1,2SHEN Yu -Hua *,1XIE An -Jian 1(1School of Chemistry and Chemical Engineering,Anhui Universitry,Hefei 230039)(2School of Pharmacy,Anhui College of Traditional Chinese Medicine,Hefei 230031)Abstract:The growth of CaC 2O 4crystals in the diluted urine of urinary lithiasis patients with different concentrations of Semen Astragali Complanali (SAC)extract was investigated by comparing with the crystallization in different systems such as pure water,sodium chloride aqueous solution and diluted healthy urine.The gained crystals were characterized by scanning electron microscope (SEM),Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR)and X -ray diffraction (XRD).The results showed that calcium oxalate monohydrate (COM)crystals were the dominant phase in the diluted pathological urine,while there were only calcium oxalate dihydrate (COD)crystals after the addtion of extract of SAC in the above four systems.It indicated that SAC could prohibit the growth of calcium oxalate,and the prevention ability of SAC from the formation of COM crystals increased along with the increase of the extract concentration.The inhibition mechanism of SAC to the crystal growth of calcium oxalate was also discussed.Key words:calcium oxalate;urinary stone;Semen Astragali Complanali ;inhibition尿结石是一种危害人类健康的常见病和多发病,其中60%~80%为含草酸钙的结石[1-2],近年来人们从不同角度对尿结石的形成及抑制因素进行广泛研究[3-6],但对其作用机理仍然不十分清楚。
高分子物理实验

高分子物理实验目录实验一粘度法测定聚合物的分子量 (1)实验二聚合物熔融指数的测定 (6)实验三偏光显微镜法观察聚合物结晶形态 (10)实验四密度法测定聚乙烯的结晶度 (14)实验五膨胀计法测定聚合物的玻璃化温度 (16)实验六聚合物的差热分析及应用 (19)前言高分子科学既是基础科学也是实验科学。
实际上高分子科学就是在大量的实验基础上发展起来。
尤其是聚合物加工成型作为高分子科学中重要的分支,我校又以其作为高分子材料与工程专业的专业方向,实验技术在高分子材料的研究和教学中尤为重要。
高分子物理实验是一门综合性极强的实验课,涉及多种学科领域和相应测试方法及仪器,其实验目的一方面是学生掌握高分子物理理论知识,另一方面进一步扩大学生的知识面,帮助学生了解实验方法和仪器结构及性能,分析实验操作过程中具体影响因素,提高解决实际问题的能力。
本实验讲义主要根据教学大纲和对学生实验要求进行编写。
在实验水平上,即介绍高分子科学的传统实验方法,也尽可能介绍一些有关的新技术。
对近年来高分子科学、特别是高分子物理领域涌现的许多新方法、新技术,由于实验条件和教学时数的限制,只好舍弃。
实验一粘度法测定聚合物的分子量粘度法是测定聚合物分子量的相对方法。
高聚物分子量对高聚物的力学性能、溶解性、流动性均有极大影响。
由于粘度法具有设备简单、操作方便、分子量适用范围广、实验精度高等优点,在聚合物的生产及科研中得到十分广泛的应用。
本实验是采用乌氏粘度计测定甲苯溶液中聚苯乙烯粘度,进而测定求出PS试样分子量。
一、实验目的要求1、掌握粘度法测定聚合物分子量的实验基本方法。
2、了解粘度法测定聚合物分子量的基本原理。
3、通过测定特性粘度,能够计算PS的分子量。
二、实验原理1、粘性液体的牛顿型流动粘性流体在流动过程中,由于分子间的相互作用,产生了阻碍运动的内摩擦力,粘度就是这种内摩擦力的表现。
