分子标记技术
ssr标记原理
ssr标记原理
SSR标记，即简单重复序列标记，是一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术。
它利用了DNA序列中的简单重复序列，这些重复序列通常由1-6个碱基组成，形成长串重复。
由于这些重复序列在不同个体间的数量存在差异，因此能揭示比其他标记技术更高的多态性。
SSR标记的基本原理是，根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段。
由于核心序列串联重复数目不同，能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物。
将这些产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。
SSR 标记具有一些优点，如一般检测到的是一个单一的多等位基因位点、微卫星呈共显性遗传，可鉴别杂合子和纯合子、所需DNA量少等。
在采用SSR技术分析微卫星DNA多态性时，必须知道重复序列两端的DNA序列的信息。
ssr分子标记原理
ssr分子标记原理SSR分子标记原理引言：SSR分子标记（SSR molecular tagging）是一种用于分析和鉴定生物体内特定分子的技术。
它基于分子生物学和生物化学的原理，通过特定的标记物，可以在细胞、组织或体液中准确地检测和定位目标分子。
本文将介绍SSR分子标记的原理及其在科研和医学领域的应用。
一、SSR分子标记的原理SSR分子标记是一种基于DNA序列多态性的分子标记技术。
它利用了DNA序列中的简单重复序列（simple sequence repeat, SSR），即由1-6个碱基重复组成的核酸序列。
SSR序列在基因组中广泛存在，具有高度变异性和遗传稳定性，因此可以作为DNA分子标记的候选序列。
SSR分子标记的原理可以简单概括为以下几个步骤：1. DNA提取：从样品（如细胞、组织或体液）中提取总DNA。
2. SSR标记物设计：根据目标分子的序列信息，设计特异性引物，引物的两端分别包含互补的SSR序列。
3. PCR扩增：利用PCR技术，使用设计好的引物对DNA进行扩增，扩增产物中包含了目标分子的序列和SSR序列。
4. 电泳分析：将PCR扩增产物进行电泳分析，根据SSR序列的长度变异性，可以将不同样品中的目标分子进行定性和定量分析。
二、SSR分子标记的应用SSR分子标记技术在科研和医学领域具有广泛的应用价值，以下是几个典型的应用案例：1. 遗传多样性研究：SSR分子标记可以用于研究不同物种或不同个体间的遗传多样性。
通过对多个基因座进行SSR分子标记，可以获得物种或个体的遗传背景信息，进而推断种群结构、基因流动和进化关系等。
2. 基因定位和图谱构建：SSR分子标记可以用于构建遗传图谱，帮助研究人员定位和克隆感兴趣的基因。
通过SSR标记物在遗传图谱上的位置，可以确定目标基因的大致区域，为后续的克隆工作提供有力的指导。
3. 疾病诊断和预后评估：SSR分子标记在医学诊断中的应用也日益广泛。
通过对特定基因的SSR序列进行分子标记，可以检测和鉴定与疾病相关的突变或多态性。
分子标记技术的类型原理及应用
分子标记1.分子标记技术及其定义1974年,Grozdicker等人在鉴定温度敏感表型的腺病毒DNA突变体时, 利用限制性内切酶酶解后得到的DNA片段的差异, 首创了DNA分子标记。
所谓分子标记是根据基因组DNA存在丰富的多态性而发展起来的可直接反映生物个体在DNA水平上的差异的一类新型的遗传标记,它是继形态学标记、细胞学标记、生化标记之后最为可靠的遗传标记技术。
广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质分子。
通常所说的分子标记是指以DNA多态性为基础的遗传标记。
分子标记技术本质上都是以检测生物个体在基因或基因型上所产生的变异来反映基因组之间差异。
2.分子标记技术的类型分子标记从它诞生之日起, 就引起了生物科学家极大的兴趣,在经历了短短几十年的迅猛发展后, 分子标记技术日趋成熟, 现已出现的分子标记技术有几十种, 部分分子标记技术所属类型如下。
2.1 建立在Southern杂交基础上的分子标记技术(1) RFLP ( Rest rict ion Fragment Length Polymorphism)限制性内切酶片段长度多态性标记；(2) CISH ( Chromosome In Situ Hybridization) 染色体原位杂交。
