不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛检质控品SOP
不规则抗体筛检质控品标准操作程序（SOP）一、用途本试剂盒用于长春博迅生物技术有限责任生产的抗人球蛋白检测卡（12卡/盒）、不规则抗体检测试剂（人血红细胞）（4%，5ml/瓶）进行的不规则抗体筛检实验的室内质量控制。
二、准备工作1、将质控品从冰箱取出后平衡至室温。
2、观察检测卡外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18－25℃），再用专用离心机离心5分钟。
三、操作步骤1、将抗人球蛋白检测卡做好标记；2、将不规则抗体检测试剂（人血红细胞）用低离子强度盐溶液稀释到细胞浓度为0.8%；3、将0.8%的红细胞按照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ顺序加到抗人球蛋白检测卡1~3管和4~6管中，50μl/管。
4、分别在前3管加入样本1，后3管加入样本2，50μl/管。
5、将检测卡置37℃孵育器中15分钟。
6、即刻使用专用离心机离心5分钟（900 rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟），取出，肉眼判定结果。
结果判定：1、本产品为非定值质控品，格局表中所提供的结果仅为定性结果，因此建议各实验室对每批号的产品自行建立相应的参考值。
2、抗体筛检：室内质控品按阳性(样本2)、阴性(样本1)设计，阳性质控品含有已知其特异性的不规则抗体，阴性质控品不含有不规则抗体。
3、质控品检测结束后，用户可将检测结果与参考值进行比较，阳性质控结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。
失控后要分析查找原因，必要时重复实验，确认失控原因消除后开展正常检测工作。
质控品抗A 抗B 不规则抗体样本1 + + 0样本2 0 0 +“0”代表阴性，“+” 代表阳性。
特异性及效价：O血清：与A1、B型红细胞均发生凝集，与O型红细胞不发生凝集，与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阴性，无溶血及其他不易分辨现象；O血清与A1型红细胞反应，效价≥8，与B型红细胞反应，效价≥8。
AB血清(含IgG型抗D抗体)：与A1、B、O型红细胞均不发生凝集，与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阳性，无溶血及其他不易分辨现象；试管抗人球法效价为2~8；微柱凝胶法效价为4~16。
BIOVUE不规则抗体筛选操作规程
BioVue不规则抗体筛查操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：不规则抗体筛查2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
具有已知抗原的人红细胞将与血浆中相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue －poly Cassettes3．包装规格：400卡/箱试剂卡(707300);100卡/箱试剂卡(707350)4．试剂成分：抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第1～6柱：抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特异性抗－lgG(兔)抗－C3b(鼠单克隆)(克隆F7G3) 抗－C3d(鼠单克隆)(克隆C4C7) FD＆C1＃蓝色染料FD＆C5＃黄色染料5．试剂的储存与效期：储存方法：2～25℃环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)检测卡为即用型产品。
每一微柱中含有仅适用于一个测试的试剂。
不规则抗体筛查流程步骤
不规则抗体筛查流程步骤下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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实验四不规则抗体筛选与鉴定、效价测定
2.鉴定 2.鉴定
标管： ⑴标管：11支1-10、自c 加样： ⑵加样：Ps2滴+谱细胞1滴 离心、观察结果： ⑶离心、观察结果： ①直接观察 ②4℃10min观察 ③恢复室温观察，有格局为IgM ④37℃观察有无凝集 ⑤凝聚胺法或抗人球法（上谱细胞），观 察格局可判断有无IgG抗体 测效价： ⑷测效价：若有抗体，测效价
操 作
1.筛选 1.筛选
(聚凝胺法 聚凝胺法) 聚凝胺法 (抗人球法 抗人球法) 抗人球法
⑴标管8支:S1、S2、S3、S1’、S2’、S3’、K、自c 标管8 ⑵加样：受检血清2滴+上述细胞1滴检测 加样 ⑶观察结果:阳性进行不规则抗体鉴定 观察结果: ⑷测抗体效价（室温、4℃10min、恢复室温 测抗体效价 10min、37℃3min ）
注意事项 1.更换滴管， 1.更换滴管，防止干扰 更换滴管 2.防止前带现象， 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 防止前带现象 3.试剂细胞 3.试剂细胞 4.稀释液体积越小， 4.稀释液体积越小，产生误差越大 稀释液体积越小
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
思考题
1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水 聚凝胺、抗人球介质中进行。 聚凝胺、抗人球介质中进行。 2.抗体效价检测的临床应用 2.抗体效价检测的临床应用
目的 掌握抗体效价的测定方法 原理 Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可 见“±”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材 试剂 小试管、记号笔、滴管、离心机 悬浮红细胞、血清、生理盐水
实验步骤 1.标记管号 标记管号：1、2、4、8、16、32…… 标记管号 2.从2号开始各管分别加生理盐水50ul 从 号开始各管分别加生理盐水50ul 3.加血清 加血清：1、2管各加血清 加血清 4.倍比稀释 倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出50ul移入 倍比稀释 第3管，混匀；再从第3管吸出50ul移入第4 管，以此类推，至最后一管，吸出50ul弃去。 5.加悬红 加悬红：每管各加50ul ，混匀。 加悬红 6.3000r／min离心 离心15秒，直接观察结果 观察结果、 离心 观察结果 4℃10min、室温10min、37℃3min观察结果。
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4.致敏红细胞（质控细胞）。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛选操作规程一．试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二．标本收集与处理1．血清或血浆都可以使用。
2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
三．操作步骤1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。
2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。
3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8. 从微柱正反两面判读并记录结果。
四．结果判读阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。
3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。
1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。
阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程(SOP)
目的:输血前进行检验查,可对有妊娠史,多次输血史,大量输血的病人进行不完全抗体的初选.
