不规则抗体检测标准操作规程
卡式不规则抗体操作方法
卡式不规则抗体操作方法卡式不规则抗体操作方法主要包括以下几个步骤：抗原包被、孵育体、洗涤、探针标记、显色以及结果解读。
首先，抗原包被是指将待检测抗原包被在固相材料上，可以使用ELISA板、纳米颗粒等材料作为固相基质。
在包被过程中，需要在固相材料上涂覆包被液，将待检测抗原与固相材料充分结合。
接下来是孵育体环节。
将包被好的固相材料与待检测样本共孵育，使抗原与抗体结合。
待检测样本可以是体液样本，如血清或细胞上清等。
抗原与抗体结合的结果可以通过孵育体环节来检测。
然后是洗涤步骤。
洗涤是为了去除没有结合的抗原和抗体，以减少非特异性的背景信号。
洗涤过程中，可以使用缓冲液进行一系列的冲洗，确保只有特异性的抗原与抗体结合在固相材料上。
探针标记是指使用标记物来特异性检测抗原与抗体的结合情况。
可以使用酶联免疫吸附法（ELISA）中的酶标记物，如HRP等，也可以使用放射性同位素、荧光物质等作为标记物。
标记物在将样本与固相结合后，可以通过对标记物进行染色、放射性检测或荧光检测等方式，来获得抗原与抗体结合的信息。
接下来是显色步骤。
显色可以通过使用显色底物，比如ABTS、TMB等底物，来进行信号放大和可视化。
底物与酶标记物的反应会产生着色或荧光效应，从而将结合信息转化为可见的信号。
最后是结果解读。
通过读取显色或荧光信号的强度，可以获得待检测抗原的定量信息。
结果解读可以通过比较待检测样本的信号强度与阴性对照、阳性对照的信号强度来判断抗原是否存在。
通常，将待检测样本的信号强度与阴性对照的信号强度进行比较，如果待检测样本的信号强度高于阴性对照，则表示抗原存在。
总结起来，卡式不规则抗体的操作方法主要包括抗原包被、孵育体、洗涤、探针标记、显色以及结果解读。
通过这些步骤，可以对特定抗原的存在与否进行定性和定量分析。
在实际操作中，需要注意标本的处理、试剂的准备和操作条件的控制，以确保实验结果的准确性和可靠性。
不规则抗体筛选
不规则抗体筛选一、试验原理：利用不规则抗体筛选红细胞试剂对血清进行血型不规则抗体检测。
在任何介质中，只要任何单组或多组筛选红细胞产生凝集或溶血反应，则试验为阳性，表明血清中存在与筛选细胞中抗原相对应的抗体。
若抗筛试验为阳性，建议用谱细胞来检测抗体特异性。
一、注意事项：1. 建议在使用血型卡前重新离心后再应用。
2. 若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡时，不可使用。
3. 撕开凝胶卡的封口膜时，不能用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉污染。
4. 红细胞悬液的浓度为0.5~0.8%，浓度过高或过低会影响检测结果。
5. 血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白，否则会在微柱凝胶中阻止红细胞沉淀，呈现假阳性反应。
6. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，一定要认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
7. 某些药物、疾病可导致正定型结果弱阳性反应或正反定型不相符，应进一步检查以明确原因。
8. 溶血性疾病、巨球蛋白血症、输注大分子血浆扩容剂如右旋糖酐等可能会影响实验结果。
9. 人源血液样本存在潜在的传染性，凝胶卡使用后按医疗生物垃圾废弃物处理。
二、设备及材料试剂：1、LB-3000医用低速离心机2、LB-C02-1免疫微柱孵育器3、加样枪：10μl, 25μl, 50μl 和 1000μl4、广谱抗人球蛋白卡（抗-IgG+C3d）5、不规则抗体筛选红细胞试剂三、操作流程：1、取广谱抗人球蛋白卡（抗-IgG+C3d）一张，按规定检查符合要求后，进行标记（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，受检者姓名或编码）。
2、红细胞悬液配制：不规则抗体筛选红细胞悬液：取不规则抗体筛选红细胞试剂中的I号、II号、III号红细胞，稀释4倍（1份红细胞和3份生理盐水）。
