血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
稀有血型、不规则抗体阳性、及配血不相合等及时报告程序
稀有血型、不规则抗体阳性、及配血不相
合等及时报告程序
为确保临床用血的安全和合理性，本文制定了稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序。
在进行交叉配血实验时，输血科人员应按照操作规程认真完成实验，并由另一人进行复核后签字发出血液。
如果发现稀有血型的输血需求，输血科应立即通知用血临床科室，并在血液储备不足的情况下暂停手术。
同时，输血科人员应上报输血科主任，与市中心血站联系，确保血液的供应。
对于紧急的稀有血型输血，输血科人员应立即上报输血科主任，输血科主任应与血站联系，确保急症抢救用血并上报医务科。
对于不规则抗体阳性及配血不相合等情况，输血科人员应重新做不规则抗体及交叉配合实验并复查血型，必要时更换试剂，重做试验。
如果仍然不相符，应上报输血科主任，输血科主任应上报医务科和主管院长。
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程1.目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7(2)条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于医疗机构输血科对临床疑难交叉配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血(AlHA)患者的交叉配血试验。
3.职责医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。
4.原理本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。
配血前需确定受血者的ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性,选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。
5.所需设备和试剂普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。
6.检测环境条件室温应控制在18-27°C,湿度应保持30%-70%°7.步骤与方法7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。
7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。
7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能：③详细告知家属，决定是否送市血液中心。
7.2.3家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血科。
7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。
7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行7.2.2-7.2.4程序8.交叉配血结果判定主侧、次侧交叉配血均无溶血、无凝集，表示配血相合。
对于AlHA患者，已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点临床治疗当中，输血治疗属于移植细胞治疗，红细胞作为运输氧气的重要载体，是治疗或者辅助治疗的重要手段，但不适当的血液制品的输注将造成不良后果，严重者可以危及生命，因此应该按照相关程序对受血者和供血者的血液进行准确的输血前血型血清学检查才能保证受血者的输血安全。
血型复查红细胞上的抗原纷繁复杂，但是具有重大临床意义的，也是现在临床上运用的是ABO 血型系统和Rh 血型系统，通常所有住院患者在一开始会常规查一个血型定性，就包括ABO 系统和Rh 系统。
大型医院一般微柱凝胶法，而在输血前也需要再进行血型复查，包括正定型（用抗-A 及抗-B 的试剂与被检测血细胞反应，检测红细胞表面是否存在A 抗原B 抗原），和反定型（用标准A 细胞和B 细胞与被检血清反应，检测血清中是否含有抗体），此时复查多采用试管法或者玻璃法，由于ABO 系统的天然抗体多属于IgM 型抗体，属于温抗体，盐水介质下就可以看见凝集，一般不需要离心即可看出结果，当受血者的抗体较弱时可以离心观察，临床上反定型防止假阴性均采用盐水介质法离心后观察。
不规则抗体筛查受血者有输血史、妊娠史或者短期内需要大量输血时应按规定进行不规则抗体的筛查和鉴定，以便及时发现有临床意义的不规则抗体从而避免输血反应的发生，不规则抗体指除了抗-A 和抗-B 抗体以外的抗体，分为自身抗体和同种异体抗体。
自身抗体是指受血者体内产生的抗体，针对自身红细胞的抗原，这种抗体不仅可以和自身红细胞反应还可以和大多数红细胞反应，而同种异体抗体是指多次输血或者妊娠刺激机体产生的针对同种异基因的红细胞的抗体。
不规则抗体按照抗体的类型可以分为IgM 和IgG 类，根据次分类可以选择不同的筛选方法，主要有盐水介质法、聚凝胺法、抗球蛋白实验，以及微柱凝胶法等。
交叉配血实验在完成前个试验后，复查收到的受血者血样的ABO、Rh 血型以及不规则抗体筛查实验，进行最后一步，交叉配血实验，主要是检查受血者血清中有无破坏供者的红细胞的抗体，使受血者和供血者的血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分，实验包括以下几项：1、主侧配血：受血者的血清和供血者的血细胞反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细胞的抗体。
血型及交叉合血操作规程
