脂肪酶的用途
脂肪酶及其产生菌的筛选与改良研究进展
在脂肪酶催化过程 中，脂肪酶 的活性部位被一个螺 旋片段 （ 又称 “ 盖子” ）所包住 。在底物存在的情况 下 ，酶的构象发生变化 ， “ 盖子”打开 ，含有活性 部位的疏水部位就暴露 出来 。 “ 盖子 ”螺旋 的双亲 性会影响脂肪酶与底物在油 ／ 水界面的结合能力 ，其 双亲性 的减弱将导致脂 肪酶活性 的降低 ， “ 盖子 ” 的外表面相对亲水 ，而其面 向催 化部位 的内表 面则 相对疏水 。由于脂肪酶与油 ／ 水界面的缔合作用 ，使 “ 盖子”张开 ，活性部位得 以暴露 ，这使得脂肪酶与 底物的结合能力增强 ，此时底物就容易进入疏水性 通道而与活Ｊ 陛部位结合 ，形成酶一底物复合物［ ４ １ 。 １ 脂肪酶来源 ． ３ 脂肪酶广泛存在于动植 物和微生物 中。植物 中 含脂肪酶较多的是油料作物种子［ ５ １ ，如蓖麻籽 、油菜 籽等 ；动物体 内含脂肪酶较多的是高等动物的胰脏 和脂肪组织 ，在肠液 中也含有少量 的脂肪酶 ，用于 补 充胰脂肪酶对脂 肪消化 的不足阎 ；微 生物 中的细 菌 、真菌和酵母菌脂肪酶含量最为丰 富１ ７ １ 。由于微生 物种类多 、繁殖快 、易发生遗传变异 ，具有 比动植 物更广的作用 ｐ Ｈ值和温度范 围以及底物专一性 ，适 合 于工业化 生产脂肪酶和 获得高纯度样 品。 因此 ，
ｉ ｄ ｓ ｉｌｕ ｅ ． ｈ ｓｐ ｐ ｒｍａ ｅ ｕ ｎ ｕ ｔ ａ ｓ ｓ Ｔ ｉ ａ ｅ ｋ ｓａ ｓ ｍｍａｙ ｏ ｒ ｖｎ ｃ ｅ ｎｎ ｆｓ ａｎ ｒ ｄ ｃ ｎ ｐ ｓ ｓ ａ ｄ ｒ ｓ ￣１ ｒｇ ｅ ｓ ｒ ｒ ｉ ｏ ｉ ｇ ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｔ ｉ ｓｐ ｏ ｕ ｉｇ ｌ ａ ｅ ｅ ｅ ｔｈ ｐ ｏ ｒ ｓ ． ｆ ｍｐ ｒ ｉ ｎ ３ Ｋｅ ａ ｄ ： ｌ ａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｉ ｇ ｓ ａｎ ； ｓ ｒ ｅ ｉｇ；ｉ ｒ ｖ ｍｅ ｔ ｙ ｗ ｒ ｓ ｉ ｓ ； ｒ ｄ ｃ ｎ ｔ ｉ ｓ ｃ ｅ ｎ ｎ ｐ ｒ ｍｐ ｏ ｅ ｎ
酶在奶酪中的应用
酶在奶酪制作中的应用Application of Enzymes in the production of cheese摘要目前,我国的乳制品以奶粉、鲜奶类制品、酸奶为主,奶酪的生产和研究较少。
但是生物技术的迅速发展和人们对生物工程认识的日渐加深，酶工程已成为生物技术在实际生产中非常重要的应用。
虽然酶工程学近年来才兴起, 但酶在奶酪中的应用却由来已久。
本文主要就以上几种酶在奶酪生产中的酶制剂进行了论述。
关键词：生物工程；奶酪；酶制剂ABSTRACTAt present, China's dairy powdered milk, milk type products, yoghurt-based, less cheese production and research. However, the rapid development of biotechnology and Bioengineering people deepening understanding, enzyme engineering has become very important in the actual production of the application of biotechnology. Although the enzyme engineering in recent years before the rise, but the enzyme used in cheese has a long history. This review focuses on more than several enzymes in cheese production, enzymes are discussed.Key words: Bioengineering; cheese; enzymes目录1. 