2.2 以重复序列为基础的分子标记技术(1) ( Satellite DNA ) 卫星DNA；(2) ( Minisatellite DNA ) 小卫星DNA;(3) SSR( Simple Sequence Repeat ) 简单序列重复, 即微卫星DNA。
2.3 以PCR为基础的分子标记技术(1) RAPD ( Randomly Amplif ied Polymorphic DNA ) 随机扩增多态性DNA；(2) AFLP( Amplif ied Fragment Length Polymorphism) 扩增片段长度多态性；(3) SSCP( Single Strand Conformation Polymorphism) 单链构象多态性；(4) cDNA-AFLP( cDNA- AmplifiedFragment Length Polymorphism) cDNA -扩增片段长度多态性；(5) TRAP( Target Region Amplified Polymorphism) 靶位区域扩增多态性；(6) SCAR ( Sequence Char acterized Amplified Region) 序列特征化扩增区域；(7) SRAP ( Sequencerelated Amplified Polymorphism) 相关序列扩增多态性。
常用分子标记技术原理及应用
单链制备
通过加热或化学方法 将双链DNA变性为 单链。
凝胶电泳
将单链DNA在聚丙 烯酰胺凝胶上进行电 泳，并观察迁移率变 化。
结果分析
通过比较正常和突变 DNA的迁移率，确 定是否存在基因突变。
应用实例
遗传病诊断
SSCP技术可用于检测与遗传病相关的 基因突变，如囊性纤维化、镰状细胞 贫血等。
肿瘤研究
特点
高分辨率、高灵敏度、可重复性和可 靠性，能够检测出微小的基因组差异 ，广泛应用于遗传育种、生物多样性 保护、人类医学等领域。
分子标记技术的应用领域
遗传育种
通过分子标记技术对动植物进行遗传资源鉴定、品种纯度 鉴定、遗传连锁分析和基因定位等，提高育种效率和品质。
生物多样性保护
利用分子标记技术对物种进行遗传结构和亲缘关系分析， 评估物种的遗传多样性和濒危程度，为保护生物多样性提 供科学依据。
人类医学
分子标记技术在人类医学中用于疾病诊断、药物研发、个 体化医疗等方面，有助于提高疾病的预防、诊断和治疗水 平。
常用分子标记技术简介
RFLP（限制性片段长度多态性）
SSR（简单序列重复）
利用限制性内切酶对DNA进行切割，产生 不同长度的片段，通过电泳和染色检测多 态性。
利用串联重复的DNA序列多态性进行标记 ，通过PCR扩增和电泳检测多态性。
分子标记辅助育种
利用AFLP技术标记控制重要性状 的基因，辅助育种者快速筛选具 有优良性状的个体。
植物分子生态学研
究
利用AFLP技术分析植物种群遗传 结构、物种演化和生态适应性等 方面的研究。
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SSR技术
原理
简单序列重复标记（SSR）是一种基于PCR的分子标记技 术，利用微卫星序列的重复单元进行扩增，通过检测等位 基因的长度多态性来识别基因组中的变异。
分子标记技术原理方法及应用
分子标记技术原理方法及应用分子标记技术是一种用于检测和定位特定分子的方法。
其原理是通过将一种特殊的化学物质（标记物）与目标分子结合，然后利用标记物的性质来对目标分子进行分析和检测。
分子标记技术被广泛应用于生物医学研究、生物学检测和药物研发等领域。
常用的分子标记技术有荧光标记、酶标记和放射性标记等。
荧光标记是一种将目标分子与荧光染料结合的技术。
荧光标记的原理是通过荧光染料的特性，使得目标分子在荧光显微镜下显示出特定的荧光信号，从而对其进行定位和分析。
荧光标记可以在细胞、组织和体内进行，具有灵敏度高、分辨率高和实时监测的优点。
常见的荧光标记方法有间接免疫荧光标记、原位杂交荧光标记和荧光蛋白标记等。
荧光标记技术广泛应用于细胞定位、蛋白质相互作用研究、细胞分析和分子诊断等领域。
酶标记是一种利用酶与底物反应的方法进行分子标记。
通常，酶标记将目标分子与特定的酶（如辣根过氧化酶、碱性磷酸酶等）结合，然后通过对底物的催化作用产生显色或荧光信号。