血型及交叉合血操作规程一、引言作为医疗机构中常见的操作流程之一，血型及交叉合血是确保输血安全的重要环节。
本文将介绍血型和交叉配血的基本概念、操作步骤以及注意事项，以提供规范的操作指南。
二、血型的基本概念血型是指个体红细胞膜上存在的抗原和抗体的组合情况，分为A、B、AB和O四种类型。
在血型鉴定中，需要使用抗A和抗B两种血清对被测血液进行试验，从而确定其血型类型。
此外，还需要测试被测血液中是否存在抗D抗体，以判断其Rh阴性或Rh阳性。
三、交叉配血的基本概念交叉配血是在输血前进行的一项重要试验，旨在检测受血者的血清中是否存在与供血者红细胞的抗体相对应的抗原，以避免输血反应的发生。
具体操作如下：1. 取受血者的血清和供血者的红细胞，将它们分别置于两个试管中。
2. 依次加入适量混合胶体试验红细胞悬液和抗人球蛋白试剂，轻轻振荡混合。
3. 观察反应是否出现凝集、增浊或溶解等现象。
4. 凝集或增浊反应表示交叉配血不合格，需停止输血操作；溶解反应则表示血型和抗体基本匹配，可以进行输血。
四、血型及交叉合血操作规程以下为血型及交叉合血操作的具体步骤，操作人员应根据实际情况进行：1. 准备工作a. 确认受血者的基本信息，包括姓名、住院号、血型等。
b. 根据受血者血型，选择相应的供血者。
c. 根据病情和输血需求，估计所需输血量。
d. 消毒操作台面和操作器具。
2. 操作步骤a. 将受血者的血液样本采集到干燥无菌试管中，标明受血者信息。
b. 将受血者的样本送至血库，进行血型鉴定。
c. 根据受血者的血型和抗体情况，在血库选择适当的供血者。
d. 从血库获取供血者的血液样本。
e. 将供血者样本标记并送至血型试验室进行交叉试验。
f. 根据交叉试验结果判断是否合适进行输血操作。
g. 如满足输血条件，按照医嘱进行输血操作。
五、注意事项1. 操作人员应进行严格的洗手和穿戴手套等防护措施，以防交叉感染。
2. 每一步操作都需要仔细核对患者信息，确保输血操作正确。
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤.doc
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤一.1. 血型鉴定排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者 2%-5%红细胞悬液。
3.加样ABO正定型： 1 滴（ 50ul ）抗 A、抗 B 试剂加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
ABO反定型： 1 滴（ 50ul ）患者血清加 1 滴（ 50ul ）反定型试剂红细胞。
RhD定型： 1 滴（ 50ul ）抗 D 血清加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
4.二. 结果判断离心（ 2 档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）1.排管标记 01、 02、 03 及自身对照管2. 加样各试管分别加入相应的患者血清 2 滴（ 100ul ）及筛选细胞 1 滴（ 50ul ）。
3.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留约，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失显微镜检查三. 交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）1.标本准备分离供血者血浆与红细胞三次洗涤，制备供血者 2%-5%红细胞悬液2.排管标记排管，主侧、次侧及自身对照管3.加样各试管分别加入相应的备检血清 2 滴（ 100ul ）及 2%-5%备检红细胞悬液 1 滴（ 50ul ）4.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血轻轻混匀，肉眼观察有无凝集结果判断并记录各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失肉眼观察阴性者，显微镜检查记录交叉配血结果A、 B、O试验红细胞悬液的制备1.分别采取已知A、 B、O 三种血型的红细胞，经盐水洗涤 3 次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）红细胞悬液的配置悬液浓度（ %）压实红细胞（滴）盐水（滴）2 1 （ 40）5 1 （ 16）10 1 （ 8）20 1 （ 4）2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取 3 个以上健康成人血液，按A、B、O 型分别混合后，按上法制备。
血型鉴定、交叉配血操作规程
⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。
备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。
⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。
【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。
【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。
【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。
实验三血型鉴定(交叉配血)
盐水介质法
原理及目的
交叉配血试验是指受血者血清加供血者红细胞悬液;供血 者血清加受血者红细胞悬液，同时进行凝集试验。前者称 主试验，后者称副试验。其目的是验证供者与受者ABO血 型鉴定是否正确，防范引起溶血性输血反应。此外，也可 检出ABO血型系统的不规则凝集素以及发现ABO系统以外 的其他血型抗体。