操作:
1、取3—5名“O”型正常人抗凝血(新鲜血常规抗凝血)进行等量混合。
2、用无菌生理盐水洗涤3—5次。
3、配制成2%红细胞悬液(上述离心沉淀红细胞1ml加生理盐水49mL混匀)待用。
4、取病人(受血者)血清或血浆100mL和2%红细胞悬液100mL等到量混合，然后离心，侄去上清液，混匀，倒在玻片上，显微镜观察是否凝集。
5、如有凝集，说明该受血者体内存在不规则抗体，毅然交叉配血不能进行。
6、如无凝集才能配血。
不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛选操作规程一.试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白(IgG)单特异检测试剂卡。
2.上:海血液生物医药有限公同3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二.标本收集与处理1.血清或血浆都可以使用。
2.如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
操作步骤1.取出试剂卡，平衡至室温:使用前离心确保无气泡和断层。
2.观察卡的反应液面高度,确保试剂液面高于凝胶平面3cm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请子1小时内进行下面操作。
3.分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4.再分别向反应柱内加入10u1 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5.观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹儿下微柱充分，使反应物混匀。
6.在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7.用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8.从微柱正反两面判读并记录结果。
四.结果判读阳性结果（＋）红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果(-):无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上:方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56C水济30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 +反应:红细胞在柱中玻璃珠上:面凝集，并形成一个环形带。
3+反应:发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 +反应:发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。
1+反应:大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。
阴性反应:所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项1.试剂卡应保存在2-25C，请勿冷冻保存:请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不变放在离热源很近或阳光直射的地方。
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不规则抗体筛选操作规程
一．试剂和仪器
1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液
3.离心机和孵育器
二．标本收集与处理
1．血清或血浆都可以使用。
2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
三．操作步骤
1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。
2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。
3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8. 从微柱正反两面判读并记录结果。
四．结果判读
阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。
3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少
量细胞。
1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的
底部有少量红细胞。
阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项
1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。
如果试剂卡放在冰箱中，使用前应先恢复至室温。
2.卡中液体试剂的冻结或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃珠到达微柱底部；另外细菌污染也有可能引起假阳性结果。
3.红细胞悬液的配制请参阅说明书要求。
4.微柱中加入样本或试剂时，请注意以下几点
1）加样枪的位置：加样枪枪头应与微柱管壁保持大约45度角，并
避免直接接触。
2）操作之前请详细阅读试剂使用说明书，加样量要准确。
5.反应结果应双面判读。
6.质控管：用于阴性质控，即用微柱中的试剂进行平行试验，正常情况下未发生凝集反应的红细胞在微柱中能够顺利通过玻璃珠之间的间隙到达底部，否则说明这张卡或红细胞本身有质量问题。
如质控管是阳性结果，提示试验结果应进一步分析。
7.如果试剂卡出现以下结果后，请按要求处理，必要时经销商联系：1）正常情况下，微柱中的液面应高于玻璃珠水平面3mm左右，当微柱中试剂液面等于或低于玻璃珠水平面时，请不要使用此卡。
2）由于运输原因，导致试剂盒倒臵时间过长，可能会在试剂或微柱中出现气泡。
操作人员取卡时如果发现有气泡，可将卡垂直向上，用手轻弹，把气泡弹出，如果气泡过大不能弹出，可用离心机离心一次，即可将气泡清除。
3）如果试剂卡有明显损坏（微柱裂开或锡纸裂开等），试剂中有明显的颗粒物质，请不要使用。
（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。
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