小鼠角膜新生血管内皮细胞的分离培养及其趋化因子受体的表达(新)
小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用的研究
作 用 。方 法 取 小 鼠主 动 脉 ， 去 除周 围 的 脂 肪 和结 缔 组 织 ， 将动脉环剪成 ０ ． ５ ｎ ｌ ｍ大小 ， 放入基质胶 处理 的 １ ２孔 培 养 板 内， 待 细 胞 长满 ， 用胰酶消化后 ， 取单细胞悬液用抗 Ｃ Ｄ １ ４ ６免 疫 磁 珠 纯 化 ， 再用 Ｃ Ｄ ３ １抗 体 鉴 定 细 胞 纯 度 ， 按 ｌ ０ 个 细胞／ ｆ － Ｌ 加入 ９ ６孔 板 培 养 ， 细胞 ７ ０ ％ ～８ ０ ％ 融 合 时 用 不 同 浓 度 Ｍ１ Ｆ或 ＭＩ Ｆ抑 制 剂 处 理 细 胞 ， ４ ８ ｈ后 用 甲 基 噻 唑 基 四 唑（ Ｍ Ｔ Ｔ ） 检 测 细 胞 增 殖 程 度 。结 果 经Ｃ Ｄ １ ４ ６磁 珠 纯 化 后 细 胞 纯 度 为 ９ ５ ％ 以上 ， ＭＴ Ｔ检 测 结 果 显 示 低 剂 量 ＭＩ Ｆ能
ｃ ｏ ｍ ｍ ｏ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｍａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｍ ｉ ｇ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ（ ＭＩ Ｆ ） ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｍｕ ｒ ｉ ｎ ｅ ａ ｏ ｒ ｔ ａ Ｖ Ｅ Ｃ ｗ ｅ ｒ ｅ ｇ ｏ ｔ ｉ ｒ ｄ ｏ ｆ
的增 殖 ， 说明 Ｍ Ｉ Ｆ在 血 管 内皮 细胞 的 多 种病 理 生 理 反 应 中 起 重 要 作 用 。 ［ 关键词 ］ 巨噬细胞移动抑制因子 ； 血 管 内皮 细 胞 ； 细胞培养技术 ； 剂量效应关 系； 小 鼠 ［ 中国 图书 资 料 分 类 号 ］ Ｒ 一 ３ ２ ２ ； Ｒ ３ ２ ９ ． ５ ［ 文 献 标 志码 ］ Ａ ［ 文章编号 ］ ２ ０ ９ ５ — １ ４ ０ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） ０ １ — ０ ０ １ ０ － ０ ４
血管内皮生长因子及其受体家族在角膜组织及角膜病变中的作用和研究进展
血管内皮生长因子及其受体家族在角膜组织及角膜病变中的作用和研究进展冯璐;狄国虎;周庆军【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2016(020)011【摘要】背景：血管内皮生长因子是一类具有多功能的细胞因子家族,在增强血管的渗透性、诱导血管发生和血管生成及内皮细胞生长、促进细胞迁移、抑制细胞凋亡等方面发挥作用。
目的：阐述血管内皮生长因子及其受体在角膜组织中的作用及最新研究进展。
方法：应用计算机检索PubM ed数据库2005至2015年10年间的文献。
英文检索词为＂vascular endothelial growth factor,cornea＂,依据纳入排除标准选择43篇文献进行归纳总结。
结果与结论：1血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体通过引起Tip细胞活化影响Notch信号通路参与角膜新生血管的调控。
2角膜的新生淋巴管主要依赖于巨噬细胞分泌的血管内皮生长因子C或血管内皮生长因子D,进一步活化淋巴管内皮细胞血管内皮生长因子受体3,引起细胞增殖、迁移,最终导致新生淋巴管的形成。
3单纯疱疹病毒性角膜炎诱发角膜新生淋巴管是通过血管内皮生长因子A/血管内皮生长因子受体2途径实现的。
4血管内皮生长因子家族可显著促进受损的角膜神经末梢、上皮及角膜敏感度的修复,具有营养神经及促进角膜上皮修复的功能。
【总页数】7页(P1644-1650)【作者】冯璐;狄国虎;周庆军【作者单位】山东省眼科研究所,山东省眼科学重点实验室,山东省青岛市266071【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.改良内皮抑素基因对大鼠角膜新生血管中血管内皮生长因子及其受体表达的抑制作用 [J], 葛红岩;肖楠;田霈;王琳;罗鑫;刘平2.改良内皮抑素基因对大鼠角膜新生血管中血管内皮生长因子及其受体表达的抑制作用 [J], 葛红岩;肖楠;田霈;王琳;罗鑫;刘平3.血管内皮生长因子及其受体通道与角膜新生血管的关系研究进展 [J], 胡文静;周善璧4.血管内皮生长因子及其受体家族在角膜组织及角膜病变中的作用和研究进展 [J], 冯璐;狄国虎;周庆军5.血管内皮生长因子C及其受体血管内皮生长因子受体3在食管癌淋巴转移中的作用 [J], 王羽;孙平;郭素芬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管内皮生长因子C在小鼠碱烧伤角膜内的表达及意义