3.分别混匀，低速离心约2 分钟，轻轻摇匀，观察结果。 4.结果判定： 同型配血，主测、次测均不凝集，表示无配血禁忌，可以
输血； 异型配血时，主测无凝集，次测凝集，无溶血，可以输给 少量。输异型血时，如次测不凝集，不可以输血，应重新 复查血型或追查其原因。
患 者
献 血 者
交叉配血试验
主侧配血用患者血清与供试剂和器材生理盐水 小试管、尖嘴滴管、离心机、试管架、显微镜等
操作步骤
1.取受血者和供血者血液各2ml，注入一清洁干燥试管内， 按常规方法分离血清。同时留数滴滴加于含少量生理盐水 的小试管内，制成5％的红细胞生理盐水悬液。注意要分 别标明供血者与受血者的血液管、血清管、红细胞悬液管 的姓名。 2.另取清洁试管2支，标明主测和次测。主测：受血者血清 1 滴加供血者红细胞悬液1滴。次测：供血者血清1滴加受 血者红细胞悬液1滴。
主
者红细胞进行试验
侧
次
次测配血
侧
供血者血清与患
者红细胞进行试验
交叉配血的要求
主侧配血要求：
绝对不可以有凝集或溶血
凝
现象。
集
次测配血要求：
供血者血清加受血者红细
胞在允许范围内，可以有 凝集现象，但不可以有溶
不
血。
凝
集
交叉配血试验结果图例
无溶血 无凝集
实验15 血型鉴定&交叉配血
一、 ABO血型系统鉴定
（二）玻片法
抗A标准检悬液1d 竹签混匀，静置15min，观察结果： 肉眼与显微镜下观察有无凝集
一、 ABO血型系统鉴定
结果判断： eg： 抗A标准血清+RBC悬液→凝集； 抗B标准血清+RBC悬液→不凝集 结果报告： 血型正定型为： X型
一、 ABO血型系统鉴定
【原理】 ABO血型系统天然抗体（IgM）分子量大， 能在生理盐水介质中与相应RBC抗原结合 发生凝集反应，以标准血清（抗A、抗B） 鉴定红细胞上的抗原（正定型），或用标 准红细胞鉴定被见血清的抗体（反定型）。 当出现凝集时，存在与已知抗体相应抗原 或已知抗原相应的抗体。
一、 ABO血型系统鉴定
｝A型
二、交叉配血试验
【原理】 将受血者的红细胞与血清分别同供血者的 血清与红细胞混合，观察有无凝集现象 ， 来判断受血者与供血者之间配血是否相合。
二、交叉配血试验
【操作】 1、准备：①制备受血者RBC悬液 ②制备供血者RBC悬液 ③制备受血者血清 ④制备供血者血清 2、取小试管2支，分别标记主侧、次侧 3、加血清和细胞悬液： 在主侧管中分别加②和③各1滴， 在次侧管分别加④和①悬液各1滴，混匀。 4、1 000r/min离心1 min。 5、观察结果 同ABO血型正定型试管法。
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悬液浓度（%） 压实红细胞（滴） 盐水（滴）
2 1 2.0ml（40）
5 1 0.8ml（16）
10 1 0.4ml（8）
20 1 0.2ml（4）
2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个以上健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。
弃去上清液，留约0.1ml，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min内消失
显微镜检查
三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）
1.标本准备
分离供血者血浆与红细胞
三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液
2.排管标记
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
一.血型鉴定
1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备 分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者2%-5%红细胞悬液。
3.加样
ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
排管，主侧、次侧及自身对照管
3.加样
各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul）
4. 结果观察
离心（2档），观察结果
先看上清液有无溶血
轻
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心
ABO反定型：1滴（50ul）患者血清加1滴（50ul）反定型试剂红细胞。
RhD定型：1滴（50ul）抗D血清加1滴（50ul）患者红细胞悬液。
4. 结果判断
离心（2档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
二.不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）
1.排管标记01、02、03及自身对照管
先观察上清液有无溶血
弃去上清液，留0.1ml，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min内消失
肉眼观察阴性者，显微镜检查
记录交叉配血结果
A、B、O试验红细胞悬液的制备
1. 分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）
2.加样 各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1滴（50ul）。
3.结果观察
离心（2档），观察结果
先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心
先观察上清液有无溶血