紫外分光光度法的应用原理
仪器分析课件 第3章 紫外分光光度法
检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制
和结果处理
记录装置
二、分光光度计的类型
（一）单光束分光光度计
光源 单色器
参比 样品
检测器
显示器
• 只有一条光路，通过变换参比池和样品池的位 置，使它们分别置于光路来进行测定
国产751型、752型、721型、722型、UV-1100 型、英国SP-500型
E2a ca E2b
(3) 图计算法----两组分吸收光谱完全重叠--混合样品测定 (3)图中，a,b 吸收光谱双向重迭，互相干扰，在最大波长处互相
吸收。处理方法如下：
解线性方程组 过程：
（三）示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量 较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。
第三节 紫外-可见分光光度计
依据朗伯-比尔定律，测定待测液吸光度A的仪器。（选择不同波
长单色光λ、浓度） 分光光度计外观 分光光度原理图:
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器 信号处理及显示
信号处理 显示器
单色器
分光光度计外观
吸收池 检测器
光源
721型可见分光光度计
一、主要部件
1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光
浓度C及液层厚度L的乘积成正比。
注意! 适用范围
①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。 ③吸光度A具有加和性。Aa+b+c= Aa &光系数
A=k c L
k = A /c L
1、摩尔吸光系数或Em： 在一定λ下，c=1mol/L，L=1cm时的吸光度。单位：L/(mol.cm)
紫外-可见分光光度法的基本原理(一)
紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学方法，它利用物质对紫外光和可见光的吸收来确定物质的浓度。
本文将介绍紫外-可见分光光度法的基本原理，包括仪器的构成、光谱的特点以及测定原理等方面。
1. 仪器的构成紫外-可见分光光度法的仪器主要由光源、进样系统、分光器、检测器和数据处理系统五个部分组成。
其中光源通常采用汞灯、钨灯或氘灯，进样系统包括进样池和进样装置，分光器可分为单道光栅和双道光栅，检测器可采用光电倍增管或光电二极管，数据处理系统包括计算机和相关的数据处理软件。
2. 光谱的特点紫外-可见分光光度法所使用的光源通常在紫外至可见光范围内，因此能够观测到物质在这一范围内的吸收光谱。
吸收光谱通常表现为在特定波长范围内的吸收峰或吸收带，其位置和强度可反映物质的化学性质和浓度。
通过测定样品和对照液的吸光度差值，可以确定样品中所含物质的浓度。
3. 测定原理在紫外-可见分光光度法中，测定原理主要包括比较法和标准曲线法两种。
比较法是通过测定待测溶液与对照液的吸光度差值来确定物质的浓度，而标准曲线法则是通过构建标准曲线，利用标准溶液的吸光度与浓度的关系来确定待测溶液的浓度。
两种方法均需要在特定波长下进行测定，并且要对光谱仪进行基准校准和零点校准。
4. 应用范围紫外-可见分光光度法在分析化学领域有着广泛的应用，可以用于测定各种有机和无机物质的浓度，如药物、生物分子、环境污染物等。
其灵敏度高、操作简便、准确性好，因此被广泛应用于医药、环保、化工等领域。
5. 结语紫外-可见分光光度法作为一种常用的分析化学方法，具有许多优点，但也存在一些局限性，如对样品的要求较高、需要标准曲线等。
因此在实际应用中需要根据具体情况选择合适的方法，并结合其他分析方法进行综合分析，以获得更准确的结果。
通过以上介绍，相信读者对紫外-可见分光光度法的基本原理有了一定的了解，希望能对相关领域的研究和应用提供一定的参考和帮助。
6. 光源的选择与影响在紫外-可见分光光度法中，光源的选择对测定结果有着重要的影响。
简述紫外可见分光光度法的基本原理。
简述紫外可见分光光度法的基本原理。
紫外可见分光光度法是一种常用的分析方法，通过测量物质在紫外可见光区的吸光度来分析物质的浓度。
其基本原理如下：
1. 光源：使用特定波长范围的光源，通常是紫外光或可见光。