血管内皮生长因子C在小鼠碱烧伤角膜内的表达及意义李建章;洪杉;杨树才;陈明伟;马晶【期刊名称】《解剖科学进展》【年(卷),期】2008(14)2【摘要】目的观察血管内皮生长因子C(VEGF-C)在小鼠角膜碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达情况,探讨VEGF-C在小鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管形成过程中的作用。
方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,分别于碱烧伤后1d、3d、5d、7d、12d 和18d取材。
采用免疫组化法(SP),观察VEGF-C在正常角膜和碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达情况。
应用淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)标记淋巴管,观察小鼠碱烧伤角膜内新生淋巴管的形成情况。
结果在正常小鼠角膜组织内,VEGF-C 表达于角膜上皮层和内皮层。
在碱烧伤角膜内,VEGF-C主要表达于角膜基质内入侵的炎性细胞和角膜上皮层细胞,并且表达增高,于碱烧伤后3d,VEGF-C的表达达到高峰(P<0.01)。
碱烧伤后7d,VEGF-C的表达下降至正常水平,可见阳性表达LYVE-1的处于开放状态的新生淋巴管。
结论VEGF-C可能参与小鼠角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管形成过程。
【总页数】4页(P137-140)【关键词】角膜碱烧伤;血管内皮生长因子C;淋巴管【作者】李建章;洪杉;杨树才;陈明伟;马晶【作者单位】哈尔滨医科大学附属第四医院泌尿外科;黑龙江省眼病防治研究所;哈尔滨医科大学解剖学教研室【正文语种】中文【中图分类】R779.13【相关文献】1.鼠角膜碱烧伤后新生淋巴管上血管内皮生长因子受体-3的表达和意义 [J], 曹敏;刘恒明;李斌;胡军2.密蒙花对小鼠碱烧伤角膜新生血管内皮生长因子表达的影响 [J], 沈志华;左志琴;刘军3.低分子肝素对大鼠角膜碱烧伤后血管内皮生长因子和肝细胞生长因子表达的影响[J], 翁夷平;赵平4.鼠角膜碱烧伤后血管内皮细胞生长因子在其角膜中的表达及意义 [J], 邱培瑾;姚克;朱丽君;周彩云;程坚5.基质金属蛋白酶2、9和血管内皮生长因子在碱烧伤小鼠角膜组织中的表达 [J], 冯玉梅;冯怡;朱旭东;党颖;马清钧;周岐新;曾昭淳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管内皮生长因子受体3在大鼠胚胎皮肤淋巴管和血管内皮的表达及意义
血管内皮生长因子受体3在大鼠胚胎皮肤淋巴管和血管内皮的表达及意义马晶;赵玲辉;张雅芳;杨树才【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2005(014)003【摘要】目的观察血管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3, VEGFR-3)蛋白在大鼠第15d胚胎和第21d胚胎皮肤淋巴管和血管内皮的表达水平,探讨VEGFR-3在胚胎淋巴管和血管发生发育中的生物功能.方法应用免疫组织化学技术(SABC法)对大鼠第15d和第21d胚胎共61例皮肤样本进行抗鼠VEGFR-3免疫组织化学染色,观察VEGFR-3在皮肤淋巴管和血管内皮细胞的表达情况.结果大鼠胚胎皮肤淋巴管和血管内皮细胞均阳性表达VEGFR-3蛋白,VEGFR-3蛋白在大鼠胚胎第15d、胚胎第21d皮肤淋巴管内皮细胞的阳性表达率分别是38.71%(12/31)和73.33%(22/30),第21d胚胎皮肤淋巴管VEGFR-3蛋白的表达水平明显高于第15d胚胎皮肤淋巴管VEGFR-3蛋白的表达水平(P<0.01).VEGFR-3蛋白在大鼠胚胎第15d、胚胎第21d皮肤血管内皮细胞的阳性表达率分别是48.39%(15/31)和46.67%(14/30),第15d和第 21d胚胎皮肤血管VEGFR-3蛋白的表达水平之间无明显差异(P>0.05).结论随着大鼠胚胎的发育,VEGFR-3蛋白在皮肤淋巴管的表达水平表现为明显上升的趋势,提示VEGFR-3在淋巴管发生发育中的作用逐渐增强.