CpG-ODN的免疫刺激作用
CpG ODN在治疗呼吸道变应性疾病中的研究进展
、
诊断及治疗等方面存在广泛 的相似或相 同之处。其 严重 影 响 了人 们 的生 活质 量 ， 已成 为 亟 待 解 决 的 全 球性 健康 问题 。变 应性 疾 病 主 要 的治 疗 方 法为 药 物 治疗 ， 现有治 疗 方 法 的 不 足 和 变 应 性 疾 病 发 病 率 但 的逐 年增 高 ， 给变应 性疾 病 的治 疗 带来 了新 的挑 战 ， 细胞 和分 子生 物学 的迅 猛 发 展 为 治疗 呼 吸道 变 应 性 疾病 提供 了新 的治 疗靶 点 和方 法 。１９ ９ ５年 ， ｒ ｇ等 Ｋｉ ｅ 发现不 仅 细菌 Ｄ Ａ， Ｎ 而且 某 些 人 工 合 成 的寡 聚脱 氧 核苷酸均具有免疫刺激作用 ， 这些具有免疫刺激 活 性 的 Ｄ Ａ都具 有 共 同 的特征 序 列 ， Ｃ Ｇ基序 。对 Ｎ 即 ｐ 含 Ｃ Ｇ基 序 的寡 聚脱 氧核苷 酸 （ ｙｏｉｅ— ｈｓｈｔ ｐ Ｃ ｔｓ ｎ ｐ ｏｐ ａ ｅ ｇ ａｉｅｏ ｇｄ ｏｙ ｕ ｌ ｔ ｅ Ｃ Ｇ Ｏ Ｎ） 研 究 引 ｕ ｎｎ ｌ ｏｅｘ ｎ ｅｅ ｉ ， ｐ Ｄ 的 ｉ ｏｄ 起 了人 们极 大 的兴趣 ， 在 治疗 感 染 性 疾 病 、 其 肿瘤 和 变应 性 疾病 中显 示 出 良好 的应 用前 景 。
Ｉ Ｉ Ａ ＭＥ Ｉ Ａ Ｏ Ｒ Ａ － Ｎ Ｎ Ｄ Ｃ Ｌ Ｊ Ｕ Ｎ Ｌ Ｉ Ａ
寡核苷酸CpG-ODN增强HBV疫苗接种的细胞免疫反应
别 为 ６ ８ ３ ８ ± １２ ３ ２ 、 ８ ． ８ １ｌ ２ ４ 、 ３ ． ３ ９ ８ ２ 、 １ ４ ２ ± ９ ７ ４ ， 高 于 体 外 未 用 ｒ ｓ 激 的 对 照 组 ｃ ｍ ６ ． ７ ４ ． ４ ６５ ２ ４ ± ３ ． ８ ７ ３ ２ ４ ± ３ ． ８ ５ ８ ． ４ ４ ． ５ 均 ＨＢ 刺 ｐ 值 ： ０ ． ０ １ ２ ６ ２ ５ ７ ５ ５ ． 、 ５ ． ± ２ ７ ３ ２ ７ ３ ８ ０ ． ； 时 也 高 于 单 用 ｒ ｓ免 疫 的 小 鼠 。结 论 Ｃ Ｇ Ｏ ２３ ７ ０ ± ８ ． 、 ７ ． ±３ ８ ３ ２６ ５ ５ ２ ． 、 ５ ． ±２ ６ ８ 同 ＵＢ ｐ — ＤＮ 能 增 强接 种 ｒ ｓ产 生 的 特 异 性 淋 巴 细胞 增 殖反 应 。 ＵＢ
１ ２ ｇ ｒ Ｂ ＋ ５ ． ０ ｇ Ｃｐ ＯＤＮ 、 ． Ｏ ｇ ｒ ． ５ Ｕ ｓ ０ ０ Ｇ－ ２ ５ ＨＢｓ ５ ． ０ ／ Ｇ— ＋ ０ ０ ＊ Ｃｐ ＯＤＮ 、 ． ０／ ＵＢｓ ５ ． ０ ｇ Ｃｐ ＯＤＮ 的 小 鼠 ｃ ｍ 值 分 ｇ ５０ ＊ ｒ ｇ ＋ ０ ０ Ｇ－ ｐ
摘 要 ： 目的 研 究寡 核 苷 酸 Ｃ Ｇ Ｏ ｐ － ＤＮ 对 小 鼠 接 种 基 因 重 组 乙 型 肝 炎 病 毒 （ Ｖ疫
Ｂ ／ （ ２ ） 鼠腹 腔 分 别 接 种基 因 重组 ＨＢ 疫 苗 （ ＵＢｓ 或 ５ ｇ Ｃｐ － ＡＩＢ ｃ Ｈ 小 Ｖ ｒ ） Ｏ Ｇ ＯＤＮ＋ｒ ＵＢｓ ｒ ｓ分 为 ０ ６ １ ２ 、 ． ０ ５ ０ ｇ ， ＵＢ ． ５、 ． ５ ２ ５ 、 ． ０
１６７ ５ ３ ８ ３ ２２ ５ ５ ２ ７ ３ ７ ３ ８ ０ ． ， 异 有 统 计 学意 义 （ ７ ． ± ５ ． 、 ５ ． ± ２ ． 、５ ． ±２ ６ ８ 差 Ｐ＜ ０ ０ ） （ ） 种 ０ ６ ， ＵＢ ．５ 。 ２ 接 ． ５／ ｒ ｓ＋ ５ ． ０／ ｐ － Ｎ、 ｇ ０ ０ ｚ Ｃ Ｇ ＯＤ ｇ
CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨
CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨马瑞;黄俊;吴长有【期刊名称】《免疫学杂志》【年(卷),期】2006(22)3【摘要】目的探讨cpG ODN对重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）诱导小鼠细胞免疫应答的影响。