即粘度可以表征粘性液体在流动过程中所受阻力的大小。
按照牛顿的粘性流动定律,当两层流动液体间由于粘性液体分子间的内摩擦力在其相邻各流层之间产生流动速度梯度是(),液体对流动dv/drF/A,,,dv/dr的粘性阻力是: (1-1) 该式即为牛顿流体定律。
天南星中两个多不饱和脂肪酸的含量测定

p ae h s ,0 0 4 . 3
H3 a d a e o i i , g a i n e u i n, h p i l m e h d t x r c t e t PO4 n c t n t l r e r d e t l to t e o tma t o o e t a t h wo
( . c o l fCh m ia LLieS in e in Ag iut r 1 S h o e c l8 r ce c ,Jl rc lu eUnie st o i v riy,Ch ng h n 1 0 1 a e u 3 1 8,Chn ia;
2 S a g a s a c n e o 0 e n z t n o a i o a i e e M e ii e. . h n h iRe e r h Ce t r f r M d r ia i fTr d t n lCh n s o i d cn
Sh n a n tt t fM a e i e ia,Chi e e Ac d my o c e c s h n ha 2 1 03 a gh iI s iu e o t ra M d c n s a e fS in e ,S a g i 0 2 ,Ch na i ; 3 Ph r c l g . a ma y Co l e,Ch n h n Un v r iy o a ii n l i e e M e i i e e a gc u i e st fTr d to a Ch n s d c n ,Ch n c n 1 01 7.Ch n ) a g hu 3 l ia
Ab t c : Un e t e o l wi g o d to s A g l n Z r a S - 一 8 o u n ( u , 2 0 sr t a d r h f l o n c n ii n : i t o b x B C 1 c l m e 5 m 5 mm ×
半夏不同栽培品的成分比较

半夏不同栽培品的成分比较
杨红兵;石磊;林先明;姚永秀;杨华;郭杰;刘海华
【期刊名称】《中国现代中药》
【年(卷),期】2011(013)006
【摘要】目的:比较半夏不同栽培品的成分.方法:采用多指标定量法.结果:半夏新品Y系、鄂半夏一号的蛋白质、总氨基酸及水溶性浸出物等含量较高;来风半夏、荆半夏、昭通半夏的生物碱、总酸及醇溶性浸出物等含量较高.结论:半夏不同栽培品的各类成分间存在此消彼长的现象.
【总页数】3页(P27-29)
【作者】杨红兵;石磊;林先明;姚永秀;杨华;郭杰;刘海华
【作者单位】湖北中医药大学药学院,湖北,武汉,430061;湖北中医药大学药学院,湖北,武汉,430061;湖北省农业科学院中药材研究所,湖北,恩施,445000;湖北中医药大学药学院,湖北,武汉,430061;湖北省农业科学院中药材研究所,湖北,恩施,445000;湖北省农业科学院中药材研究所,湖北,恩施,445000;湖北省农业科学院中药材研究所,湖北,恩施,445000
【正文语种】中文
【相关文献】
1.不同居属地半夏有效成分有机酸的比较研究 [J], 戴小斌;谈献和;吴皓;王康才;张瑜
2.不同居属地半夏核苷类有效成分的比较研究 [J], 戴小斌;谈献和;吴皓;王康才;张瑜
3.不同光照强度下半夏化学成分含量的比较研究 [J], 张跃进;孟祥海;杨东风;许玲;张小燕
4.唐半夏栽培品与野生品生药学比较研究 [J], 吴立明;程晓卫
5.半夏野生品和栽培品中8种核苷类成分的含量测定方法建立及差异分析 [J], 张勇;李传峰;高桂花;马瑜;任强
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茶叶中多糖含量的测定

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检出限 J $) #D3 4 2(
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仪器检出限图
较长时间 + 如放置过夜或在水浴上预消解 1 以防止产生大量泡 沫造成损失。 #) 0) # #) 0) = 消解时温度不能过高, 以避免消解液的炭化, 减少砷元 消解液在电热板上消解时, 须将 >:I@8 及 >*@= 赶尽, 否
素的损失。 则这些强氧化剂与抗坏血酸、 硫脲等还原剂反应而影响五价砷的 还原, 从而影响砷元素的测定。 #) 0) 8 消解过程最好在通风橱中进行。 参考文献 % # = 8 杨惠芬等主编 ) 食品卫生理化检验标准手册 ) 中国标准出 版社出版, %""6) 阎军等 ) 应用 <L? M ##$% 型双道原子荧光光度计联合测定 进口食品中砷和汞 ) 原子荧光分析方法手册 ( 内部资料 ) ) 王鹏等 ) 氢化物原子荧光法测定化妆品中微量砷 ) 原子荧 光分析方法手册 ( 内部资料 ) ) 陈素兰等 ) 双道原子荧光法测定土壤中砷和汞 ) 环境监测 管理与技术, %""" , %% ( #) )