前言 (5)2. 奶酪熟化中的酶的种类 (6)2.1 凝乳酶 (6)2.2 脂肪酶 (7)2.3氨基肽酶 (7)3.酶在奶酪生产中的作用 (9)3.1 促进奶酪凝结成块,缩短熟化期 (9)3.2 产生芳香物质,增加奶酪的香气 (9)3.3 提高奶酪中可溶性氮的含量 (9)3.4 生产低脂肪奶酪制品 (9)3.5其它的作用 (9)4.酶制剂在奶酪熟化中的应用研究情况 (11)5. 展望 (12)6. 参考文献 (13)1.前言奶酪不仅具有与液体奶完全不同的风味和口感，而且含有较多的低聚肽、脂肪酸、维生素、钙、磷等营养物质,深受欧美等西方国家人民的喜爱；也是储备液体奶生产的一类固态乳制品。
复合凝乳酶的功能主治
复合凝乳酶的功能主治1. 简介复合凝乳酶是一种具有多种功能的酶类制剂。
它由多种酶混合而成，包括乳化酶、凝乳酶、蛋白酶和脂肪酶等。
复合凝乳酶能够在食品加工业中发挥很多重要的功能，具有广泛的用途。
2. 主要功能2.1 促进乳化复合凝乳酶中的乳化酶能够将水和油融合在一起，形成稳定的乳化液体。
这种乳化作用在很多食品加工过程中非常重要，例如制作乳酪、冰激凌和巧克力等。
通过使用复合凝乳酶，这些食品的质地更加柔软顺滑，口感更加丰富。
2.2 促进凝乳复合凝乳酶中的凝乳酶能够促进蛋白质的凝聚，使之形成凝乳。
这种特性在奶制品加工中非常重要，例如制作酸奶和乳酪等。
凝乳酶能够加速乳液的凝结过程，提高产品的稳定性，延长产品的保质期。
2.3 分解蛋白质复合凝乳酶中的蛋白酶能够分解蛋白质，使其变得更容易消化。
蛋白酶能够帮助人体吸收和利用蛋白质，提高蛋白质的利用率。
在食品加工中，蛋白酶也能够被用于催化剂、蛋白质组织的分解和食物的调味等方面。
2.4 分解脂肪复合凝乳酶中的脂肪酶能够分解脂肪，在食品加工中起到重要的作用。
脂肪酶能够帮助人体吸收和利用脂肪，提高脂肪的利用率。
在食品加工中，脂肪酶也常被用于制作植物油和调和油等产品。
3. 适用范围3.1 食品工业复合凝乳酶在食品工业中被广泛应用。
例如，它可以用于制作奶制品（如酸奶、乳酪）、糕点、蛋糕、巧克力等。
复合凝乳酶能够改善食品的质地、口感和营养价值。
3.2 医药行业复合凝乳酶也被应用于医药行业。
它可以用于制备医用凝胶、膏药、药片等制剂。
通过使用复合凝乳酶，这些制剂的凝固特性更好，便于使用和储存。
3.3 生物技术在生物技术领域，复合凝乳酶可以作为重要的酶催化剂。
它可以用于生物反应器中的生物反应过程，提高反应速率和产量。
此外，复合凝乳酶也可以应用于生物酶工程中，发展新的酶类制剂和生物技术工艺。
4. 安全性评估复合凝乳酶已经通过多项安全性评估，并被认定为安全可靠的食品添加剂。
它符合国内外的相关法规和标准，并获得了食品药品监督管理部门的批准。
8酶的工业应用
可催化L-酪氨酸或邻苯二酚生成多巴。已经制 成固定化酶使用。
多巴是治疗帕金森氏综合症的一种重要药物。 该酶作用pH为3.5-6.0，温度为30-55℃，为控
制氧化进程，应添加维生素C或硫酸肼等抗氧 化剂。
三、酶在药物制造方面的应用
核苷磷酸化酶
可催化阿糖尿苷生成阿糖腺苷；而阿糖尿苷由 尿苷通过化学方法转化而成；
由于酶具有专一性强和效率高的特点，所 以在医药方面使用的酶具有种类多、用量 少、纯度高的特点。