方法HBsAg和HBsAg＋CpG ODN分别肌肉注射免疫Balb／c 小鼠后，从淋巴组织（脾和淋巴结）和非淋巴组织（肺）分离淋巴细胞，体外经HBsAg抗原刺激后，利用ELISA检测细胞培养液中IFN-γ的水平，再利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ^＋细胞的频率，分析IFN-7^＋细胞亚群。
结果对照组和HBsAg免疫组IFN-γ产生的水平很低，当HBsAg加强免疫1～2次后，IFN-γ表达仍然没有明显升高；而CpG ODN＋HBsAg免疫1次或加强免疫后，CpG显著促进HBsAg诱导的IFN-γ产生。
进一研究结果表明CpG促进HBsAg诱导淋巴器官和非淋巴器官内CD4^＋和CD8^＋T细胞IFN-γ的表达。
结论CpG免疫佐剂不仅能诱导细胞免疫应答同时也诱导体液免疫应答，提示CpG ODN可以用于HBsAg预防和治疗性佐剂。
【总页数】4页(P235-238)【关键词】CpG;0DN;HBsAg;疫苗;佐剂【作者】马瑞;黄俊;吴长有【作者单位】中山大学基础医学院免疫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.分析CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用 [J], 杜晓敏;周益民;2.佐剂CpG-ODN与重组HBsAg疫苗联合免疫乙型肝炎病毒转基因小鼠的免疫应答研究 [J], 张卓然;杨淑凤;李炎;郑丛龙3.CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用 [J], 李娜;刘建勋;曾瑞红4.CD137L在HBsAg DNA疫苗诱导小鼠细胞免疫应答中的佐剂效应 [J], 江虹;黄茵;史丽云;吴炜;蔡玲斐;贾红宇;钟石根5.CpG-ODN调节小鼠免疫细胞对HBsAg体液免疫应答性的初步研究 [J], 刘兴田;冯永堂;孟洁;苗乃法;鞠吉雨;吴国庆;魏兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
CpG ODN增强孕鼠及其新生小鼠对乙肝疫苗的免疫应答反应
CpG ODN增强孕鼠及其新生小鼠对乙肝疫苗的免疫应答反应
秦卫兵;蒋建伟;莫宏波 【期刊名称】《广东医学》 【年(卷),期】2006(27)2 【摘 要】目的探讨CpG ODN对孕鼠及其新生小鼠的免疫应答增强作用.方法将乙肝疫苗和20μgCpGODN联合或单独肌肉注射到怀孕第1天的C57BL/6孕鼠体内,怀孕第14天以同样剂量加强免疫1次.待分娩后立即收集母鼠及其新生小鼠的血清,用ELISA方法检测抗HBs IgG抗体,无菌取母鼠的脾脏作HE染色,观察脾脏淋巴细胞变化.测量新生小鼠体长并称量体重、脑重.结果孕鼠空白对照组产生的抗HBs IgG抗体与孕鼠HB-sAg组相比P＜0.05,具有显著性差异.孕鼠HBsAg+CpG ODN组与孕鼠HBsAg组相比,差异具有显著性(P＜0.05).HBsAg+CpG ODN组新生小鼠的抗HBsIgG抗体与HBsAg组相比,差异具有显著性(P＜0.05).表明乙肝疫苗联合20μgCpG ODN免疫孕鼠,使孕鼠及其新生小鼠抗HBsIgG抗体产生显著增加.显微镜下观察表明CpGODN使孕鼠的脾脏淋巴细胞浸润明显增多.各实验组的新生小鼠体长、体重、脑重、体重系数等生长发育指标与对照组相比无显著性差异.结论20μg CpG ODN能够增强孕鼠对乙肝疫苗的免疫应答并被动增强其新生小鼠的免疫力,对新生小鼠的宫内发育无不良影响.
【总页数】3页(P174-176) 【作 者】秦卫兵;蒋建伟;莫宏波 【作者单位】广东省计划生育科学技术研究所,广州,510600;暨南大学医学院生化教研室,广州,510632;暨南大学医学院生化教研室,广州,510632