酶标记在生物学检测中得到广泛应用，特别是在酶联免疫吸附试验（ELISA）中。
酶标记具有灵敏度高、稳定性好的特点，可以用于检测蛋白质、核酸和小分子等生物分子。
放射性标记是利用放射性同位素与目标分子结合的技术。
放射性同位素具有高灵敏度和长时间半衰期的特点，可以用于追踪和测定目标分子的存在和分布。
放射性标记技术广泛应用于细胞和分子影像学、放射性定位和药物代谢等领域。
分子标记技术在生物医学研究、生物学检测和药物研发等领域有着广泛的应用。
在生物医学研究中，分子标记技术可以用于研究细胞和分子的结构和功能，探索疾病的发生机制和药物的作用机理。
在生物学检测中，分子标记技术可以用于检测和定位特定的生物分子，如蛋白质、核酸和小分子等，从而实现对生物过程的观察和分析。
在药物研发中，分子标记技术可以用于筛选和评价药物的活性和毒性，以及研究药物的代谢和药理学特性。
总之，分子标记技术的发展和应用为生物医学研究和生物学检测提供了强大的工具，有助于我们深入理解生命的奥秘和开发有效的治疗手段。
SSR分子标记技术简述
SSR标记
SSR 标记是当今流行的分子标记技术之 一。尽管 SSR 分布于基 因组的不同位置，但其两端多是保守 的单拷贝序列，因此可以根 据两端的序列设计一对特异引 物，通过 PCR 技术将其扩增出来， 利用电泳分析技术获得长 度多态性， 即 SSR 标记。
SSR分子标记的优势
SSR在真核生物基因组中分布广
SSR标记的基本原理：根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应 扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩 增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决 定基因型并计算等位基因频率。
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多态性丰富
其产物进行测序胶电泳分离时单碱基分辨率 高、遗传信息量大
SSR通常为显性标记，呈孟德尔式遗传
具有很好的稳定性和多态性 DNA用量少 技术要求低，成本低廉 PCR扩增的可重复性高
SSR标记的劣势
开发和合成新的SSR引物投入高、难度大 现有的SSR标记数量有限，不能标记所有的功 能基因 SSR多态性的检测和应用很大程度上依赖PCR 扩增的效果 SSR座位突变率高，对变异反应非常敏感等等
SSR标记的原理Байду номын сангаас
微卫星中重复单位的数目存在高度变异，这些变异表现为微卫星 数目的整倍性变异或重复单位序列中的序列有可能不完全相同， 因而造成多个位点的多态性。如果能够将这些变异揭示出来，就 能发现不同的SSR在不同的种甚至不同个体间的多态性，基于这 一想法，人们发展起了SSR标记。
由于基因组中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保 守性较强的单一序列，因而可以将微卫星侧翼的DNA片 段克隆、测序，然后根据微卫星的侧翼序列就可以人工 合成引物进行PCR扩增，从而将单个微卫星位点扩增出 来。由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异，个 体的扩增产物在长度上的变化就产生长度的多态性，这 一多态性称为简单序列重复长度多态性(SSLP)，每一扩 增位点就代表了这一位点的一对等位基因。由于SSR重 复数目变化很大，所以SSR标记能揭示比RFLP高得多 的多态性，这就是SSR标记的原理
利用分子标记辅助育种
利用分子标记辅助育种一、分子标记辅助育种概述分子标记辅助育种是现代生物技术与传统育种方法相结合的一种高效育种技术。
它利用分子标记与目标基因紧密连锁的特性，在作物育种过程中对目标基因进行追踪和选择，从而显著提高育种效率和准确性。
随着分子生物学技术的不断发展，分子标记辅助育种已成为作物遗传改良的重要手段，在农业生产中发挥着越来越重要的作用。
二、分子标记辅助育种的关键技术1. 分子标记类型- SSR标记（简单重复序列标记）：SSR标记具有多态性高、共显性遗传、重复性好等优点。
其核心是由1 - 6个核苷酸组成的简单重复序列，广泛分布于基因组中。
通过设计特异性引物对SSR区域进行扩增，根据扩增产物的长度多态性来检测个体间的差异。