一、酶在疾病诊断方面的应用
根据体液内酶活力的变化诊断疾病
酸性磷酸酶（ACP） • 前列腺癌患者及出现肝炎、甲状旁腺机能亢进、红血 球病变等疾病时，血清中酸性磷酸酶的活力会升高。
碱性磷酸酶（ALP或AKP） • 佝偻病、骨骼软化症、骨瘤、骨骼广泛性转移癌、甲 状旁腺机能亢进、黄疸性肝脏疾病等，患者血清中碱 性磷酸酶活力升高；而软骨发育不全等疾病，引起该 酶活力下降。
脱除苦味和防止出现白色浑浊； 葡萄糖氧化酶：可去除果汁、饮料、罐头食品和果蔬干
制品中的氧气，防止产品氧化变质，防止微生物生长， 延长食品保存期； 溶菌酶：可防止细菌污染，起保鲜作用等。
果胶酶的作用机理
酯化的半乳糖醛酸
柚苷（柚配质-7-芸香糖苷） 橙皮苷（橙皮素-7-芸香糖苷）
四、改善食品的品质和风味
风味酶的发现和应用，在食品风味的再现、强化和矫正 方面有广阔应用前景。例如： 用洋葱风味酶处理甘蓝等蔬菜； 用奶油风味酶（脂肪酶）作用于含乳脂的巧克力、冰 淇淋、人造奶油等食品； 端肽酶水解苦味肽消除苦味； 风味酶用于恢复甚至强化原来的天然风味。
面包制造中，面团中添加适量的-淀粉酶和蛋白酶，可 缩短面团发酵时间，面包品质也有提高。
南极假丝酵母脂肪酶B的修饰与改造
基因组学与应用生物学，2011年，第30卷，第2期，第243－250页Genomics and Applied Biology,2011,Vol.30,No.2,243－250评述与展望Review and Progress南极假丝酵母脂肪酶B的修饰与改造章素平柳志强郑裕国*浙江工业大学生物工程研究所,杭州,310014*通讯作者,zhengyg@摘要南极假丝酵母脂肪酶B是用途最为广泛的脂肪酶之一，可用于许多有机化合物、医药中间体等的合成。
为了改善南极假丝酵母脂肪酶B的催化性能，提高其环境适应性，同时提高蛋白的表达量，降低生产成本，从而使其更适于工业化应用，许多针对酶蛋白分子的修饰及改造方法已在南极假丝酵母脂肪酶B中得到大量应用。
本文从化学修饰、理性设计和非理性设计3个方面详细综述了南极假丝酵母脂肪酶B的修饰与改造的关键技术，包括定点突变、蛋白质融合、易错PCR和DNA改组等，同时也介绍了以上技术在改良南极假丝酵母脂肪酶B特性方面的诸多成功实例。
关键词南极假丝酵母脂肪酶B,化学修饰,理性设计,非理性设计Research Progress of Modification for Candida antarctica Lipase BZhang Suping Liu Zhiqiang Zheng Yuguo*Institute of Bioengineering,Zhejiang University of Technology,Hangzhou,310014*Corresponding author,zhengyg@DOI:10.3969/gab.030.000243Abstract Candida antarctica lipase B is one of the most widely used lipases,which has been used for the synthe-sis of many organic compounds,and pharmaceutical intermediates.In order to improve the catalytic properties of Candida antarctica lipase B,enhance its environmental adaptability for industrial applications,increase its yield and