!分析检验
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《 食品科学》
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茶叶标准物质砷含量测定情况表 ( " # $) 标准含量 + 23 4 53 1 测定含量 + 23 4 93 1 :&; $) #6 7 $) $8 $) #8 7 $) $% 0) 8
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半夏生物碱含量测定及其对豚鼠离体肠管运动的影响

半夏生物碱含量测定及其对豚鼠离体肠管运动的影响卢燕;聂克;林艳艳;张勇【期刊名称】《山东中医杂志》【年(卷),期】2013(0)12【摘要】目的:观察半夏生物碱对豚鼠离体肠管运动的影响,探讨其止呕的作用机制。
方法 :提取半夏生物碱并测定其含量,以呕吐相关受体激动剂乙酰胆碱(Ach)、组胺磷酸盐(His)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)为工具药,以豚鼠离体回肠收缩张力为指标,观察半夏生物碱对离体回肠运动的影响。
结果:半夏生物碱能够剂量依赖性地抑制离体回肠自主收缩,使肠管收缩平均张力降低;能明显拮抗Ach、His、5-HT的兴奋肠管作用,使收缩张力显著降低;能明显拮抗DA的松弛肠管作用,使张力升高。
结论:半夏生物碱可抑制离体肠管运动,其机制可能是阻断M受体、H1受体、5-HT 受体、DA受体,也可能是对肠管平滑肌的直接抑制作用。
【总页数】3页(P916-918)【关键词】半夏生物碱;含量测定;离体肠管运动【作者】卢燕;聂克;林艳艳;张勇【作者单位】山东中医药大学【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.可见-紫外分光光度法测定半夏硫熏前后总生物碱的含量 [J], 周霞;张小琳;赵杨;万军2.浅析对半夏使用硫磺进行熏制的时间对半夏总生物碱含量的影响 [J], 张浩波;陈晖;麻文霞;梁慧光3.野罂粟总生物碱对离体豚鼠肠管及小鼠输精管的作用 [J], 金宏伟;袁亚非;等4.野生半夏总生物碱含量的测定 [J], 庄华梅;雷然;付惠5.半夏生物碱对豚鼠离体回肠5-HT_3受体与NK_1受体的影响 [J], 张启龙;巩丽丽;李贵生;杜静;聂克因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
实验1 化学反应速率和活化能的测定

实验1 化学反应速率和活化能的测定一、实验目的1. 了解浓度、温度和催化剂对反应速度的影响。
2. 加深对反应速率和活化能概念的理解。
3. 测定过二硫酸铵与碘化钾反应的反应速率,并计算反应级数、反应速率常数和反应的活化能。
4. 练习温度、时间和体积的测量及恒温操作。
二、实验原理在水溶液中过二硫酸铵和碘化钾发生如下反应:4228424243(NH )S O +3KI (NH )SO +K SO +KI =或: 2--2--2843S O +3I 2SO +I = (1)其反应速率根据速率方程可表示为:82--2(S O )(I )m n kc c ν=⋅ (2)式中v 是在此条件下反应的瞬时速率,若2-28[S O ]、-[I ]是起始浓度,则v 表示起始速度,k 是速率常数,m 与n 之和是反应级数。
实验能测定的速率是在一段时间(△t )内反应的平均速率,如果在△c 时间内2-28[S O ]的改变为△2-28[S O ],则平均速率:2-28(S O )c tν-∆=∆ (3)近似地用平均速率代替起始速率:2-2--2828(S O )(S O )(I )m n c kc c t ν-∆==⋅∆ (4) 为了能够测出反应在△c 时间内2-28[S O ]的改变值,需要在混合(NH 4)2S 2O 8和KI 溶液的同时,注入一定体积已知浓度的Na 2S 2O 3溶液和淀粉溶液,这样在反应(1)进行的同时还进行下面的反应:2--2--233462S O +I =S O +3I (5)这个反应进行得非常快,几乎瞬间完成,而反应(1)比反应(2)慢得多。
因此,由反应(1)生成的-3I 立即与2-23S O 反应,生成无色的2-46S O 和-I 。
所以在反应的开始阶段看不到碘与淀粉反应而显示的特有蓝色。
但是一当Na 2S 2O 3耗尽,反应(1)继续生成的I 3-就与淀粉反应呈现出特有的蓝色。
由于从反应开始到蓝色出现标志看2-23S O 全部耗尽,所以从反应开始到出现蓝色这段时间△t 里,2-23S O 浓度的改变△2-23[S O ]实际上就是Na 2S 2O 3的起始浓度。