例如，在水稻育种中，利用SSR 标记可以有效区分不同品种的水稻，为品种鉴定和纯度检测提供了可靠的方法。
- SNP标记（单核苷酸多态性标记）：SNP标记是基因组中单个核苷酸的变异，是最常见的遗传变异类型。
它具有数量多、分布广泛、检测通量高的特点。
SNP标记的检测方法包括基于PCR的方法、芯片技术和新一代测序技术等。
在玉米育种中，SNP标记已被广泛应用于全基因组关联分析（GWAS），用于挖掘与重要农艺性状相关的基因位点，为分子标记辅助选择提供了丰富的标记资源。
- AFLP标记（扩增片段长度多态性标记）：AFLP标记结合了RFLP（限制性片段长度多态性）和PCR技术的优点，具有较高的多态性检测效率。
其原理是通过对基因组DNA进行限制性内切酶酶切，然后连接特定的接头，再进行选择性扩增。
扩增产物通过电泳分离，根据片段长度多态性来分析遗传差异。
在小麦育种中，AFLP标记可用于构建遗传连锁图谱，定位控制小麦抗病性、品质等性状的基因。
2. 目标基因定位与克隆- 连锁分析：连锁分析是通过研究标记与目标基因在染色体上的连锁关系来定位目标基因的方法。
当标记与目标基因紧密连锁时，它们在遗传过程中倾向于一起传递。
分子标记技术PPT课件
EDTA （ didodium ethylenediaminetetraacetate）即乙二胺四乙酸。
•15
电泳 电泳用的凝胶由琼脂糖（agarose）制备，
琼脂糖的浓度通常为0.9-1.0%。 酶切后的DNA样品通过电泳，使DNA片段
分离,并按分子量的大小排列。
•16
杂交膜的制备
DNA 从 凝 胶 转 移 到 特 制 的 杂 交 膜 上 ， 常用Hybond N+（Amersham） 的尼龙膜。
（2）数量极多，遍布整个基因组，可检测座位 几乎无限；
（3）多态性高，自然界存在许多等位变异，无 须人为创造；
（4）表现为中性，不影响目标性状的表达； （5）许多标记表现为共显性的特点，能区别纯 合体和杂合体。
•8
五、常用的分子标记
第一类分子标记 以分子杂交为核心的分子标记技术
一）限制性片段长度多态性标记（Restriction fragment length polymorphism, RFLP）
•28
基本原理
采用随机合成的寡核苷酸（通常10bp）作 PCR反应的引物，对所研究生物基因组DNA进 行PCR扩增，经过30－40个循环，即可得到大 量的DNA片段，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳、 EB染色、紫外下显示RAPD带纹。
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食安0801 02 邓凯近年来，现代生物技术，特别是分子标记技术发及其产品的检验检疫工作中，分子标记技术也得到展迅速，已被广泛应用于生物进化、系统分类、物种了越来越广泛的应用。
本文综述了分子标记技术在多样性、遗传育种、品种鉴定、基因组作图或基因定植物检疫实践中的应用和发展前景。
位、基因定位克隆（map-based cloning）等领域的研1分子标记技术发展概况究。
广义的分子标记（molecular markers）是指可遗传遗传标记（geneticmarkers）的发展经历了4个阶的并可检测的DNA序列或蛋白质标记；狭义的分子段：①形态标记（morphological markers），主要指植标记概念只是指DNA标记。
蛋白质标记包括种子储物学形态特征；②细胞标记（cytological markers），主藏蛋白、同工酶（指由一个以上基因位点编码的酶的要是染色体核型和带型等；③生化标记（biochemical 不同分子形式）及等位酶（指由同一基因位点的不同markers），主要是同工酶和储藏蛋白等生化物质；等位基因编码的酶的不同分子形式）。
在出入境植物④分子标记（molecular markers），即核苷酸。
分子标记是以生物大分子（主要是遗传物质DNA）的多态性为基础的一种遗传标记。
理想的分子基于“3S”技术的数字化烟草农业标记所具有的优点：①多态性高；②遍布整个基因③检测手段简单、迅速；④无基因多效性；⑤能够明确辨别等位基因；⑥实验重复性好；⑦直接以试论林木病虫害防治信息的数DNA的形式表现，不受植物的生长条件和发育阶段的影响，在植物的任何生长阶段都可检测。