reduce production costs,many modified methods have been widely applied.This paper elaborates on the tech-nologies for modification of Candida antarctica lipase B from three aspects:Chemical modification,rational de-sign and irrational design,such as site-directed mutagenesis,protein fusion,error-prone PCR,DNA shuffling,and then presents their application and achievements in improving the properties of Candida antarctica lipase B. Keywords Candida antarctica lipase B,Chemical modification,Rational design,Irrational design脂肪酶(1ipase,EC3.1.1.3)即三酰基甘油酰基水解酶，是一种特殊的酯键水解酶，它可以在油水界面上催化油脂的水解反应，生成脂肪酸和甘油、甘油单酯或二酯(Jaeger et al.,1994;Joseph et al.,2008)。
食品加工过程中常用的酶制剂情况
食品加工过程中常用的酶制剂情况食品加工中常用的酶7.5.5.1食品加工中常用的酶在食品加工中加入酶的目的通常是为了：①提高食品品质。
②制造合成食品。
③增加提取食品成分的速度与产量。
④改良风味。
⑤稳定食品品质。
⑥增加副产品的利用率。
食品加工业中所利用的酶比起标准的生化试剂来说相当的粗糙。
大部分酶制剂中仍含有许多杂质，而且还含有其他的酶，食品加工中所用的酶制剂是由可食用的或无毒的动植物原料和非致病、非毒性的微生物中提取的。
用微生物制备酶有许多优点：①微生物的用途广泛，理论上可以说利用微生物可以生产任何种酶。
②可以通过变异或遗传工程改变微生物而生产较高产的酶或其本身没有的酶。
③大多数微生物酶为胞外酶，所以回收酶非常容易。
④培养微生物用的培养基来源容易。
⑤微生物的生长速率和酶的产率都是非常高的。
因为酶催化反应的专一性与高效性，在食品加工中酶的应用相当广泛，表7-7列出食品工业中正在利用或将来很有发展前途的酶。
从表7-7可以看出：用在食品加工中的酶的总数相对于已发现的酶的种类与数量来比较还是相当少的。
用得最多的是水解酶，其中主要是碳水化合物的水解酶；其次是蛋白酶和脂肪酶；少量的氧化还原酶类在食品加工中也有应用。
目前，食品加工中只有少数几种异构酶得到应用。
表7-7酶在食品加工中的应用酶食品目的与反应淀粉酶焙烤食品增加酵母发酵过程中的糖含量酿造在发酵过程中使淀粉转化为麦芽糖，除去淀粉造成的混浊各类食品将淀粉转化为糊精、糖，增加吸收水分能力巧克力将淀粉转化成流动状糖果从糖果碎屑中回收糖果汁除去淀粉以增加起泡性果冻除去淀粉，增加光泽果胶作为苹果皮制备果胶时的辅剂糖浆和糖将淀粉转化为低分子量的糊精(玉米糖浆)蔬菜在豌豆软化过程中将淀粉水解转化酶人造蜂蜜将蔗糖转化为葡萄糖和果糖糖果生产转化糖供制糖果点心用葡聚糖-蔗糖酶糖浆使糖浆增稠冰琪淋使葡聚糖果增加，起增稠剂作用乳糖酶冰琪淋阻止乳糖结晶引起的颗粒和砂粒结构饲料使乳糖转化成半乳糖和葡萄糖牛奶除去牛乳中的乳糖以稳定冰冻牛乳中的蛋白质纤维素酶酿造水解细胞壁中复杂的碳水化合物咖啡咖啡豆干燥过程中将纤维素水解水果除去梨中的粒状物，加速杏及番茄