【正文语种】中 文 【中图分类】R3 【相关文献】 1.新型CpG ODN增强乙肝疫苗诱导IgG2a类抗体产生的实验研究 [J], 丛中一;包木胜;万敏;王莉;李大鹏;王丽颖;于永利 2.CpG ODN增强乙肝疫苗在老年小鼠中的免疫应答 [J], 秦卫兵;蒋建伟;陈巧儿;杨宁;王一峰;韦相才;欧汝强 3.乙肝疫苗联合CpG-ODN或单独应用对孕鼠及新生鼠的影响 [J], 张金萍;肖昕;蒋建伟;刘秀香 4.CpG ODN增强乙肝疫苗免疫反应的研究 [J], 戴帆;董斌;郭晓磊;石碧珠;方丽娟;莫家琳;田素娟;孟民杰 5.CpG-ODN增强乙型肝炎病毒转基因小鼠对重组乙肝疫苗的细胞免疫应答 [J], 李岩;张卓然;杨淑凤;郑丛龙
CD_3McAb、CD_28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究
CD_3McAb、CD_28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究罗志刚;谢江波【期刊名称】《南华大学学报：医学版》【年(卷),期】2003(31)4【摘要】目的为肿瘤生物治疗寻找高效、安全的效应细胞。
方法采用CD3 单克隆抗体与CD2 8单克隆抗体及CpGODN共刺激外周血单核细胞活化增殖。
对增殖细胞的增殖量、剂量依赖性与细胞表型进行测定。
结果单用CD3 单克隆抗体和小剂量的IL - 2就可以引起PBMC有效扩增 ,CD2 8单抗可提供协同刺激信号 ,使PBMC扩增达到最高。
而CpGODN亦可提供第二信号 ,但较CD2 8单抗为弱。
CD2 8协同扩增呈剂量非线性相关型 ,而CpGODN则为剂量正相关。
表型测定表明共刺激细胞中NK细胞比率明显增高 ,分别达到33.1 0 %± 1 3.82 % (CD3 +CD2 8) ,2 9.5 0 %± 1 3.2 0 % (CD3 +CPGODN) ,与对照组比较差异有显著性(P <0 .0 5 )。
同时 ,CD4+ CD8+ T细胞比值发生倒置。
结论CD2 8、CpGODN均能协同CD3 单抗诱导PBMC活化增殖 ,CD2 8单抗激活无剂量线性相关 ,而CpGODN激活有剂量正相关。
激活的细胞是以NK细胞、CD4+ CD8-、CD4- CD8+ T细胞为主体的异质细胞群。
【总页数】5页(P379-382)【关键词】CD3;CD28;CpG;ODN;NK细胞【作者】罗志刚;谢江波【作者单位】南华大学第二附属医院;湖南省肿瘤医院【正文语种】中文【中图分类】R73-34【相关文献】1.CpG ODN刺激PBMC后作用于卵巢癌细胞HO8910杀伤活性的研究 [J], 吴富菊;马晓艳;魏敏;薛惠荣2.CpG ODN刺激PBMC后作用于肝癌细胞BEL-7402杀伤活性的检测 [J], 罗利琼;林月霞;王辉;黄树林3.CD3McAb、CD28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究 [J], 罗志刚;谢江波4.CD80联合CD28/CpG ODN活化的PBMC对胃癌细胞杀伤作用的实验研究 [J], 方军;郭树军;李永研5.CpG-ODN对慢性乙型肝炎患者PBMC免疫刺激作用的观察 [J], 李宁;范学工;朱才;应若素;黄燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
CpGODN对哮喘小鼠肺组织共刺激分子B7和CD40表达的影响
ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ（ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ Ａ） ，ａ ｓ ｔ ｈ ｍ ａ ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ （ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ Ｂ ） ， ｄ ｅ ｘ ａ ｍ ｅ ｔ ｈ ａ ｓ ｏ ｎ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ（ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ Ｃ） ，Ｃ ｐ Ｇ Ｏ Ｄ Ｎ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ（ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ Ｄ）ｗ ｉ ｔ ｈ
医 学 研 究 杂志 ２ ０ １ ３ 年ｌ １ 月 第４ ２ 卷 第ｌ １ 期
・论
善 ・
Ｃ ｐ Ｇ ＯＤ Ｎ 对 哮 喘 小 鼠肺 组 织 共 刺 激 分 子 Ｂ ７和 Ｃ Ｄ ４ ０表 达 的 影 响
李如 霞 罗 芳 李 孟荣
摘 要 目 的 观察 Ｃ ｐ Ｇ Ｏ Ｄ Ｎ对 哮 喘 小 鼠 肺 组 织 共 刺 激 分 子 Ｂ ７和 Ｃ Ｄ ４ ０表 达 的影 响 ， 探讨其诱 导免疫 耐受 的可能机 制。
方 法 清 洁 级 雄 性 Ｂ ａ ｌ ｂ ／ ｃ小 鼠 ４ ８只 ， 随机分为对照组 （ Ａ组 ） 、 哮 喘组 （ Ｂ组 ） 、 地塞米松 （ Ｄ Ｘ Ｍ） 组（ ｃ组 ） 、 Ｃ ｐ Ｇ Ｏ Ｄ Ｎ组 （ Ｄ组 ） ， 每组 １ ２只 。用 卵 白蛋 白 （ Ｏ Ｖ Ａ） 致 敏 和 激 发 建 立 小 鼠 哮 喘模 型 。 观 察肺 组 织 病 理 变 化 ， 支气 管肺 泡灌 洗 液 （ Ｂ Ａ Ｌ Ｆ ） 中 自细 胞 总 数 及 分 类计 数 ， 反 转 录 一聚 合 酶 链 反 应 （ Ｒ Ｔ—Ｐ Ｃ Ｒ ） 法及免疫组 织化学法 分别测定 肺组织 中 Ｂ ７ 、 Ｃ Ｄ ４ ０ ｍＲ Ｎ Ａ 及 蛋 白 表 达 。结 果 ①肺 组织病理变化 ： Ｂ组 支 气 管 、 血 管 周 围及 间 质 和 肺 泡 腔 内有 较 多 炎 性 细 胞 浸 润 ， 支气 管上皮 多处 断裂 ， 细 小 支 气 管 内可 见 黏
CpG寡核苷酸对人外周血B淋巴细胞免疫刺激作用
CpG寡核苷酸对人外周血B淋巴细胞免疫刺激作用陈军浩;吴超;欧阳建;刘勇;耿东进【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2006(021)004【摘要】目的观察CpG-ODN2006和CpG-ODN2216对健康人外周血单个核细胞中B淋巴细胞抗原递呈相关分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ及共刺激分子CD80、CD86表达的影响,探讨CpG-ODN对B淋巴细胞抗原递呈功能的作用.方法 CpG-ODN2006、CpG-ODN2216与健康人PBMC共培养48 h,用流式细胞技术以CD19-PreCP"设门"其中B淋巴细胞,检测其袁面CD69、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80及CD86的表达状况,并与未加CpG-ODN组进行比较.B淋巴细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达量以几何平均荧光强度表示(MFI);CD80、CD86的表达量以阳性细胞百分率表示.结果 CpD-ODN2006和CpG-ODN2216均显著提高B淋巴细胞CD69、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80及CD86的表达,与未加CpG-ODN组比较有显著性差异(P＜0.05).CpG-ODN2216使B淋巴细胞表面抗原递呈相关分子的增加量更为明显.结论 CpG-ODN能够提高B淋巴细胞表面抗原递呈相关分子和共刺激分子的表达,能增强B淋巴细胞递呈抗原的能力.