【总页数】4页(P305-308)【作者】马晶;赵玲辉;张雅芳;杨树才【作者单位】哈尔滨医科大学解剖学教研室,黑龙江 150086;哈尔滨医科大学解剖学教研室,黑龙江 150086;哈尔滨医科大学解剖学教研室,黑龙江 150086;哈尔滨医科大学解剖学教研室,黑龙江 150086【正文语种】中文【中图分类】R322.1+2【相关文献】1.血管内皮生长因子C及血管内皮生长因子受体3在人直肠腺癌中的表达及其意义 [J], 曾昭明2.血管内皮生长因子受体3在视网膜母细胞瘤Rb50中的表达及其意义 [J], 李书华;徐波;徐若冰;张雅洁3.Podoplanin、β-catenin及血管内皮生长因子受体3在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义 [J], 纪亮;张鹏;李玉兰;姜杨;李永涛;杨慧科;刘艳翠4.血管内皮生长因子受体3在慢性鼻-鼻窦炎病变组织中的表达及其意义 [J], 米淑娜5.血管内皮生长因子受体3与PI3K/AKT在胃癌组织中的表达及意义 [J], 苗莹莹;朱正秋;黄广清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管内皮生长因子在氧诱导小鼠新生血管中的表达及意义
血管内皮生长因子在氧诱导小鼠新生血管中的表达及意义孔怡淳;韩梅;赵堪兴【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2006(024)004【摘要】目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在小鼠视网膜新生血管中的表达及意义.方法对新生c57BL/6N小鼠高氧后相对低氧饲养,诱导产生视网膜新生血管.在出生后12 d、17 d摘除眼球,应用RT-PCR,Western Blot以及视网膜血管荧光灌注造影技术检测全视网膜VEGF mRNA、蛋白表达水平以及视网膜新生血管的发生程度.结果视网膜血管造影显示高氧造成血管发育受限,相对低氧后产生新生血管.伴随新生血管的发生,VEGF mRNA升高2.3倍;VEGF蛋白含量也升高7.3倍.结论VEGF表达改变与新生血管发生成正相关,其升高也是造成病理性视网膜新生血管发生的机制之一.减少内源性VEGF表达可能成为治疗视网膜新生血管的新方法.【总页数】4页(P407-410)【作者】孔怡淳;韩梅;赵堪兴【作者单位】300074,天津医科大学;300022,天津市眼科医院;300022,天津市眼科医院【正文语种】中文【中图分类】R77【相关文献】1.小鼠氧诱导视网膜新生血管形成中EphA2与 VEGF 的表达及相关性研究 [J], 黄文志;李倩庆;高宗银2.氧诱导新生小鼠视网膜病变中血管新生和氧应激相关基因表达的变化 [J], 余增洋;龚陈媛;张国庆;季莉莉N1在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及意义 [J], 底煜;张轶欧;杨飏;陈晓隆4.YAP在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及意义 [J], 杨军;周佳莹;董德坤;刘盈5.色素上皮细胞衍生因子在氧诱导大鼠视网膜病变新生血管中的表达及意义 [J], 马玉胜;马锋伟;程美红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组人内皮抑素滴眼液抑制小鼠角膜新生血管形成的研究
重组人内皮抑素滴眼液抑制小鼠角膜新生血管形成的研究冯怡;冯玉梅;朱旭东;马清钧【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2005(023)001【摘要】目的检验重组人内皮抑素对角膜新生血管形成的抑制效果,探索其临床应用价值.方法用MTT方法检验重组内皮抑素对血管内皮细胞的增殖抑制活性;用重组人内皮抑素滴眼液,治疗小鼠角膜碱烧伤导致的角膜新生血管形成.结果重组人内皮抑素10μg/mL时可抑制bFGF刺激下HUVEC的增殖,抑制率达到42.1%(P＜0.05);100μg/mL的内皮抑素可抑制碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管形成,治疗7 d 时新生血管长度较未治疗组减少30.9%(P＜0.01),新生血管化面积减少了13.7%(P ＜0.01).结论内皮抑素特异地抑制血管内皮细胞增殖,抑制碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管形成,可能成为临床上预防、治疗相关眼科疾患的药物.【总页数】4页(P12-15)【作者】冯怡;冯玉梅;朱旭东;马清钧【作者单位】100850,北京,军事医学科学院生物工程研究所;400016,重庆医科大学药理系;100850,北京,军事医学科学院生物工程研究所;100850,北京,军事医学科学院生物工程研究所【正文语种】中文【中图分类】R772【相关文献】1.