光源产生的光经过一系列光学元件聚焦后，成为一个具有特定波长范围的光束。
2. 分光器：分光器将光束分离成不同波长的光束。
分光器通常
使用棱镜或光栅等光学元件来分散光束，使其成为不同波长的光谱。
3. 样品池：将待测样品置于样品池中，光束通过样品时，样品
会吸收特定波长的光。
吸收光的强度与样品中某种物质的浓度成正比。
4. 检测器：检测器接收通过样品后的光束，并将光信号转化为
电信号。
光的强度由电压信号表示。
5. 计算和分析：使用计算机或其他数据处理设备对电信号进行
分析和计算，得出样品中某种物质的浓度。
通过测量样品在不同波长下的吸光度，可以得到样品的吸收光谱。
根据光的强度与浓度之间的线性关系，可以通过比较吸收光强度与标准曲线的关系来确定样品中某种物质的浓度。
nb∕sh∕t 0966-2017 白油中芳烃含量的测定紫外分光光度法
nb∕sh∕t 0966-2017 白油中芳烃含量的测定紫外分光光度法1. 引言1.1 概述在石油化工行业中，白油是一种重要的工业原料，广泛用于润滑、冷却和清洗等领域。
然而，白油中芳烃的含量对其质量有着重要影响。
因此，在生产过程中准确测定白油中芳烃的含量具有十分重要的意义。
1.2 研究背景过去，测定白油中芳烃含量的方法主要基于气相色谱法和红外光谱法。
然而，这些方法存在着复杂的样品制备步骤和相对低的测量灵敏度等问题。
为了解决这些问题，并提供更加准确且高效的分析手段，紫外分光光度法逐渐引起了人们的关注。
1.3 研究目的本文旨在探讨使用Nb∕sh∕t 0966-2017标准所规定的紫外分光光度法来测定白油中芳烃含量的可行性和准确性。
通过详细描述该方法的原理、步骤和数据处理流程，并与传统方法进行比较，以验证其优势和应用前景。
同时，对该方法的优缺点进行讨论，并提出后续工作规划，以期为白油质量监测和工业生产提供有力支持。
以上是“1. 引言”部分的内容，主要包括了概述、研究背景和研究目的三个方面的描述。
2. 白油中芳烃含量的重要性和应用:2.1 芳烃对白油质量的影响:在白油中，芳烃是一种常见的污染物。
芳烃的存在会严重影响白油的质量和性能。
首先，芳烃会降低白油的闪点和挥发性，增加火灾和爆炸的风险。
其次，芳烃还会导致白油易氧化、变质，从而缩短了白油的使用寿命。
此外，芳香化合物还具有较强的毒性和致癌性，在工业生产过程中可能对人体健康产生潜在危害。
2.2 芳烃在工业生产中的作用:尽管芳烃对于白油质量有着负面影响，但在某些特定领域中仍然需要添加芳烃。
例如，在橡胶工业中，芳香化合物可以作为溶剂和软化剂使用，提高橡胶制品的柔软度和可塑性，改善其加工性能。
此外，在润滑油、防锈剂和添加剂等行业中，芳烃也被广泛用于提高产品的性能指标。
2.3 芳烃含量监测的必要性:由于芳烃对白油质量和环境安全具有重要影响，准确监测和控制白油中的芳烃含量对于保障产品质量和生产安全至关重要。
第十章 紫外可见分光光度法
如果用△ E电子，△ E振动以及△E转动表示各能级 差，则：
E电 E振 E转
能级差 E h h c
由分子中的电子能级、振动能级和转动能级跃迁产 生的光谱称分子吸收光谱。
2．分子吸收光谱的分类： 分子内运动涉及电子能级、振动能级和转动
能级三种跃迁能级，
E电 E振 E转
对应的波谱区范围如下：
吸收曲线与最大吸收波长 max
①同一种物质对不同波长光的吸光度 不同。如KMnO4在400nm吸收少， 在525nm吸收最大，吸光度最大处 对应的波长称为最大吸收波长λmax ②不同浓度的同一种物质，其吸收曲 线形状相似,λmax不变。而对于不同 物质，它们的吸收曲线形状和λmax 则不同。 ③吸收曲线可以提供物质的结构信息，
电子的基团。 例： C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N— 注：当出现几个生色团共轭，则几个生色团所产生的
吸收带将消失，代之出现新的共轭吸收带，其波 长将比单个生色团的吸收波长长，强度也增强。
下面为某些常见生色团的吸收光谱
生色团 烯 炔 羧基 酰胺基 羰基 偶氮基 硝基 亚硝基 硝酸酯
溶剂 正庚烷 正庚烷 乙醇 水 正己烷 乙醇 异辛酯 乙醚
称最小吸收波长(λmin) 。
3.肩峰:在一个吸收峰旁边 产生的一个曲折。 4.末端吸收:只在图谱短波 呈现强吸收而不成峰形的
部分。
5. 生色团
所谓生色团，是指有机化合物分子结构中含有p -
p*和n-p*中跃迁的基团,即能在紫外-可见光范围内产 生吸收的原子团。 对有机化合物：主要为具有不饱和键和未成对
概述
一、紫外-可见分光光度法：是研究物质在紫外可见光区(200 ~ 800 nm)分子吸收光谱的分析方 法。
可见光区 400~760nm；紫外光区200~400nm。 二.紫外—可见分光光度法的特点 （1）灵敏度较高：灵敏度可达10-5~10-7g/mL （2）选择性较好：多组分共存溶液中，无需化学
02-紫外可见分光光度法全
例：Cd2+浓度为140 umol ·L-1 ，双 硫腙法显色测定波长为520nm，液
层厚度2cm，吸光度为0.22，求 和
透光率T。
解： (1) A = b c
0.22 = 2 140 10-6
= 785.7 L ·mol-1 ·cm-1
(2) A =－lgT = 0.22 lgT = －0.22 T = 10－0.22 = 0.60 = 60%
（ε=200-2000L /（mol*cm ），如苯环。
（4） 210-250 nm有强吸收峰，表明可能含有2个共轭双键 ；在260nm,300 nm,330 nm有强吸收峰，说明是3个或3个以 上双键的共轭体系。
（5)若吸收峰延伸至可见光区，则可能是长链共轭或稠环 化合物
习题P46第21,22题
第三节 紫外可见分光光度法的定量分析 P9
照射分子，由于分子、原子或离子的能级是量子化的，不
连续的，只有光子的能量(h)与被照射物质粒子的基态和
激发态能量之差(E)相等时，才能被吸收。
△ E = h （ h为普朗克常数）
不同物质的基态和激发态的能量差不同，选择吸收光
子的能量也不同，即吸收的波长不同。
2、光的种类 P7
➢具有单一波长的光叫单色光，比如红，蓝光等。 ➢由不同波长的光组成的光叫复色光。比如日光等 ➢如两种适当颜色的单色光按适当的强度比例混合 能得到白光，则这两种颜色的光叫做互补色光。
A = K·b ·c
c：物质的量浓度(mol ·L-1) K:吸光系数。
b：为液层厚度(cm)
应用的条件：
入射光必须是单色光； 吸收发生在稀的均匀的介质中； 吸收过程中，吸收物质互相不发生作用。
3、吸光系数（K）
紫外分光度实验报告
一、实验目的1. 理解紫外分光光度法的基本原理和应用。
2. 掌握紫外分光光度计的操作方法。
3. 学习通过紫外分光光度法测定溶液中特定物质的含量。
4. 熟悉标准曲线的制作及其在定量分析中的应用。
二、实验原理紫外分光光度法是一种基于物质对紫外光和可见光的选择性吸收进行定性和定量分析的方法。
根据朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law），溶液的吸光度（A）与溶液的浓度（c）、光程（l）和摩尔吸光系数（ε）成正比，即 \( A = εlc \)。
通过测量溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出溶液中特定物质的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、比色皿、移液管、容量瓶、洗耳球等。
2. 试剂：待测物质的标准溶液、溶剂、空白溶液等。
四、实验步骤1. 仪器准备：打开紫外-可见分光光度计电源，预热30分钟，确保仪器稳定。
2. 标准溶液的配制：根据实验要求，准确配制一系列已知浓度的待测物质标准溶液。
3. 空白溶液的配制：用溶剂配制空白溶液，用于扣除溶剂的吸光度。
4. 吸光度测量：- 将比色皿洗净并晾干，将标准溶液和空白溶液分别装入比色皿。
- 在紫外-可见分光光度计上设置合适的波长，调整吸光度为0（空白溶液）。
- 测量各标准溶液在设定波长下的吸光度值。
5. 标准曲线的制作：以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
6. 样品的测定：- 配制待测样品溶液，用移液管准确量取一定体积的样品溶液。
- 按照标准溶液的测定步骤，测量待测样品溶液的吸光度值。
- 在标准曲线上查找对应的浓度值。
五、实验结果与讨论1. 标准曲线的制作：根据实验数据，绘制标准曲线，观察曲线的线性关系。
2. 样品的测定：根据待测样品溶液的吸光度值，在标准曲线上查找对应的浓度值。
3. 误差分析：分析实验过程中可能出现的误差，如操作误差、仪器误差等，并提出改进措施。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了紫外分光光度法的基本原理和操作方法，学会了利用紫外分光光度计测定溶液中特定物质的含量。
dns紫外分光光度法
dns紫外分光光度法DNS紫外分光光度法是一种广泛应用于分子生物学领域的分析技术，其能够准确测定DNA、RNA以及蛋白质等生物大分子物质的浓度和纯度。
本文将从以下几个方面进行介绍。
一、DNS紫外分光光度法的原理DNS紫外分光光度法是利用生物大分子物质对紫外光的吸收来测定其浓度和纯度的方法。
在285-300nm波长范围内，DNA、RNA和蛋白质等分子会吸收较多的紫外光。
DNS试剂在这样的紫外光照射下被物质还原为DNB，且DNB的产生与样品中丝氨酸、组氨酸、酪氨酸等氨基酸的含量成正比。
这样，通过对样品与标准品在波长范围内的吸收值进行比较，可计算出样品中的生物大分子物质的浓度和纯度。
二、DNS紫外分光光度法的步骤1. 制备DNS试剂：将1g 3,5-二硝基水杨酸溶于100ml浓硫酸中，加入冰水中，使其在冰水中降温结晶，将产生的白色晶体过滤、清洗并干燥，即得到DNS试剂。
2. 样品准备：将待测样品制备成一定浓度的溶液，一般为50～100μg/ml, 要求样品溶液中无酶及其他干扰物质。
同时，还需准备一系列标准样品。
3. 测定吸光度值：将样品与标准样品分别加入量刚好的稀释液中，然后在波长范围内进行吸光度测定，记录吸光度值。
4. 计算生物大分子物质的浓度和纯度：根据吸光度计算样品中生物大分子物质的浓度和纯度，并将其与标准品的吸光度值对比，判断样品是否纯度高、浓度精确。
三、DNS紫外分光光度法的应用DNS紫外分光光度法在蛋白质纯化、定量、质量控制等方面具有广泛应用。
它不仅可以用于测定DNA、RNA和蛋白质的浓度和纯度，还可以用于判断DNA、RNA的纯度以及分子量大小。
四、DNS紫外分光光度法的优缺点优点：具有简便操作、准确可靠、灵敏度高、测量速度快等优点，适用于大量样品的测定。
缺点：DNS试剂的稳定性差，易降解和硫酸等化学物品使用过程需要注意操作安全性与环保性等问题。
综上所述，DNS紫外分光光度法是一种简单而有效的生物大分子物质测定方法，其具有极高的应用价值以及很广的适用范围。
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紫外分光光度法的应用原理
什么是紫外分光光度法？
紫外分光光度法是一种常用的分析方法，用于确定溶液中的物质浓度或测量溶液中的吸收率。
它基于物质吸收紫外线的原理，通过测量样品吸光度来推断物质浓度。
紫外分光光度法的原理
紫外分光光度法的原理基于分子的电子能级跃迁。
有机分子和某些无机物质在紫外光照射下，会发生电子转移或跃迁，从而吸收光能。
通常，这些转移发生在紫外光区域，波长范围通常是200到400纳米。
当有机分子或无机物质吸收紫外光时，它们的电子会由基态（低能级）跳跃至激发态（高能级）。
这种跃迁会导致吸光现象，即样品溶液吸收了一部分入射光的能量。
根据比尔–估耳定律，光吸收和样品浓度呈线性关系。
根据定律，吸光度（A）与溶液浓度（C）之间的关系可以表示为：
A = εcl
其中，A是吸光度，ε是摩尔吸光系数，c是物质的浓度，l是样品厚度。
紫外分光光度法的应用
紫外分光光度法广泛应用于多个领域，包括医药、环境、食品和化工等。
以下是紫外分光光度法在不同领域的一些应用示例：
1. 医药领域
•药物分析：紫外分光光度法可用于测定药物的浓度，帮助确定合适的药物剂量。
•蛋白质测定：通过测量蛋白质在紫外光下的吸收能力，可以确定其浓度和纯度。
2. 环境领域
•水质分析：紫外分光光度法可用于测定水中有机物和污染物的浓度，用于评估水质污染程度。
•大气监测：通过分析大气中有害气体和颗粒物的吸收能力，可以监测空气质量和大气污染物的浓度。
3. 食品领域
•食品添加剂检测：紫外分光光度法可用于测定食品中添加剂的浓度，保证食品安全和合规性。
•营养分析：通过测定食品中维生素、矿物质等的吸收能力，可以评估食品的营养价值。
4. 化工领域
•反应动力学研究：通过监测化学反应中物质浓度的变化，利用紫外分光光度法可以研究反应的速率和机理。
•催化剂活性评估：通过测定反应中某物质的吸收能力，可以评估催化剂的活性和效果。
总结
紫外分光光度法利用物质吸收紫外光的原理，通过测量样品吸光度来推断物质
的浓度。
它在医药、环境、食品和化工等领域具有广泛的应用。
通过分析吸收光谱，可以确定物质的浓度和纯度，从而实现定量分析和质量控制。
紫外分光光度法为许多行业提供了一种快速、准确和可靠的分析方法。
对于使用紫外分光光度法进行定量分析的实验室和行业来说，了解其原理和应用非常重要。