的去皮半纤维素咖啡降低浓缩咖啡的黏度果胶酶(可利用方面)巧克力-可可增加可可豆发酵时的水解活动咖啡增加可可豆发酵时明胶状种衣的水解果汁增加压汁的产量，防止絮结，改善浓缩过程水果软化橄榄增加油的提取酒类澄清果胶酶(不利方面)橘汁破坏和分离果汁中的果胶物质面粉若酶活性太高会影响空隙的体积和质地脂肪酶(可利用方面)干酪加速熟化、成熟及增加风味油脂使脂肪转化成甘油和脂肪酸牛乳使牛奶巧克力具特殊风味脂肪酶(不利方面)谷物食品使黑麦蛋糕过分褐变牛乳及乳制品水解性酸败油类水解性酸败磷酸酯酶婴儿食品增加有效性磷酸盐啤酒发酵使磷酸化合物水解牛奶检查巴氏消毒的效果核糖核酸酶风味增加剂增加5'-核苷酸与核苷过氧化物酶(可利用方面)蔬菜检查热烫葡萄糖的测定与葡萄糖氧化酶综合利用测定葡萄糖过氧化物酶(不利方面)蔬菜产生异味水果加强褐变反应葡萄糖氧化酶各种食品除去食品中的氧气或葡萄糖，常与过氧化氢酶结合使用脂氧合酶面包改良面包质地、风味并进行漂白双乙醛还原酶啤酒降低啤酒中双乙醛的浓度过氧化氢酶牛乳在巴氏消毒中破坏H2O2多酚氧化酶(可利用方面)茶叶、咖啡、烟草使其在熟化、成熟和发酵过程中产生褐变多酚氧化酶(不利方面)水果、蔬菜产生褐变、异味及破坏维生素C利用酶还能控制食品原料的贮藏性品质。
脂肪酶的分离纯化
贺州学院课程考核试卷（论文）（2013—2014学年第 1 学期）课程名称：酶工程开课单位：化生学院考核年级、专业：11生物工程任课教师：何彩梅论文题目：脂肪酶的分离纯化脂肪酶的分离纯化摘要：采用简单的两步法—离子交换层析和疏水层析法，对Candida sp. 99−125 脂肪酶进行了纯化，比活提高了10.0倍，达到27200 U/mg，回收率为35.5%. SDS−PAGE 电泳分析显示该酶的分子量约为38 kDa. 酶学性质研究表明，该酶最适反应温度为40℃，最适反应pH 值为8.5，在室温下具有良好的稳定性. 钙离子和Tween80 能够促进提高脂肪酶的活性，而铁离子、铜离子和SDS 对其有明显的抑制作用.一．前言脂肪酶(Lipase, EC3.1.1.3)是一类重要的酯键水解酶. 与动植物脂肪酶相比，微生物脂肪酶的制备周期短，作用pH 和作用温度范围广，底物专一性强，便于进行工业生产和制备高纯度制剂[1].在众多脂肪酶中，假丝酵母系(Candida sp.)脂肪酶的用途最为广泛，特别是用于合成短碳链酯类化合物如香料、生物柴油等物质[2]和手性化合物的拆分反应[3].Candida sp. 99-125 是本实验室保存的一类菌种，目前已应用于生物柴油[4]、维生素A 酯[5]、棕榈酸异辛酯[6]等物质的催化合成研究. 然而该菌株生产的脂肪酶中含有大量的杂质，不仅影响脂肪酶的酶活水平，而且对酶促催化反应带来许多不利因素. 为此，本研究采用简单的两步法—离子交换层析和疏水层析法分离纯化Candida sp. 99-125 脂肪酶，并对纯化后酶的性质进行了研究.2 材料与方法2.1 试剂与仪器粗酶粉，产酶菌株为Candida sp. 99−125，实验室自制；聚丙烯酰胺；液相色谱仪；SDS (Sodium Dodecyl Sulfate)电泳仪；DEAE Sepharose FF 层析柱和PhenylSepharose FF (Low sub)层析柱.2.2 实验方法2.2.1 粗酶液的制备取2 g 粗酶粉溶于20 mL Tris-HCl (20 mmol/L, pH=7.5)缓冲液，待搅拌均匀离心，取上清液为上柱用的粗酶液. 粗酶液中蛋白的比活为2710 U/mg.2.2.2 离子交换层析法纯化脂肪酶以20 mmol/L Tris-HCl 缓冲液(pH=7.5)平衡离子交换层析柱，上样4 mL 粗酶液. 