3、加样：①第1,2,3及第6孔加入受检者红细胞悬液50μl。
②第4孔加入A1型反定型试剂红细胞悬液50μl③第5孔加入B型反定型试剂红细胞悬液50μl。
实验四不规则抗体筛选与鉴定、效价测定
2.鉴定 2.鉴定
标管： ⑴标管：11支1-10、自c 加样： ⑵加样：Ps2滴+谱细胞1滴 离心、观察结果： ⑶离心、观察结果： ①直接观察 ②4℃10min观察 ③恢复室温观察，有格局为IgM ④37℃观察有无凝集 ⑤凝聚胺法或抗人球法（上谱细胞），观 察格局可判断有无IgG抗体 测效价： ⑷测效价：若有抗体，测效价
操 作
1.筛选 1.筛选
(聚凝胺法 聚凝胺法) 聚凝胺法 (抗人球法 抗人球法) 抗人球法
⑴标管8支:S1、S2、S3、S1’、S2’、S3’、K、自c 标管8 ⑵加样：受检血清2滴+上述细胞1滴检测 加样 ⑶观察结果:阳性进行不规则抗体鉴定 观察结果: ⑷测抗体效价（室温、4℃10min、恢复室温 测抗体效价 10min、37℃3min ）
注意事项 1.更换滴管， 1.更换滴管，防止干扰 更换滴管 2.防止前带现象， 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 防止前带现象 3.试剂细胞 3.试剂细胞 4.稀释液体积越小， 4.稀释液体积越小，产生误差越大 稀释液体积越小
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
思考题
1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水 聚凝胺、抗人球介质中进行。 聚凝胺、抗人球介质中进行。 2.抗体效价检测的临床应用 2.抗体效价检测的临床应用
目的 掌握抗体效价的测定方法 原理 Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可 见“±”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材 试剂 小试管、记号笔、滴管、离心机 悬浮红细胞、血清、生理盐水
实验步骤 1.标记管号 标记管号：1、2、4、8、16、32…… 标记管号 2.从2号开始各管分别加生理盐水50ul 从 号开始各管分别加生理盐水50ul 3.加血清 加血清：1、2管各加血清 加血清 4.倍比稀释 倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出50ul移入 倍比稀释 第3管，混匀；再从第3管吸出50ul移入第4 管，以此类推，至最后一管，吸出50ul弃去。 5.加悬红 加悬红：每管各加50ul ，混匀。 加悬红 6.3000r／min离心 离心15秒，直接观察结果 观察结果、 离心 观察结果 4℃10min、室温10min、37℃3min观察结果。
不规则抗体筛选
谢谢
Polybrene法
原理： 原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶 液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的 负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞 的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细 胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红 细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发 生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸 橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚 凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而 真正的凝集不消失。(见图).