【总页数】3页(P1-3)【作者】陈军浩;吴超;欧阳建;刘勇;耿东进【作者单位】南京大学医学院附属南京鼓楼医院,医学检验中心,江苏,南京,210008;南京大学医学院附属南京鼓楼医院,感染科,江苏,南京,210008;南京大学医学院附属南京鼓楼医院,血液科,江苏,南京,210008;南京大学医学院附属南京鼓楼医院,医学检验中心,江苏,南京,210008;南京大学医学院附属南京鼓楼医院,医学检验中心,江苏,南京,210008【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.不同序列的CpG-ODN对猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞免疫刺激作用的研究 [J], 温建新;邱洪;李俊;任慧英;周顺;王金宝2.CpG-ODN对猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞免疫刺激作用的初步研究 [J], 温建新;李俊;周顺;任慧英;牛钟相;王金宝3.CpG寡核苷酸对人外周血单个核细胞的免疫刺激作用 [J], 郭勇;曹星梅;刘捷;田玮;张王刚;姚煜4.CpG寡核苷酸对人外周血淋巴样树突状细胞的增殖作用 [J], 蔡玲;王法春5.CpG ODN重组质粒对猪外周血淋巴细胞免疫刺激作用的研究 [J], 张进进; 冷雪; 周宇; 伭婷; 夏辉; 盛陈艳; 麻宝艺; 马青霞; 刘雅馨; 高沙沙; 杜锐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况
分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况摘要免疫佐剂的主要作用是提高抗原（免疫原）的免疫原性和免疫反应的可持续性，它能诱导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。
近年来，免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注，该文着重介绍分子佐剂CpG DNA 的研究进展及应用概况，以为开发研制高效、低毒、结构新颖的免疫佐剂提供参考。
关键词分子佐剂；CpG DNA；研究进展；应用作为一种非特异性免疫增强剂，当佐剂与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。
同时，既减少了抗原的使用量，增加了机体抗体的产生量，又可以减轻免疫耐受。
近年来，佐剂发展较快，多种新型佐剂不断涌现，黏膜佐剂、纳米佐剂、天然佐剂及分子佐剂等是目前研究的热点。
用分子佐剂来提高基因疫苗的免疫效率是基因疫苗研究的关键，很多分子佐剂如CpG DNA、细胞因子、共刺激分子、趋化因子、C3d、免疫刺激调节分子等成为当前研究的热点。
1 CpG DNA的研究进展CpG DNA是一种DNA序列，其核心是一些未甲基化的CpG基序，具有免疫激活功能，它包括ODN（oligodeoxynucl-eotides，含CpG基序）和细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA，其碱基普遍遵循5-嘌呤-嘌呤-嘧啶-嘧啶-3的排列规律[1]。
研究表明，这种排列可激活多种免疫效应细胞，又称为免疫刺激DNA序列，其在细菌和病毒基因组中出现的频率至少是脊椎动物基因组的20倍，使入侵的外来细菌和病毒能够轻易地被脊椎动物的免疫系统所识别，从而激活相应的免疫应答机制。
CpG DNA的免疫激活机制可通过模式识别理论来解释，该理论是2000年由美国免疫学家Janeway et al提出的，病原相关分子模式（PAMP）是指天然免疫针对主要靶分子信号，模式识别受体（PRR）是指相对应的识别受体。
天然免疫中TLR家族成员识别PAMP后，从而在抗感染天然免疫中发挥重要作用。
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CPG提高 提高PBMC中Th1细胞 提高 中 细胞
Th1占淋巴细胞百分比 Th1占淋巴细胞百分比
CPG提高 提高PBMC中Th1 、Tc1 提高 中 细胞百分率
16 14 12 10 8 6 4 2 0 Th1 Tc1 对照 Th2 CPG-ODN
* *
*：与对照组比较，P<0.05
CPG刺激 刺激BPMC分泌细胞因子 刺激 分泌细胞因子
CpG-ODN的免疫刺激作用 CpG-ODN的免疫刺激作用
陈军浩 南京大学医学院附属鼓楼医院
CPG概念 概念
为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重 复序列， 基序。 复序列，即CpG 基序。 一种免疫佐剂 作用靶点TLR9 作用靶点TLR9 细胞免疫，体液免疫 细胞免疫，
Th1免疫应答 免疫应答
慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 HBV免疫耐受， HBV免疫耐受，持续感染 免疫耐受 肿瘤微小残留病的清除
80 70 60 50 40 30 20 10 0 IFN-γ IL-2 对照组 IL-4 CPG- ODN组 CPG- ODN 组 IL-10
*
*：与对照组比较，P<0.05
CPG诱导 诱导PBMC杀伤靶细胞 诱导 杀伤靶细胞
1. 2.
收集CPG活化的 活化的PBMC 收集 活化的 细胞毒性实验：效应细胞为 细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的 活化的 PBMC；靶细胞为 预染的K562细胞。 细胞。 ；靶细胞为CFSE预染的 预染的 细胞 对照组效应细胞为未经CPG活化的 活化的PBMC。 对照组效应细胞为未经 活化的 。 效：靶＝20：1，混合培养 。流式细胞术 ： ，混合培养2h。 检测靶细胞死亡率。 检测靶细胞死亡率。
CFSE染色靶细胞 染色靶细胞
实验结果
CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5) 活化PBMC对 细胞的杀伤作用(N=5) 活化PBMC 细胞的杀伤作用
CPG活化PBMC 对照组
16.85±5.14 % 8.62±2.83 %
*
*：与对照组比较，P<0.05 ：与对照组比较，
CIK细胞杀伤靶细胞 细胞杀伤靶细胞
APC与T细胞作用机制 与 细胞作用机制
CPG对B细胞抗原递呈相关分子的 对 细胞抗原递呈相关分子的 作用研究
1.
CpG2006、2216由上海生物工程技 、 由上海生物工程技 术服务有限公司合成， 术服务有限公司合成，全硫代化修饰 对照组为含10%FCS的RPMI1640＋ 对照组为含 的 ＋ 外周血PBMC，细胞量107/孔，37℃、 外周血 ，细胞量 孔 ℃ 5%CO2、48小时 小时 实验组加入CpG2006或CpG2216， 或 实验组加入 ， 终浓度均为1umol/mL，余同上 终浓度均为 ，
3.
CPG诱导 诱导PBMC杀伤靶细胞 诱导 杀伤靶细胞
CFSE染色靶细胞 染色靶细胞
1.
2. 3. 4. 5. 6.
浓度为5µmol/ L 的CFSE （2羧基荧 浓度为 羧基荧 光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯） 光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液 取对数生长期的靶细胞浓度108/ L 取对数生长期的靶细胞浓度 细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合 细胞悬液与等体积 37 ℃孵育 孵育10 min。 。 离心洗涤两次后 悬浮细胞备用
TOLL受体 受体
TOLL受体在血细胞中的表达 受体在血细胞中的表达
活化B细胞负载核心抗原 活化 细胞负载核心抗原
1. 2. 3. 4.