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第31卷第9期2013年9月中华中医药学刊CHINESEARCHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEVol.31No.9Sep.2013
中华中医药
学刊
多倍体与八倍体半夏中草酸钙晶体含量的测定潘平,李伟平,鲁光耀,吕迪,蒋福升,丁志山(浙江中医药大学,浙江杭州310053)
摘要:目的:测定多倍体(十六倍体)半夏和八倍体半夏原球茎以及块茎中草酸钙晶体的含量。方法:采用高效液相色谱法,以0.5%磷酸水溶液为流动相,以草酸为对照品,测定多倍体半夏和八倍体半夏中草酸钙晶体的含量。结果:多倍体半夏原球茎和块茎中草酸钙晶体的含量分别为(2.799±0.017)%和(1.375±0.037)%,八倍体半夏原球茎和块茎中草酸钙晶体含量分为为(1.136±0.028)%和(1.924±0.05)%。结论:半夏原球茎和块茎中均含有较高含量的草酸钙晶体,与八倍体半夏相比,多倍体半夏块茎中的草酸钙晶体明显比八倍体半夏低。关键词:半夏;草酸钙晶体;多倍体;八倍体;HPLC中图分类号:R284.1文献标志码:A文章编号:1673-7717(2013)09-1985-03
ContentDeterminationofCalciumOxalateinOctoploidandPolyploidPinelliaPANPing,LIWeiping,LUGuangyao,LYUDi,JIANGFusheng,DINGZhishan(ZhejiangChineseMedicalUniversity,Hangzhou310053,Zhejiang,China)
Abstract:Objective:TodeterminethecontentofCalciumOxalateinprotocormandtuberofoctoploidandpolyploid(hexadecaploid)Pinellia.Methods:TodeterminethecontentofCalciumOxalateinoctoploidandpolyploidPinelliabyHPLCmethodwith0.5%PhosphoricAcidasmobilephaseandoxalicacidasstandardpreparation.Results:ThecontentofCalciumOxalateinprotocormofpolyploidPinelliawas(2.799±0.017)%while(1.375±0.037)%intubers,therewere(1.136±0.028)%CalciumOxalateinprotocormofoctoploidPinelliawhile(1.924±0.05)%intubers.Conclu-sion:ThereishighcontentofCalciumOxalateinprotocormandtuberofPinellia,comparedwithoctoploidPinellia,thetu-bersofpolyploidPinelliahaslowestcontentofCalciumOxalate.Keywords:Pinellia;CalciumOxalate;octoploid;polyploid;HPLC
收稿日期:2013-04-18基金项目:浙江省中医药科技计划项目(2013AZ031);浙江省大学生科技成果推广项目(2010R410041)作者简介:潘平(1992-),女,浙江杭州人,本科学生,研究方向:中药资源开发与利用。通讯作者:丁志山(1967-),男,山东人,教授,研究方向:中药生物技术。E-mail:zjtcmdzs@163.com。
半夏是天南星科植物半夏Pinelliaternatat(Thunb.)Breit.的干燥块茎,辛、温;有毒。归脾、胃、肺经,具有燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结等功效。广泛用于治疗湿痰寒痰,咳喘痰多,痰饮眩悸,风痰眩晕,痰厥头痛,呕吐反胃,胸脘痞闷,梅核气等证;外治痈肿痰核[1]。近年来,半夏在止咳镇痛、抗肿瘤、抗菌等药理作用方面的研究报道不断增加,成为研究的热点,药理实验研究结果表明半夏可能有更广的开发应用前景[2]。但是生半夏有强烈的毒性[3],是28种毒性中药之一,具有“戟人咽”的刺激性,能刺激声带黏膜,引起发炎水肿甚至失音,刺激消化道黏膜而引起呕吐或腹泻,刺激咽喉导致失音等不良反应[4]。因此有必要加强对半夏安全性的控制。本项目组在前期的试验中,成功诱导出了多倍体(十六倍体)半夏品种,该品种能大大提高半夏的产量,但是,目前尚未对该品种半夏毒性成分进行系统的研究,也没有对半夏原球茎中草酸钙晶体含量测定的报道。草酸钙晶体是天南星科植物主要的毒性成分[5],本研究采用HPLC法对多倍体半夏以及普通半夏(即八倍体半夏)原球茎和块茎中毒性成分草酸钙晶体的含量进行了测定,以便为半夏多倍体品种的安全应用及其产业的开发和进一步的研究提供借鉴。1实验材料和试剂
1.1试药