混匀后置37℃水浴30分钟后，用生理盐水洗 涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水， 然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以3400rpm 离心15秒钟，轻摇，观察结果。
结果意义
筛选红细胞1、2、3 自身红细胞 血清中存在的抗体
+ +
— +
同种抗体
自身抗体，或自身抗 体和同种抗体同时存 在
—
+
自身抗体
抗体筛选检查
一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以 外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如 抗D、抗N、抗M、jk-抗体。 2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意 义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清 （含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示 病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选” 阳性。
2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临 床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、 不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl), 保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天 后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要 考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来 选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情 的延误。
不规则抗体筛查
不规则抗体检查不规则抗体检查也称红细胞抗体检查。
不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体。
ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体。
其多为ＩｇＧ抗体。
主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应。
临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。
红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时；2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。
1. 原理利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应，如果出现凝集表示血清中存在不规则抗体。
2. 试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操作步骤3.1 取试管三支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴。
3.2 各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀。
3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
3.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。
如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
不规则抗体筛查
不规矩抗体检讨不规矩抗体检讨也称红细胞抗体检讨.不规矩抗体是指抗Ａ.抗Ｂ以外的血型抗体.ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规矩抗体.其多为ＩｇＧ抗体.主如果经输血或怀胎等免疫刺激产生,在盐水介质中不克不及凝集而只能致敏响应抗原的红细胞,必须经由过程特别介质才干使致敏红细胞消失凝集反响.临床上平日所称的“同型血”现实上是指ＡＢＯ血型体系和Ｒｈ血型体系雷同,其它红细胞血型体系未必雷同.假如交叉配血不细心,或者只用盐水介质配血,则有可能检讨不出ＡＢＯ血型体系之外的不规矩抗体,而此抗体与响应抗原产生免疫反响,可导致溶血性输血反响的产生.红细胞血型抗体检讨实用于下列情形：1.ABO血型判定发明受检者血清中有不测抗体时;2.供血者血清抗体筛检;3.输血前受者血清抗体检讨;4.输血后溶血反响疑为由同种抗体引起时;5.妊妇血清的抗体检讨;6.新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检讨;7.直接抗球蛋白实验阳性红细胞上抗体的检讨.1. 道理应用筛选细胞（Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ）上消失的多种红细胞抗原与被检血清在凝集胺介质中反响,假如消失凝集暗示血清中消失不规矩抗体. 2. 试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ）2.2 凝集胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操纵步调3.1 取试管三支,标明Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴,加5%筛选细胞（Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ）各1滴.3.2 各加LIM0.7ml,混杂平均后,再各加Polybrene 溶液2滴,并混杂平均.3.3 用BASO专用离心计心情1000G离心力,离心10秒,然后把上清液倒失落,不要沥干,让管底残留约0.1ml液体.3.4 轻轻动摇试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则必须重作.3.5 最后参加Resuspending 2滴,轻轻迁移转变试管混归并同时不雅察成果.假如凝集散开,暗示是由Polybrene引起的非特异性集合,抗体筛检成果为阴性;如凝集不散开,则为红细胞抗原抗体联合的特异性反响,抗体筛检成果为阳性,应进一步作抗体判定.4. 筛选Ⅰ号细胞,筛选Ⅱ号细胞,筛选Ⅲ号细胞.对应的细胞反响格式表一张.红细胞血型抗体筛选细胞反响格式表4. 临床意义固然不规矩抗体筛选阳性率仅为0.37%,但是该项阳性的患者一旦输入具有响应抗原的红细胞,抗原.抗体产生免疫性联合,在补体的介入下,使输入的红细胞产生消融,即产生溶血性输血反响.患者消失发烧.贫血.黄疸和血红蛋白尿,轻微时甚至危及其性命.是以,在输血中要经常小心这种输血反响产生的可能性.当不规矩抗体筛选阳性时,必须进一步作抗体判定,肯定其特异性后,再输入无响应抗原的红细胞,才干达到安然输血之目标.新生儿溶血病(ＨＤＮ)也是因为母亲体内消失着与其胎儿红细胞不合营的ＩｇＧ性质的不规矩抗体,引起的同种自动免疫性疾病.凡是以ＩｇＧ性质消失的不规矩抗体,理论上都可以引起ＨＤＮ,因为ＩｇＧ性质抗体能经由过程胎盘进入胎儿血轮回,损坏胎儿红细胞,激发胎儿水肿.黄疸.贫血和肝脾肿大,甚至并发核黄疸.是以对有输血史或怀胎史的妊妇也应作不规矩抗体筛选,若检测出不规矩抗体,应作出响应的预防和治疗.Ｒｈ血型中Ｄ抗原的抗原性强于Ｅ抗原的抗原性,是以产生抗Ｄ抗体的几率大于抗-Ｅ抗体.抗Ａ1抗体为Ａ亚型中不规矩抗体,它的消失提醒我们在留意ＡＢＯ血型以外的不规矩抗体的同时,也应高度看重ＡＢＯ亚型中的不规矩抗体,因为它也是引起溶血性输血反响的一个身分.抗Ｍ抗体为冷凝集素,很少在37℃有活性,一般在体内不克不及引起溶血反响,但患者处于低温麻醉状况下手术时应留意,因为此类抗体可激活补体.当机体的体温在冷抗体最适反响温度规模内(4～20℃)时,可产生溶血反响.37℃4℃,偶可在37℃查出.抗Ｐ1抗体很少在体内造成溶血,几乎老是ＩｇＭ型抗体,所以不克不及经由过程胎盘,不会造成ＨＤＮ.冷凝集素在配血时可疏忽.自身抗体在自身溶血性贫血时消失较多,一向以来是输血的一大难题,我们仍遵守一般输血原则.综上所述,不规矩抗体是引起溶血性输血反响和新生儿溶血病的重要身分之一, 对输血产生溶血性反响所引起肾衰.逝世亡病例的诊断有临床意义.是以为了包管输血安然,进步输血疗效,削减或杜绝溶血性输血反响的产生,不规矩抗体检讨必须作为输血前检讨的重要项目之一.。
不规则抗体筛查试验
不规则抗体筛查试验（SOP）【产品名称】通用名称：不规则抗体检测试剂（人血红细胞）英文名称：Red Blood Cells Reagent for Irregular Antibody Test【包装规格】每盒有OⅠ、OⅡ、OⅢ红细胞各1瓶，5ml/瓶，浓度4%。
【生产企业】企业名称：长春博迅生物技术有限责任公司【预期用途】有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的红细胞或缩短其寿命，轻则影响治疗效果，重则危及病人生命；对于孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器及智力发育，严重者则会危及新生儿的生命。
对受血者和献血者进行不规则抗体检测，能够发现有临床意义的抗体，从而减少溶血性输血反应。
本品采用凝聚胺方法检测待检血浆（血清）是否存在不规则抗体，只用于临床检测，不用于血源筛查。
【检验原理】本实验原理为血凝试验。
红细胞上含有D、C、E、c、e、Jk a、Jk b、M、N、s、Fy a、Fy b、k、Le a、Le b、P1，该实验用已知抗原的红细胞与待检血浆（血清）孵育，以发现待检血浆（血清）中是否存在不规则抗体。
【主要组成成份】本品由3人份（单人份/瓶）直接抗人球蛋白试验阴性的O型健康成人红细胞组成，红细胞上含有能引起溶血性输血反应的抗原，抗原谱至少包括Rh系统的D、C、E、c、e抗原，Kidd系统的Jk a、Jk b抗原，MNS系统的M、N、s抗原，Kell系统的k抗原，Duffy系统的Fy a、Fy b抗原，Lewis系统的Le a、Le b抗原，P系统的P1抗原。
每套试剂红细胞中至少有2人份红细胞含有D、C、c、e、s、Fy a、k抗原，至少1人份红细胞含有E、Jk a、Jk b、M、N、Fy b、Le a、Le b、P1抗原。
OⅠ红细胞5ml×1OⅡ红细胞5ml×1OⅢ红细胞5ml×1不同批号的红细胞试剂不可以互换。
【储存条件及有效期】2~8℃保存。
7不规则抗体筛查试验
不规则抗体筛查试验（SOP）【产品名称】通用名称：不规则抗体检测试剂（人血红细胞）英文名称：Red Blood Cells Reagent for Irregular Antibody Test【包装规格】每盒有OⅠ、OⅡ、OⅢ红细胞各1瓶，5ml/瓶，浓度4%。
【生产企业】企业名称：长春博迅生物技术有限责任公司【预期用途】有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的红细胞或缩短其寿命，轻则影响治疗效果，重则危及病人生命；对于孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器及智力发育，严重者则会危及新生儿的生命。
对受血者和献血者进行不规则抗体检测，能够发现有临床意义的抗体，从而减少溶血性输血反应。
本品采用凝聚胺方法检测待检血浆（血清）是否存在不规则抗体，只用于临床检测，不用于血源筛查。
【检验原理】本实验原理为血凝试验。
红细胞上含有D、C、E、c、e、Jk a、Jk b、M、N、s、Fy a、Fy b、k、Le a、Le b、P1，该实验用已知抗原的红细胞与待检血浆（血清）孵育，以发现待检血浆（血清）中是否存在不规则抗体。
【主要组成成份】本品由3人份（单人份/瓶）直接抗人球蛋白试验阴性的O型健康成人红细胞组成，红细胞上含有能引起溶血性输血反应的抗原，抗原谱至少包括Rh系统的D、C、E、c、e抗原，Kidd系统的Jk a、Jk b抗原，MNS系统的M、N、s抗原，Kell系统的k抗原，Duffy系统的Fy a、Fy b抗原，Lewis系统的Le a、Le b抗原，P系统的P1抗原。
每套试剂红细胞中至少有2人份红细胞含有D、C、c、e、s、Fy a、k抗原，至少1人份红细胞含有E、Jk a、Jk b、M、N、Fy b、Le a、Le b、P1抗原。
OⅠ红细胞5ml×1OⅡ红细胞5ml×1OⅢ红细胞5ml×1不同批号的红细胞试剂不可以互换。
【储存条件及有效期】2~8℃保存。
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不规则抗体检测标准操作规程
1 目的规范不规则抗体检测过程，保证不规则抗体检测质量，保障临床输血安全。
2 职责输血科(血库)工作人员负责不规则抗体检测相关工作。
3 适用范围适用于输血科(血库)工作人员从事不规则抗体检测。
4 生物安全要求所有用于临床不规则抗体检测的标本，均视为存在潜在的生物安全危害,被血液污染的物品必须放入医疗专用垃圾袋，损伤性废弃物放入利器盒。
5 设备和材料
5.1 标本: 血浆或血清。
5.2 试剂：标准Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号不规则抗体筛选红细胞、低离子强度溶液（LIM）等。
5.3设备：血型血清学专用离心机、标本离心机、移液器、试管架等。
5.4 耗材：清洁干燥一次性塑料吸嘴、速干手消毒液/消毒纸巾、污物桶、医疗废弃物专用袋、医疗废弃物处置标签、一次性橡胶手套等。
6 环境不规则抗体检测环境要求宽敞明亮、干燥通风、安全卫生、整洁有序。
7 操作步骤
7.1 方法：凝胶柱法。
7.2 原理：由于输血或妊娠等外源性抗原的同种免疫作用，使机体对外源性抗原产生同种免疫抗体，当再次输入相应抗原时就会产生抗原抗体反应。
应用特定的抗体筛选红细胞（Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号），与受检者血清/血浆在二种介质（盐水、凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别(IgM、IgG)。
7.3 试剂及器材:特定的Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号2%～5%筛选红细胞；低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。
试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。
7.4 操作步骤
7.4.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。
7.4.2 检查标本的状态。
盐水法：
7.4.3 取洁净试管3支，分别标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，用滴管分别加入受检者血清/血浆2滴。
7.4.4 再对应加入2%～5%Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号抗体筛选细胞1滴，混匀。
7.4.5 1000 ×g离心15秒或按试剂说明书操作，察看上清液有无溶血，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录盐水介质反应情况。
肉眼观察无凝集，用滴管吸取管内悬液少许于玻片上，在显微镜下察看有无凝集现象。
凝聚胺法：
7.4.6 取洁净试管3支，按照盐水法的操作滴加受检者血清/血浆、抗体筛选细胞，各管加低离子溶液（LIM ）0.65ml，混匀，再各加凝聚胺溶液2滴，混匀。
7.4.7 1000 ×g离心15秒或按试剂说明书操作,倒掉上清液，让管底残留约0.1ml液体，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，必须重做。
7.4.8 最后各加2滴悬浮液，轻轻摇动试管混合，同时肉眼观察结果。
7.4.9 如果60秒内凝集散开，再进一步用显微镜观察有无凝集，镜下无凝集红细胞则为凝聚胺引起的非特异性凝集，不规则抗体筛选结果阴性；60秒内凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，不规则抗体筛选结果阳性。
7.5 结果判读
7.5.1 阴性：3管均无凝集无溶血；
7.5.2 阳性：一管或多管出现凝集或溶血。
根据抗体筛选细胞格局表进行分析判定。
8 记录结果将检测结果记录在检测登记表中。