先以Tris-HCl 缓冲液冲洗掉未被离子交换层析柱结合的蛋白，再用0~0.4 mol/L的NaCl 溶液进行浓度梯度洗脱，洗脱体积为15 倍柱体积，最后以1 mol/L NaCl 溶液彻底洗脱结合蛋白. 分步收集洗脱液进行分析，合并酶活高的组分.2.2.3 疏水层析法纯化脂肪酶向上节得到的高活性脂肪酶样品溶液中加入固体硫酸铵至0.8 mol/L，将该溶液注入经0.8 mol/L 硫酸铵(AS)缓冲液(pH=7.0)平衡的疏水层析柱中. 先用0.8mol/L 硫酸铵缓冲液冲洗掉未被结合的蛋白，再用0.8~0.0 mol/L 的硫酸铵缓冲液进行浓度梯度洗脱，洗脱体积为10 倍柱体积，最后以20 mmol/L Tris-HCl (pH=7.5)缓冲液继续冲洗至彻底洗脱结合蛋白. 分步收集洗脱液进行分析.2.2.4 脂肪酶活力的测定脂肪酶活力测定采用橄榄油乳化液水解滴定法[7].酶活定义：脂肪酶在40℃, pH 为8.0 的条件下水解橄榄油乳化液产生1 μmol/min 脂肪酸所消耗的酶量，即为1个脂肪酶活力单位(记为1 U).2.2.5 蛋白质浓度的测定蛋白质浓度的测定采用Bradford 检测法[8]. 标准蛋白质为1 mg/mL 牛血清蛋白(BSA).2.2.6 SDS−聚丙烯酰胺凝胶电泳合并2.2.3 节得到的高活性脂肪酶样品溶液，加入2 倍SDS−PAGE 上样缓冲液，经沸水浴加热3∼5 min，得到电泳样品. 电泳采用浓度为12%的分离胶，控制电压在150 V. 电泳结束后进行考马斯亮蓝染色.3 结果与讨论3.1 脂肪酶的纯化3.1.1 离子交换层析采用DEAE Sepharose FF (1 mL)作为离子交换层析柱，紫外检测器的检测波长为280 nm，流动相流速为0.8 mL/min，进样量为4 mL.对上样后未被DEAE 柱结合的蛋白洗脱液进行酶活测定，结果表明，洗脱液中不存在酶活性物质. 然后用NaCl 溶液梯度洗脱，结果如图1 所示.图1 层析柱DEAE 分离纯化脂肪酶图1 显示有2 个蛋白吸收峰(A, B)，A 峰的峰形与酶活值构成的峰吻合，说明A 峰为纯化得到的目标脂肪酶蛋白峰，B 峰为杂蛋白峰. 活性测定表明，A 峰的比活为16600 U/mg，纯化倍数为6.1 倍，酶收率为55.7%.但2 峰之间有牵连现象，无法实现完全分离，说明DEAE柱对Candida sp.脂肪酶的分离效果一般.3.1.2 疏水层析采用Phenyl Sepharose FF (1mL)作为疏水层析柱.流动相流速为0.8 mL/min，进样量为4 mL.对上样后未被Phenyl 柱结合的蛋白洗脱液进行酶活测定，表明没有酶活性物质被洗脱出来. 用硫酸铵溶液梯度洗脱酶液的实验结果见图2.图2 表明，以梯度为0.8~0.0 mol/L 的硫酸铵溶液洗脱时，脂肪酶蛋白并没有被洗脱下来，说明脂肪酶蛋白的疏水性比较强，与Phenyl 柱结合牢固；而以20mmol/L Tris-HCl 缓冲液洗脱时，洗脱液则表现出较高的脂肪酶活性. 脂肪酶经Phenyl Sepharose FF 层析柱进一步纯化后，收率为63.7%，纯化倍数为1.6 倍.图2 层析柱Phenyl 分离纯化脂肪酶综上所述，Candida sp. 99-125 脂肪酶在经过DEAE离子交换层析和Phenyl 疏水层析两步纯化后，其比活为27200 U/mg，比粗酶提高了10.0 倍，产品收率为35.5%.3.2 脂肪酶的性质3.2.1 脂肪酶的最适反应温度分别测定纯化后的脂肪酶溶液样品在不同温度下的酶活性，结果见图4，表明该脂肪酶的最适反应温度为40℃.3.2.2 脂肪酶的最适反应pH 值在37℃下，分别测定纯化后的脂肪酶溶液样品在不同pH下的酶活性，结果见图5，表明该脂肪酶的最适反应pH 值为8.5.3.2.3 脂肪酶的温度稳定性将纯化后的酶液在不同温度下放置1 h 后测定酶活性，结果见图6. 