重组人内皮抑素抑制角膜新生血管的实验研究 [J], 李维义;高晓唯;任兵2.重组人内皮抑素两种给药途径抑制角膜新生血管的实验研究 [J], 李维义;高晓唯;郭继华;任兵3.基因重组小鼠凝血栓蛋白-1抑制兔角膜新生血管形成的实验研究 [J], 金玲;蔡郑东;楼月芳4.重组分泌型内皮抑素抑制兔角膜新生血管形成的实验研究 [J], 王晓燕;孙汶生;马春红;张利宁;袁中芳;魏增涛5.内皮抑素基因治疗对小鼠肿瘤组织内新生血管形成抑制作用的实验研究 [J], 隋刚;徐志飞;孙耀昌;刘永靖;乌立晖;秦雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠角膜新生血管内皮细胞的分离培养及其趋化因子受体的表达论文
ｄａｙｓ ａｎｄ ｐｅａｋｅｄ
ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｍｏｄｅｌｉｎｇ，ａｎｄ
ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ
ｎｅｔｗｏｒｋ—ｌｉｋｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｆｏｒ ＣＤ３ １ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ
ｃｏｒｎｅａｓ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｇｒｅｗ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｗａｌｌ ２ ｈｏｕｒｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ
ａｎｄ ＣＣＲ４ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｔｈｅ ｗｅａｋｅｓｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ＣＣＲ９，ＣＸＣＲ４ ａｎｄ
ＣＸ３ＣＲＩ ｍＲＮＡ
ｗｅｒｅ
ＣＸＣＲ５ ｍＲＮＡ，ｗｈｉｌｅ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＣＸＣＲ３，ＣＣＲ６，ＣＣＲｌ０ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
达。
结果碱烧伤后７ ｄ裂隙灯显微镜下可见小鼠左眼角膜出现新生血管，碱烧伤后２周角膜新生血管的
形成达高峰，免疫荧光检测可见角膜组织内特异性ＣＤ３１染色的血管网。角膜新生血管血管内皮细胞培养后
２
ｈ贴壁生长，形态呈扁平多边形，体积较大，传代培养后细胞生长速度明显加快。培养的角膜新生血管内皮
细胞ＣＤ３１表达阳性，细胞质中呈棕黄色染色，而角膜基质细胞中ＣＤ３１表达阴性。逆转录ＰＣＲ结果显示分 离培养的血管内皮细胞中ＣＣＲｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３和ＣＣＲ４ ｍＲＮＡ相对表达量最高，ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲｌ０和
ｂｅａｄｓ ｃｏａｔｅｄ ｗｉｔｈ
ａｎｔｉ・ＣＤ３ １．Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ—ｃｏａｔｅｄ ｗａｌｌｓ
万方数据
主堡塞墼竖型盘查！！！！至！旦筮！！鲞箍！塑垦！塑！垦翌Ｑ业！！尘竺尘！！！！翌！里！！！！！！！！：！！：堕！：！
角膜新生血管治疗中以VEGF／VEGFR为靶点药物的研究进展
角膜新生血管治疗中以VEGF／VEGFR为靶点药物的研究进展王群;黄一飞【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2015(033)012【摘要】角膜是眼屈光间质的重要组成部分，具有透明性、无血管性。
透明角膜对维持眼视光功能十分重要。
角膜的无血管状态是以低水平的血管生成因子和高水平的抗血管生成因子为基础。
在病理情况下，角膜血管生成因子和抑制因子的平衡被打破，从而产生病理性角膜新生血管（corneal neovascularization，CNV）。
血管内皮生长因子（VEGF）是目前已知促新生血管生成最主要的生长因子之一。
近年来，VEGF和其受体的靶向抑制药物的有效性及安全性已经在部分新生血管性眼病如年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、新生血管性青光眼、早产儿视网膜病变和CNV中得以证实。
本文就CNV的抗VEGF及其受体靶向治疗药物的研究进展加以综述。