MS粉培养基(BR,上海宇涵生物科技有限公司,批号
110412);琼脂粉(BR,国药集团化学试剂有限公司,批号
F20091119);6-苄基嘌呤(AR,上海伯奥生物科技有限公
司,批号080116);1-萘乙酸(AR,中国医药(集团)上海化学试剂公司,批号F20020528);2,4-二氯苯氧乙酸(AR,上海试四赫维化工有限公司,批号080401);肌醇(AR,上海康捷生物科技发展有限公司,批号110901);草酸(AR,国药集团化学试剂有限公司,批号T20071015,纯度HPLC≥98%);甲醇(GR,天津赛孚瑞科技有限公司,批号20120518001)。1.2仪器
SW-CJ-2FD超净工作台(苏州安泰空气技术有限公
司);LDZX立式压力蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市英谷予华仪器厂);
5891第31卷第9期2013年9月中华中医药学刊CHINESEARCHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEVol.31No.9Sep.2013
中华中医药
学刊
SENCOR-201旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公
司);AR2130电子精密天平(OhausCorp.PineBrook,Nj,USA);DGG-9070A电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验
仪器有限公司);PHS-3C型PH计(上海精密科学仪器有限公司);Ultimate3000高效液相色谱仪系统(戴安中国有限公司)。多倍体与八倍体半夏均采自江山宝珠农业有限公司中药材GAP基地,一年生,经浙江中医药大学中药学博士丁志山教授鉴定为天南星科植物半夏(Pinelliaternatat(Thunb.)Breit)。2方法与结果
2.1半夏原球茎的诱导
分别取多倍体半夏和八倍体半夏叶片或者叶柄,接入MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA的培养基中,待形
成愈伤组织后,将愈伤组织转接至半夏原球茎诱导培养基中(MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+1.5mg/L2,4-D),在培养温度(25±2)℃,光照度2000~2500lx,光照
12h/d的条件下培养30d,即可观察到原球茎的形成。2.2供试品溶液的制备
分别将多倍体半夏原球茎和块茎,八倍体半夏原球茎和块茎干燥至恒重,打粉,过60目筛,每种样品粉末均取0.2g,精密称定,加入15倍量的蒸馏水,70℃水浴10min,过滤,弃去上清液,残渣用热水洗涤两次,然后用15倍量的0.1mol/L的HCl超声提取3次,过滤,合并3次滤液,用
0.1mol/L的HCl定容至10mL,即为供试品溶液。2.3对照品溶液的配制
取草酸对照品粉末15mg,精密成定,用适量的蒸馏水溶解后,定容至50mL,然后精密吸取10mL,用蒸馏水定容至50mL,即得0.06mg/mL的草酸对照品溶液,4℃保存备用。2.4系统适应性考察
戴安Acclaim120C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:0.5%磷酸水溶液(用精密pH计测定,pH为2.3);检测波长210nm,流速1.0mL/min,柱温28℃。在此条件下,供试品溶液中草酸钙的峰与其他峰分
离度R>1.5,达到基线分离,对照品溶液与供试品溶液中草酸钙的出峰时间在4min左右,具体见图1。从图中可以看出,草酸对照品、多倍体半夏块茎,八倍体半夏块茎,多倍体半夏原球茎和八倍体半夏原球茎的出峰时间分别为4.008min,4.06min,4.00min,4.08min和4.07min,所有样品和对照品的理论塔板数n均大于
2000,符合含量测定的要求。
1~5分别表示多倍体半夏块茎,八倍体半夏块茎,多倍体半夏
原球茎和八倍体半夏原球茎,草酸对照品。图1样品和对照品HPLC图2.5标准曲线的制备
取0.06mg/mL的草酸对照品溶液,按照上述的色谱条件,分别进样20、40、60、80和100μL,测定峰面积,以对照品的量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。结果发现,进样量与峰面积成正比(见下表),草酸在1.2~6.0μg的范围内线性关系良好,标准曲线方程,见图2。为Y=13.164X-1.3356,相关系数r=0.999,符合相关的要求。表1标准曲线结果进样量(μL)20406080100
峰面积14.456±1.01031.128±0.89245.481±2.01260.418±0.67278.797±1.2312.6方法学考察
2.6.1精密度考察取同一样品,每次进样10μL,重复
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