磁珠分选B淋巴细胞 磁珠分选 淋巴细胞 CPG活化 淋巴细胞 活化B淋巴细胞 活化 核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC 核心抗原肽 流式细胞仪、 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载 状况
特异性CTL诱导 诱导 特异性
Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组 检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异 检测对照组和实验组 抗原特异 前者为对照组（ ），后者为实验组 性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加 （ 区）。前者为对照组 未加APC），后者为实验组（加 ），后者为实验组（ APC）。 ）。
1.
负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培 负载了抗原的活化 细胞与淋巴细胞混合培 培养液). 养(含IL-2的RPMI1640培养液 含 的 培养液
2. 3.
收集细胞,以五聚体技术检测 特异性CTL. 收集细胞 以五聚体技术检测HBV特异性 以五聚体技术检测 特异性 实验组特异性CTL为0.50±0.19%，对照组 为 实验组特异性 ± ， 为0.20±0.10%。 ± 。
对照组
加CPG-ODN组 组
CpG提高 细胞表面MHC-Ⅰ、 提高B细胞表面 Ⅰ 提高 细胞表面 MHC-Ⅱ的表达 Ⅱ
2500 2000
MHC 表 达 量 （ MFI ）
*
*
*
*
1500 1000 500 0 CpG2006 221 200 221
Ⅰ *
Ⅱ
P&lG提高 细胞表面CD80、 提高B细胞表面 、 提高 细胞表面 CD86的表达 的表达
、 表 达 率 （ ）
80 70 60 50 40 0 0 0 0
6
006 C
Cp2006
C
CD80 CD80 *
CD86 CD86
P<0.05
C
6
CD80 CD86
* * *
*
B细胞 细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达 Ⅰ Ⅱ 细胞
磁珠分选B细胞 磁珠分选 细胞
分选前B 分选前B细胞 7.89%
分选后B细胞 89.6% 分选后B
活化B细胞负载抗原肽 活化 细胞负载抗原肽
M1
Marker All M1
% Gated 100.00 41.34
活化B细胞负载核心抗原 活化 细胞负载核心抗原
荧光显微镜观察B细胞负载 荧光显微镜观察 细胞负载HBcAg18-27肽 细胞负载 肽
2.
3.
CpG提高淋巴细胞 提高淋巴细胞CD69表达 提高淋巴细胞 表达
35 30 25 20
率 （ ） % CD69 表 达
*
15 10 5 0 CpG2006 221
*
200
淋巴细胞 *
淋巴细胞
P<0.05
221
B细胞 细胞CD80、CD86表达 细胞 、 表达
对照组
加CPG-ODN组 组
加CPG-ODN组 组
CIK细胞杀伤靶细胞 细胞杀伤靶细胞
研究背景
通过主动免疫、过继特异性免疫、 通过主动免疫、过继特异性免疫、 过继非特异性免疫等方式， 过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙 肝患者体内残存的HBV，达到治疗效 ， 肝患者体内残存的 果。
研究背景
B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质， 淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质， 同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究 同时具有CpG-ODN受体：TLRCpG 受体 探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效 探讨CpG-ODN诱导 淋巴细胞成为高效 CpG 诱导 APC，使之具有类似于树突状细胞功能 ， 的可行性。 的可行性。
结论
1. 2. 3. 4. 5. 6.
CpG能够活化 细胞，对T细胞无明显的作用 能够活化B细胞 能够活化 细胞， 细胞无明显的作用 CpG能够提高 细胞表面抗原递呈相关分子的表达 能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达 能够提高 CPG诱导 诱导PBMC产生高水平的 产生高水平的IFN-γ 诱导 产生高水平的 CPG诱导淋巴细胞向 诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化 诱导淋巴细胞向 、 分化 CPG增强 增强PBMC对K562细胞的杀伤作用 对 细胞的杀伤作用 增强 通过B细胞介导 可诱导特异性CTL 通过 细胞介导, CPG可诱导特异性 细胞介导 可诱导特异性