【总页数】6页(P1138-1143)【作者】王群;黄一飞【作者单位】中国人民武装警察部队总医院眼科；解放军医学院,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R730.54【相关文献】1.角膜新生血管治疗中以VEGF/VEGFR为靶点药物的研究进展 [J], 王群2.以VEGF/VEGFR为靶点的肝癌药物研究进展 [J], 赵小峰;董浩;黄晓平;许瑞安;刁勇3.VEGF/VEGFR通路在胃癌靶向治疗中的研究进展 [J], 刘雯静;秦长江4.以VEGF及VEGFR为靶点的抗肿瘤血管生成治疗研究进展 [J], 陈芳琳;陈正堂5.以VEGF/VEGFR为靶点的抗肿瘤药物的研究进展 [J], 陈川（综述）;俞德超（审阅）;滕理送（审阅）因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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模型；近交系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠 基金项目：国家自然科学基金青年项目（８１２００７２７）；江苏省医学重点人才项目（ＲＣ２０１１１０４）；苏州 市科技计划项目（ＳＹＳ２０１４４８）；苏州大学博士研究生学术新人奖子项目（５８３２００１３１３）
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｃｏｒｎｅａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｇａｏｑｉｎ，Ｘｉａｏ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｃｏｒｎｅａｓ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｅｅｎｃｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｗｅｒｅ
ｔｏ
ａｓｓａｙ ｔｈｅ
ＣＤ３ １
ｆｌａｔｍｏｕｎｔ ２ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ｃｏｒｎｅａｌ ｐｉｅｃｅｓ
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ｃｅｌｌｓ
ｃａｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ
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Ｖａｓｃｕｌａｒ
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ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ
ｃｏｒｎｅａｓ
ａｆｆｉｎｉｔｙ
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ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－０１６０．２０１６．０２．００８
【摘要】
背景研究角膜新生血管生成的病理机制对角膜新生血管的治疗具有重要意义，但目前的相
目的
关研究多采用非角膜新生血管来源的血管内皮细胞，研究结果的可靠性受到一定影响。
探索从碱烧
伤诱导实验性小鼠角膜新生血管组织中分离和培养血管内皮细胞的方法，并检测新生血管内皮细胞中趋化 因子受体的表达，为角膜新生血管内皮细胞的生物学特性研究奠定基础。方法７—８周龄ＳＰＦ级健康雄性 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠１０只，采用ＮａＯＨ碱烧伤法构建小鼠实验性角膜新生血管模型，采用免疫荧光技术检测ＣＤ３１在 角膜新生血管中的表达。在碱烧伤后２周摘取眼球分离角膜组织，眼科手术剪剪碎角膜组织后应用胶原酶Ｄ 消化获取单个细胞，使用包被ＣＤ３１抗体的磁珠分选获取血管内皮细胞。采用免疫组织化学染色法检测 ＣＤ３１在细胞中的表达以鉴定培养的细胞，采用逆转录ＰＣＲ法检测血管内皮细胞中趋化因子受体基因的表
ＣＸ３ＣＲｌ
ｍＲＮＡ呈中等强度表达，ＣＣＲ５、ＣＣＲ８ ｍＲＮＡ相对表达量较低，而ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ４和ＣＸＣＲ５ ｍＲＮＡ表
达未检测到。结论ＣＤ３１抗体的磁珠分选法可有效分离纯化小鼠角膜新生血管内皮细胞，并可进行体外培 养且培养的细胞可表达趋化因子受体。 【关键词】 内皮细胞／角膜新生血管来源；细胞培养；角膜新生血管／化学诱导；趋化因子受体；动物