第一代分子标记（以Southern杂交技术为核心）对数字农业的认识及其基本构想现代农为限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，缩写20世纪80年代中期发展起来的一种最早的分子标记。
目前有2种方法可进行DNA的RFLP 分析：一是根据其原理用RFLP的探针进行特殊基因的DNA克隆、cDNA克隆、随机的基因组DNA克隆和合成的低聚核苷酸克隆；二是对那些分子量较小的DNA样本（如线粒体DNA、核糖体DNA等），可在酶切后对其产物直接电泳，将不同大小的限制性酶切DNA 片段分离，从而得到该DNA的RFLP图谱。
RFLP标记呈孟德尔式遗传，大多数RFLP 的等位基因为共显性，在任何分离群体中能区分纯合基因型与杂合基因型。
但该技术在操作过程中涉及了DNA的提取、酶切、电泳分离、探针的制备和Southern杂交等一系列分子生物学技术，步骤繁杂，工作量大，且分析中需要的DNA量大，因此在很大程度上限制了RFLP技术的应用。
第2代分子标记（以PCR技术为核心）包括RAPD（Random amplified polymorphic DNA，随机扩增的多态性DNA）、AFLP（amplified fragment length polymorphism，扩增片段长度多态性）、SSR（Simple sequence repeat，简单重复序列）、SRAP（Sequence-Related Amplified Polymorphism，相关序列扩增多态性）、TRAP（Target Region Amplification Polymorphism，目标区域扩增多态性）等分子标记。
利用PCR技术的忠实性、效率和特异性可以极大地简化样品的收集与处理工作，同时也降低了对样品数量和质量的要求，通常用几十纳克（ng）以内的DNA样品就可满足分析的需要。
这对于分子标记辅助育种、QTL定位等研究带来了很大的便利。
此外，PCR技术还可以锁定特定的目标DNA区域进行扩增，有利于后续工作的开展（序列测定、功能研究等）。
第3代分子标记以SNP（Single-Nucleotide Polymorphism，单核苷酸多态性）为主。
同一位点的不同等位基因之间常只有1个或几个核苷酸的差异。
因此，从分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测具有重要意义。
随着计算机和DNA芯片技术引入分子生物学领域，研究者可同时对成千上万个克隆测序，用计算机分析数据和显示最终结果。
SNP作为一种新的遗传标记，几乎完全建立在DNA芯片技术的基础上。
SNP是同一物种不同个体间染色体上遗传密码单个碱基的变化，主要表现为基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列多态性，包括单碱基的转换、颠倒以及单碱基的插入或缺失等。
分子标记作为新的遗传标记，具有比形态标记、细胞标记和同工酶标记显著的优点。
但是，目前发现的任何1种分子标记均不能满足作为理想的遗传标记的所有要求。
上述列举的几种分子标记各有优、缺点，应用中应根据研究的需要及实验条件选择相应的标记技术。
2在植物及其产品检验检疫中的应用分子标记不但高效、简便、稳定、精确，而且省时，不受生物生长期的限制，所需样品少，对检疫对象的虫态和生理状态没有特定的要求，特别适用于要求快速检出结果的进出境植物检验检疫。
因此，分子标记在检验检疫实践中被广泛应用。
2.1分子标记技术在植物病害检疫中的应用采用AFLP、RFLP、RT-PCR、PCR等分子生物学技术，分别以功能基因、核糖体ITS等区域为靶标，对大豆疫霉病菌、小麦矮腥黑穗病菌、水稻细菌性条斑病菌、瓜类果斑病菌和亚洲梨火疫病菌等10多种植物检疫性疫病进行特异性分子靶标的研究，并开发出相应PCR检测方法。
小麦印度腥黑穗病（Tilletia indica）是一种世界性的检疫性有害生物，其冬孢子的形态特征与黑麦草腥黑粉菌（Tilletia walkeri）、水稻腥黑粉菌（Tilletia horrida）及狼尾草腥黑粉菌（Tilletia. bariclayana）的冬孢子十分相似。
程颖慧[1]等根据线粒体DNA的序列、ITS区DNA片段设计特异性引物，能有效地鉴别小麦印度腥黑穗病与黑麦草腥黑粉菌以及其他相似种或相关种，检测的灵敏度为1个冬孢子，整个检测过程缩短至1d。
大豆疫霉菌的生理小种分化复杂。
王化波等（2003）采用RAPD技术，利用13个引物对中国大豆疫霉菌的75个分离物和11个美国分离物进行了PCR扩增。
RAPD指纹聚类分析结果表明，在中国的大豆疫霉菌群体内，多数分离物之间遗传相似性较低，在DNA水平上存在显著的遗传变异，具有较丰富的遗传多样性。
Whisson等[2]利用RFLPs技术分析了澳大利亚和美国大豆疫霉菌的遗传关系，证明美国分离物较澳大利亚分离物具有更复杂的遗传结构，并推断澳大利亚的大豆疫霉菌可能是从美国传入的。
亚洲梨枯死病，又叫梨枝条黑枯病、亚洲梨火疫病，是一种严重为害亚洲梨的毁灭性细菌病害，其病原为Erwinia pyrifoliae。
Rhim等[3]利用16S～23 SrDNA的ITS序列对Erwinia pyrifoliae和E. amylovora进行研究，发现通过ITS引物可以区分这两个菌种。
McGhee等（2002）也证实E. amylovora和 E. pyrifoliae密切相关，但属于两个不同的种。
在植物病毒检疫中目前应用较多的分子标记技术是RT-PCR技术。
RT-PCR技术被应用于李坏死环斑病毒、菜豆花叶病毒、番茄不孕病毒（TAv）、烟草环斑病毒（TRsv）、番茄环斑病毒（ToRsv）的检测。
结果表明该方法灵敏度和准确度都很高，利用分子检测技术可以快速、准确的鉴定植物病毒病害。
2.2在植物害虫检疫中的应用梁广勤等（1994）利用染色体和同工酶技术鉴定寡鬃实蝇幼虫，节省了从幼虫饲养到成虫的时间与鉴定成本，有利于加快产品的通关速度。
朱振华等（2005）利用mtDNACytb基因对果实蝇属的橘小实蝇（Bactrocera dorsalis）、瓜实蝇（Bactroceracucurbitae）、南瓜实蝇（Bactrocera tau）、番石榴实蝇（Bactrocera correcta）、具条实（Bactrocera scutellata）、黑漆实蝇（Bactrocera scutellaris）等6种实蝇进行分析，结果表明mtDNACyt 基因可以作为这6种实蝇种类鉴别的分子标记。
张亮等[4]采用RAPD技术有效区分了果实蝇属（Bactrocera）的南瓜实蝇、黑漆实蝇、具条实蝇、瓜实蝇、橘小实蝇和番石榴实蝇等6种实蝇。
Kethidi等（2003）通过分析RAPD扩增产物中的序列特异性扩增片段，设计特异性引物对从亚洲长角天牛所有发育阶段的翅、足、触角和卵、幼虫、蛹、成虫组织的DNA进行扩增。
结果表明，RAPD标记可被用于亚洲长角天牛的鉴定。
安榆林等（1998）应用RAPD技术分析松墨天牛、云杉大墨天牛和云杉小墨天牛的DNA多态性，证实该技术可以用于区分天牛近缘种，尤其为天牛幼虫的鉴定提供了1种新方法。
Burrows[5]以RFLP技术和DNA探针进行线虫种的鉴定，清楚地区别了马铃薯金线虫（Globoderarostochiensis）与马铃薯白线虫（Globodera pallida）。
Harris等应用PCR技术对单个根结线虫幼虫的mtDNA进行了鉴定。
Power等用PCR技术成功区分了4种常见根结线虫和奇特伍德根结线虫。
喻盛甫等（1998）利用RAPD技术对根结线虫进行过种类鉴定。
Webster等（1990）用mtDNA克隆得到pCes70基因，作为松材线虫和拟松材线虫的检测的探针。
rDNA的ITS区序列分析被应用于松材线虫与拟松材线虫的区别，这些分子标记技术克服了形态学上难以鉴别的困难，且快速准确。
2.3在有害杂草检验检疫中的应用DNA分子标记如核糖体DNA的ITS区的序列分析及叶绿体rbcL的基因序列分析等已被广泛应用于野生植物的分类与鉴定。
但在杂草检疫对象鉴定中的应用报道还不多见。
当今生物技术的发展日新月异，新的技术层出不穷，分子标记技术以其准确、稳定、高效等优点已被广泛应用于医学、农林、水产、生物工程等领域。
分子生物工作者应该跟踪国内、外最新发展动态，将新技术应用于植物检验检疫工作中。
但目前分子检测技术在检验检疫工作中还未得到充分应用。
目前某些植物检疫对象可以通过分子标记技术提高鉴定的准确性和工作效率，比如有害杂草和昆虫，检疫现场检出的往往是草籽和幼虫，传统的方法需要将草籽发芽、幼虫饲养成成虫，才能加以鉴别，花费时间长。
而分子标记技术需要的时间短，准确性高。
因此，将分子标记技术应用在检验检疫工作中可以提高检验检疫的工作质量与工作效率。
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