该脂肪酶在高于35℃的条件下容易失活，但在室温(20∼30℃)下放置时具有较好的稳定性. 将酶在室温(20℃)下放置2d，其酶活收率在95%以上.3.2.4 金属离子对脂肪酶活性的影响向纯化后的脂肪酶溶液中分别加入5 mmol/L 的MgSO4, CuSO4, FeSO4, CaCl2 溶液和2.5 mmol/L 的K2SO4 溶液，在30℃下放置30 min，以不加离子的酶液为对照，分别测定其酶活.图7 表明，Fe2+和Cu2+对此酶有明显的抑制作用；而Ca2+的活化效果最好，可使酶活提高30%. 这说明适量的Ca2+能够促进脂肪酶活性的提高，对酶分子的最佳活力构象起稳定作用. 因此，可选择CaCl2 作为活化剂以提高酶活性.3.2.5 表面活性剂和酶抑制剂对脂肪酶活性的影响向纯化后的脂肪酶溶液中分别加入1 mmol/L 的EDTA, β-Mercaptoethanol, Dithiothreitol (DTT)和SDS,以及0.1%的Triton-X100, Tween80, Span60 和Span85，在30℃下放置30 min 后测定酶活，以不加表面活性剂或抑制剂的酶液为对照，结果见图8. 可见加入0.1%的Tween80 可略微提高该脂肪酶的活性，而1 mmol/L 的SDS 的引入对酶有抑制作用，EDTA 对酶活性的影响不大，说明该酶不是金属结合酶. 其他表面活性剂和抑制剂对酶活性的影响不大.3.3 假丝酵母系脂肪酶性质的比较Candida antarctica 脂肪酶B 的催化活性强，比活约为9 U/mg (Fluka 公司商品酶，62288 lipase B, Candidaantarctica，recombinant from Aspergillus oryzae)，温度稳定性好，立体选择性高[9]，特别是商品固定化产品Novozyme 435 在60∼80℃下仍保持较高的催化活性[10].Candida rugosa 脂肪酶包含5 个同工酶[11]，不同的同工酶对不同碳链脂肪酸的选择性差别较大，纯化的LipA 比活为750 U/mg[12]，最适反应温度在35∼40℃，最适反应pH 值为7∼8[11].Candida lipolytica 脂肪酶报道较多，姜延程等[13]对该酶采用DEAE−Cellulose DE-52 和DEAE−SephadexA-50 离子交换层析等步骤纯化，比活提高27.4 倍，达到169 U/mg，收率11%；徐岩等[1]采用盐析和透析的方法将比活提高2.69 倍，收率45%；张金红等[14]采用疏水层析法对其进行分离纯化，比活提高了10 倍以上. 但该酶的温度稳定性差，在30℃下存放24 h，酶活损失50%以上[13].4. 结论通过Candida sp. 99-125 脂肪酶的分离纯化及其酶学性质研究，得到如下结论：采用DEAE Sepharose FF 离子交换层析和PhenylSepharose FF (Low sub)疏水层析两步进行纯化，使Candida sp. 99-125 脂肪酶的比活显著提高，达到27200U/mg，为粗酶的10.0 倍，收率为35.5%. 经分析该酶的分子量约为38 kDa.(2)Candida sp. 99−125 脂肪酶纯化后的最适反应温度为40℃，最适反应pH 为8.5. 该脂肪酶在室温(20℃)条件下具有较好的稳定性，放置2 d，其酶活保留达95%以上. Ca2+的活化效果最好，可使酶活提高30%，Tween80 可略微提高该脂肪酶的活性，而Fe2+, Cu2+和SDS 对其有明显的抑制作用.参考文献：[1] 徐岩, 李建波, 王栋. 解脂假丝酵母脂肪酶的纯化及性质研究 [J].无锡轻工大学学报, 2001, 20(3): 257−260.[2] Bourg-Garros S, Razafindramboa N, Pavia A A. Large-scalePreparation of 3-Hexen-1-yl Acetate Using Candida antarctica Immobilized Lipase in Hexane [J]. Biotechnol. Bioeng., 1998, 59(4):498−500.[3] Maria S C, Jose V S G. Lipase-catalyzed Synthesis of Chiral Amides:A Systematic Study of the Variables that Control the Synthesis [J].Tetrahedron, 1998, 54: 2877−2892.[4] Deng L, Nie K L, Wang F, et al. Studies on Production of Biodiesel byEsterification of Fatty Acids by a Lipase Preparation from Candida sp.99-125 [J]. Chin. J. Chem. Eng., 2005, 13(4): 529−534.[5] Yin C H, Liu T, Tan T W. Synthesis of Vitamin A Esters byImmobilized Candida sp. Lipase in Organic Media [J]. Chin. J. 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脂肪酶的用途
脂肪酶是一种广泛存在于生物体内的酶类，主要作用是催化脂肪水解反应。
脂肪酶的用途非常广泛，从食品加工、制药业到环境工程、生物能源等领域均有重要应用价值。
以下将详细介绍脂肪酶的主要应用。
一、食品加工
1. 奶制品：脂肪酶可以用于乳制品加工中的乳脂肪酶解，可以提高奶脂酸值，促进乳脂丰满，改善乳品质地和口感。
2. 油脂加工：脂肪酶在油脂加工中被广泛应用，例如在油脂水解反应中，可以将植物油脂水解为游离脂肪酸和甘油，用于生产酸式脂肪酸盐油和混合脂肪酸盐油；同时，脂肪酶还可以用于改善油脂的质地和口感。
3. 面粉加工：脂肪酶可以用于改善面粉质地，促进面粉的发酵和加工过程。
二、制药业
1. 药物合成：脂肪酶可以用于有机合成中，例如在合成酯类药物时可以作为催化剂，提高反应速率和产率。
2. 药物释放：脂肪酶可以用于缓控释药系统中，例如将药物与脂肪酶结合，通过脂肪酶的作用使药物在特定部位释放，实现药物的定向释放和控制释放。
三、环境工程
1. 污水处理：脂肪酶在污水处理中起到重要作用，可以用于去除污水中的油脂和脂肪类物质，提高污水的处理效果。
2. 生活垃圾处理：脂肪酶可以用于生活垃圾的生物降解过程中，通过降解脂肪类物质，减少垃圾的体积和对环境的污染。
四、生物能源
1. 生物柴油生产：脂肪酶被广泛应用于生物柴油的生产过程中，可以催化植物油脂的酯化反应，将植物油脂转化为生物柴油。
2. 生物氢产生：脂肪酶在生物氢生产中可以作为催化剂，促进底物的水解反应，提高氢气产量。
以上只是脂肪酶的一些主要应用领域，实际上脂肪酶在生物化工、医学、农业等领域也有很多其他的应用价值，例如药物代谢研究、动物饲料添加剂、制浆造纸工业等。
鉴于脂肪酶的广泛应用前景，未来还将有更多新的应用领域不断发现和拓展。