达。
结果碱烧伤后７ ｄ裂隙灯显微镜下可见小鼠左眼角膜出现新生血管，碱烧伤后２周角膜新生血管的
形成达高峰，免疫荧光检测可见角膜组织内特异性ＣＤ３１染色的血管网。角膜新生血管血管内皮细胞培养后
２
ｈ贴壁生长，形态呈扁平多边形，体积较大，传代培养后细胞生长速度明显加快。培养的角膜新生血管内皮
细胞ＣＤ３１表达阳性，细胞质中呈棕黄色染色，而角膜基质细胞中ＣＤ３１表达阴性。逆转录ＰＣＲ结果显示分 离培养的血管内皮细胞中ＣＣＲｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３和ＣＣＲ４ ｍＲＮＡ相对表达量最高，ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＣＲｌ０和
７Ｓ
Ｋｅｙ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ
Ｐｒｏｇｒａｍ（ＲＣ２０１ １
１０４）；Ｓｕｚｈｏｕ
Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｎａｔｕｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＳＹＳ２０１４４８）；Ｓｏｏｃｈｏｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｔａｌｅｎｔｓ Ｐｒｏｇｒａｍ（５８３２００１３ １３）
新生血管形成是一个复杂的病理生理过程，其中 包括血管内皮细胞的分化成熟、增生、迁移和管腔形成 等，任何影响血管内皮细胞生物学行为的因素均能影 响新生血管形成¨。１。正常情况下，角膜是无血管的 透明组织，但在炎症、化学烧伤、感染等病理状态下，角 膜组织的结构和屏障功能受损，导致病变组织的炎症 细胞和血管内皮祖细胞浸润，最终引起角膜新生血管 形成¨。。研究角膜新生血管的发生因素有助于理解 角膜新生血管的发病机制，为临床治疗相关疾病提供 理论依据，也为其他新生血管性眼病发病机制的研究 提供参考。近年来，有关角膜新生血管的研究多采用 局部或全身药物干预后的在体观察，但药物干预常对 组织和机体产生系统性和综合性的影响，无法直接获 得对新生血管内皮细胞的直接作用和独立影响的结 果，体外实验时对细胞的选择成了关键问题。从新生 血管组织中分离和培养血管内皮细胞用于体外生物学 功能的研究将弥补体内研究的不足¨。。由于对新生 血管组织来源的内皮细胞进行分离和培养的难度较 大，故目前多采用其他组织来源的血管内皮细胞系，因 此相关干预因子对角膜新生血管内皮细胞作用机制研 究的可靠性受到一定的影响。基于以上因素，本研究 拟构建实验性角膜新生血管模型，应用磁珠分选法分 离角膜新生血管组织来源的血管内皮细胞，通过特殊 的培养条件进行培养，并检测血管相关因子受体在细 胞中的表达，为进一步研究其生物学功能和相关干预 实验提供基础。
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｕ Ｐｅｉｒｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｌｕｐｅｉｒｏｎｇ＠ｓｕｄａ．ｅｄｕ．ｃｎ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ】
Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ
Ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ
ａｎｄ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｃｏｒｎｅａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｓ
ｏｆ
ａｒｅ
ｂｒｏｗｎ
ｄｙｅ ｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ，ｉｎ ｃｏｎｔｒａｓｔ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ
ａｂｓｅｎｔ ｉｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｉｎ ＣＣＲｌ，ＣＣＲ２，ＣＣＲ３
ａｎｄ
ｄｅｔｅｃｔ
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Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｃｏｒｎｅａｌ
ｍｏｄｅｌｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ
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ｍａｌｅ ＢＡＬＢ／ｃ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｇｅ ｏｆ ７－８ ｗｅｅｋｓ ｂｙ ｓｔｉｃｋｉｎｇ ｔｈｅ
ｗａｓ
ｕｓｅ
ｆｉｌｔｅｒ ｐａｐｅｒｓ ｗｉｔｈ ＮａＯＨ ｉｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
１３２・
主堡塞墼竖型盘查！！！！至！旦筮！！鲞箜！塑
！！也！垦！Ｐ ＱＰ！生！！竺！！！！！！型！型！！！！：！！！：！！：堕！：！
・实验研究・
小鼠角膜新生血管内皮细胞的分离培养 及其趋化因子受体的表达
刘高勤
肖艳辉 陈志刚
徐静
陆培荣
２１５００６苏州大学附属第一医院眼科 通信作者：陆培荣，Ｅｍａｉｌ：ｌｕｐｅｉｒｏｎｇ＠ｓｕｄａ．ｅｄｕ．ｃｎ
１材料与方法
１．１
材料
１．１．１实验动物７～８周龄ＳＰＦ级健康雄性ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠以及动物饲料购自上海中科院斯莱克动物中心， 体质量２５—３０ ｇ。实验动物的使用遵循ＡＲＶＯ声明， 并通过苏州大学实验动物伦理委员会批准。
１．１．２
主要试剂
引物由南京金思瑞生物科技有限
公司合成；ｍＲＮＡ Ｍｉｎｉ抽提试剂盒（美国ＱＩＡＧＥＮ公 司）；ｒＴａｑ酶、逆转录试剂盒（日本ＴａＫａＲａ生物技术公 司）；ＤＭＥＭ培养基、胎牛血清（ｆｅｔａｌ
ｂｙ ｉｎ
ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｈｅ
ｗａｓ ａｔ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ—ＰＣＲ ｗａｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｉｍａｌｓ Ａｎｉｍａｌ ｃｏｍｐｌｉｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｏ
ｄｅｔｅｃｔ
ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｔｈｉｓ
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｆｕｎｄ Ｔａｌｅｎｔｓ Ｄｏｃｔｏｒａｌ
ｉｎｄｕｃｅｄ；Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｅｈｅｍｏｋｉｎｅ；Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｍｏｄｅｌｓ，ａｎｉｍａｌ；Ｍｉｃｅ，ｉｎｂｒｅｄ ＢＡＬＢ／ｃ ｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（８１２００７２７）；Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ｍａｄｅ
ｉｎ
２ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ
ａｌｋａｌｉ ｂｕｒｎ ａｎｄ
ｔｈｅｎ
ｗｅｒｅ
ｄｉｇｅｓｔｅｄ
ｂｙ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ
ｗｅｒｅ
ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｎｅｏｖａｓｅｕｌａｒｉｚｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｂｙ
ｏｌｌ
ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｍａｇｎｅｔｉｃ
ｂｅａｄｓ ｃｏａｔｅｄ ｗｉｔｈ
ａｎｔｉ・ＣＤ３ １．Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ—ｃｏａｔｅｄ ｗａｌｌｓ
万方数据
主堡塞墼竖型盘查！！！！至！旦筮！！鲞箍！塑垦！塑！垦翌Ｑ业！！尘竺尘！！！！翌！里！！！！！！！！：！！：堕！：！
ａｎｄ
ｔｈｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
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Ｔｈｉｓ
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ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｒｎｅａｌ